作为中性白细胞弹性蛋白酶抑制剂的吡咯并吡咯酮衍生物 本发明涉及治疗上有效的二环化合物、它们的制备方法、含有它们的药用组合物以及它们在化学治疗上的应用。特别是，我们已发现一组新的治疗炎症疾病有效的二环类化合物。
炎症是组织损伤或微生物侵入的基本反应，其特征在于循环的白细胞结合到并且外渗通过血管内皮。循环的白细胞包括中性白细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、单核细胞和淋巴细胞。不同的炎症形式涉及不同类型浸润的白细胞。
发炎的过程可以由多种方式启动，包括感染、组织损伤和自身免疫反应。作为发炎的过程，血流中的中性白细胞进入损伤部位的组织。中性白细胞含有大量各种细胞内颗粒，并且当发炎的部位激活时，所述颗粒的内容物分泌到该组织中。各种颗粒含有多种酶和其他蛋白质，其中许多具有抗菌作用。
在嗜苯胺蓝细胞颗粒中发现的一种酶为中性白细胞弹性蛋白酶。中性白细胞弹性蛋白酶在体内具有广谱的活性。例如，在肺中该酶可增加粘液产生和改变上皮的细胞组成。该酶还可引起许多组织微循环内血管渗透性的改变，因此它对许多有关的组织成分是一种强的破坏剂。
虽然在体内有弹性蛋白酶的内源抑制剂(包括抗胰蛋白酶和白细胞蛋白酶抑制剂)，但是弹性蛋白酶活性与许多疾病(包括气道、关节和皮肤的炎症)的发病机理有关。该酶还可引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)以及由外伤和／或脓毒症所引起的其他急性炎症的一些或大多数症状。
现在我们发现了一组新的抑制中性白细胞弹性蛋白酶地化合物。因此，在治疗与弹性蛋白酶活性有关的疾病和改善其症状中，这些化合物具有潜在的治疗作用。
一方面，本发明提供了式(Ⅰ)化合物及其盐和溶剂合物(以下均称为“本发明化合物”)(指出了有关的立体化学)其中R1代表C1-6烷基；
R2代表C2-4烷基或C2-4链烯基；
a代表1或2；
R3代表C1-8烷基或(CH2)nAr；
n代表1或2；
Ar代表任选取代的苯基。
式(Ⅰ)表示了手性中心的有关立体化学。本发明包括外消旋形式的化合物和一种对映体占优势或完全是对映体形式的化合物。一般来讲，我们优选提供纯的对映体形式的式(Ⅰ)化合物，尤其是具有式(Ⅰ)绝对立体化学对映体形式的化合物。
本发明还包括生理上可以接受的式(Ⅰ)化合物的盐。生理上适用的式(Ⅰ)化合物的盐包括无机酸和有机酸如盐酸盐和酒石酸盐。
Ar代表任选取代的苯基，其取代基的实例包括卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、硝基、羟基、胺(可由1或2个C1-4烷基任选取代)、CF3、COOH、COOC1-4烷基或CONH2(可由1或2个C1-4烷基任选取代)。
这里所说的“烷基”包括支链和直链的烷基，并且当有3个或3个以上的碳原子存在时，还可以包括环烷基。
R1合适的烷基包括甲基、乙基和丙基。
R3合适的C1-8烷基包括正丁基、环丙基和叔丁基。
我们优选R1为甲基或乙基，尤其是甲基。
我们优选R2为异丙基或丙基，尤其是异丙基。
我们优选a为1。
我们优选R3为C1-8烷基或CH2Ar。优选的Ar包括苯基和由1个或多个卤素取代的苯基。
用以下体外和体内试验测定本发明化合物抑制中性白细胞弹性蛋白酶的作用。人中性白细胞弹性蛋白酶的体外试验试验要点
50mM Tris／HCl(pH8．6)
150mM NaCl
11．8nM纯化的人中性白细胞弹性蛋白酶
在试验中二甲基亚砜的10mM试验化合物贮备液用水稀释至合适浓度。在加入底物溶液(见下面)之后的上述各数值为最终浓度。
