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1、(10)申请公布号 CN 102627613 A (43)申请公布日 2012.08.08 CN 102627613 A *CN102627613A* (21)申请号 201210044543.4 (22)申请日 2012.02.27 C07D 239/34(2006.01) A61K 31/505(2006.01) A61P 9/04(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 11/06(2006.01) A61P 13/08(2006.01) A61P。
2、 35/00(2006.01) A61P 3/10(2006.01) (71)申请人 中国药科大学 地址 210009 江苏省南京市童家巷 24 号 (72)发明人 孙宏斌 夏俊 张秀玲 宋建飞 王秋娟 (54) 发明名称 一种2-(4,6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈 基 -3,3- 二苯基丙酸光学异构体及其制备、 方法 医药用途 (57) 摘要 本发明涉及一种光学纯化合物、 制备方法 及其医药用途， 具体地说是一种 2-(4， 6- 二 甲 基 嘧 啶 -2-) 氧 基 -3- 腈 基 -3， 3- 二 苯 基 丙酸光学异构体及其制备方法和医药用途。 (51)Int.Cl. 权利要求书 。
3、1 页 说明书 5 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 3 页 1/1 页 2 1.一种2-(4， 6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈基-3， 3-二苯基丙酸光学异构体， 其化 学结构如式 I 所示 ： 2. 权利要求 1 所述光学异构体的药学上可接受的盐、 水合物或溶剂化物。 3. 权利要求 1 所述的光学异构体的制备方法， 是其外消旋体的拆分方法， 包括成盐、 分 离和纯化， 其特征在于 ： 所述的成盐是外消旋体与光学纯有机碱类化合物在有机溶剂中反 应生盐沉淀而拆分， 分离得到 S-2-(4， 6- 二甲基。
4、嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙 酸盐沉淀或其溶液， 经纯化后得到 S-2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯 基丙酸光学异构体。 4. 根 据 权 利 要 求 3 所 述 的 制 备 方 法， 所 述 的 光 学 纯 有 机 碱 类 化 合 物 优 选 (S)-(-)- 苯乙胺、 (S)-(-)-1-(4- 氯苯基 ) 乙胺、 (S)-(-)-1-(4- 溴苯基 ) 乙胺。 5. 权利要求 1 或 2 所述的光学异构体作为内皮素受体拮抗剂的应用。 6.权利要求1或2所述的光学异构体用于生产治疗存在内皮素水平升高的疾病的药物 的。
5、应用。 7.权利要求1或2所述的光学异构体用于生产治疗由内皮素导致其产生和或发展的疾 病的药物的应用。 8. 权利要求 1 或 2 所述的光学异构体用于治疗慢性心力衰竭、 再狭窄、 高血压、 肺动脉 高压、 急性 / 慢性肾衰、 脑局部缺血、 哮喘、 良性前列腺增生和前列腺癌的应用。 9. 权利要求 1 或 2 所述的光学异构体与一或多种选自肾素 - 血管紧张素抑制剂系统 的活性成分如肾素抑制剂、 血管紧张素II拮抗剂、 血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、 混合的 ACE/ 中型内肽酶 (NEP) 抑制剂、 阻断剂、 利尿剂、 钙通道阻断剂和 VEGF 阻断物质的组合。 10. 一种口服、 肠。
6、道外或腹膜内应用的药剂和常规药学赋形剂。 权 利 要 求 书 CN 102627613 A 2 1/5 页 3 一种 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯 基丙酸光学异构体及其制备方法、 医药用途 技术领域 0001 本发明涉及一种光学纯化合物、 制备方法及其医药用途， 具体地说是一种 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸光学异构体及其制备方法和医药用 途。 背景技术 0002 内皮素 (endothelin， ET) 是 1988 年由 Yanagisawa 等发现的由 21 个氨基酸组成 的多肽， 属。
