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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610302003.X (22)申请日 2016.05.09 (71)申请人 郭舒洋 地址 213164 江苏省常州市钟楼区白云东 苑6幢甲单元401室 (72)发明人 郭舒洋林茂平王统军 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) A61P 3/12(2006.01) A61P 7/06(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 1/14(2006.01) (54)发明名称 一种荔枝多糖铁配合物的制备方法 (57)摘要 本发明。
2、公开了一种荔枝多糖铁配合物的制 备方法， 属于多糖铁配合物领域。 本发明从荔枝 中提取出荔枝多糖， 将荔枝多糖和铁盐为原料进 行络合反应制备得荔枝多糖铁配合物， 本发明制 备得到的荔枝多糖铁络合物不仅可以作为新型 补铁剂， 稳定性好， 对胃肠道无或极少刺激作用， 副作用小， 溶解度好， 含铁量高， 而且结合了荔枝 多糖自身的生物活性， 还具有调节免疫、 开胃益 脾等作用， 在人体释放后可被充分吸收利用。 权利要求书1页 说明书5页 CN 105906736 A 2016.08.31 CN 105906736 A 1.一种荔枝多糖铁配合物的制备方法， 其特征在于具体制备步骤为： （1） 称取12。
3、kg荔枝剥壳去核得到荔枝肉， 将其放入石臼中人工研磨捣碎， 再用匀浆器 搅拌匀浆2030min， 倒入微波振荡仪中， 按料液比为6:1向荔枝匀浆中加入相应体积的去 离子水， 以500600W功率微波预处理1020min； （2） 将上述预处理后的荔枝匀浆移入陶瓷酶解罐中， 按体积比为1:5向匀浆中加入蒸馏 水并搅拌均匀得混合酶解底物， 再加入酶解底物总质量12%的复合酶制剂， 搅拌均匀后用 浓度为0.2mol/L柠檬酸调节pH至46， 再将酶解罐移至3545的恒温水浴摇床上， 保温 酶解24h； （3） 酶解结束后提高水浴温度至9095， 灭酶58min后放入高速离心机， 以4000 5000。
4、r/min转速离心分离1015min， 去除下层沉淀得到上清液， 再向上清液中加入其体积3 倍的浓度为75%乙醇溶液， 移入46冰水浴中， 静置沉淀过夜， 最后倒入布氏漏斗， 用无水 乙醇抽滤洗涤35遍， 得到荔枝多糖； （4） 称取2030g上述制得的荔枝多糖、 1015g柠檬酸三钠倒入锥形瓶中， 加入1000 1200mL去离子水， 置于7080下超声水浴中， 用质量浓度为30%氢氧化钠溶液调节pH至8 9并用磁力搅拌机以200300r/min转速进行搅拌； （5） 在搅拌的过程中逐滴滴加浓度为0.5mol/L硝酸铁溶液， 当反应液中出现红棕色不 溶物时， 停止滴加， 继续保温搅拌反应12。
5、h， 待其冷却至室温后过滤得滤液， 再加入滤液总 体积35倍的无水乙醇， 转入漩涡振荡仪， 以3040W功率旋涡振荡3040min， 得到红棕色 悬浮液； （6） 将上述得到的红棕色悬浮液置于卧式离心机中， 以50005500r/min转速离心分离 1520min， 收集下层沉淀， 用无水乙醇持续冲洗1015min后放入烘箱， 在105110下干 燥12h后即得荔枝多糖铁配合物。 2.根据权利要求1所述的一种荔枝多糖铁配合物的制备方法， 其特征在于： 所述的复合 酶制剂是由纤维素酶、 果胶酶和中性蛋白酶按质量比为2:2:5复配制得。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105906736 A 2。