将上述混合物于30℃保温15分钟，在该期间，在加入0．6mM MeO-琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-N-缬氨酰-对硝基苯胺之后用BioTek 340i板式读数器测定剩余的弹性蛋白酶活性10分钟。在405nm处吸光度增加的速率是与弹性蛋白酶的活性成正比。绘制酶活性与抑制剂浓度的关系曲线，用曲线适合的软件测定IC50。体内人中性白细胞弹性蛋白酶的抑制剂活性用IL-8诱导的肺浸润液的一种口服体内模型评价细胞内弹性蛋白酶的抑制作用
将成年仓鼠(100-150g)随机分组(n=4)并禁食过夜。气体麻醉(3％异氟烷)，经口给予以1ml／100g体重水为载体或含有预先溶解了的化合物。在麻醉下同时或依次经气管内给予1μg重组的人IL-8的100μl无菌生理盐水溶液。给予IL-8的6小时之后经腹内给予戊巴比妥处死动物。肺用2×2．5ml无菌生理盐水灌洗，通过解剖取出股骨。
用灌洗和从股骨髓收集的中性白细胞制备细胞内弹性蛋白酶。这可通过超声处理中性白细胞和离心完成，得到细胞内颗粒。颗粒经冷冻／解冻和超声处理而破裂。然后用这些标本进行弹性蛋白酶和髓过氧化酶试验，以评价化合物的效果和归一化中性白细胞的回收。人全血弹性蛋白酶抑制试验
一式三份新鲜的、肝素化的人全血(200μl)加到受试化合物适当稀释的样品(10μl)中。对照样品(平行6份)以水代替受试化合物。样品用吸管充分地混合，然后于37℃保温30分钟。再加入冷的红细胞裂解缓冲液(750μl 155mM氯化铵、0．12mM EDTA、10mM碳酸氢钾，pH7．4)。试管盖好，翻转数次，于4℃保温15分钟，每5分钟翻转一次。于4℃以250g离心10分钟，洗涤得到的小丸状细胞。洗涤用生理盐水(300μl)，随后于4℃以100g离心10分钟。在将最终的细胞小颗粒重新分散在缓冲液(200μl 100mM Tris，300mMNaCl，1％(w／v)HTAB，pH 8．6)中之前，再次将小颗粒洗涤2次。样品于-20℃贮存。在样品冷冻-解冻4次之后，用比色法测定置于50mM Tris，150mM NaCl，0．6mM MeO-琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-N-缬氨酰-pNA，pH8．6中的弹性蛋白酶的活性，同时测量405nm处吸光度增加的速率。
因此，在治疗与弹性蛋白酶活性有关的疾病和改善其症状中，本发明化合物具有潜在的治疗作用。所述疾病尤其包括支气管炎(包括慢性支气管炎)。还可以治疗任何慢性阻塞性肺部疾病(COPD)。
本发明化合物具有潜在治疗益处的疾病实例还包括呼吸道炎症疾病如支气管炎(包括慢性支气管炎)、支气管扩张、哮喘和肺部过度反应性、急性呼吸道窘迫综合征和脓毒性休克、肺部炎症和损坏性疾病如肺气肿、胆囊纤维变性和炎症、外组织炎症和损坏性疾病如皮肤病(例如狼疮和牛皮癣)以及牙周疾病(包括龈炎)。
此外，本发明化合物具有潜在治疗益处的疾病实例还包括创伤治疗和烧伤治疗、心血管疾病(如心肌梗塞和中风)、外周血管疾病(包括间歇性跛行)、动脉粥样硬化、重灌注损伤、在进行心肺分流手术时发生的心血管改变以及败血病。
本发明化合物还可用于治疗结缔组织疾病如风湿性关节炎、骨关节炎和脊椎炎、肾炎如肾小球性肾炎。
本发明化合物也可用于治疗某些白血病如急性骨髓性白血病和急性脊髓单核细胞白血病和慢性单核细胞白血病，以及预防或抑制实体肿瘤如肺、乳房、前列腺和胃癌与黑素瘤的转移。