7、于角蝰毒素 (sarafotoxin) 家族， 具有很强的缩血管作用。目前已证实内皮素有 ET-1、 ET-2、 ET-3 三种。哺乳动物主要有两种 ET 受体 ： ETA和 ETB， 为 G 蛋白偶联受体， 内皮 素通过其发挥生理作用。ETA受体绝大多数分布于血管平滑肌细胞， 与 ET-1 选择性结合， 起 到收缩血管和细胞增生作用 ； ETB受体是非选择性的， 与三种 ET 异构肽的亲和力相同， 它主 要分布于内皮细胞， 通过诱导一氧化氮(NO)的释放起到血管舒张作用， 但也有一小部分ETB 受体存在于某些平滑肌细胞， 起到血管收缩作用。 0003 ET 具有广泛的生物学活性， 使之与多种。
8、疾病如高血压、 充血性心力衰竭、 肾衰、 肺 动脉高压、 转移性前列腺癌、 脑血管痉挛等有关。阻断内皮素的产生或拮抗其与受体的结 合， 可以用于治疗上述疾病。研究认为， 内皮素受体拮抗剂将会成为临床上用于治疗高血 压、 心衰、 蛛网膜下腔出血、 肿瘤、 糖尿病、 肾病及肾衰、 哮喘等疾病的新型药物。 0004 2007 年 6 月 15 日， 美国 FDA 批准了 Gilead Science 公司的肺动脉高压的治疗药 物安贝生坦 ambrisentan( 商品名为 Letairis)。Ambrisentan 是一种用于治疗肺动脉高压 (PAH) 的高选择性内皮素 ETA受体拮抗剂， 属于 -。
9、 二苯基丙酸类， 可强效抑制内皮素所致 血管收缩。 0005 申请人已通过对安贝生坦的结构改造， 获得了系列安贝生坦类似物， 通过体外 筛选， 得到一个拮抗活性最强的化合物 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸， 几乎与安贝生坦相当， 可参见中国专利 201110043855.9( 申请号 )， 及文献 (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters， 2011， 21 ： 3894-3897)。Melvin， JR. 在专 利 WO 2009017777 A2 中报道了安贝生坦代谢物的相关研究， 研究表明， 。
10、安贝生坦的 3 位甲 氧基在体内极易被代谢， 成为低活性的 3 位羟基取代的安贝生坦， 从而减短了安贝生坦在 体内的作用时间。与安贝生坦的 3 位甲氧基相比， 我们的目标化合物 2-(4， 6- 二甲基嘧 啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸的 3 位是腈基， 在体内不易被代谢， 从而可能延长 药物作用时间。因 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸结构中含 有一个手性中心， 而且上市药物安贝生坦为 S 构型的单一光学异构体， 故而我们对其进行 拆分制备了它的两个光学异构体， 并对其两个光学异构体作了药理活性研究。结果发现， 。
11、S 型光学异构体的内皮素拮抗活性远远大于 R 型光学异构体， 与安贝生坦有相当的药效反 应， 综合前述的该化合物3位腈基比安贝生坦3位甲氧基的优点， 未来有可能成为优于安贝 生坦的内皮素拮抗剂。 说 明 书 CN 102627613 A 3 2/5 页 4 发明内容 0006 申请人将 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸的外消旋 体进行拆分分离， 得到其 S 型 ( 式 I) 和 R 型 ( 式 II) 光学异构体， 并分别对其活性进行研 究， 发现 S 型光学异构体的内皮素拮抗活性远远大于 R 型光学异构体。 0007 本发明旨在提供一种 2。
12、-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙 酸 S 型光学异构体以提高药效、 减少用药剂量、 降低不良反应发生率。所要解决的技术问题 是 S 型和 R 型两种光学异构体的拆分以及药效学验证。 0008 0009 本发明所称的 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸的单 一光学异构体为式 I 所示的化合物。该化合物可为药学上可接受的盐、 水合物或溶剂化物。 0010 在本发明中， 式 I 和式 II 光学纯化合物是通过将 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧 基-3-腈基-3， 3-二苯基丙酸外消旋混合物与。
13、光学纯有机碱类化合物成盐而拆分， 并通过 R型与S型盐在特定溶剂中溶解度不同而结晶分离出来， 再将盐通过简单的酸碱处理得到R 型或 S 型光学纯 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸。 0011 具体地说式 I 光学纯化合物的制备方法就是 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧 基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸外消旋体的拆分方法， 包括成盐、 分离、 纯化， 其要旨是外消 旋体与光学纯有机碱类化合物在有机溶剂中反应生成盐沉淀而拆分， 分离后得到式 I 盐沉 淀或有机溶液， 将盐或溶液纯化后得到式 I 化合物。 0012 所述的光学纯。