6、 一种荔枝多糖铁配合物的制备方法 技术领域 0001 本发明公开了一种荔枝多糖铁配合物的制备方法， 属于多糖铁配合物领域。 背景技术 0002 铁是人体内必需的微量元素之一， 是血红蛋白和肌红蛋白的核心部分， 细胞中许 多有重要功能的酶也都含有铁， 是人体许多正常生理过程中不可缺少的物质。 缺铁严重时， 细胞内酶的功能受到影响， 产生神经系统和消化道症状， 对全身健康影响很大。 缺铁性贫血 是世界上最常见的疾病之一， 常见药用补铁剂分为有机铁和无机铁两大类， 无机铁主要为 硫酸亚铁， 硫酸亚铁虽然铁含量较高， 吸收较好， 在一定程度上可以缓解铁缺乏和贫血症 状， 但常伴有胃肠刺激和锈味等副作用。
7、， 生物利用度低， 化学稳定性差， 并且铁在体内能产 生内源性自由基， 导致细胞膜脂质过氧化造成损伤。 0003 荔枝主要分布于我国的广东、 广西、 福建、 海南和台湾等地， 是华南地区栽培面积 最大的果树， 长期以来， 荔枝因具有较高的营养价值和多种滋补养颜效果一直被视为 “果中 珍品” ，“常食荔枝能补脑健身， 治疗瘰疬， 开胃益脾； 干制能补元气， 可作为产妇及老弱者的 补品” 。 目前， 多糖的提取方法主要有加热浸提法、 酶解法、 微波萃取法、 超声提取法和超滤 法等。 0004 研究表明， 以植物多糖为载体， 配合上三价铁离子后形成的多糖铁配合物， 不仅可 以避免胃肠道刺激， 其副作。
8、用小， 溶解度好， 含铁量高， 与传统的无机补铁剂相比， 植物多糖 铁配合物具有稳定的水溶性、 易吸收、 无铁味、 无肠道刺激、 无毒性、 定向十二指肠吸收等优 点， 符合理想的口服补铁剂的国际标准， 是一种值得研究开发的新型补铁剂。 因此， 多糖铁 配合物成为当前研究热点。 发明内容 0005 本发明主要解决的技术问题： 针对治疗缺铁性贫血的药物为各种亚铁盐制剂， 可 溶性有机络合铁剂琥珀酸亚铁、 富马酸铁、 葡萄糖酸铁等， 游离的亚铁离子刺激胃肠， 造成 恶心、 呕吐、 腹泻、 便秘等消化道不良反应， 且二价铁制剂易产生内源性自由基， 导致细胞膜 脂质过氧化而造成细胞膜损伤的问题， 提供了。
9、一种荔枝多糖铁配合物的制备方法， 本发明 从荔枝中提取出荔枝多糖， 将荔枝多糖和铁盐为原料进行络合反应制备得荔枝多糖铁配合 物， 本发明制备得到的荔枝多糖铁络合物不仅可以作为新型补铁剂， 稳定性好， 对胃肠道无 或极少刺激作用， 副作用小， 溶解度好， 含铁量高， 而且结合了荔枝多糖自身的生物活性， 还 具有调节免疫、 开胃益脾等作用， 在人体释放后可被充分吸收利用。 为了解决上述技术问题， 本发明所采用的技术方案是： （1） 称取12kg荔枝剥壳去核得到荔枝肉， 将其放入石臼中人工研磨捣碎， 再用匀浆器 搅拌匀浆2030min， 倒入微波振荡仪中， 按料液比为6:1向荔枝匀浆中加入相应体积的。
10、去 离子水， 以500600W功率微波预处理1020min； （2） 将上述预处理后的荔枝匀浆移入陶瓷酶解罐中， 按体积比为1:5向匀浆中加入蒸馏 说明书 1/5 页 3 CN 105906736 A 3 水并搅拌均匀得混合酶解底物， 再加入酶解底物总质量12%的复合酶制剂， 搅拌均匀后用 浓度为0.2mol/L柠檬酸调节pH至46， 再将酶解罐移至3545的恒温水浴摇床上， 保温 酶解24h； （3） 酶解结束后提高水浴温度至9095， 灭酶58min后放入高速离心机， 以4000 5000r/min转速离心分离1015min， 去除下层沉淀得到上清液， 再向上清液中加入其体积3 倍的浓度为。
