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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)实用新型专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201620881433.7 (22)申请日 2016.08.15 (73)专利权人 重庆出入境检验检疫局检验检疫 技术中心 地址 400020 重庆市江北区红黄路8号 (72)发明人 聂福平杨俊王昱王国民 张雷吴蕊 (74)专利代理机构 重庆市恒信知识产权代理有 限公司 50102 代理人 伍纯建 (51)Int.Cl. C12M 1/34(2006.01) C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/68(2006.01) (54)实用新型名称 口蹄疫病毒RTLAMP。
2、检测试剂盒 (57)摘要 本实用新型公开了一种口蹄疫病毒RT-LAMP 检测试剂盒， 包括盒体， 与盒体后侧面连接的盒 盖， 试剂管固定座和试剂管稳固结构， 其中试剂 管固定座为上、 下、 前和后四个壁组成的方形管 状结构， 在上壁设置有反应液管存放孔 、 反应液 管存放孔、 酶溶液管存放孔、 阳性对照管存放 孔、 阴性对照管存放孔和DEPC水管存放孔， 在试 剂管固定座的上方设置试剂管稳固结构， 试剂管 稳固结构设置有与上述各存放孔相对应的稳固 孔。 本实用新型检测灵敏度高、 检测快速， 使用时 取放试剂方便。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 206014913 U 2017.0。
3、3.15 CN 206014913 U 1.口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 包括盒体 （1） ， 与盒体 （1） 后侧面连接的盒盖 （4） ， 其 特征在于： 还包括试剂管固定座 （2） 和试剂管稳固结构 （3） ， 其中所述试剂管固定座 （2） 为 上、 下、 前和后四个壁组成的方形管状结构， 在所述上壁设置有反应液管存放孔 （5） 、 反应 液管存放孔 （6） 、 酶溶液管存放孔 （7） 、 阳性对照管存放孔 （8） 、 阴性对照管存放孔 （9） 和 DEPC水管存放孔 （10） ， 在所述试剂管固定座 （2） 的上方设置试剂管稳固结构 （3） ， 所述试剂 管稳固结构 （3） 设置。
4、有与反应液管存放孔 （5） 、 反应液管存放孔 （6） 、 酶溶液管存放孔 （7） 、 阳性对照管存放孔 （8） 、 阴性对照管存放孔 （9） 和DEPC水管存放孔 （10） 相对应的稳固孔 （14） 。 2.根据权利要求1所述口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 其特征在于： 所述试剂管稳固 结构 （3） 的上表面设置有说明书存放槽 （12） 。 3.根据权利要求1或2所述口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 其特征在于： 所述试剂管固 定座 （2） 的两相对的边上设置有半圆形缺口 （11） 。 4.根据权利要求1或2所述口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 其特征在于： 所述试剂管稳 固结。
