技术领域
本发明涉及化妆品和药物领域。本发明涉及作为胱天蛋白酶-14激活剂 的以下通式(I)的肽化合物：R1–(AA)n–X1–X2–Ile–Gln–Ala–Cys–Arg –Gly–X3–(AA)p–R2，并且涉及它们在用于预防和/或校正DNA损伤、预 防和/或治疗皮肤老化的迹象和光老化以及改善皮肤屏障功能的化妆品和/ 或药物中的用途。
背景技术
人体中最大的器官皮肤的主要功能是保护人体免受包括外部侵害在内 的许多形式的侵害。这些侵害的实例包括这样的侵害，例如污染，UV辐射， 或者刺激性化学物质如表面活性剂、防腐剂或香料，机械侵害如擦伤、修 面或脱毛。污染表示“外部”污染和“内部”污染，“外部”污染例如由于柴油颗 粒、臭氧或重金属，“内部”污染可以特别由于油漆、胶水或壁纸释放的溶 剂(例如甲苯、苯乙烯、二甲苯或苯甲醛)，或者还由于香烟烟雾。空气干燥 也是皮肤侵害的主要原因。这类外部侵害引起皮肤屏障功能的改变，这导 致皮肤不适，令人不快的感觉现象如紧绷或瘙痒，或者甚至过度脆弱和发 红。此外，这些外部侵害促进皮肤所谓的“外源性”老化的加速。实际上， 外源性老化是由身体在其整个生命中经历的环境因素所引起的，所述因素 统称为外部侵害。
除了其作为物理屏障的作用，皮肤还作为水不可渗漏的屏障发挥作用 以防止脱水。由皮肤形成的这个屏障由几层组成，包含确保皮肤持续更新 的不同类型的细胞。首先，这个更新过程包括其中皮肤的表层细胞脱落的 现象，这个现象必须通过基底层中的角质形成细胞确保的表皮更新来补偿， 所述角质形成细胞活跃地分裂并分化为角质层的细胞或角质细胞 (corneocyte)。这些更新以及损伤(例如UV-辐射诱导的损伤)情况中的皮肤修 复作用是由一套信号传导途径高度控制的。这些信号传导途径之一包括蛋 白酶胱天蛋白酶-14。胱天蛋白酶-14是胱天蛋白酶家族的独特的成员。实 际上，不像广泛表达的胱天蛋白酶家族的其他成员，胱天蛋白酶-14仅在表 皮中表达和活跃，并且在大多数其他成年组织中不存在(Eckhartetal.,J. Invest.Dermatol.,2003,44:1148-1151)。胱天蛋白酶-14在形成由表皮组成的 屏障中的重要作用最近已证实(Deneckeretal.,Nat.Cell.Biol.2007, 9:666-674)。实际上，其仅在那些发生分化和“角化”的表皮层内以及毛囊中 表达并发挥其蛋白水解作用(Lippensetal.,CellDeathDiffer.,2000, 10:257-259)。然而，据证实胱天蛋白酶-14起重要作用，特别是在水合过 程的维持、角质细胞形成和凋亡保护中，特别是在外部侵害的情况中，例 如那些由于UV辐射的外部侵害(Deneckeretal.,J.CellBiology,2008, 451-458)。此外，据证实胱天蛋白酶-14负责将聚丝蛋白原(profilaggrin)切割 为聚丝蛋白，然后所述聚丝蛋白水解为肽和氨基酸，其形成天然保湿因子 (Hosteetal.,J.Invest.Dermatol.Abstract,2007,S71)。所有这些结论使得开 发包含胱天蛋白酶-14作为活性成分的药物组合物，其可以用作防晒剂 (WO2008025830)。然而，目前没有可用的化妆品化合物允许使用胱天蛋白 酶-14，从而将聚丝蛋白原转化为待活化的聚丝蛋白以保护皮肤免受UV辐 射以及改善屏障功能，虽然的确存在对这种类型的新护理的需求。
发明内容
现在，申请人证实以下通式(I)的肽化合物是优异的胱天蛋白酶-14激活 剂，并且对改善皮肤屏障功能以及保护皮肤免受诸如UV辐射的外部侵害 (特别是DNA保护功能)具有显著作用：
R1–(AA)n-X1–X2–Ile–Gln–Ala–Cys–Arg–Gly–X3–(AA)p-R2。
