大花萱草圣诞红的组织培养方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102265785 B (45)授权公告日 2013.03.06 CN 102265785 B *CN102265785B* (21)申请号 201010190810.X (22)申请日 2010.06.02 C12N 5/04(2006.01) A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 上海上房园艺有限公司 地址 201114 上海市闵行区浦江镇浦江村 (72)发明人 陈建华 黄建荣 沈勤 (74)专利代理机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 31225 代理人 林君如 (54) 发明名称 大花萱草圣诞红的组织培养方法 (57) 摘要 本发明涉及大花萱。

2、草圣诞红的组织培养方 法， 该方法包括以下步骤， 在萱草 圣诞红 开花 时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽， 经过 无菌材料的获得、 芽的分化和增殖、 不定芽壮苗培 养、 生根培养及炼苗与移栽获得萱草 圣诞红 植 株。与现有技术相比， 本发明通过组培技术， 可大 大提高繁殖速度和苗木的整齐度， 更好地保持原 有的母本性状， 并且能够提高成活率， 从而提高产 量， 移栽成活率可达 95。 (51)Int.Cl. 审查员 王颖 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 一种用于大花萱草圣诞。

3、红组织培养的培养基， 其特征在于， 包括花苞诱导培养 基、 不定芽增殖培养基、 壮苗培养基和生根培养基， 其中， 所述的花苞诱导培养基的成分 为 MS+KT0.3mg/L+NAA3.0mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的不定芽增殖培养基的成 分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的壮苗培养基的成分 为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的生根培养基的成分为 MS+NAA0.1mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L。 权 利 要 求 书 。

4、CN 102265785 B 2 1/6 页 3 大花萱草圣诞红的组织培养方法 技术领域 0001 本发明涉及一种植物的组织培养方法， 尤其是涉及一种大花萱草圣诞红的组织培 养方法。 背景技术 0002 大花萱草 圣诞红 为百合科萱草属植物， 多年生草本， 叶嫩绿色且， 绿叶成丛极为 美观 ； 初夏开花， 花大， 漏斗形， 直径 10cm 左右， 红色， 花中心黄色， 花色鲜艳， 栽培容易， 病 虫害少， 对环境的适应性强。 萱草因观赏性强， 适应环境， 所以在园林中广泛应用， 可大面积 片植做地被， 也可丛植或配置于花境中， 也是小庭院美化的优良材料。 目前国内常见的萱草 品种为黄色的金娃娃。

5、和红色的 红运 ， 色彩较为单一， 而大花萱草 圣诞红 为红黄复色， 大 红色花瓣中部亮黄色， 非常美丽漂亮， 且耐半荫， 又可做疏林地被植物， 是良好的花镜与庭 院材料。 因作为国外引进的品种引种数量较少， 其分株慢， 市场需求量大， 种苗供应受限制。 目前国内关于大花萱草 圣诞红 的组培报道尚未见。 发明内容 0003 本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种大大提高繁殖 速度和苗木的整齐度， 更好地保持原有的母本性状的大花萱草圣诞红的组织培养方法。 0004 本发明的目的可以通过以下技术方案来实现 ： 0005 大花萱草圣诞红的组织培养方法， 其特征在于， 该方法包括以下。

6、步骤 ： 0006 (1) 无菌材料的获得 0007 在萱草 圣诞红 开花时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用浓度为 75wt的乙醇浸泡 20-40s， 1wt的升汞溶液浸泡 10-20min， 经无菌水冲洗 5-6 次后用无菌滤纸吸干表面水份， 取花苞基部切成 1cm 长接种于花苞诱导 培养基上或取小芽基部切成 1cm 长接种于小芽诱导培养基上 ； 0008 (2) 芽的分化和增殖 0009 花苞接种于花苞诱导培养基上 6 周后， 花苞开始膨大， 出现黄绿色突起， 3 周后可 见明显的愈伤组织， 小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，。

7、 继续培养1个 月， 然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养 ； 0010 (3) 不定芽壮苗培养 0011 在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 不定芽迅速伸长， 20 天后可以长到 2-3cm ； 0012 (4) 生根培养 0013 取高度为 2-3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 10 天后幼苗基部分化 出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 2-3cm ； 0014 (5) 炼苗与移栽 0015 继续生根培养 20-30 天， 根系长至 1-2cm 时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室 说 明 书 CN 。