11、75%乙醇溶液， 移入46冰水浴中， 静置沉淀过夜， 最后倒入布氏漏斗， 用无水 乙醇抽滤洗涤35遍， 得到荔枝多糖； （4） 称取2030g上述制得的荔枝多糖、 1015g柠檬酸三钠倒入锥形瓶中， 加入1000 1200mL去离子水， 置于7080下超声水浴中， 用质量浓度为30%氢氧化钠溶液调节pH至8 9并用磁力搅拌机以200300r/min转速进行搅拌； （5） 在搅拌的过程中逐滴滴加浓度为0.5mol/L硝酸铁溶液， 当反应液中出现红棕色不 溶物时， 停止滴加， 继续保温搅拌反应12h， 待其冷却至室温后过滤得滤液， 再加入滤液总 体积35倍的无水乙醇， 转入漩涡振荡仪， 以3040。
12、W功率旋涡振荡3040min， 得到红棕色 悬浮液； （6） 将上述得到的红棕色悬浮液置于卧式离心机中， 以50005500r/min转速离心分离 1520min， 收集下层沉淀， 用无水乙醇持续冲洗1015min后放入烘箱， 在105110下干 燥12h后即得荔枝多糖铁配合物。 0006 所述的复合酶制剂是由纤维素酶、 果胶酶和中性蛋白酶按质量比为2:2:5复配制 得。 0007 本发明的应用方法： 将本发明制备得到的荔枝多糖铁配合物加入到注射用水中配 制成每毫升含铁元素260280mg的溶液， 所述的注射用水为常规无菌去离子注射用水， 加 入质量分数10的NaOH溶液调节pH值为911， 。
13、控制温度在5060， 然后再加入总质量5 8%的活性炭， 搅拌混合2030min后用0.220.24 m微滤膜过滤， 将滤液在105115灭 菌510min， 灭菌后的滤液装入容器中， 即得荔枝多糖铁配合物注射液成品。 0008 本发明的有益效果是： （1） 本发明制备得到的荔枝多糖铁络合物不仅可以作为新型补铁剂， 稳定性好， 对胃肠 道无或极少刺激作用， 副作用小， 溶解度好， 含铁量高； （2） 本发明荔枝多糖铁络合物中结合了荔枝多糖自身的生物活性， 还具有调节免疫、 开 胃益脾等作用， 水溶性好， 在人体释放后可被吸收利用。 具体实施方式 0009 称取12kg荔枝剥壳去核得到荔枝肉， 。
14、将其放入石臼中人工研磨捣碎， 再用匀浆 器搅拌匀浆2030min， 倒入微波振荡仪中， 按料液比为6:1向荔枝匀浆中加入相应体积的 去离子水， 以500600W功率微波预处理1020min； 将上述预处理后的荔枝匀浆移入陶瓷 酶解罐中， 按体积比为1:5向匀浆中加入蒸馏水并搅拌均匀得混合酶解底物， 再加入酶解底 物总质量12%的复合酶制剂， 搅拌均匀后用浓度为0.2mol/L柠檬酸调节pH至46， 再将酶 解罐移至3545的恒温水浴摇床上， 保温酶解24h； 酶解结束后提高水浴温度至9095 ， 灭酶58min后放入高速离心机， 以40005000r/min转速离心分离1015min， 去除下。
15、 层沉淀得到上清液， 再向上清液中加入其体积3倍的浓度为75%乙醇溶液， 移入46冰水 说明书 2/5 页 4 CN 105906736 A 4 浴中， 静置沉淀过夜， 最后倒入布氏漏斗， 用无水乙醇抽滤洗涤35遍， 得到荔枝多糖； 称取 2030g上述制得的荔枝多糖、 1015g柠檬酸三钠倒入锥形瓶中， 加入10001200mL去离 子水， 置于7080下超声水浴中， 用质量浓度为30%氢氧化钠溶液调节pH至89并用磁力 搅拌机以200300r/min转速进行搅拌； 在搅拌的过程中逐滴滴加浓度为0.5mol/L硝酸铁 溶液， 当反应液中出现红棕色不溶物时， 停止滴加， 继续保温搅拌反应12h。
