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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611251131.2 (22)申请日 2016.12.30 (71)申请人 浙江海洋大学 地址 316000 浙江省舟山市普陀区朱家尖 大同路127号 (72)发明人 孙坤来李雪荣李勤凤史佳铭 陈雨蕉陈荫赵玉勤 (74)专利代理机构 杭州浙科专利事务所(普通 合伙) 33213 代理人 吴秉中 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) (54)发明名称 秋葵多糖的提取方法 (57)摘要 本发明提供一种秋葵多糖的提取方法， 具体 步骤为： 1） 预处理。
2、； 2） 脱脂； 3） 酶解； 4） 纯化； 5） 脱 蛋白。 有益效果为采用复合酶酶解， 微波助溶的 方式提取多糖。 酶解条件温和， 不会破坏秋葵多 糖的结构， 使其保持较高的活性； 多种酶联合酶 解， 并有多种酶激活剂激活复合酶， 酶解速度快 且酶解更彻底， 提高秋葵多糖的提取率； 利用溶 剂提取和微波提取相结合， 提高多糖提取率； 氯 仿和正丁醇能使蛋白质变性而不溶于水， 在含蛋 白质的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇会形成凝 胶物， 通过离心的方式去除蛋白质； 最后得到的 秋葵多糖的纯度很高， 提取率高且能保持较高活 性； 操作步骤简单， 成本低廉， 经济效益高。 权利要求书1页 说明书4页。
3、 CN 106832027 A 2017.06.13 CN 106832027 A 1.秋葵多糖的提取方法， 其特征在于以下步骤： 1） 预处理： 将新鲜秋葵干燥， 研磨， 过筛； 2） 脱脂： 在秋葵粉中加入有机溶液， 回流脱脂， 得到去脂秋葵粉； 3） 酶解： 在去脂秋葵粉中加入蒸馏水， 搅拌， 加入酶解剂， 微波助溶， 酶解结束后灭酶， 4） 4） 过滤， 滤液浓缩得到秋葵粗多糖浓缩液； 5） 纯化： 在秋葵粗多糖浓缩液中加入乙醇， 静置， 离心， 去掉上清液， 在沉淀中加入蒸馏 水， 用树脂脱色纯化； 6） 脱蛋白： 加入脱蛋白液， 搅拌后过滤取上清液， 加入乙醇， 静置离心， 收集沉。
4、淀并用乙 醇反复清洗， 冷冻干燥， 并在低温下粉碎， 得到秋葵多糖粉末。 2.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤2中有机溶液 为石油醚， 料液比为1:401:80， 在索氏提取器中， 于4060下回流脱脂24h。 3.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤3中蒸馏水按 料液比1:301： 60加入， 搅拌速率为200500r/min。 4.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤3中酶解剂成 份及其重量份为26份纤维素酶， 15份果胶酶， 0.40.7份牛胰蛋白酶， 0.20.5份氯化钙， 0.010.03份。
5、烷基酚聚氧乙烯醚， 0.020.04份半胱氨酸， 0.010.04份乙酸叶醇酯和0.03 0.05份2-吡咯烷乙酸。 5.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤3中酶解温度 为4055， pH为5.26.8， 酶解时间为0.10.4h。 6.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤3中微波功率 为200400W， 频率为5001MHz， 作用时间为3050min。 7.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤3中用沸水浴 灭酶， 灭酶时间为1020min。 8.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于：。