本发明的特殊方面是应用式(Ⅰ)化合物治疗慢性支气管炎。慢性支气管炎是由于气道表面暴露在有害的化学物或试剂而产生的疾病或是另一疾病的继发疾病。通过在气道表面上过度分泌粘液而引起该病的症状。该过量的粘液不能有效地被消除，结果减少了肺内的气体交换，从而导致呼吸困难和血氧过少、周期复发的微生物感染和与咳出粘液样物质有关的持续的咳嗽。对粘液过量分泌提出的机制包括在上皮暴露于刺激性物质后中性白细胞募集进入至气道；中性白细胞在气道表面分泌弹性蛋白酶，并且该酶既增加了分泌在气道表面粘液的数量，又极大地改变了气道上皮的细胞组成。因此，应用本发明化合物抑制弹性蛋白酶的活性是治疗慢性支气管炎的一个途径。在慢性梗塞性肺部疾病(COPD)(例如在带有气流阻塞的慢性支气管炎)中减低了的肺功能也归因于弹性蛋白酶介导的肺损害，结果导致气道狭窄和炎症。因此，弹性蛋白酶抑制剂可以改善肺功能。
如以上所示，本发明化合物可用作为人或兽医的药物，尤其可用作为中性白细胞弹性蛋白酶的抑制剂。
因此，另一方面，本发明式(Ⅰ)化合物或其生理上适用的盐或溶剂合物可用作为人或兽医的药物，尤其可用于治疗与弹性蛋白酶有关的疾病，如慢性支气管炎。
人们明白，这里提到的治疗可延伸为预防和治疗所述的疾病。
再一方面，本发明还提供了应用式(Ⅰ)化合物或其生理上适用的盐或溶剂合物制备与治疗弹性蛋白酶有关疾病(尤其是慢性支气管炎)的药物。
又一方面，本发明也提供了治疗由弹性蛋白酶活性引起或介导的人或动物疾病的方法，该方法包括给所述受试者人或动物服用有效剂量的式(Ⅰ)化合物或其生理上适用的盐或溶剂合物。
可以将本发明化合物配制成以任一方便的方式给药的剂型，因此本发明在其范围内也包括用于治疗的药用组合物，该组合物包括式(Ⅰ)化合物或其生理上适用的盐或溶剂合物与一种或多种生理上适用的稀释剂或载体的混合物。
本发明还提供了制备所述药用组合物的方法，该方法包括将各种成分混合。
可以将本发明化合物配制成例如口服给药、口腔含剂、非经胃肠道给药、局部给药或直肠给药的形式。
口服给药的片剂和胶囊剂可以含有常用的赋形剂如粘合剂例如糖浆、阿拉伯树胶、明胶、山梨糖醇、西黄蓍胶、淀粉胶浆或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂如乳糖、微晶纤维素、糖、玉米淀粉、磷酸钙或山梨糖醇；滑润剂如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂如马铃薯淀粉、交联羧甲基纤维素钠或淀粉羟基乙酸钠；湿润剂如硫酸月桂酯钠。所述片剂可以按照本技术领域已知的方法进行包衣。口服液体制剂可以为例如水或油混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以为在应用之前与水或其他合适载体构成的干粉产品。所述液体制剂可以含有常用的添加剂如混悬剂例如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖／糖浆、明胶、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用油；乳化剂如卵磷脂、山梨糖醇酐单油酸酯或阿拉伯树胶；非水载体(可以包括食用油)如杏仁油、精炼椰子油、油状酯、丙二醇或乙醇；防腐剂如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯或山梨酸。如果合适，所述制剂还可以含有缓冲盐、芳香剂、着色剂和／或甜味剂(如甘露糖醇)。
对于口含剂，组合物可以为按常规方法配制的片剂或锭剂。
也可以将本发明化合物配制成栓剂，例如含有常用栓剂基质(如可可脂或其他甘油酯)的栓剂。