本发明的肽化合物的特征在于它们
-激活胱天蛋白酶-14，并因此激活其关于聚丝蛋白原的蛋白水解作用；
-帮助保持表皮的水合；
-防止和修复经受UVB辐射的皮肤细胞的DNA损伤；以及
-优化表皮的屏障功能。
因此，本发明的第一个目的是提供以下通式(I)的肽化合物：
R1-(AA)nX1-X2-Ile-Gln-Ala-Cys-Arg-Gly-X3-(AA)p-R2。
本发明的第二个目的是提供一种化妆品组合物，其包含所述式(I)的肽 化合物作为主要活性成分。
此外，本发明的第三个目的涉及包含所述式(I)的肽化合物的化妆品组 合物用于(i)保护和/或修复DNA损伤、激活胱天蛋白酶-14以及聚丝蛋白形 成，(ii)预防和/或治疗皮肤老化的迹象和光老化，以及(iii)改善皮肤屏障功 能以及表皮水合的用途。
最后，本发明的第四个目的是提供一种使用包含所述式(I)的肽化合物 的组合物对待治疗的皮肤或角质附属物进行化妆品治疗的方法。
本发明的第一个目的涉及通式(I)的肽化合物：
R1–(AA)n-X1–X2–Ile–Gln–Ala–Cys–Arg–Gly–X3–(AA)p–R2
(I)
其中
X1为天冬氨酸、谷氨酸或者无氨基酸；
X2为天冬酰胺、脯氨酸、丝氨酸或者无氨基酸；
X3为天冬酰胺、精氨酸、亮氨酸或者无氨基酸；
AA为任何氨基酸，并且n和p为0-2的整数；
R1是游离的N-末端氨基酸的伯胺官能团，R2是C-末端氨基酸的羧基 官能团的羟基，其被可以选自C1-C30烷基链的基团取代，或者是NH2、NHY 或NYY基团，其中Y为C1-C4烷基链；
所述通式(I)的序列包含6-13个氨基酸残基。
术语“肽化合物”或“肽”表示通过肽键或修饰的肽键连接在一起的两个 或更多个氨基酸的链。
“肽化合物”或“肽”表示如上文所述的本发明的天然存在的或者合成的 肽，或者是其通过蛋白水解或合成获得的片段中的至少一种，或者其序列 完全或部分由上述肽序列组成的任何天然存在的或合成的肽。
构成本发明的肽化合物的氨基酸可以为左旋构型，即L-构型，和/或可 以为右旋构型，即D-构型。因此本发明的肽可以为L-、D-或DL-形式。
为了改善对降解的抗性，可能必需使用本发明的肽的受保护形式。保 护形式显然必须是生物学相容形式，并且应当与化妆品和药物领域中的应 用相容。优选地，为了保护N-末端氨基酸的伯胺官能团，用具有C1-C30、 饱和或不饱和的烷基链的酰基类型取代基团R1，取代基可以选自乙酰基或 芳香基团。优选地，为了保护C-末端氨基酸的羧基官能团，用C1-C30烷基 链类型取代基团R2，或者R2为NH2、NHY或NYY基团，其中Y为C1-C4烷基链。
本发明的肽可以在N-末端、C-末端或者这两个末端受保护。
在本发明的第一个优选实施方案中，在通式(I)中，
X1为天冬氨酸、谷氨酸或者无氨基酸；
X2为天冬酰胺、脯氨酸、丝氨酸或者无氨基酸；
X3为天冬酰胺、精氨酸、亮氨酸或者无氨基酸；
整数n和p等于0；
R1是游离的N-末端氨基酸的伯氨基官能团，R2是C-末端氨基酸的羧 基官能团的羟基，其被可以选自C1-C30烷基链的基团取代，或者是NH2、 NHY或NYY基团，其中Y为C1-C4烷基链；
所述通式(I)的序列包含6-9个氨基酸残基。
在第二个优选实施方案中，所述肽化合物对应于下式之一：
(SEQIDNo:1)Asp–Pro–Ile–Gln–Ala–Cys–Arg–Gly–NH2
(SEQIDNo:2)Ile–Gln–Ala–Cys–Arg–Gly–NH2
(SEQIDNo:3)Asn–Arg–Ile–Gln–Ala–Cys–Arg–Gly-NH2
(SEQIDNo:4)Pro-Ile-Gln-Ala-Cys-Arg-Gly-Phe-NH2
