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1、(10)授权公告号 CN 101974010 B (45)授权公告日 2012.01.04 CN 101974010 B *CN101974010B* (21)申请号 201010518995.2 (22)申请日 2010.10.26 C07D 493/08(2006.01) A61K 31/357(2006.01) A61P 9/00(2006.01) (73)专利权人 云南生物谷灯盏花药业有限公司 地址 650224 云南省昆明北郊金殿 (72)发明人 杜江 林艳和 林炎海 (54) 发明名称 一种具有药用活性的新化合物灯盏细辛酸 (57) 摘要 本 发 明 涉 及 一 种 具 有 结 构。
2、 式 (I) 的 新 化 合 物 或 其 药 学 上 可 接 受 的 盐， 该 化 合 物 可 以 自 菊 科 飞 蓬 属 植 物 灯 盏 细 辛 Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz. 的 干 燥 全 草中提取分离得到。所述的化合物具有抗炎 性反应、 抗血小板聚集、 抗血栓及扩血管作用， 可用于制备用于心脑血管疾病治疗的药物。 结构式 (I) (51)Int.Cl. 审查员 朱洁 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 101974010 B1/1 页 2 1. 具有如下的结构式化合物灯盏细辛酸或。
3、其药学上可以接受的盐 ： 2. 一种制备权利要求 1 的化合物的制备方法， 其特征在于取灯盏细辛的全草或地上部 分， 粉碎， 用 0-95乙醇或 0-95丙酮水溶液提取三次， 合并三次提取液， 减压浓缩， 浓缩 液用聚酰胺树脂层析， 先用水洗脱， 再用 50-90的乙醇洗脱， 收集 50-90乙醇洗脱液后 减压浓缩， 此部分用硅胶反复层析， 制备得到灯盏细辛酸。 3. 如权利要求 2 的一种制备权利要求 1 的化合物的制备方法， 其特征在于取灯盏细 辛的全草或地上部分， 粉碎， 用 0-95乙醇或 0-95丙酮水溶液提取三次， 合并三次提 取液， 减压浓缩， 浓缩液用聚酰胺树脂层析， 先用水洗。
4、脱， 再用 50-90的乙醇洗脱， 收集 50-90乙醇洗脱液后减压浓缩， 此部分用硅胶反复层析， 结合增/减压反相Rp-18柱层析、 Sephadex LH-20 反复纯化， 制备得到灯盏细辛酸。 4. 药物组合物， 其含有权利要求 1 的化合物作为活性成分以及药学上可接受的载体。 5. 权利要求 1 的化合物在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 101974010 B1/5 页 3 一种具有药用活性的新化合物灯盏细辛酸 技术领域 0001 本发明涉及一种具有抗炎性反应、 抗血小板聚集、 抗血栓及扩血管作用的新化合 物及其药学上可以接受的盐， 以及含该化合物作为活。
5、性成分的治疗心脑血管疾病的药用组 合物。 具体的说是从灯盏细辛中提取的新化合物灯盏细辛酸(Brevic acid)、 制备方法及其 在制药中的应用。 背景技术 0002 迄今为止， 以冠心病、 脑卒中 ( 脑中风 ) 为代表的心脑血管疾病发病率居高不下， 其病死率位居人类各类疾病死亡率首位。寻找新的、 有效的治疗心脑血管疾病药物是当今 制药及临床医学界非常关注的难点及热点。 0003 灯 盏 细 辛 又 名 灯 盏 花， 系 菊 科 飞 蓬 属 植 物 Erigeron Breviscapus(Vant.) Hand.-Mazz.的干燥全草， 具有散寒解表， 祛风除湿， 活络止痛的功效。 云南。
