所属技术领域
本发明涉及一种从枳实中提取橙皮甙和辛弗林的工艺技术，属于天然 产物分离技术领域。
背景技术
我国柑橘资源及产量均居世界第三，产量达到1078万吨，全国各地均 有栽培。枳实为芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，主 产于四川、江西、福建、江苏等地。5～6月间采摘或采集自落的果实 ，自中部横切为两半，晒干或低温干燥，较小者直接晒干或低温干燥 。用时洗净、闷透，切薄片，干燥。生用或麸炒用。
柑橘属容易成花，但座果率较低，一般为3%-5%，丰产树可达10%左右 ，低产树通常不到1%。幼果由于生理原因凋落为生理落果。生理落果 有两个明显的高峰期，第一次在5月上中旬（花谢后1-2周），落果的 数量多，约占总落果量的73%-99%，时间短而集中；第二次落果高峰期 出现在6月上旬，幼果桔黄后从蜜盘（子房基部和果蒂之间）处脱落， 落果较大，约占总落果量的0.02%-0,27%。我国柑橘种植面积广阔，落 果资源丰富，落果中含有橙皮甙和辛弗林等多种有效成分，因而成为 具有工业化生产价值的原料。
陈皮中主要成分为辛弗林，与辛弗林共存于陈皮中的黄酮类化合物还 有陈皮甙、新陈皮甙、柑桔黄甙、橙皮黄素、酸橙黄素，另外还有中 性内酯类苦味质柠檬素及挥发油等成分。枳实苦而微寒，入脾、胃、 大肠经，苦泄力大，行气力强，可入药。这些药理活性归功于桔皮中 的橙皮甙和辛弗林等成分，因成研究枳实中这两种成分的提取技术具 有重要意义。
辛弗林易溶于水，难溶于乙醇，几乎不溶于氯仿、乙醚。辛弗林除具 有升压、抗休克作用外，还具有以下作用：提高新陈代谢、增加热量 消耗、提高能量水平、氧化脂肪和减肥。用于治疗支气管哮喘及手术 和麻醉时降低血压，虚脱及休克，体味性低血压等。辛弗林是酸橙果 实中的主要活性成分，其可有效预防能量过剩（热量堆积），逐风理 气，温胃促进食欲并加速新陈代谢。酸橙理论上可加速脂肪代谢且不 会像使用麻黄的患者那样出现不良的副作用影响心血管，也是一种温 和的芬芳除痰剂，一种神经镇定剂和治疗 便秘的轻泻剂。
橙皮甙，又名橙皮甙、陈皮甙，属于天然黄酮类化合物，其纯品为白 色针状晶体或淡黄色粉末，味苦，性温，分子式C28H34O15，分子量610. 57，熔点258-262℃，几乎不溶于冷水，但在乙醇或热水中有较大的溶 解度，可溶于吡啶、甘油、乙酸或稀碱溶液，不溶于氯仿、丙酮、乙 醚或苯中，与三氯化铁、金属盐类反应显色或生成沉淀，与盐酸—镁 粉反应呈紫红色。存在于柑橘皮和柑橘采前落果中。橘皮中含量约为 3%，未成熟果含量更高。橙皮甙具有抑制癌细胞生长、消炎止痛、避 孕、抑菌、防紫外线等生理活性。
橙皮甙在自然界分布很广泛，主要存在于豆科、白桦、唇形花科、蝶 形花科、芸香科、柑橘属植物体中。橙皮甙具有良好的生物活性，具 有抗脂质氧化及清除氧自由基，抗炎、抗病毒、抗菌，增强毛细血管 韧性，缩短出血时间，抑制癌细胞活性及延缓衰老等作用。橙皮甙具 有维持渗透压，增强毛细血管韧性，缩短出血时间，降低胆固醇等作 用，在临床上用于心血管系统疾病的辅助治疗，可培植多种防止动脉 硬化和心肌梗塞的药物，是成药“脉通”的主要原料之一。在食品工 业中可用作天然抗氧化剂。也可用于化妆品行业。橙皮甙大部分存在 于柑桔加工的废弃物中，如果皮、果囊中，其中成熟的果皮和组织中 橙皮甙的含量最高（内果皮30%—50%，桔皮、核、果肉中30%—50%， 外果皮10%—20%）。汁液和桔囊中含量较低1%—5%。
公开号为CN01106994的中国专利公开了一种从中药枳实中提取药用原 料辛弗林的方法，该方法是用水提取枳实，提取液经浓缩、醇沉、回 收乙醇、砂滤，然后上阳离子树脂柱，先用适量水冲洗，再用一定浓 度的氨水洗脱，氨水洗脱液经浓缩直接析晶，重结晶即得辛弗林。本 方法具有操作过程简单、生产成本低等优点。
公开号为CN102276669A的中国专利公开了从枳实中提取橙皮甙的制备 方法，包括以下步骤：（1）准备原料即枳实细粉倒入提取罐中；（2 ）配置碱溶液对罐内料作浸泡处理后排空液再翻料；（3）配置碱溶液 对罐内料作热处理；（4）配置碱溶液对罐内料作第一次渗滤处理后排 空液再翻料；（5）配置碱溶液对罐内料作第二次渗滤处理后排空液再 翻料；（6）泵入提取液提取橙皮甙；（7）析离橙皮甙结晶；（8）对 橙皮甙结晶作滤干、烘干处理。