本发明还涉及这些序列的同源形式。根据本发明，“同源”表示与选自 序列SEQIDNo:1至SEQIDNo:4的肽序列至少50%、或者优选至少80% 以及更优选至少90%相同的任何肽序列。“至少X%相同的肽序列”表示两 个序列的最佳对比后获得的，进行比较的两个序列的氨基酸残基之间的相 似性百分比。最佳对比是利用局部同源性算法获得的，例如可获得自NCBI 网站的BLASTP计算机软件中使用的那些算法。
术语“同源”还可以指肽，其由于化学上等同的氨基酸的取代，即由于 用具有相同特征的另一残基取代一个残基而与序列SEQIDNo:1至SEQ IDNo:5的肽序列不同。因此常规取代在Ala、Val、Leu和Ile之间进行； 在Ser和Thr之间进行；在酸性残基Asp和Glu之间进行；在Asn和Gln 之间进行；以及在碱性残基Lys和Arg之间进行；或者在芳香残基Phe和 Tyr之间进行。
本发明的通式(I)的肽可以通过常规化学合成(在固相或液体均相中)或 者通过酶促合成(Kullmanetal.,J.Biol.Chem.1980,225,8234)从其组成氨 基酸或衍生物获得。
本发明的肽可以是天然存在的或合成的。优选地，根据本发明，所述 肽是通过化学合成获得的。
最后，活性成分可以是单种肽、肽混合物或者肽衍生物和/或由氨基酸 衍生物组成。
本发明的肽化合物可以用作药物。
根据本发明的一个有利的实施方案，将本发明的肽化合物溶解于一种 或多种本领域技术人员常规使用的生理学合适的溶剂中，例如水、甘油、 乙醇、丙二醇、丁二醇、二丙二醇、乙氧基化二甘醇或丙氧基化二甘醇、 环状多元醇或者这些溶剂的任何混合物。
根据本发明的另一有利的实施方案，将本发明的肽化合物溶解于化妆 品或药物载体如脂质体中，或者吸附在粉末状有机聚合物、矿物支持物如 滑石和膨润土上，更通常溶解于或固定至任何生理学合适的载体。
本发明的第二个目的涉及一种化妆品组合物，其包含所述通式(I)的肽 化合物作为活性成分。优选地，本发明的组合物为适合局部施用的形式， 其包含化妆品可接受的介质。“化妆品可接受”表示适合与皮肤或人角质附 属物接触，无任何毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等风险的介质。 施用于皮肤的组合物可以为霜剂、水包油或油包水乳剂或复合型乳剂、溶 液剂、混悬剂、微乳剂、水性凝胶或无水凝胶、精华素(serum)形式，或者 还可以是小泡分散液、贴剂、喷雾剂、软膏剂、发膏、乳剂、胶体、乳(milk)、 洗剂、口红，或者还可以是粉末，所有均适合施用于皮肤、嘴唇和/或角质 附属物。
优选地，所述肽化合物以约0.0005-500ppm的浓度、优选0.01-5ppm 的浓度存在于组合物中。
更优选地，本发明的组合物进一步包含至少一种其他活性成分，其促 进所述肽化合物的作用。实例包括但不限于以下类别的成分：其他活性肽 物质，植物提取物，愈合、抗老化、抗皱、镇静(soothing)、自由基清除剂 和抗UV物质，刺激真皮大分子合成或能量代谢的物质，水合、抗细菌、 抗真菌、抗炎物质，麻醉剂，调节皮肤分化、色素沉积或色素脱失的物质， 刺激指甲或毛发生长的物质等。优选地，使用具有抗皱活性的物质如自由 基清除剂或抗氧化剂，或者刺激真皮大分子合成的物质，或者刺激能量代 谢的物质。具体地，所述活性成分选自维生素、植物甾醇、黄酮类化合物、 DHEA和/或其前体或者其化学或生物学衍生物、金属蛋白酶抑制剂或者类 视黄醇。此外，可以将添加剂如溶剂、稀释剂、染料、防晒剂、仿晒剂 (self-tanningagent)、颜料、填充剂、防腐剂、气味吸收剂、增稠剂、乳化 剂、湿润剂、软化剂、香料、抗氧化剂、成膜剂、螯合剂、掩蔽剂、调节 剂等加入所述组合物中。