6、药物研究所张人 伟等首次从灯盏细辛中分离到黄酮类活性成分灯盏乙素， 并把灯盏乙素为主、 含少量灯盏 甲素 ( 芹菜素苷 ) 的混合物称为灯盏花素 (breviscapin) 张人伟， 杨生元， 林永月， 药学学 报 (1981)， 16(1)， 68-6。除了灯盏乙素外， 专利 CN1136434 公开了二咖啡酸奎宁酸酯类化 合物 3， 5- 二咖啡酰基奎宁酸和 3， 4- 二咖啡酰基奎宁酸 (3， 4-dicaffeoylquimc acid)。 CN1064236C 则公开了焦袂康酸 (promenonic acid) 及飞蓬苷 (erigenoide) 在治疗心脑 血管疾病方面应用。张卫。
7、东等申请了从灯盏细辛中分离到的活性成分 1-(2 - 吡喃 酮 )-6- 咖啡酰基 -D- 葡萄糖苷的制剂和制备方法的专利 CN1252276。专利 CN1462750 公开了从灯盏细辛中分离到的活性成分飞蓬酯乙及其制备方法和在制药中的应用。 除此之 外， 尚未见其他自灯盏细辛中发现的新化合物公开。 0004 迄今为止， 自灯盏细辛中提取的、 具有治疗心脑血管疾病活性的药物很多。 其中大 部分为多种化合物的混合物， 这些药物虽然具有治疗作用， 但多种成分必然造成如下的问 题 ： 疗效的均一性差、 质量控制难、 副作用难以控制 ( 注射剂尤其明显 )。单类化合物有效 的药物仅有灯盏花素制剂， 难。
8、以满足复杂的临床医学需求。 0005 鉴于如上原因， 本发明人经过深入研究， 从灯盏细辛中提取分离出新的化台物 ： 灯 盏细辛酸 (Brevic acid)。经试验证明其具有抗炎性反应、 抗血小板聚集、 抗血栓及扩张血 管作用， 可用于制备用于治疗心脑血管疾病的药物。 并提供了灯盏细辛酸的提取制备方法。 发明内容 0006 本发明针对现有技术空白， 公开新活性成分灯盏细辛酸 ( 以下简称 “本发明化合 物” 或 “灯盏细辛酸” ) 或其药学上可以接受的盐。本发明提供了如下技术方案 ： 0007 具有如下的结构式化合物灯盏细辛酸 ： 0008 说 明 书 CN 101974010 B2/5 页 。
9、4 0009 本发明化合物结构数据如下 ： 0010 HRESIMS ： m/z 493.1111M+Na+(cal for C24H22O10Na.493.1110)， D 19.6， -138.44 (0.06， 丙酮 ) ； 0011 IR(KBr 压 片 ) ： 3426， 2938， 1717， 1607， 1516， 1450， 1316， 1279， 1155， 1101， 1043， 1028， 835， 716cm-1； 0012 UVmax(MeOH) ： 228.5(22174)， 315(20224)nm ； 0013 1H NMR(400MHz， DMSO-d6， p。
10、pm) ： 2.28-2.48(2H， m， H-2， H-2)， 3.95， 4.18(each 1H， m， H-9)， 4.15(1H， m， H-6)， 4.59(1H， t， J 5.6Hz， H-5)， 5.31(1H， t， J 5.2Hz， H-4)， 5.64(1H， t， J 5.6Hz， H-3)， 6.21(1H， d， J 16Hz， H-3” )， 6.74(2H， d， J 7.6Hz， H-6” ， H-8” )， 7.29(2H， d， J 7.6Hz， H-5” ， H-9” )， 7.35(1H， d， J 16Hz， H-2” )， 7.54(2H， m。
11、， H-4 ， H-6 )， 7.65(1H， m， H-5 )， 8.01(2H， m， H-3 ， H-7 )。 0014 13C NMR(100MHz， DMSO-d6， ppm) ： 104.0(C-1)， 38.3(C-2)， 66.0(C-3)， 67.8(C-4)， 74.1(C-5)， 82.3(C-6)， 59.4(C-9)， 167.2(C-10)， 165.8(C-1 )， 130.2(C-2 )， 129.9(C-3 ， C-7 )， 129.3(C-4 ， C-6 )， 133.9(C-5 )， 165.5(C-1” )， 145.9(C-2” )， 113.7(C-。