公开号为CN102050855A的中国专利公开了一种从枳实原料中综合提取 辛弗林和橙皮甙的方法，以克服现有技术无法对两种产品综合开发而 导致的资源浪费，并且优化提取步骤，降低生产成本，提升可操作性 。原料粉碎后，采用碱性有机溶剂提取；合并提 取液，浓缩至比重1.05，过滤，滤液脱色；将滤液调至中性，过滤得 橙皮甙产品，收率25%，含量95%；过滤得到的母液调节至强碱性，采 用混合有机溶剂萃取，浓缩至一定体积加入小极性溶剂结晶，产品收 率为1.2%，辛弗林含量为98%。本发明实现了将枳实原料充分利用，设 计工艺同时生产辛弗林和橙皮甙两种产品，大大降低了生产成本；总 体提取过程更加优化，缩短了工艺流程，节约生产成本。但是辛弗林 的产品收率太低
公开号为CN101875703A的中国专利公开了一种利用果皮果渣提取果胶 和辛弗林的方法，包括以下步骤：1)先将果皮搅碎至粒径2～3mm，置 于蒸汽或沸水中处理5～8min，以钝化果胶酶活性；杀酶后的原料再在 水中清泡30min，在90℃温度下加热5min，压去汁液，用清水漂洗数次 ，尽可能除去苦味、色素及可溶性杂质，干皮温水浸泡复水后备用； 2)经预处理的原料与30～50倍的水混合，加入占液重2.0％-2.5％的离 子交换剂制成料浆，调节料浆pH值到1.3～1.6，在搅拌下加热2h，过 滤，放入卧螺离心机洗渣20min，分离出不溶于水的离子交换剂和废渣 ，得到含有果胶粗产品，将所述果胶粗产品用卧螺离心机萃取60min， 将所述经过萃取的滤液用三效降膜蒸发器浓缩，得到果胶浓缩液；3) 在所述果胶浓缩液中加入占液重1.5％的工业盐酸，搅匀，再徐徐加入 等量的95％浓度的酒精，边加边搅拌，使果胶沉淀析出，再用80％浓 度的酒精洗涤，除去醇溶性杂质，然后用95％浓度的酸性酒精洗涤两 次，用螺旋压榨机榨干，最后经干燥处理得到果胶成品；4)将用于吸 附辛弗林的强酸性阳离子交换树脂柱进行预处理，先用质量分数为10 ％的氯化钠溶液浸泡2h，装柱，蒸馏水反洗至流出的水澄清为止，然 后用2倍柱体积的50g/L的氢氧化钠溶液冲洗，用蒸馏水洗至pH值为中 性，再用4倍体积的体积分数为5％的盐酸溶液冲洗，最后再用蒸馏水 洗至pH值为中性；将步骤3)分离出的废液用塔式蒸馏器蒸馏进行乙醇 回收处理，再与步骤2)分离出来的果胶废液合并后上树脂柱，用5％浓 度的氨水洗脱，再用三效降膜蒸发器浓缩，最后经喷雾干燥处理得到 辛弗林成品。
辛弗林在陈皮中含量最高，而且橙皮甙在陈皮中也有一定含量，取材 方便，分布广泛，价格便宜。目前公开的文献资料未能对提取过程中 其有效成分进行综合开发利用，因而对陈皮进行综合深加工意义非凡 ，探索从陈皮中同时提取辛弗林和橙皮甙，其意义相当远大。
发明内容
本发明采用的技术方案包括：干燥过后的枳实经石油醚脱脂、用稀碱 溶液回流提取、过滤、浓缩至干、用酸水进行溶解，上树脂吸附、分 步洗脱、浓缩结晶制得橙皮甙和辛 弗林纯品。
因此，本发明提供一种从枳实中提取辛弗林和橙皮甙的方法，步骤包 括：
(1)粉碎干燥枳实，并将枳实、石油醚按重量（kg）/体积比（L）=1: 2-4进行混合，70℃回流提取40min，陶瓷膜过滤一次，得滤液，再经 减压浓缩去除石油醚得到枳实精油；
(2)将枳实滤渣、乙醇水溶液按重量（kg）/体积比（L）=1:2-4进行混 合，45℃回流提取40min，陶瓷膜过滤一次，得滤液，再重复一次，合 并滤液得混合提取液；
(3)将提取液在50℃减压进行浓缩至原有体积的1/4-1/10，得到浓缩液 Ⅰ，上KLFC－150大孔树脂吸附浓缩液，并用A溶液进行洗脱，得到洗 脱液Ⅰ，并将洗脱液Ⅰ进行50℃减压浓缩至原来体积的1/4-1/10，得 浓缩液Ⅱ；
(4)再用B溶液对KLFC－150大孔树脂进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ，并将洗 脱液Ⅱ进行50℃减压浓缩至原来体积的1/3-1/15，得浓缩液Ⅲ；
(5)用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅱ调节pH至7.5左右，4℃静置过 夜结晶，过滤得结晶物，即为辛弗林；
