技术领域
本发明属于医药技术领域。具体而言，涉及一种新结构的PAR-1拮抗剂、其制备方法、及含有它们的药物组合物以及它们在制备治疗血栓性疾病药物方面的用途。
背景技术
蛋白酶激活受体1(ProteaseActivatedAcceptor-1，PAR-1)是最近发现的抗血小板类抗血栓药物的新靶点。蛋白酶激活受体1又叫凝血酶受体，凝血酶被凝血连锁激活后通过PAR-1受体作用于血小板从而激活血小板，引起血小板聚集从而引起血栓和凝血。PAR-1引起的血栓中富含血小板成分，是动脉血栓的主要成因。PAR-1拮抗剂能阻断凝血酶激活血小板，从而阻断动脉血栓形成，可以用于治疗急性冠状动脉疾病(AcuteCoronarySyndrome)。已经有几个PAR-1抑制剂处于临床研究(ChackalamannilS.,ThrombinReceptor(ProteaseActivatedReceptor-1)AntagonistsasPotentAntithromboticAgentswithStrongAntiplateletEffects,J.Med.Chem.,2006,49(18),5389-5403)。
传统的用于防治血栓性疾病的药物分为三类。第一类是抗凝血类，分为直接凝血酶抑制剂和间接凝血酶抑制剂，该类药物通过作用于凝血连锁的不同环节来抑制血栓形成，具有抑制各种血栓形成的作用，如维生素K拮抗剂和Xa因子抑制剂等；第二类是抗血小板类，如COX-1抑制剂和ADP受体拮抗剂等，该类药物主要用于防治动脉血栓；第三类是纤维蛋白溶解剂，主要用于溶解血液中形成的纤维蛋白。
抗血小板药物多是传统的动脉血栓防治药物，如氯吡格雷和阿司匹林等。这些药物的缺点是出血风险比较大。而作为新发现的抗血小板类抗血栓药物的PAR-1拮抗剂，则具有较小的出血风险，因此这类化合物可以作为治疗动脉血栓的很有前景的药物。
本发明公开了一种新的三唑希夫碱类PAR-1拮抗剂，可以用于制备抗动脉血栓疾病的药物。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种具有良好抗血栓形成活性的化合物及其药学上可以接受的盐。
本发明的另一个目的是提供一种具有良好抗血栓形成活性的化合物及其药学上可以接受的盐的方法，及其在治疗动脉血栓方面的应用。
现结合本发明的目的对本发明内容进行具体描述。
本发明具有式I的化合物具有下述结构式：
合成上述化合物的方法为：
。
化合物II和化合物III在酸或者碱的催化下反应，得到希夫碱IV；IV与V在碱存在下反应得到化合物I。
本发明所述式I化合物的药学上可接受的盐，包括但是不限于与各种无机酸如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢溴酸等形成的盐，也包括与各种有机酸如乙酸、琥珀酸、马来酸、苹果酸以及各种氨基酸等形成的盐。
本发明所述式I化合物，可以与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂共同制成药物组合物。
本发明的组合物，所述的药学或食品学上可接受辅料选自：填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、防腐剂、包衣材料、或其它赋形剂。
本发明的组合物，所述的药学或食品学上可接受辅料。填充剂为填充剂包括乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、预胶化淀粉、甘露醇、山梨醇、磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙、微晶纤维素的一种或几种的组合物；所述的粘合剂包括蔗糖、淀粉、聚维酮、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、羟丙纤维素、甲基纤维素、聚乙二醇、药用乙醇、水的一种或几种的组合物；所述的崩解剂包括淀粉、交联聚微酮、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、羧甲纤维素钠、泡腾崩解剂的一种或几种的组合物。
本发明所述式I化合物具有PAR-1的拮抗作用，可作为有效成分用于制备抗血栓方面的治疗药物。本发明所述式I化合物的活性是通过体外模型验证的。