在所有情况中，本领域技术人员会确保选择这些辅助剂及其比例以不 损害本发明组合物的有利性质。例如，这些辅助剂可以所述组合物总重量 的0.01-20%的量存在。当本发明的组合物为乳剂时，脂肪相可以占所述组 合物总重量的5-80重量%，并且优选5-50重量%。所述组合物中使用的乳 化剂和辅助乳化剂选自本领域常规使用的那些乳化剂和辅助乳化剂。这些 乳化剂和辅助乳化剂可以例如所述组合物总重量的0.3-30重量%的量使用。
本发明的第三个目的涉及包含本发明的肽化合物的组合物用于预防和 /或修复DNA损伤、激活胱天蛋白酶-14以及形成聚丝蛋白的用途。旨在“预 防和/或修复DNA损伤”的肽化合物表示能够修复由于DNA碱基之间的光 化学反应(例如环丁烷嘧啶二聚体的形成)的损伤的生物学活性肽化合物或 衍生物。“使得胱天蛋白酶-14激活”的肽化合物表示能够增加胱天蛋白酶-14 的量的任何生物学活性肽或衍生物，其通过增加胱天蛋白酶-14的蛋白合成 (通过基因表达的直接或间接调节)，或者通过其他生物学过程，例如信使 RNA转录物的稳定或不稳定。使得“聚丝蛋白的形成”增加的肽化合物表示 能够增加转化为聚丝蛋白的聚丝蛋白原的量的任何生物学活性肽或衍生 物，其通过胱天蛋白酶-14的蛋白水解活性的增加，或者通过胱天蛋白酶-14 的量的增加。
具体地，本发明的组合物用来预防和/或修复外部侵害所引起的DNA 损伤。“外部侵害”表示可以由环境引起的侵害。实例包括这样侵害，例如 污染，UV辐射，或者刺激性化学物质如表面活性剂、防腐剂或香料，机械 侵害如擦伤、修面或脱毛。然而，优选地，外部侵害主要是UV辐射，特 别是UVB辐射。
本发明的另一个目的涉及包含所述肽化合物和化妆品可接受的介质的 化妆品组合物用于预防和/或治疗皮肤老化的迹象和光老化的用途。“皮肤老 化的迹象”包括但不限于由皮肤老化引起的所有明显表现。具体地，这是指 皱纹、深粗皱纹、细纹、裂痕、皮肤和皮下组织的下垂、皮肤弹性丧失、 和呆滞(sluggishness)、致密性和色调丧失以及真皮萎缩。此外，“皮肤老化 的迹象”还表示毛孔增大、瑕疵、褪色、老年斑、角化症、胶原丧失以及真 皮和表皮中的其他变化，但是还表示由于老化的皮肤和角质附属物外观的 任何变化，例如角质层表面粗糙，但是还表示不系统地表现为改变的外观 的皮肤的任何内部改变，例如真皮变薄。“光老化”表示由长期和累积暴露 于太阳所引起的皮肤过早老化。
优选地，本发明涉及如上文所述的组合物用于改善皮肤的屏障功能以 及表皮的水合的用途。
最后，本发明的最后一个目的涉及化妆品治疗方法，其特征在于将包 含有效量的本发明的肽化合物的组合物局部施用于待治疗的皮肤或角质附 属物，以预防和/或治疗皮肤老化的迹象和光老化以及预防和/或修复UV辐 射引起的损伤。在一具体实施方案中，在皮肤暴露于太阳之前施用所述组 合物，因此是优异的预处理以预防DNA水平的损伤。
在本发明的第二实施方案中，将所述组合物作为晒后护理施用于皮肤 以修复DNA水平的任何皮肤损伤。
在本发明的最后一个优选实施方案中，在早上作为抗老化日间护理施 用所述组合物，或者在睡前作为夜间修复护理施用所述组合物。如果用作 日间护理，通过限制DNA水平的损伤的出现，所述组合物会提供关于环境 侵害如UVB辐射的皮肤保护。作为夜间护理，所述组合物会通过修复白天 所引起的皮肤损伤来发挥作用。
附图说明
图1是显示用通过siRNA/胱天蛋白酶-14基因转染的正常人角质形成 细胞(NHK)进行的免疫印迹结果的直方图。
图2a和2b是显示在接受UV辐射的正常人角质形成细胞(NHK)上进行 的2个彗星(comet)测试结果的直方图。
以下实施例描述和证实肽化合物的效力，例如本发明描述的那些效力， 但是不应当理解为限制本发明。
实施例
实施例1：在肽SEQIDNo:2的存在下，正常人角质形成细胞中胱天蛋白 酶-14表达的研究