(6)用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅲ调节pH至6左右，4℃静置过夜 结晶，过滤得结晶物，即为橙皮甙。
在一个实施方案中，步骤（2）中所述乙醇溶液，是指含有20%的乙醇 、0.0001mol/LNaOH的乙醇水溶液。
在一个实施方案中，步骤（3）中所述A溶液，是指含有40%的乙醇、0 .001mol/LNaOH的乙醇水溶液。
在一个实施方案中，步骤（4）中所述B溶液，是指含有60%的乙醇、0 .0001mol/LNaOH的乙醇水溶液。
在一个实施方案中，步骤(5)、(6)中所述过滤，是指采用0.2μm孔径 大小的陶瓷膜过滤一次。
技术效果
1、本发明方法操作简单，大大提高了辛弗林和橙皮甙的产率，极大地 降低了辛弗林和橙皮甙的生产成本，简化了其生产过程，还能得到大 量的油类物质。
2、使用枳实作为提取原料，既大大提高了枳实的利用效率，又提高了 枳实的附加值。
3、柑桔种植容易，产量高、价格低，来源方便，后续资源有保障。
4、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免 了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，大大地降低了其 生产成本。
5、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中 可利用成熟的试剂回收常规技术，极大地降低了向环境排放废弃物。
附图说明：
图1：枳实样品中橙皮甙的HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐 标表示分离时间。
图2：橙皮甙标准品的HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表 示分离时间。
图3：枳实样品中辛弗林的HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐 标表示分离时间。
图4：辛弗林标准品的HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表 示分离时间。
具休实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实 施例的任何一个或类似实例。
实施例1
选用枳实中辛弗林含量在1.34%、橙皮甙含量在4.94%，将枳实干燥后 粉碎至10目以下称取100kg，加入400L的石油醚进行混合，70℃回流提 取40min，陶瓷膜过滤一次，得滤液，再经减压浓缩去除石油醚得到枳 实精油。将枳实滤渣与250L的20%乙醇水溶液，其中乙醇水溶液还含有 0.0001mol/LNaOH进行混合，45℃回流提取40min，陶瓷膜过滤一次， 得滤液，再重复一次，合并滤液得混合提取液400L。将提取液进行浓 缩，得到50L浓缩液Ⅰ，上KLFC－150大孔树脂吸附浓缩液，并含有40 %的乙醇、0.001mol/LNaOH的乙醇水溶液进行洗脱，得到120L洗脱液Ⅰ ，并将洗脱液Ⅰ进行50℃减压浓缩至15L，得浓缩液Ⅱ。再用含有60% 的乙醇、0.0001mol/LNaOH的乙醇水溶液对KLFC－150大孔树脂进行洗 脱，得到200L洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进行50℃减压浓缩至20L，得浓 缩液Ⅲ。用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅱ调节pH至7.5左右，4℃静 置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为辛弗林样品0.885kg。用 0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅲ调节 pH至6左右，4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为橙皮 甙样品3.65kg。