12、3” )， 125.1(C-4” )， 130.7(C-5” ， C-9” )， 116.3(C-6” ， C-8” )， 160.6(C-7” )。 0015 该化合物为新化合物， 与专利 CN1462750 中公开的飞蓬酯乙骨架相同， 但取代基 及位置均不同。飞蓬酯乙是分别在 3， 5 位形成咖啡酸酸酯， 而本专利涉及的灯盏细辛酸则 3 位上由苯甲酰基取代形成苯甲酸酯， 而 4 位上则形成对羟基苯丙烯酸酯。 0016 本发明所说的盐是指药学上可接受的盐， 例如与氢氧化钠， 氢氧化钾等碱形成的 盐。 0017 本发明所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体， 例如 ： 稀释剂、 赋 。
13、形剂如水等， 填充剂如淀粉、 蔗糖等 ； 黏合剂如纤维素衍生物、 藻酸盐、 明胶和聚乙烯吡咯烷 酮 ； 湿润剂如甘油 ； 崩解剂如琼脂、 碳酸钙和碳酸氢钠 ； 吸收促进剂如季铵化合物 ； 表面活 性剂如十六烷醇 ； 吸附载体如高岭土和皂黏土 ； 润滑剂如滑石粉、 硬脂酸钙和镁、 和聚乙二 醇等。另外还可以在组合物中加入其他辅剂如香味剂、 甜味剂等。 0018 本发明提供了制备权利要求 1 的本发明化合物的方法 ： 取灯盏细辛的全草或地上 部分， 粉碎， 用 0-95醇或 0-95丙酮水溶液提取三次， 合并三次提取液， 减压浓缩。浓缩 液用聚酰胺树脂层析， 先用水洗脱， 再用 50-90的乙醇洗。
14、脱， 收集 50-90乙醇洗脱液后 减压浓缩。此部分浓缩液至少可用如下方法分离制备得到灯盏细辛酸 ： 0019 1、 用硅胶反复层析 ； 0020 2、 用增 / 减压反相 (Rp-18) 柱层析制备 ； 说 明 书 CN 101974010 B3/5 页 5 0021 3、 用葡聚糖凝胶 (Sephadex LH-20) 反复纯化制备 ； 0022 4、 用上述 1 结合 2 和 / 或 3 的方法制备。 0023 除上述制备方法， 本领域技术人员熟知的一些方法也可以用于制备灯盏细辛酸， 比如前述灯盏细辛全草用乙酸乙酯提取、 浓缩液用溶剂分配萃取后用各种正反相层析方法 制备本发明化合物。 0。
15、024 药效学试验研究 0025 一 . 心脑血管方面的药理作用 0026 1. 对不同诱导剂诱导血小板凝集的影响 0027 1.1 材料 0028 灯盏细辛酸 ： 20mg/kg 灌胃 ； 0029 空白对照组 ： 生理盐水 ； 0030 阳性对照 ： 阿司匹林。 0031 1.2 实验方法 0032 豚鼠分组 ( 每组 8 只 )， 灌胃 5 天， 空白对照用生理盐水。末次给药 1 小时后颈动 脉采血， 以枸橼酸钠抗凝， 混匀， 离心， 合并上清液作为 PRP( 富血小板血浆 )， 血小板计数 ； 余下血浆离心， 取上清液作为PPP(贫血小板血浆) ； 以PPP调零， 取PRP300l加入。
16、比浊管， 37温育， 加入诱导剂 PAF( 血小板活化因子 )， 聚集不同时间， 记录数据。结果见表 1。 0033 0034 与空白对照组比较 *p 0.01 0035 用 ADP 诱导剂的试验结构与上述实验结果类似。 0036 由上述结果可知， 灯盏细辛酸能抑制不同诱导剂诱导的血小板聚集 ( 凝集 )、 降低 最大聚集率， 效果与阿司匹林类似。 0037 2. 对大鼠体外血栓形成的影响 0038 按照药理学公知方法取下分别测定血栓温重及血栓干重。 0039 结果表明， 在大鼠动脉 - 静脉血流旁路术血栓形成的实验中， 与模型对照组比较， 灯盏细辛酸组 P 0.01 ； 在大鼠体外血栓形成过。