6、 所述的步骤3中脱蛋白液 为质量比4： 16:1的氯仿和正丁醇的混合液， 加入量为脱色纯化后秋葵多糖浓缩液质量的 1/21/4。 9.根据权利要求1所述的秋葵多糖的提取方法， 其特征在于： 所述的步骤4和5中的乙醇 均为95%的乙醇。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106832027 A 2 秋葵多糖的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及多糖提取技术领域， 具体是一种秋葵多糖的提取方法。 背景技术 0002 秋葵( Abelmoschus esculentus L .Moench )又名黄秋葵、 羊角豆、 咖啡黄葵、 毛 茄， 黄蜀葵， 民间也称洋辣椒。 原产于非洲， 20世纪初由印度。
7、引入中国， 多见于中国南方。 其可食用部分是果荚， 分绿色和红色两种， 口感脆嫩多汁， 滑润不腻， 香味独特， 种子可榨 油。 秋葵性味淡、 寒， 具有利咽、 通淋、 下乳、 调经之功效。 秋葵含有丰富的维生素和矿物质， 每100克秋葵的嫩果中， 约含有4毫克的维生素C、 1 .03毫克的维生素E以及310微克的胡萝 卜 素。 秋葵中富含的锌和硒等微量元素， 对增强人体防癌抗癌能力很有帮助。 其次， 秋葵嫩果 中有黏黏的液体物质， 这种黏液含有果胶和黏多糖类等多糖。 黏多糖具有增强机体抵抗力， 维护人体关节腔里关节膜和浆膜的光滑效果， 削减脂类物质在动脉管壁上的堆积， 避免肝 脏和肾脏中结缔组。
8、织萎缩等功效。 再者， 秋葵含水量高， 脂肪很少， 每100克秋葵嫩果只含有 0 .1克脂肪， 很适合想要减肥瘦身的女士， 而且它富含的维生素C和膳食纤维， 还能使皮肤 嫩白。 此外， 黄秋葵的粘性物质， 可促进胃肠蠕动， 有益于助消化， 益肠胃； 秋葵的粘性物质 中含有50的可溶性纤维素， 有利通便、 排毒、 防癌， 能有效降低血清胆固醇， 预防心血管 病、 可提高耐缺氧能力； 黄秋葵中含有的果胶和多糖可有护肝功效， 防治便秘； 同时， 黄秋葵 不仅含钙量与鲜奶相当， 且钙的吸收率在50-60， 高于牛奶1倍， 是理想的钙源； 黄秋葵为 低能量食物， 且黄酮含量为2 .8， 可延缓衰老、 具。
9、有抗氧化、 防衰老作用， 防治糖尿病。 0003 现在对于多糖的提取已有很多研究， 现有技术如授权公告号为CN104311691B的中 国发明专利， 公开了一种苦瓜多糖的提取方法， 包括下述的步骤： 将苦瓜清洗干净并晾干， 再粉碎成苦瓜粉， 在苦瓜粉中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶， 在微波条件下酶解， 酶解后浓 缩并脱色， 离心， 取上清液浓缩醇沉， 再离心， 采用乙醇清洗沉淀， 冷冻干燥后并粉碎， 得苦 瓜多糖。 采用该方法从苦瓜中提取多糖， 采用酶作用条件温和， 采用各种不同的酶将苦瓜中 的脂肪、 纤维素酶解， 将其中的多糖提取出来， 提高了苦瓜的利用率。 该方法未脱蛋白， 多糖 纯度不高，。
10、 且提取率也有待提高。 现有技术如授权公告号为CN104844720B的中国发明专利， 公开了一种百尾参多糖的分离提取方法， 包括以下步骤： 将新鲜百尾参洗净， 干燥后粉碎； 与石油醚回流脱脂； 添加蒸馏水提取， 提取结束合并水提液； 水提液用布氏漏斗抽滤， 滤液 醇沉后静置、 离心、 去掉上清液， 沉淀用蒸馏水定容； 脱色纯化、 浓缩， 得粗多糖液； 粗多糖液 按质量比3:1的比例加入氯仿和正丁醇的混合液， 振摇后取上层清液， 加入乙醇、 静置、 离 心， 得脱蛋白百尾参多糖； 洗涤， 冷冻干燥即得。 该方法可获得纯度高、 品质好的百尾参多 糖， 方法简单、 易操作， 极具市场推广价值。 该。
11、方法只采用水提法提取多糖， 未采取其他方式 辅助提取， 提取率不高。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种提取率高， 提取的多糖活性强， 纯度高的秋葵多糖的 说明书 1/4 页 3 CN 106832027 A 3 提取方法。 0005 本发明针对背景技术中提到的问题， 采取的技术方案为： 秋葵多糖的提取方法， 具体操作步骤： 1） 预处理： 将新鲜秋葵在鼓风机中干燥， 温度为5070， 干燥时间为0.81.5h， 直至秋 葵中水分为38%， 研磨， 过40100目筛； 2） 脱脂： 在秋葵粉中按料液比为1:401:80加入石油醚， 在索氏提取器中， 于4060下 回流脱脂24h， 过。