还可以将本发明化合物配制成单次快速静脉注射(bolus injection)或连续输注的非经胃肠道给药的剂型，并且可以为例如安瓿、管形瓶、小体积输注液或预先装入注射器的单位剂量形式，或为加有防腐剂的多倍剂量容器的形式。本发明组合物可以为例如水或非水载体的溶液剂、混悬液剂或乳剂，并且可以含有配方剂(formulatory agents)如抗氧化剂、缓冲剂、抗微生物剂和／或毒性调节剂。另外，有效成分可以为在应用之前与合适载体(如灭菌的无热原的水)构成的粉末形式。所述干燥的固体粉末制剂可以按下法制备：在无菌操作下将灭菌的粉末装入各个灭菌容器内，或者在无菌操作下将灭菌溶液装入各个容器内并冷冻干燥。
这里所说的局部给药包括吹入法给药和吸入法给药。局部给药的各种类型制剂的实例包括软膏、霜剂、洗剂、粉剂、阴道栓剂、喷雾剂、气溶胶、用于吸入器或吹入器的胶囊剂或弹射剂，或滴剂(如眼或鼻滴剂)。
软膏和霜剂可以为用例如水或油基质以及合适的增稠剂和／或凝胶剂和／或溶剂配制而成。所述基质可以包括例如水和／或油如液体石蜡或植物油例如花生油或蓖麻油或溶剂如聚乙二醇。可以应用的增稠剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、微晶蜡和蜂蜡。
洗剂可以用水或油基质配制而成，并且一般来讲还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、混悬剂或增稠剂。
外用的粉剂可以藉助合适的粉剂基质如滑石、乳糖或淀粉配制而成。滴剂可以用水或非水基质配制而成，并且还含有一种或多种分散剂、增溶剂或混悬剂。
喷雾剂可以配制成例如水溶液剂或混悬液剂或应用合适的推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷、1，1，1，2-四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体，从加压包装容器输送的气溶胶剂。
可以配制用于吸入器或吹入器的明胶胶囊剂或弹射剂，它们含有本发明化合物与合适粉状基质如乳糖或淀粉的粉状混合物。
本发明组合物还可以与其他治疗药物如抗炎剂例如皮质激素或非甾体抗炎药(NSAID)、支气管舒张剂如β-2-肾上腺素能激动剂和黄嘌呤类药(如茶碱)、粘液溶解剂、抗毒蕈碱类药、抗白三烯类药、细胞粘连抑制剂(如ICAM拮抗剂)、抗氧化剂(如N-乙酰半胱氨酸)、肺表面活性剂和／或抗微生物剂和抗病毒剂合并应用。本发明组合物也可以与基因替代疗法并用。
因此，又一方面，本发明提供了一种组合物，它包括式(Ⅰ)化合物或其生理上适用的盐或溶剂合物以及其他治疗上有效药物。
上面提到的组合物可以方便地用于药物配方中，因此含有上述并用药物以及药学上适用载体的药物配方代表了本发明的又一方面。
上述合并应用的各个成分可以以分开的或组合的药物配方依次服用或同时服用。熟悉本技术领域的专业人员可以容易地知道已知治疗药物的合适剂量。
本发明化合物可以方便地服用，其口服剂量为例如0．01～50mg／kg体重，更合适为0．05～25mg／kg体重，一天1次或多次。当然，精确的剂量取决于患者的年龄、病情、所选择的具体给药途径以及欲治疗的疾病。治疗支气管炎时优选口服本发明化合物。对于其他的适应症，可能需要其他给药途径，例如对ARDS，则需要静脉注射(i．v．)。
本发明化合物具有有效的持续作用。
式(Ⅰ)化合物及其盐和溶剂合物可以按下述方法进行制备，这构成了本发明的又一方面。
制备式(Ⅰ)化合物的本发明方法包括
(ⅰ)使式(Ⅱ)化合物与式(ⅩⅩⅩⅩ)化合物或其酸衍生物(如酰卤例如酰氯)或其受保护的衍生物缩合，(指出了有关的立体化学)