17、程中， 灯盏细辛酸使血栓湿重较对照组比 较有显著性差异 (P 0.01)。 0040 二 . 抗炎性方面的药理作用 ： 对二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 0041 本发明化合物物 ： 20mg/kg 灌胃 ； 0042 对照组 ： 生理盐水 ； 0043 实验方法 0044 参照陈奇主编的 中药药理研究方法学 制作动物炎症模型， 结果见下表 ： 说 明 书 CN 101974010 B4/5 页 6 0045 0046 0047 与对照组比较 *P 0.01 0048 三 . 血管活性试验 0049 表 2. 灯盏细辛酸对苯肾上腺素诱导兔主动脉收缩的影响 (n 10) 0050 0051。
18、 *P 0.01vs 给药前对照 0052 鉴于灯盏细辛酸具有以上药理活性， 因此预想灯盏细辛酸可用于治疗心脑血管疾 病， 尤其是冠心病、 脑卒中 ( 中风 )。 0053 本发明化合物可单独或与其它药用许可的辅料按现有技术制成片剂、 胶囊、 滴丸、 颗粒剂等口服剂型或注射液、 冻干剂等注射用剂型。 实施例 0054 实施例 1 ： 灯盏细辛酸的提取制备工艺 0055 取灯盏细辛的全草 10kg， 粉碎， 用 70丙酮水溶液提取三次， 合并三次提取液， 减 压浓缩。浓缩液上聚酰胺树脂层析， 先用水洗脱， 再用 60的乙醇洗脱， 收集 60乙醇洗脱 液后后减压浓缩， 此部分用硅胶反复层析， 制备。
19、得到灯盏细辛酸 (Brevic acid)50g。 0056 实施例 2 ： 灯盏细辛酸的提取制备工艺 0057 取灯盏细辛的全草 10kg， 粉碎， 用 70乙醇水溶液提取三次， 合并三次提取液， 减 压浓缩。浓缩液上聚酰胺树脂层析， 先用水洗脱， 再用 80的乙醇洗脱， 收集 80乙醇洗 脱液后后减压浓缩， 此部分用增压反相 (Rp-18) 柱层析分离制备得到灯盏细辛酸 (Brevic acid)60g。 0058 实施例 3 ： 灯盏细辛酸的提取制备工艺 0059 取灯盏细辛的全草 10kg， 粉碎， 用水溶液提取三次， 合并三次提取液， 减压浓缩。 浓缩液上聚酰胺树脂层析， 先用水洗脱。
20、， 再用 50的乙醇洗脱， 收集 50乙醇洗脱液后后 减压浓缩， 此部分用葡聚糖凝胶 (Sephadex LH-20) 反复纯化制备得到灯盏细辛酸 (Brevic acid)40g。 0060 实施例 4、 灯盏细辛酸的片剂的制备工艺 0061 将灯盏细辛酸 10g 与淀粉混合均匀后， 加入 10的淀粉浆 10g 制成软材， 过 14 目 筛制粒， 在 70-80温度下干燥， 过 12 目筛整粒， 加硬脂酸镁 2g 混合后， 压制成 1000 片， 即 得。每片含灯盏细辛酸 10mg。 0062 实施例 5、 灯盏细辛酸的胶囊剂制备工艺 0063 加 10g 灯盏细辛酸， 加 80干燥的淀粉 。
21、30g 和硬脂酯镁 2g 混合均匀后， 分装成 1000 粒胶囊， 每粒胶囊含灯盏细辛酸 10mg。 0064 实施例 6. 灯盏细辛酸的注射液制备 说 明 书 CN 101974010 B5/5 页 7 0065 10g 灯盏细辛酸溶解在 5000ml 冷的注射用蒸馏水中， 85g 氯化钠、 2g 氢氧化钠混 合溶解在 1000ml 热的注射用蒸馏水中。将两种溶液混合， 加水至 10000ml， 调节 pH 值在 5.0-7.0 滤棒过滤， 膜过滤， 澄明度检查合格后加氮气封瓶， 在 115， 10atm 压力下灭菌 25 分钟。 0066 实施例 7. 灯盏细辛酸的注射用冻干剂制备 0067 取适量氢氧化钾、 氯化钠、 甘露醇， 加注射用水 1600 毫升溶解， 加活性炭 3.2g， 吸 收 30 分钟除热原， 过滤除去活性碳， 在滤液中加入灯盏细辛酸 10g， 调节 pH 为 6.0 7.3， 微孔滤膜滤过， 加注射用水至 2000ml， 分装为 1000 支， 冷冻干燥， 即得。 说 明 书 。