这个研究的目的是测定胱天蛋白酶-14在通过本发明的肽处理或未处 理的正常人角质形成细胞中的表达：
方案
将培养的正常人角质形成细胞NHK用1%或3%-肽SEQIDNo:2处理 24小时。然后将细胞洗涤，用3.7%-多聚甲醛固定，在BSA(稀释至1/100th) 的存在下使用0.1%-triton。将细胞在胱天蛋白酶-14-特异性小鼠单克隆抗体 (BDBiosciences)的存在下温育，然后在与荧光标记偶联的二抗的存在下温 育。然后将细胞通过落射荧光显微镜(NikonEclipseE600显微镜)检查。
结果
相对于对照条件，在肽处理的NHK细胞中观察到光强度的增加。荧光 的这种增加是剂量依赖性的，因为当加入3%的肽溶液时荧光比1%时更强。 因此，肽SEQIDNo:2激活NHK中的胱天蛋白酶-14表达。
实施例2：在用肽SEQIDNo:2处理的HNK中通过siRNA研究胱天蛋白 酶-14表达
为了定量本发明的肽对NHK群体中胱天蛋白酶-14过量表达的效力， 利用siRNA技术“消除”编码胱天蛋白酶-14的基因。
方案
将NHK细胞在6-孔板中培养至60%汇合，然后用20μL的1%-肽SEQ IDNo:2处理。然后，逐孔小心地滴加100μL先前制备的包含胱天蛋白酶 -14的siRNA和转染试剂的混合物。将细胞培养板在37°C和5%CO2下温 育72小时。每2天更换培养基。实施4种条件：
-条件1：不含siRNA和肽活性成分的对照
-条件2：siRNA转染的细胞，不含肽活性成分
-条件3：未转染但用肽活性成分处理的细胞
-条件4：用siRNA转染并用肽活性成分处理的细胞
利用常规免疫印迹技术(蛋白印迹)观察胱天蛋白酶-14表达的定量，所 述免疫印迹技术通过抗胱天蛋白酶-14抗体并根据常规方案进行。为了分析 用siRNA转染的NHK中由所述肽带来的补偿，与其基因未被siRNA消除 的未处理的NHK进行比较。
结果
在条件1和3之间，发现加入所述肽导致胱天蛋白酶-14蛋白表达相对 于对照增加20.9%。在条件1和2之间，清楚看到siRNA对胱天蛋白酶-14 蛋白表达的影响：低30.6%。然而，将肽SEQIDNo:2加入用siRNA转染 的细胞帮助恢复胱天蛋白酶-14，然后由于siRNA的存在的减少相对于对照 条件仅14%。
结论是本发明的肽SEQIDNo:2增加NHK中胱天蛋白酶-14的表达。
实施例3：在肽SEQIDNo:1的存在下，人皮肤活组织检查中聚丝蛋白原 /聚丝蛋白表达的研究
这个研究的目的是测定本发明的肽对人皮肤活组织检查中的聚丝蛋白 和聚丝蛋白原(此后表示为聚丝蛋白原/聚丝蛋白)的量的影响。
方案
将人皮肤的样品在空气/液体界面培养。在第一条件下，将样品用1% 肽SEQIDNo:1处理24小时和72小时。在第二条件下，将样品用相同但 浓度为3%的肽处理24小时和72小时。
此后将这些皮肤样品用甲醛固定，然后包埋入石蜡中。然后制备大小 为2-3μm的切片。通过在胃蛋白酶中温育来暴露特异性位点后进行免疫染 色。然后，通过聚丝蛋白-特异性小鼠单克隆抗体(TebuSantaCruz)，随后与 荧光标记偶联的二抗来进行免疫染色。然后利用落射荧光显微镜(Nikon EclipseE600显微镜)检测皮肤切片。
结果
在用本发明的肽处理的活组织检查上观察到原/聚丝蛋白染色的增加。 注意到染色不仅是剂量依赖性的，而且其随时间增加(24小时条件与72小 时条件之间)。因此可以得出结论，肽SEQIDNo:1通过胱天蛋白酶-14表 达和/或活性的增加，允许聚丝蛋白原切割为聚丝蛋白的增加。
实施例4：NHK细胞的彗星测试
彗星测试是允许在细胞水平定量DNA损伤的测试。
方案
为了这个目的，将NHK细胞：