(ⅱ)将式(Ⅲ)化合物或其受保护的衍生物用化合物YO2SR1(这里Y为活性基团如卤素，例如氯)进行磺酰化，(指出了有关的立体化学)
(ⅲ)将式(Ⅳ)化合物或其羧酸酯进行环合，(指出了有关的立体化学)
(ⅳ)将相应的式(Ⅴ)化合物进行氧化，(指出了有关的立体化学)其中Xa为硫或SO，
(Ⅴ)使相应的式(Ⅵ)化合物与式R3-L化合物(这里L为离去基团)进行反应，或者(指出了有关的立体化学)
(ⅵ)将式(Ⅰ)化合物保护的衍生物脱去保护，
(ⅶ)从对映体混合物中纯化式(Ⅰ)的1个对映体化合物，并且如果希望或需要，将得到的式Ⅰ化合物游离碱转变成生理上适用盐的形式，或者反过来，或者将一种盐的形式转变成另一生理上适用盐的形式。方法(ⅰ)
所述缩合反应是在偶合剂如EDC、HATU或TBTU存在下，优选也在HOBT存在下和溶剂如二氯甲烷、DMF、MeCN或四氢呋喃，于0℃～室温下进行。人们明白，另一方法是可以应用羧酸、酸衍生物(如酰氯、活性酯、酸酐或混合酸酐)。因此，反应条件可以相应改变，例如用包括碱。方法(ⅱ)
所述磺酰化反应合适在LHMDS或NaH存在下，于溶剂如四氢呋喃中，在-78℃～0℃下进行。方法(ⅲ)
所述环合反应合适在碘化2-氯-1-甲基吡啶鎓或EDC存在下，于溶剂如二氯甲烷中，在0℃～回流温度下进行。在该反应中可以应用包括酰卤(如酰氯)(优选在碱存在下)、酸酐、硫代酯的酸衍生物。方法(ⅳ)
所述氧化反应可以按通常的方法进行，例如用过酸进行氧化。方法(ⅴ)
优选的离去基团包括卤素(例如氯、溴或碘)、甲磺酸盐或甲苯磺酸盐。该反应可以按下法完成：使反应物任选在碱如三乙胺或碳酸钾存在下，于一种惰性非质子传递溶剂如DMF或MeCN中进行反应。方法(ⅵ)
保护基，尤其是氮保护基以及脱保护的方法见T．W．Greene在“Protective Groups in Organic Synthesis”，第2版(1991)，J．Wiley＆Sons中所述。方法(ⅶ)
用常用的方法例如手性色谱法(如手性HPLC)和用同手性酸(Homochiral acid)如酒石酸进行结晶，可以获得纯的单一对映体。
式(Ⅰ)化合物生理上适用的酸性盐如盐酸盐或酒石酸盐可以通过用式(Ⅰ)碱性化合物与期望的酸反应制得。
其中R3代表C2-8烷基或-(CH2)nAr的式(Ⅰ)化合物也可以通过将式(Ⅵ)化合物进行还原性胺化反应制得。
对于该还原性胺化反应，首先将式(Ⅵ)化合物与相应的醛反应，然后用还原剂如三乙酰氧基硼氢化物，于乙酸存在下，在惰性溶剂如DCM中进行还原。
按照下述反应路线1所示方法，可以容易地制得式(Ⅱ)中间体化合物：
反应路线1步骤(a)
这是常用的保护反应，当P2代表BOC的情况下，该保护反应可以用(BOC)2O于碱(如NaOH)存在下在极性溶剂系统(如二噁烷／水)中完成。步骤(b)
在合适的溶剂如吡啶／DMF和(BOC)2O或合适的等同物存在下用碳酸氢铵处理，可以完成所述转变。步骤(c)
这是常用的保护反应，在P1代表CBZ情况下，该反应可以在惰性溶剂如THF存在下，于-50℃以下，用nBuLi接着用CBZ-Cl进行反应而完成。步骤(d)
该反应可以通过与RX反应完成，这里RX为在合适溶剂(如丙酮或乙腈)中能将SMe中的硫转变为锍的化合物(如MeI、苄基碘或Me2SO4)。R通常代表烷基或芳烷基，X代表卤化物，尤其是碘化物或硫酸酯。对于该反应，酰胺的保护是方便的，但不是必需的。步骤(e)
该环闭合反应在合适的溶剂如MeCN中通过用Dowex 2×8(400目)OH-树脂处理完成。另外，该环闭合反应也可以在合适的溶剂(如MeCN)中通过用碳酸钾处理来完成。步骤(f)