8、102265785 B 3 2/6 页 4 内开瓶炼苗 3 天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化 40 天后， 即可移栽室外， 给予肥水管 理即可。 0016 所 述 的 花 苞 诱 导 培 养 基 的 成 分 为 MS+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L、 MS+KT0.3mg/ L+NAA3.0mg/L 或 MS+KT0.5mg/L+NAA5.0mg/L。 0017 所述花苞诱导培养基的成分优选 MS+KT0.3mg/L+NAA3.0mg/L。 0018 所述的小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA2.0mg/ L+NAA0.。

9、2mg/L 或 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。 0019 所述的不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA2.0mg/ L+NAA0.2mg/L 或 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。 0020 所述不定芽增殖培养基的成分优选 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。 0021 所 述 的 壮 苗 培 养 基 的 成 分 为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA1.0mg/ L+NAA0.1mg/L 或 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。 0。

10、022 所述壮苗培养基的成分优选 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。 0023 所述的生根培养基的成分为 MS+NAA0.05mg/L、 MS+NAA0.1mg/L 或 MS+NAA0.2mg/L， 优选 MS+NAA0.1mg/L。 0024 所述的培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 24-26， 光照为 70-90mol/ms， pH 值为 5.5-6.0。 0025 与现有技术相比， 本发明通过组培技术， 可大大提高繁殖速度和苗木的整齐度， 更 好地保持原有的母本性状， 并且能够提高成活率， 从而提高产量。 具体实施方式 002。

11、6 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。 0027 实施例 1 0028 大花萱草圣诞红的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0029 (1) 无菌材料的获得 0030 在萱草 圣诞红 开花时摘取花苞， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用浓度为 75wt的乙醇浸泡20s， 1wt的升汞溶液浸泡10min， 经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干 表面水份， 取花苞基部切成 1cm 长， 接种于花苞诱导培养基上， 该花苞诱导培养基的成分为 MS+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L ； 0031 (2) 芽的分化和增殖 0032 花苞接种于花苞诱导培养基上 6 周后， 花苞开始膨大。

12、， 出现黄绿色突起， 3 周后可 见明显的愈伤组织， 继续培养 1 个月， 然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行 培养， 该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0033 (3) 不定芽壮苗培养 0034 在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L， 不定芽迅速伸长， 20 天后 可以长到 2cm ； 0035 (4) 生根培养 0036 取高度为 2cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 该生根培养基的成分为 说 明。

13、 书 CN 102265785 B 4 3/6 页 5 MS+NAA0.05mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 2cm ； 0037 (5) 炼苗与移栽 0038 继续生根培养20天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理即可， 移栽成活率可达到 95。 0039 以上的培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 24， 光照为 70mol/ms， pH 值为 5.5。 0040 实施例 2 0041 大花萱草。

14、圣诞红的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0042 (1) 无菌材料的获得 0043 在萱草 圣诞红 开花时摘取花苞， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用浓度为 75wt的乙醇浸泡40s， 1wt的升汞溶液浸泡20min， 经无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干 表面水份， 取花苞基部切成 1cm 长， 接种于花苞诱导培养基上， 该花苞诱导培养基的成分为 MS+KT0.5mg/L+NAA5.0mg/L ； 0044 (2) 芽的分化和增殖 0045 花苞接种于花苞诱导培养基上 6 周后， 花苞开始膨大， 出现黄绿色突起， 3 周后可 见明显的愈伤组织， 继续培养 1 个月， 然后切下带。

15、芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行 培养， 该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L， 基部愈伤组织比较多， 但不影响不定芽的增殖， 不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象， 在该培养中生长发育良 好 ； 0046 (3) 不定芽壮苗培养 0047 在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L， 不定芽迅速伸长， 20 天后 可以长到 3cm ； 0048 (4) 生根培养 0049 取高度为 3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 该。

16、生根培养基的成分为 MS+NAA0.2mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 3cm ； 0050 (5) 炼苗与移栽 0051 继续生根培养20天， 根系长至1cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理即可。 0052 以上的培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 26， 光照为 90mol/ms， pH 值为 6.0。 0053 实施例 3 0054 大花萱草圣诞红的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0055 (1)。

17、 无菌材料的获得 0056 在萱草 圣诞红 开花时摘取花苞， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用浓度为 75wt的乙醇浸泡30s， 1wt的升汞溶液浸泡15min， 经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干 表面水份， 取花苞基部切成 1cm 长， 接种于花苞诱导培养基上， 该花苞诱导培养基的成分为 MS+KT0.3mg/L+NAA3.0mg/L ； 说 明 书 CN 102265785 B 5 4/6 页 6 0057 (2) 芽的分化和增殖 0058 花苞接种于花苞诱导培养基上 6 周后， 花苞开始膨大， 出现黄绿色突起， 3 周后可 见明显的愈伤组织， 继续培养 1 个月， 然后切下带芽。