12、滤干燥得到去脂秋葵粉； 3） 酶解： 在去脂秋葵粉中按料液比1:301： 60加入蒸馏水， 搅拌， 搅拌速率为200500r/ min。 加入酶解剂， 酶解剂成份及其重量份为26份纤维素酶， 15份果胶酶， 0.40.7份牛胰 蛋白酶， 0.20.5份氯化钙， 0.010.03份烷基酚聚氧乙烯醚， 0.020.04份半胱氨酸， 0.01 0.04份乙酸叶醇酯和0.030.05份2-吡咯烷乙酸。 酶解温度为4055， pH为5.26.8， 酶解 时间为0.10.4h。 微波助溶， 微波功率为200400W， 频率为5001MHz， 作用时间为3050min。 酶解结束后用沸水浴灭酶， 灭酶时间为。
13、1020min。 过滤， 滤液经真空浓缩至原来体积的1/4 1/3得到秋葵粗多糖浓缩液。 酶解条件温和， 不会破坏秋葵多糖的结构， 使其保持较高的活 性； 多种酶联合酶解， 并有多种酶激活剂激活复合酶， 酶解速度快且酶解更彻底， 提高秋葵 多糖的提取率； 利用溶剂提取和微波提取相结合， 利用被加热物体本身作为发热体而进行 加热， 不靠热传导作用， 可以使物料内部温度迅速提高， 加热时间缩短， 同时采用蒸馏水作 为提取溶剂， 具有廉价、 无毒、 易于回收再利用的特点， 大大降低了生产成本； 4） 纯化： 在秋葵粗多糖浓缩液中按质量比1:31:5加入95%乙醇， 静置， 离心， 去掉上清 液， 在。
14、沉淀中按质量比1:101:30加入蒸馏水， 用AB-8树脂脱色纯化； 5） 脱蛋白： 加入质量比4： 16:1的氯仿和正丁醇的混合液， 加入量为脱色纯化后秋葵多 糖浓缩液质量的1/21/4。 搅拌后过滤取上清液， 加入95%乙醇， 静置离心， 收集沉淀并用95% 乙醇反复清洗， 冷冻干燥， 并在15下粉碎， 得到秋葵多糖粉末。 氯仿和正丁醇能使蛋白质 变性而不溶于水， 在含蛋白质的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇会形成凝胶物， 通过离心的 方式去除蛋白质。 最后得到的秋葵多糖的纯度很高， 提取率高且能保持较高活性。 0006 与现有技术相比， 本发明的优点在于： 酶解条件温和， 不会破坏秋葵多糖的结。
15、构， 使其保持较高的活性； 多种酶联合酶解， 并有多种酶激活剂激活复合酶， 酶解速度快且酶解 更彻底， 提高秋葵多糖的提取率； 利用溶剂提取和微波提取相结合， 利用被加热物体本身作 为发热体而进行加热， 不靠热传导作用， 可以使物料内部温度迅速提高， 加热时间缩短， 同 时采用蒸馏水作为提取溶剂， 具有廉价、 无毒、 易于回收再利用的特点， 大大降低了生产成 本； 氯仿和正丁醇能使蛋白质变性而不溶于水， 在含蛋白质的多糖溶液中加入氯仿和正丁 醇会形成凝胶物， 通过离心的方式去除蛋白质； 最后得到的秋葵多糖的纯度很高， 提取率高 且能保持较高活性； 操作步骤简单， 成本低廉， 经济效益高。 具体。
16、实施例 0007 下面通过实施例对本发明方案作进一步说明： 实施例1： 秋葵多糖的提取方法， 具体操作步骤： 1） 预处理： 将新鲜秋葵在鼓风机中干燥， 温度为5070， 干燥时间为0.81.5h， 直至秋 说明书 2/4 页 4 CN 106832027 A 4 葵中水分为38%， 研磨， 过40100目筛； 2） 脱脂： 在秋葵粉中按料液比为1:401:80加入石油醚， 在索氏提取器中， 于4060下 回流脱脂24h， 过滤干燥得到去脂秋葵粉； 3） 酶解： 在去脂秋葵粉中按料液比1:301： 60加入蒸馏水， 搅拌， 搅拌速率为200500r/ min。 加入酶解剂， 酶解剂成份及其重量。
17、份为26份纤维素酶， 15份果胶酶， 0.40.7份牛胰 蛋白酶， 0.20.5份氯化钙， 0.010.03份烷基酚聚氧乙烯醚， 0.020.04份半胱氨酸， 0.01 0.04份乙酸叶醇酯和0.030.05份2-吡咯烷乙酸。 酶解温度为4055， pH为5.26.8， 酶解 时间为0.10.4h。 微波助溶， 微波功率为200400W， 频率为5001MHz， 作用时间为3050min。 酶解结束后用沸水浴灭酶， 灭酶时间为1020min。 过滤， 滤液经真空浓缩至原来体积的1/4 1/3得到秋葵粗多糖浓缩液。 酶解条件温和， 不会破坏秋葵多糖的结构， 使其保持较高的活 性； 多种酶联合酶解。