本发明的式I化合物在相当宽的剂量范围内是有效的。例如每天服用的剂量约在1mg-500mg/人范围内，分为一次或数次给药。实际服用本发明式I化合物的剂量可由医生根据有关的情况来决定。这些情况包括：被治疗者的身体状态、给药途径、年龄、体重、对药物的个体反应，症状的严重程度等。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例仅是用于说明，而并非用于限制本发明。本领域技术人员根据本发明的教导所做出的各种变化均应在本申请权利要求所要求的保护范围之内。
实施例1
。
反应原料：自制，常规方法。
1.06g(10mmol)化合物II和1.16g(10mmol)化合物III溶于20mL冰醋酸中，升温回流过夜。反应混合物稍冷后，倾倒入200mL冰水中，搅拌，抽滤收集固体，从无水乙醇中重结晶，室温下真空干燥，得到产物IV，白色晶体。MS,m/z=205([M+H]+)。
1.02g(5mmol)化合物IV、1.85g(5mmol)化合物V和2.07g(15mmol)固体碳酸钾在15mL乙腈中搅拌过夜，而后升温回流3小时。
反应混合物稍冷后倾倒到200mL冰水中，搅拌，用浓盐酸调节pH=4，50mL×3的二氯甲烷萃取，合并有机相，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上蒸去溶剂，得到的残余物经过柱层析纯化，得到纯品I，白色固体，MS,m/z=511([M+NH4]+)。
实施例2体外血小板聚集抑制试验
在96孔板中，在TRAP(凝血酶受体活化肽)诱导的血小板聚集中进行物质的药理学试验。注射器中预先加入3.13%的柠檬酸钠溶液，然后抽入20mL健康志愿者的血液，在1500g下离心20分钟，将富含血小板的血浆(PRP)分离出来并以1μLPGE1溶液(500μg/mL的乙醇溶液)/mLPRP的量进行处理。在室温下孵育5分钟后，将其在1200g下离心20分钟以除去白细胞。将不含白细胞的PRP以5mL/份分批转移到15mL的PP管中，并在3600g下离心使血小板沉淀。而后，滗出上层血浆，将得自5mLPRP的血小板沉淀重新混悬于1mLTyrode(120mMNaCl，2.6mMKCl，12mMNaHCO3，0.39mMNaH2PO4，10mMHEPES，0.35%BSA，5.5mM葡萄糖，pH=7.4)中，并用Tyrode调节至3′105/μL的血小板计数。将13mL这种细胞混悬液用866μL的10mMCaCl2溶液处理，以每孔120μL的量将其吸至96孔板中，在96孔板的孔中已经提前加入了15μL待测试物质。在室温下黑暗中孵育30分钟，加入15μLTRAP溶液(70-100μM)作为激动剂，在SpectraMax中37°C下振荡20分钟，在650nm下纪录动力学，计算阴性对照(tyrode/DMSO)和阳性对照(15μL激动剂/DMSO)的曲线下面积，并将差异定为100%。将待测试化合物I以稀释物的形式吸移，一式两份地进行测定，测定各物质浓度的AUC，计算与对照相比的AUC抑制%。通过抑制%按照参数方程并借助非线性回归分析，计算IC50值。下表给出了结果：
样品 血小板凝聚的抑制 IC50 (nM) 化合物I 2.7
从上表可以看出，本发明的化合物I表现出明显的血小板凝聚抑制作用。
实施例3
用量/片
化合物I10mg
微晶纤维素80mg
预胶化淀粉70mg
聚乙烯吡咯烷酮6mg
羧甲基淀粉钠盐5mg
硬脂酸镁2mg
滑石粉2mg。
将活性成分、预胶化淀粉和微晶纤维素过筛，充分混合，加入聚乙烯吡咯烷酮溶液，混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于50-60°C干燥，将羧甲基淀粉钠盐，硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的颗粒中压片。
实施例4
用量/片
化合物I15mg
微晶纤维素80mg
预胶化淀粉70mg
聚乙烯吡咯烷酮6mg
羧甲基淀粉钠盐5mg
硬脂酸镁2mg
滑石粉2mg。
将活性成分、预胶化淀粉和微晶纤维素过筛，充分混合，加入聚乙烯吡咯烷酮溶液，混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于50-60°C干燥，将羧甲基淀粉钠盐，硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的颗粒中压片。
实施例5
用量/粒
化合物I10mg
微晶纤维素30mg
预胶化淀粉20mg
聚乙烯吡咯烷酮3mg
硬脂酸镁2mg
滑石粉1mg。
将活性成分、预胶化淀粉和微晶纤维素过筛，充分混合，加入聚乙烯吡咯烷酮溶液，混合，制软材，过筛，制湿颗粒，于50-60°C干燥，将硬脂酸镁和滑石粉预先过筛，然后加入到上述的颗粒中，装胶囊，即得。