16、， 待其冷却至室 温后过滤得滤液， 再加入滤液总体积35倍的无水乙醇， 转入漩涡振荡仪， 以3040W功率 旋涡振荡3040min， 得到红棕色悬浮液； 将上述得到的红棕色悬浮液置于卧式离心机中， 以50005500r/min转速离心分离1520min， 收集下层沉淀， 用无水乙醇持续冲洗10 15min后放入烘箱， 在105110下干燥12h后即得荔枝多糖铁配合物。 0010 所述的复合酶制剂是由纤维素酶、 果胶酶和中性蛋白酶按质量比为2:2:5复配制 得。 0011 实例1 称取1kg荔枝剥壳去核得到荔枝肉， 将其放入石臼中人工研磨捣碎， 再用匀浆器搅拌匀 浆20min， 倒入微波振荡仪中。
17、， 按料液比为6:1向荔枝匀浆中加入相应体积的去离子水， 以 500W功率微波预处理10min； 将上述预处理后的荔枝匀浆移入陶瓷酶解罐中， 按体积比为1: 5向匀浆中加入蒸馏水并搅拌均匀得混合酶解底物， 再加入酶解底物总质量1%的复合酶制 剂， 搅拌均匀后用浓度为0.2mol/L柠檬酸调节pH至4， 再将酶解罐移至35的恒温水浴摇床 上， 保温酶解2h； 酶解结束后提高水浴温度至90， 灭酶5min后放入高速离心机， 以4000r/ min转速离心分离10min， 去除下层沉淀得到上清液， 再向上清液中加入其体积3倍的浓度为 75%乙醇溶液， 移入4冰水浴中， 静置沉淀过夜， 最后倒入布氏漏。
18、斗， 用无水乙醇抽滤洗涤3 遍， 得到荔枝多糖； 称取20g上述制得的荔枝多糖、 10g柠檬酸三钠倒入锥形瓶中， 加入 1000mL去离子水， 置于70下超声水浴中， 用质量浓度为30%氢氧化钠溶液调节pH至8并用 磁力搅拌机以200r/min转速进行搅拌； 在搅拌的过程中逐滴滴加浓度为0.5mol/L硝酸铁溶 液， 当反应液中出现红棕色不溶物时， 停止滴加， 继续保温搅拌反应1h， 待其冷却至室温后 过滤得滤液， 再加入滤液总体积3倍的无水乙醇， 转入漩涡振荡仪， 以30W功率旋涡振荡 30min， 得到红棕色悬浮液； 将上述得到的红棕色悬浮液置于卧式离心机中， 以5000r/min转 速离。
19、心分离15min， 收集下层沉淀， 用无水乙醇持续冲洗10min后放入烘箱， 在105下干燥 1h后即得荔枝多糖铁配合物。 0012 所述的复合酶制剂是由纤维素酶、 果胶酶和中性蛋白酶按质量比为2:2:5复配制 得。 0013 将本发明制备得到的荔枝多糖铁配合物加入到注射用水中配制成每毫升含铁元 素260mg的溶液， 所述的注射用水为常规无菌去离子注射用水， 加入质量分数10的NaOH溶 液调节pH值为9， 控制温度在50， 然后再加入总质量5%的活性炭， 搅拌混合20min后用0.22 m微滤膜过滤， 将滤液在105灭菌5min， 灭菌后的滤液装入容器中， 即得荔枝多糖铁配合 物注射液成品。。
20、 0014 实例2 称取1.5kg荔枝剥壳去核得到荔枝肉， 将其放入石臼中人工研磨捣碎， 再用匀浆器搅拌 匀浆25min， 倒入微波振荡仪中， 按料液比为6:1向荔枝匀浆中加入相应体积的去离子水， 以 550W功率微波预处理15min； 将上述预处理后的荔枝匀浆移入陶瓷酶解罐中， 按体积比为1: 说明书 3/5 页 5 CN 105906736 A 5 5向匀浆中加入蒸馏水并搅拌均匀得混合酶解底物， 再加入酶解底物总质量1.5%的复合酶 制剂， 搅拌均匀后用浓度为0.2mol/L柠檬酸调节pH至5， 再将酶解罐移至40的恒温水浴摇 床上， 保温酶解3h； 酶解结束后提高水浴温度至93， 灭酶6。
21、min后放入高速离心机， 以 4500r/min转速离心分离13min， 去除下层沉淀得到上清液， 再向上清液中加入其体积3倍的 浓度为75%乙醇溶液， 移入5冰水浴中， 静置沉淀过夜， 最后倒入布氏漏斗， 用无水乙醇抽 滤洗涤4遍， 得到荔枝多糖； 称取25g上述制得的荔枝多糖、 13g柠檬酸三钠倒入锥形瓶中， 加 入1100mL去离子水， 置于75下超声水浴中， 用质量浓度为30%氢氧化钠溶液调节pH至8.5 并用磁力搅拌机以250r/min转速进行搅拌； 在搅拌的过程中逐滴滴加浓度为0.5mol/L硝酸 铁溶液， 当反应液中出现红棕色不溶物时， 停止滴加， 继续保温搅拌反应1.5h， 待。