18、， 并有多种酶激活剂激活复合酶， 酶解速度快且酶解更彻底， 提高秋葵 多糖的提取率； 利用溶剂提取和微波提取相结合， 利用被加热物体本身作为发热体而进行 加热， 不靠热传导作用， 可以使物料内部温度迅速提高， 加热时间缩短， 同时采用蒸馏水作 为提取溶剂， 具有廉价、 无毒、 易于回收再利用的特点， 大大降低了生产成本； 4） 纯化： 在秋葵粗多糖浓缩液中按质量比1:31:5加入95%乙醇， 静置， 离心， 去掉上清 液， 在沉淀中按质量比1:101:30加入蒸馏水， 用AB-8树脂脱色纯化； 5） 脱蛋白： 加入质量比4： 16:1的氯仿和正丁醇的混合液， 加入量为脱色纯化后秋葵多 糖浓缩液。
19、质量的1/21/4。 搅拌后过滤取上清液， 加入95%乙醇， 静置离心， 收集沉淀并用95% 乙醇反复清洗， 冷冻干燥， 并在15下粉碎， 得到秋葵多糖粉末。 氯仿和正丁醇能使蛋白质 变性而不溶于水， 在含蛋白质的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇会形成凝胶物， 通过离心的 方式去除蛋白质。 最后得到的秋葵多糖的纯度很高， 提取率高且能保持较高活性。 0008 实施例2： 秋葵多糖的提取方法， 最优选操作步骤： 1） 预处理： 将新鲜秋葵在鼓风机中干燥， 温度为60， 干燥时间为1h， 直至秋葵中水分 为5%， 研磨， 过50目筛； 2） 脱脂： 在秋葵粉中按料液比为1:60加入石油醚， 在索氏提取器。
20、中， 于50下回流脱脂 3h， 过滤干燥得到去脂秋葵粉； 3） 酶解： 在去脂秋葵粉中按料液比1:40加入蒸馏水， 搅拌， 搅拌速率为300r/min。 加入 酶解剂， 酶解剂成份及其最优选重量份为5份纤维素酶， 3份果胶酶， 0.5份牛胰蛋白酶， 0.4 份氯化钙， 0.02份烷基酚聚氧乙烯醚， 0.03份半胱氨酸， 0.02份乙酸叶醇酯和0.05份2-吡咯 烷乙酸。 酶解温度为45， pH为6.2， 酶解时间为0.2h。 微波助溶， 微波功率为300W， 频率为 800MHz， 作用时间为30min。 酶解结束后用沸水浴灭酶， 灭酶时间为15min。 过滤， 滤液经真空 浓缩至原来体积的1。
21、/4得到秋葵粗多糖浓缩液。 酶解条件温和， 不会破坏秋葵多糖的结构， 使其保持较高的活性； 多种酶联合酶解， 并有乙酸叶醇酯和2-吡咯烷乙酸等成分激活复合 酶， 增效酶解， 酶解速度快且酶解更彻底， 提高秋葵多糖的提取率； 利用溶剂提取和微波提 取相结合， 利用被加热物体本身作为发热体而进行加热， 不靠热传导作用， 可以使物料内部 温度迅速提高， 加热时间缩短， 同时采用蒸馏水作为提取溶剂， 具有廉价、 无毒、 易于回收再 利用的特点， 大大降低了生产成本； 4） 纯化： 在秋葵粗多糖浓缩液中按质量比1:4加入95%乙醇， 静置， 离心， 去掉上清液， 在 说明书 3/4 页 5 CN 106。
22、832027 A 5 沉淀中按质量比1:18加入蒸馏水， 用AB-8树脂脱色纯化； 5） 脱蛋白： 加入质量比5:1的氯仿和正丁醇的混合液， 加入量为脱色纯化后秋葵多糖浓 缩液质量的1/3。 搅拌后过滤取上清液， 加入95%乙醇， 静置离心， 收集沉淀并用95%乙醇反复 清洗， 冷冻干燥， 并在15下粉碎， 得到秋葵多糖粉末。 氯仿和正丁醇能使蛋白质变性而不 溶于水， 在含蛋白质的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇会形成凝胶物， 通过离心的方式去除 蛋白质。 最后得到的秋葵多糖的纯度很高， 提取率高且能保持较高活性。 0009 本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知， 在此不进行赘述。 0010 以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明， 应理解的是以上所述仅 为本发明的具体实施例， 并不用于限制本发明， 凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、 补充或类似方式替代等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说明书 4/4 页 6 CN 106832027 A 6 。