脱保护可以按常用的方法完成，例如在二噁烷中用HCl处理，可以脱去BOC保护基。步骤(g)
该反应可以在合适的碱(如N-甲基吗啉)存在下，通过与三氟乙酸烷基酯(如甲基酯)或三氟乙酸酐反应完成。步骤(h)
使式(ⅩⅢ)化合物与还原剂如硼氢化锂反应，接着于烷基醇如乙醇溶剂存在下，与浓硫酸反应，可以完成该转化。步骤(ⅰ)
在路易斯酸如三氟化硼乙醚溶液和惰性溶剂如二氯甲烷存在下，发生式(ⅩⅣ)化合物与式(ⅩⅤ)化合物的反应。在Oalkyl和OSi(alkyl)3中的“alkyl”通常代表C1-6烷基。在式(ⅩⅤ)化合物中，硅烷基部分中合适的烷基包括甲基、异丙基和叔丁基。优选的Oalkyl为OEt，优选的OSi(alkyl)3为OSi(i-Pr)3或OSi(Me)2(t-Bu)。亦可预见到应用别种式(ⅩⅤ)的化合物其中Oalkyl被OSi(alkyl)3所取代。
式(ⅩⅤ)化合物可以按下法制得：使相应的羧酸酯(R2CH2COOEt或其他烷基酯，它或者是已知的，或者可以按已知方法制备)与强碱(如LHMDS)反应，接着与三烷基硅烷基氯(如三甲基硅烷基氯)或三烷基硅烷基三氟甲磺酸酯反应。该反应通常在低温(低于0℃)下、于惰性溶剂(如THF)中、在DMPU存在下进行。步骤(j)
与碱(如碳酸钾)反应，可以进行该脱保护反应。步骤(k)
所述环闭合反应可以在惰性溶剂(如THF)中于四甲基乙二胺存在下，在-20℃～25℃通过与烷基格利雅试剂(如叔丁基氯化镁)反应进行。步骤(Ⅰ)
该步反应为内酰胺磺酰化反应。该反应适合在LHMDS、NaH或KH存在下，于溶剂如THF中，在-78℃～0℃下通过与R1SO2-Y(这里Y为活性基团，优选氯)反应完成。步骤(m)
该步反应为N-脱保护反应，可以按常用的方法进行。因此当P1为CBZ时，该反应可以在溶剂如乙酸乙酯如THF中用Pd(OH)2为催化剂经氢化完成。
式(ⅩⅢ)化合物还可以按下述反应路线2制备：反应路线2步骤(a)
该反应可以按生成烷基酯的标准条件进行，例如在SOCl2存在下与醇(如甲醇)进行反应。R13为C1-6烷基，优选甲基。步骤(b)
该环合反应可以在水中于搅拌下与Dowex2×8(优选400目)进行反应来完成。步骤(c)
使式(ⅩⅩⅡ)化合物与三氟乙酸甲酯于极性的质子活泼的溶剂如MeOH中反应，生成所述TFA保护的胺。步骤(d)
合适的保护基P1包括CBZ。在该情况下将式(ⅩⅩⅢ)化合物可与强碱(如LHMDS或nBuLi)于惰性溶剂(如THF)中反应，接着再与CBZ-Cl反应。
制备反应路线中式(ⅩⅤⅢ)化合物的另一条路线见反应路线3：反应路线3反应路线3(续)步骤(a)
式(ⅩⅩⅣ)化合物或者为已知化合物，或者可以按已知化合物的类似方法制备。P1为N-保护基，优选CBZ。步骤(a)为进一步的-N-保护反应。式(ⅩⅩⅤ)中的P2为不同的N-保护基，优选BOC。当P2为BOC时，用BOC2O进行反应是合适的。
所述反应可以在碱(如三乙胺或4-二甲氨基吡啶)存在下于溶剂(如乙酸乙酯)中在0℃～25℃下进行。步骤(b)
用对甲苯磺酸吡啶鎓于溶剂(如丙酮／水)中在25℃～75℃进行所述转变。步骤(c)
用2-苯基亚硫酰基乙酸酯(PhSOCH2CO2R13)和哌啶于溶剂(如乙腈)中较适宜在室温下进行所述缩合重排反应。R13为C1-6烷基，优选甲基。步骤(d)
该步为Mitsunobu取代反应，用邻苯二甲酰亚胺、PPh3和二烷基偶氮二羧酸酯(如DEAD)在溶剂(如THF)存在下于0℃～40℃下进行。步骤(e)
该步为脱保护反应，优选用强酸如TFA在溶剂(如DCM)中较适宜于0℃～40℃下进行。R13为C1-6烷基，优选乙基。步骤(f)