5、构 （3） 的两相对的边上设置有凹槽 （13） 。 5.根据权利要求1或2所述口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 其特征在于： 所述盒体 （1） 、 盒盖 （4） 、 试剂管固定座 （2） 和试剂管稳固结构 （3） 均由纸板制成。 权利要求书 1/1 页 2 CN 206014913 U 2 口蹄疫病毒RTLAMP检测试剂盒 技术领域 0001 本实用新型属于疫病检测技术领域， 具体是一种口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 可用于动物口蹄疫病毒的检测。 背景技术 0002 口蹄疫 （Foot-and-mouth disease， FMD） 是由口蹄疫病毒 （Foot-and-mouth d。
6、isease virus， FMDV） 引起的以口腔黏膜、 蹄部和乳房皮肤发生水疱性疹为主要症状的急 性、 烈性、 接触性传染病,又称为 “口疮” 、“辟癀”“5号病” 等。 FMDV主要侵害猪、 牛、 羊等主要 家畜和其他家养、 野生偶蹄动物， 宿主范围广泛， 易感动物多达70多种。 该病传播途径多， 速 度快。 大多数国家都属于 “口蹄疫疫区” ， 非口蹄疫的国家或区域仅占少数。 2013 年， 全球口 蹄疫疫情集中在亚、 非地区以及与亚洲相邻的欧洲部分地区暴发， 全球共有 44 个国家或 地区报告发生口蹄疫疫情或分离到口蹄疫病毒。 多次世界范围内的暴发流行， 造成巨大的 政治、 经济损失。
7、。 0003 FMDV属于微RNA 病毒科 （Picornaviridae） 的口蹄疫病毒属 （Aphthovirus） ， 与所 有微RNA 病毒一样含有单股正链 RNA 基因组， 其长度约 8300nt， 其功能如同 mRNA， 编码 病毒聚蛋白。 FMDV包括A 型、 O型、 C型、 亚洲I （Asia1） 型、 SAT 型、 SAT型和SAT型7个血清 型， 每个血清型又有许多不同的亚型， 各血清型之间没有交叉性免疫， 同一血清型的各亚型 之间仅有部分交叉免疫， 使得口蹄疫的诊断和防控更加困难。 在我国， 口蹄疫的流行形势比 较严峻， 目前仅分离得到 A 型、 O 型和Asia 1 型。
8、。 近年来， A 型和O型口蹄疫疫情不断发 生， 给养殖户造成重大的经济损失。 不同血清型、 不同遗传谱系口蹄疫病毒的混杂存在及周 边国家口蹄疫疫情复杂、 流行毒株跨境传播的威胁， 进一步加大了我国口蹄疫防控的复杂 性和难度。 因此， 建立一种快速检测口蹄疫病毒及区分血清型的方法有助于该病的防控和 诊治。 在动物及其副产品的进出口检疫中也有着重要意义。 发明内容 0004 鉴于以上缺陷， 本实用新型的目的是提供一种检测灵敏度高、 检测快速的口蹄疫 病毒RT-LAMP检测试剂盒， 且试剂盒在运输过程中对试剂管有更好的稳固效果， 在使用中拿 取更方便。 0005 为了实现上述目的本实用新型采用如下。
9、技术方案： 口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂 盒， 包括盒体， 与盒体后侧面连接的盒盖， 试剂管固定座和试剂管稳固结构， 其中所述试剂 管固定座为上、 下、 前和后四个壁组成的方形管状结构， 在所述上壁设置有反应液管存放孔 、 反应液管存放孔、 酶溶液管存放孔、 阳性对照管存放孔、 阴性对照管存放孔和DEPC水管 存放孔， 在所述试剂管固定座的上方设置试剂管稳固结构， 所述试剂管稳固结构设置有与 反应液管存放孔 、 反应液管存放孔、 酶溶液管存放孔、 阳性对照管存放孔、 阴性对照管存 放孔和DEPC水管存放孔相对应的稳固孔。 0006 具体地， 所述试剂管稳固结构的上表面设置有说明书存放槽， 。
10、用于存放操作说明 说明书 1/3 页 3 CN 206014913 U 3 书。 0007 所述试剂管固定座的两相对的边上设置有半圆形缺口， 在使用过程中便于将试剂 管固定座取出， 进行实验时便于试剂管的取放。 0008 所述试剂管稳固结构的两相对的边上设置有凹槽， 便于使用时取出试剂管稳固结 构。 0009 本实用新型发明的优点是：（1） 试剂盒简便、 易保存、 取用试剂方便；（2） 不需要特 殊的试剂与设备；（3） 特异性好： 应用六个区域， 四条引物， 根据是否扩增就能判断靶标物质 的存在与否， 阳性率可达99.2%， 假阳性率小于0.1%；（4） 快速、 高效简便的扩增， 整个检测时 。