-在条件a下：与浓度为1%和3%的序列SEQIDNo:3的肽化合物培养 24小时，然后用20mJ/cm2的UVB辐射照射，以观察肽活性成分对细胞的 保护效应；
-在条件b下：在第一步中，用20mJ/cm2的UVB辐射照射，然后用浓 度为1%和3%的所述肽化合物处理24小时，以观察活性成分对细胞的修复 效应。
在每种情况下，通过无肽活性成分存在来实现对照条件。
然后通过胰蛋白酶处理(trypsination)来将细胞从它们的载体移出，然后 在900rpm下离心5分钟，之后浓缩和计数。
然后将特定细胞计数(25,000个细胞)掺入0.75%低熔点琼脂糖凝胶中， 然后沉积在预先用1%琼脂糖包被的玻片上。然后将玻片在4°C下浸没于裂 解缓冲液中1.5小时，然后在4°C下于碱性溶液中20分钟。然后裂解细胞， 并且变性DNA。将玻片浸没于电泳溶液中，然后施加电场(20V–250mA)。 因此使变性的DNA在琼脂糖凝胶内于4°C下迁移。在玻片上施用DNA荧 光染料(2μg/ml碘化丙啶)使得被损伤的情况下的DNA以彗星形式被观测 到。
定量软件用来确定应用于每种测试条件的平均尾矩(TailMoment)。这 个参数提供DNA损伤水平的信息：该参数越高，DNA损伤越大。
结果
结果如图2a和2b所示。在条件a下，当所述肽作为预处理(浓度为1% 或3%)施用时，尾矩降低57%，即细胞比施加UVB辐射的对照条件下遭受 更少损伤。这些结果清楚地证实SEQIDNo:3的肽化合物对NHK细胞的 保护效应。此外，当在没有任何预处理的照射后施用所述肽(条件b)时，当 以1%的浓度施用所述肽时，尾矩降低31%。当以3%的浓度施用所述肽时， 尾矩降低58%。条件b下的这个测试证实肽SEQIDNo:3对UV照射下的 DNA的补救作用。
实施例5：肽SEQIDNo:2对接受UVB辐射的人皮肤活组织检查的疗效 的证实
这个实验的目的是测量本发明的肽化合物在人皮肤活组织检查暴露于 UVB辐射后的修复能力。UV辐射，特别是UVB辐射诱导发生在包含两个 相邻的嘧啶(胸苷、胞嘧啶)的位点上的二聚化反应。然后形成几种类型的光 产物，其中有环丁烷-嘧啶二聚体或CPD。然而，已知当细胞受到基因毒性 应激时，其分裂周期暂时停止以允许DNA修复并避免在随后的细胞世代内 发生突变。仅在此后继续细胞增殖。如果损伤的比率或量太高，或者如果 修复无效，细胞引发程序性细胞死亡过程凋亡。因此，通过抗CPD抗体免 疫染色测量形成的光产物的量允许评价具有DNA修复作用的化合物的有 效性。
接受UVB辐射的皮肤活组织检查上的CPD免疫染色方案
将人皮肤活组织检查在空气/液体界面培养。使这些活组织检查接受 200mJ/cm2的UVB辐射。照射之后，在第一条件下，将肽SIQIDNo:2的 1%-溶液局部施用于该活组织检查24小时。在第二条件下，将肽SIQIDNo: 2的3%-溶液局部施用24小时。通过在照射之后局部施用PBS溶液来实现 对照条件。
为了染色环丁烷-嘧啶二聚体，将皮肤活组织检查包入石蜡并制备3μm 厚的组织切片。将玻片脱蜡，水合，并且用针对环丁烷-嘧啶二聚体的抗体 (MBLD194-1，小鼠单克隆)然后与荧光标记偶联的合适的二抗(Invitrogen A21202)进行免疫染色。然后用落射荧光显微镜(NikonEclipseE80i显微镜) 检查皮肤切片。
结果
在对照条件下，当活组织检查接受UVB辐射时观察到的荧光较强。在 利用肽SEQIDNo:2后处理测试的两种条件下，均观察到比用UVB辐射 的对照条件弱很多的荧光。
结论
肽SEQIDNo:2提供更好和更显著的DNA损伤修复，特别是作为胱 天蛋白酶-14激活的结果。还观察到这种修复作用是剂量依赖性的，因为施 用更大量的活性成分时修复作用更显著。
实施例6：防晒组合物