14、有机碱类化合物优选(S)-(-)-苯乙胺、 (S)-(-)-1-(4-氯苯基) 乙胺、 (S)-(-)-1-(4- 溴苯基 ) 乙胺。 0013 本发明还涉及可以从其中释放通式 I 的化合物的那些化合物 ( 前药 )， 例如通式 I 所包含的酸的酯和酰胺。优选的前药是主要在身体的某些部位如胃、 肠、 血循环、 肝中的条 件下释放。 0014 本发明的另一目的在于提供通式 I 的化合物在治疗高血压、 心衰、 蛛网膜下腔出 血、 肿瘤、 糖尿病、 肾病、 哮喘等疾病的应用。 附图说明 0015 图 1 是外消旋体光学纯度检测色谱图。 0016 图 2 是 S- 异构体光学纯度检测色谱图。 0017。
15、 图 3 是 R- 异构体光学纯度检测色谱图。 具体实施方式 说 明 书 CN 102627613 A 4 3/5 页 5 0018 下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中， 以下所述的实施例是为了 更好的阐述本发明， 并不是用来限制本发明的范围。 0019 实施例 1 0020 S-2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 0021 于反应瓶中加入10g 2-(4， 6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈基-3， 3-二苯基丙酸 外消旋体， 再加入 200mL 丙酮， 加热至回流。回流状态下滴加 2.09g S-(-)-1-(4- 氯苯基 ) 。
16、乙胺与 50mL 丙酮的混合液， 加完后回流反应 30min。放冷至室温， 有大量白色晶体析出， 滤 出结晶， 得S-2-(4， 6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈基-3， 3-二苯基丙酸-S-(-)-1-(4-氯 苯基 ) 乙胺盐粗产品 5.67g。 0022 以 上 S-2-(4， 6- 二 甲 基 嘧 啶 -2-) 氧 基 -3- 腈 基 -3， 3- 二 苯 基 丙 酸 -S-(-)-1-(4- 氯苯基 ) 乙胺盐粗产品 5.67g， 加入 250mL 丙酮回流溶解， 室温放置过夜， 析出大量白色结晶， 滤出结晶即为拆分盐精制品， 称重为 4.01g。 0023 将精制拆分盐 4.01。
17、g 加 4mL 甲醇溶解， 加 10 H2SO4酸化至 pH 至 3， 加 40mL 水， 析出大量沉淀， 抽滤， 滤饼真空干燥， 即得 S-2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 2.83g。收率 28.3。 0024 实施例 2 0025 R-2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 0026 于反应瓶中加入10g 2-(4， 6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈基-3， 3-二苯基丙酸 外消旋体， 再加入 200mL 丙酮， 加热至回流。回流状态下滴加 2.09g R-(+)-1-(4- 氯苯基 ) 。
18、乙胺与 50mL 丙酮的混合液， 加完后回流反应 30min。放冷至室温， 有大量白色晶体析出， 滤 出结晶， 得R-2-(4， 6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈基-3， 3-二苯基丙酸-R-(+)-1-(4-氯 苯基 ) 乙胺盐粗产品 5.52g。 0027 滤液即是 S-2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸丙酮溶 液， 脱去丙酮即得到S-光学异构体粗产品， 或者向该丙酮溶液中加入S-(-)-1-(4-氯苯基) 乙胺丙酮溶液进行纯化， 操作同例 1。 0028 以 上 R-2-(4， 6- 二 甲 基 嘧 啶 -2-) 氧 基 -3- 腈 基。
19、 -3， 3- 二 苯 基 丙 酸 -R-(+)-1-(4- 氯苯基 ) 乙胺盐粗产品 5.52g， 加入 250mL 丙酮回流溶解， 室温放置过夜， 析出大量白色结晶， 滤出结晶即为拆分盐精制品， 称重为 3.97g。 0029 将精制拆分盐 3.97g 加 4mL 甲醇溶解， 加 10 H2SO4酸化至 pH 至 3， 加 40mL 水， 析出大量沉淀， 抽滤， 滤饼真空干燥， 即得 R-2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 2.80g。收率 28.0。 0030 实施例 3 0031 R 型、 S 型及外消旋体 2-(4， 6- 二甲基嘧啶。