11、间仅需要1小时；（5） 鉴定简便， 可通过肉眼可视化观察检测结果， 无需电泳等其他分析步 骤， 阳性结果为绿色， 阴性结果为橙色；（6） 操作简便实用， 可广泛应用于基层口岸临床口蹄 疫病毒筛查。 附图说明 0010 本实用新型的装置可以通过附图给出的非限定性实施例进一步说明。 0011 图1为本实用新型的俯视结构示意图 （不含试剂管稳固结构） ； 0012 图2为本实用新型的纵切面结构示意图； 0013 图中： 1-盒体， 2-试剂管固定座， 3-试剂管稳固结构， 4-盒盖， 5-反应液管存放孔 ， 6-反应液管存放孔， 7-酶溶液管存放孔， 8-阳性对照管存放孔， 9-阴性对照管存放孔， 。
12、10- DEPC水管存放孔， 11-半圆形缺口， 12-说明书存放槽， 13-凹槽， 14-稳固孔。 具体实施方式 0014 下面结合附图对本实用新型做进一步说明。 但是应该理解， 这些描述只是示例的， 而非要限制本发明的范围。 此外， 在以下说明中， 省略的对公知结构和技术的描述， 以避免 不要混淆本发明的概念。 0015 参见图1和图2， 口蹄疫病毒RT-LAMP检测试剂盒， 包括盒体1， 与盒体1后侧面连接 的盒盖4， 其特征在于： 还包括试剂管固定座2和试剂管稳固结构3， 其中所述试剂管固定座2 为上、 下、 前和后四个壁组成的方形管状结构， 在所述上壁设置有反应液管存放孔 5、 反应。
13、 液管存放孔6、 酶溶液管存放孔7、 阳性对照管存放孔8、 阴性对照管存放孔9和DEPC水管存 放孔10， 反应液管存放孔 5和反应液管存放孔6中存放反应液管5 ， 酶溶液管存放孔7中 存放酶溶液管， 阳性对照管存放孔8中存放阳性对照管， 阴性对照管存放孔9中存放阴性对 照管9 ， DEPC水管存放孔10中存放DEPC水管10 。 在所述试剂管固定座2的上方设置试剂管 稳固结构3， 所述试剂管稳固结构3设置有与反应液管存放孔 5、 反应液管存放孔6、 酶溶 液管存放孔7、 阳性对照管存放孔8、 阴性对照管存放孔9和DEPC水管存放孔10相对应的稳固 孔14， 使试剂管在试剂盒中更稳固， 便于运。
14、输。 0016 所述试剂管稳固结构3的上表面设置有说明书存放槽12， 用于存放操作说明书。 所 述试剂管固定座2的两相对的边上设置有半圆形缺口11。 所述试剂管稳固结构3的两相对的 边上设置有凹槽13。 使得试剂管固定座2和试剂管稳固结构3更容易取出。 0017 试剂盒的盒体1、 盒盖4、 试剂管固定座2和试剂管稳固结构3均由纸板制成。 0018 两支反应液管所含有组分均一致， 均包括口蹄疫病毒内引物、 外引物、 环引物、 2* 说明书 2/3 页 4 CN 206014913 U 4 LAMP Buffer缓冲液、 钙黄绿素溶液； 酶溶液管含有5U/ L Bst DNA聚合酶和反转录酶的混 。
15、合液； 阳性对照管， 管内为口蹄疫病毒阳性重组质粒DNA； 阴性对照管， 管内为无口蹄疫病毒 感染的健康牛血清基因组DNA;DEPC水管， 管内为无RNA酶的DEPC水。 0019 具体的检测步骤为： 1） 制备待检测样本的模板RNA， 选用商品化的病毒RNA提取试 剂盒， 提取待测样本中的病毒RNA。 2） 扩增体系为： 20 L扩增反应液， 2 L酶混合液， 3 L待检 测样本模板RNA或阳性对照或阴性对照， 反应总体积为25 L； 3） 将配制好的步骤2） 中的扩增 反应体系的PCR管置于63 恒温反应60 min， 80反应10 min终止反应。 4） 结果判定： 反产 物显现绿色则为阳性， 橙色则为阴性。 说明书 3/3 页 5 CN 206014913 U 5 图1 图2 说明书附图 1/1 页 6 CN 206014913 U 6 。