18、愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行 培养， 该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0059 (3) 不定芽壮苗培养 0060 在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L， 不定芽迅速伸长， 20 天后 可以长到 3cm ； 0061 (4) 生根培养 0062 取高度为 3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 该生根培养基的成分为 MS+NAA0.1mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 。

19、3cm ； 0063 (5) 炼苗与移栽 0064 继续生根培养20天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理即可。 0065 上述培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 25， 光 照为 80mol/ms， pH 值为 5.8。 0066 实施例 4 0067 大花萱草圣诞红的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0068 (1) 无菌材料的获得 0069 在初春取萱草 圣诞红 植株刚萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 采用。

20、浓度为 75wt的乙醇浸泡 30s， 再利用 1wt的升汞溶液浸泡 15min， 经无菌水冲洗 5 次后用无菌滤纸吸干表面水份， 取小芽基部切成 1cm 长， 将其接种于小芽诱导培养基上， 该 小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0070 (2) 芽的分化和增殖 0071 小芽接种于小芽诱导培养基 4 周后可见明显的愈伤组织， 继续培养 1 个月， 然 后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养， 该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0072 (3) 不定芽壮苗培养 0073 在不定芽增殖培养基中诱。

21、导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L， 不定芽迅速伸长， 20 天后 可以长到 3cm ； 0074 (4) 生根培养 0075 取高度为 3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 该生根培养基的成分为 MS+NAA0.1mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 3cm ； 0076 (5) 炼苗与移栽 0077 继续生根培养20天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后，。

22、 即可移栽室外， 给予肥水管理即可。 0078 上述培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 25， 光 照为 80mol/ms， pH 值为 5.8。 说 明 书 CN 102265785 B 6 5/6 页 7 0079 实施例 5 0080 大花萱草圣诞红的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0081 (1) 无菌材料的获得 0082 在初春取萱草 圣诞红 植株刚萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 采用浓度为 75wt的乙醇浸泡 30s， 再利用 1wt的升汞溶液浸泡 15min， 经无菌水冲洗 5 次后用无菌滤纸吸干表面水份， 。

23、取小芽基部切成 1cm 长， 将其接种于小芽诱导培养基上， 该 小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0083 (2) 芽的分化和增殖 0084 小芽接种于小芽诱导培养基 4 周后可见明显的愈伤组织， 继续培养 1 个月， 然 后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养， 该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L ； 0085 (3) 不定芽壮苗培养 0086 在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1。

24、mg/L， 不定芽迅速伸长， 20 天后 可以长到 3cm ； 0087 (4) 生根培养 0088 取高度为 3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 该生根培养基的成分为 MS+NAA0.1mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 3cm ； 0089 (5) 炼苗与移栽 0090 继续生根培养20天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理即可。 0091 上述培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 。

25、25， 光 照为 80mol/ms， pH 值为 5.8。 0092 实施例 6 0093 大花萱草圣诞红的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0094 (1) 无菌材料的获得 0095 在初春取萱草 圣诞红 植株刚萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 采用浓度为 75wt的乙醇浸泡 30s， 再利用 1wt的升汞溶液浸泡 15min， 经无菌水冲洗 5 次后用无菌滤纸吸干表面水份， 取小芽基部切成 1cm 长， 将其接种于小芽诱导培养基上， 该 小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L ； 0096 (2) 芽的分化和增殖 0097 小芽。

26、接种于小芽诱导培养基 4 周后可见明显的愈伤组织， 继续培养 1 个月， 然 后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养， 该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L ； 0098 (3) 不定芽壮苗培养 0099 在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽， 将大丛芽分成小丛或单芽后， 放入壮苗 培养基上， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L， 不定芽迅速伸长， 20 天后 可以长到 3cm ； 0100 (4) 生根培养 说 明 书 CN 102265785 B 7 6/6 页 8 0101 取高度为 3cm 的小植株， 转接入生根培养基中诱导生根， 该生根培养基的成分为 MS+NAA0.1mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以长至 3cm ； 0102 (5) 炼苗与移栽 0103 继续生根培养20天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗3天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理即可。 0104 上述培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 25， 光 照为 80mol/ms， pH 值为 5.8。 说 明 书 CN 102265785 B 8 。