20、 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙 酸光学纯度的 HPLC 测定 0032 HPLC 型号 ： Agilent 1100 高效液相色谱系统 ( 包括自动进样器、 VWD 检测器、 Agilent 色谱工作站 )。 0033 色谱柱 ： Chiralpak IC， 5um， 4.6*250mm ； 0034 流动相 ： 正己烷异丙醇三氟乙酸 75 25 0.1 ； 0035 柱温 ： 25 ； 说 明 书 CN 102627613 A 5 4/5 页 6 0036 检测器 ： 紫外， 211nm ； 0037 流速 ： 0.5mL/min。 0038 经检测， 实例1、 2所。
21、分别制备的S型及R型2-(4， 6-二甲基嘧啶-2-)氧基-3-腈 基 -3， 3- 二苯基丙酸光学纯度均达到 99以上， 试验中以外消旋体样品进行色谱峰定位及 分离度验证。 0039 外消旋体体分析结果表 ( 图 1) 0040 0041 0042 S- 异构体分析结果表 ( 图 2) 0043 0044 R- 异构体分析结果表 ( 图 3) 0045 0046 实施例 4 0047 R 型、 S 型及外消旋体 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙 酸内皮素拮抗活性测定实验 0048 本实验采用盲筛， 化合物重新编号如下， 0049 A1 ： S。
22、 型 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 0050 A2 ： R 型 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 说 明 书 CN 102627613 A 6 5/5 页 7 0051 A3 ： 2-(4， 6- 二甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸外消旋体 0052 A4 ： 安贝生坦 0053 正常家兔耳缘静脉空气针处死后开胸， 取出胸主动脉， 分离。置于含有饱和氧的 4冷 K-H 液中去除结缔组织。用棉签轻轻摩擦去除动脉内膜上皮细胞， 切成 4-6mm 的血管 环， 。
23、悬挂含有 K-H 缓冲盐溶液的 8ml 浴槽中， 通纯 O2PH7.4， 恒温 37。调节静息张力为 2g， 平衡 60min。加入 10-6molL-1去甲肾上腺素 (NA) 使血管环张力上升， 再加入 10-6molL-1 乙酰胆碱 (Ach)， 通过血管舒张的程度检验内皮完整性。若加入 Ach 后舒张幅度达 50， 则 视为内皮完整， 不产生舒张或舒张幅度小于 5， 则视为去内皮成功。 0054 加入 ET-1(10-8molL-1终浓度 )， 孵育 40min 待血管收缩达到最大张力时， 给药组 分别加入受试化合物 A1-A4(10-7molL-1终浓度 )， 设溶媒组为对照组。观察 。
24、40min 后其对 内皮素的血管收缩反应的拮抗作用并记录血管环收缩张力。 0055 内皮素拮抗剂抑制率的计算 ： ET-1 所至血管收缩 40min 时的张力为 A(g)， 受试化 合物 (10-6mol L-1终浓度 ) 孵育 40min 后血管收缩张力为 B(g)， 则其抑制百分率为 (A-B)/ A100。 0056 药理测试结果表 0057 0058 A1(10-7) 抑制率 ： 43.27， A2(10-7) 抑制率 ： 10.58， A3(10-7) 抑制率 ： 20.27， A4(10-7) 抑制率 ： 49.34。 0059 由以上数据可以看出S型2-(4， 6-二甲基嘧啶-2。
25、-)氧基-3-腈基-3， 3-二苯基 丙酸 (A1) 和安贝生坦 (A4) 有相当的药效反应， 其内皮素拮抗药效反应是 R 型 2-(4， 6- 二 甲基嘧啶 -2-) 氧基 -3- 腈基 -3， 3- 二苯基丙酸 (A2) 的 4 倍多， 是外消旋体 (A3) 的 2 倍 多。 0060 以上是对本发明的说明， 但是， 本发明并不仅限于本文所述的具体实施方案， 而是 包括了所附权利要求范围内的所有改变形式。 说 明 书 CN 102627613 A 7 1/3 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 102627613 A 8 2/3 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 102627613 A 9 3/3 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 102627613 A 10 。