22、其冷却至 室温后过滤得滤液， 再加入滤液总体积4倍的无水乙醇， 转入漩涡振荡仪， 以35W功率旋涡振 荡35min， 得到红棕色悬浮液； 将上述得到的红棕色悬浮液置于卧式离心机中， 以5250r/min 转速离心分离17min， 收集下层沉淀， 用无水乙醇持续冲洗13min后放入烘箱， 在108下干 燥1.5h后即得荔枝多糖铁配合物。 0015 所述的复合酶制剂是由纤维素酶、 果胶酶和中性蛋白酶按质量比为2:2:5复配制 得。 0016 将本发明制备得到的荔枝多糖铁配合物加入到注射用水中配制成每毫升含铁元 素270mg的溶液， 所述的注射用水为常规无菌去离子注射用水， 加入质量分数10的NaO。
23、H溶 液调节pH值为10， 控制温度在55， 然后再加入总质量7%的活性炭， 搅拌混合25min后用 0.23 m微滤膜过滤， 将滤液在110灭菌8min， 灭菌后的滤液装入容器中， 即得荔枝多糖铁 配合物注射液成品。 0017 实例3 称取2kg荔枝剥壳去核得到荔枝肉， 将其放入石臼中人工研磨捣碎， 再用匀浆器搅拌匀 浆30min， 倒入微波振荡仪中， 按料液比为6:1向荔枝匀浆中加入相应体积的去离子水， 以 600W功率微波预处理20min； 将上述预处理后的荔枝匀浆移入陶瓷酶解罐中， 按体积比为1: 5向匀浆中加入蒸馏水并搅拌均匀得混合酶解底物， 再加入酶解底物总质量2%的复合酶制 剂，。
24、 搅拌均匀后用浓度为0.2mol/L柠檬酸调节pH至6， 再将酶解罐移至45的恒温水浴摇床 上， 保温酶解4h； 酶解结束后提高水浴温度至95， 灭酶8min后放入高速离心机， 以5000r/ min转速离心分离15min， 去除下层沉淀得到上清液， 再向上清液中加入其体积3倍的浓度为 75%乙醇溶液， 移入6冰水浴中， 静置沉淀过夜， 最后倒入布氏漏斗， 用无水乙醇抽滤洗涤5 遍， 得到荔枝多糖； 称取30g上述制得的荔枝多糖、 15g柠檬酸三钠倒入锥形瓶中， 加入 1200mL去离子水， 置于80下超声水浴中， 用质量浓度为30%氢氧化钠溶液调节pH至9并用 磁力搅拌机以300r/min转。
25、速进行搅拌； 在搅拌的过程中逐滴滴加浓度为0.5mol/L硝酸铁溶 液， 当反应液中出现红棕色不溶物时， 停止滴加， 继续保温搅拌反应2h， 待其冷却至室温后 过滤得滤液， 再加入滤液总体积5倍的无水乙醇， 转入漩涡振荡仪， 以40W功率旋涡振荡 40min， 得到红棕色悬浮液； 将上述得到的红棕色悬浮液置于卧式离心机中， 以5500r/min转 速离心分离20min， 收集下层沉淀， 用无水乙醇持续冲洗15min后放入烘箱， 在110下干燥 2h后即得荔枝多糖铁配合物。 0018 所述的复合酶制剂是由纤维素酶、 果胶酶和中性蛋白酶按质量比为2:2:5复配制 得。 说明书 4/5 页 6 CN 105906736 A 6 0019 将本发明制备得到的荔枝多糖铁配合物加入到注射用水中配制成每毫升含铁元 素280mg的溶液， 所述的注射用水为常规无菌去离子注射用水， 加入质量分数10的NaOH溶 液调节pH值为11， 控制温度在60， 然后再加入总质量8%的活性炭， 搅拌混合30min后用 0.24 m微滤膜过滤， 将滤液在115灭菌10min， 灭菌后的滤液装入容器中， 即得荔枝多糖铁 配合物注射液成品。 说明书 5/5 页 7 CN 105906736 A 7 。