检测设备为Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为H ypersil ODS (250mm×4.6mm，5μ)，橙皮甙的检测条件∶流动相为 水：乙腈：乙酸溶液（80：16：4，V/V）、检测波长为280nm、流速为 l ml／min、进样量为20μL；辛弗林的液相色谱检测条件∶流动相为 乙腈：水：0.1%氢氧化钠溶液（32：68：0.2，V/V）、检测波长为22 5nm、流速为l ml／min、进样量为20μL。橙皮甙样品的纯度为95.5 4%，产品收率达到70%以上、辛弗林样品的纯度为97.25%，产品收率达 到60%以上。
实施例2
选用枳实中辛弗林含量在1.34%、橙皮甙含量在4.94%，将枳实干燥后 粉碎至10目以下称取200kg，加入800L的含有0.001mol/LNaOH、45%的 乙醇的水溶液进行混合，40℃回流提取；将枳实滤渣与400L的20%乙醇 水溶液，其中乙醇水溶液还含有0.0001mol/LNaOH进行混合，45℃回流 提取40min，陶瓷膜过滤一次，得滤液，再重复一次，合并滤液得混合 提取液700L。将提取液进行浓缩，得到80L浓缩液Ⅰ，上KLFC－150大 孔树脂吸附浓缩液，并含有40%的乙醇、0.001mol/LNaOH的乙醇水溶液 进行洗脱，得到250L洗脱液Ⅰ，并将洗脱液Ⅰ进行50℃减压浓缩至25 L，得浓缩液Ⅱ。再用含有60%的乙醇、0.0001mol/LNaOH的乙醇水溶液 对KLFC－150大孔树脂进行洗脱，得到420L洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进 行50℃减压浓缩至35L，得浓缩液Ⅲ。用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩 液Ⅱ调节pH至7.5左右，4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物 ，即为辛弗林样品1.81kg。用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅲ调节p H至6左右，4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为橙皮甙 样品7.67kg。按实施例1的检测方法进行检测橙皮甙和辛弗林样品，橙 皮甙样品的纯度为96.25%，产品收率达到70%以上、辛弗林样品的纯度 为97.62%，产品收率达到60%以上。
实施例3
选用枳实中辛弗林含量在1.34%、橙皮甙含量在4.94%，将枳实干燥后 粉碎至10目以下称取400kg，加入1400L的含有0.001mol/LNaOH、45%的 乙醇的水溶液进行混合，40℃回流提取；将枳实滤渣与500L的20%乙醇 水溶液，其中乙醇水溶液还含有0.0001mol/LNaOH进行混合，45℃回流 提取40min，陶瓷膜过滤一次，得滤液，再重复一次，合并滤液得混合 提取液900L。将提取液进行浓缩，得到100L浓缩液Ⅰ，上KLFC－150大 孔树脂吸附浓缩液，并含有40%的乙醇、0.001mol/LNaOH的乙醇水溶液 进行洗 脱，得到450L洗脱液Ⅰ，并将洗脱液Ⅰ进行50℃减压浓缩至50L，得浓 缩液Ⅱ。再用含有60%的乙醇、0.0001mol/LNaOH的乙醇水溶液对KLFC －150大孔树脂进行洗脱，得到700L洗脱液Ⅱ，并将洗脱液Ⅱ进行50℃ 减压浓缩至60L，得浓缩液Ⅲ。用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅱ调 节pH至7.5左右，4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为 辛弗林样品3.72kg。用0.01mol/L的盐酸溶液将浓缩液Ⅲ调节pH至6左 右，4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为橙皮甙样品1 5.28kg。按实施例1的检测方法进行检测橙皮甙和辛弗林样品，橙皮甙 样品的纯度为98.36%，产品收率达到70%以上、辛弗林样品的纯度为9 7.29%，产品收率达到70%以上。