该步为环合反应，适宜于按分子内迈克尔反应进行。应用NaH在溶剂如THF中于例如0℃～25℃下进行。步骤(g)
在该步骤发生2步反应：N-脱保护和重新保护。用水合肼在溶剂(如乙醇)中于0℃～回流温度下脱去邻苯二甲酰亚胺基。按通常方法引入保护基P3。当P3为BOC时，该反应用BOC2O进行。步骤(h)
用R2-Y(这里Y为活性基团如溴或碘)作为反应物，经烷基化反应引入支链R2。因此，该反应用碱，优选用强碱(如LHMDS)进行。较适宜用其溶剂DMPU的THF溶液与LHMDS一起应用。合适的反应温度为-78℃-50℃。在所述条件下，一般以好的立体化学控制进行。步骤(ⅰ)
该步为酯水解反应，随后进行N-脱保护反应。酯水解反应可按常规方法进行，例如用KOH在含水乙醇中于25℃～80℃下进行。N-脱保护反应也可按常规方法进行，例如用HCl于二噁烷溶液中在0℃～50℃下进行，或者如果该保护基为三氟乙酸酯，那么可用碱处理。步骤(j)
该步为环缩合反应，可在碘化2-氯-1-甲基吡啶鎓和合适的碱如N，N-二异丙基乙基胺存在下，在溶剂如二氯甲烷中于0℃～回流温度下进行。我们还发现，有可能应用式(ⅩⅩⅩⅢ)化合物作为羧酸酯，在该情况下步骤(i)的酯水解是不必需的。在该情况下环缩合反应的优选条件包括应用烷基格利雅试剂(如t-BuMgCl)，在THF溶液中，于-20℃～25℃下进行。
制备式(ⅩⅩⅩⅠ)化合物的另一方法见反应路线4：反应路线4步骤(a)
式(ⅩⅩⅩⅩⅣ)化合物或者是已知的，或者可以按已知化合物的类似方法制备。P3为如上所述保护基，BOC是合适的。该反应可用PIFA(苯基碘氧基二(三氟乙酸酯))和碱(如吡啶)，在含水溶剂(如含水THF、二噁烷或乙腈)中进行。这是Stansfield，C．F．的方法(见Organic Preparations and Procedures Int1990，22(5)，593～603)。步骤(b)
P1为保护基如CBZ。该保护反应可按一般方法进行。例如，该保护反应可在水混溶的溶剂如THF、DMF或二噁烷中，用N-(苄氧基羰基氧)琥珀酰亚胺、苄氧基羰基氯或任一苄氧基羰基的适宜来源物进行，同时用碳酸钠调节pH至碱性。
作为另一步骤(b1)，式(ⅩⅩⅩⅩⅥ)化合物可以按一般方法由二氨基丁酸制得。步骤(c)
该反应适于分2阶段进行。第一阶段是使式(ⅩⅩⅩⅩⅥ)化合物于降低的温度下与N-甲基吗啉反应，然后与烷基氯代甲酸酯(如乙基氯代甲酸酯)在有机溶剂如DCM、二噁烷或THF中反应。第二阶段是将产物用硼氢化钠于降低的温度(如-20℃～10℃)下在溶剂(如THF)中进行还原。步骤(d)
该步氧化反应可以按任一合适的方法进行，例如用草酰氯在DMSO和DCM中于氮气氛下，在降低的温度(如-30℃～-70℃)下进行，接着与三乙胺反应。中间体(ⅩⅩⅩⅧ)不分离较适宜。步骤(e)
该步反应适于用维悌希试剂如三苯基膦R13O2CCH=PPh3进行，或者也可以用膦酸酯按Wadsworth-Emmons反应进行。步骤(f)
该步迈克尔加成反应可以用LHMDS或其他合适的强碱在合适的有机溶剂(如THF、乙醚或甲苯)中进行，最好有配位剂如TMEDA存在。
中间体式(Ⅲ)化合物可以由反应路线1脱去保护的式(ⅩⅧ)化合物与式(ⅩⅩⅩⅩ)化合物或其酸衍生物如酰卤(如酰氯)按以上主要方法(ⅰ)所述方式进行反应而制得(开始的N-脱保护反应可以按以上反应路线1步骤(m)所述进行)。
中间体式(Ⅳ)化合物可以由式(ⅩⅦ)化合物(带有合适受保护的伯胺)按以上所述由式(ⅩⅧ)化合物与主要方法(ⅱ)制备式(Ⅲ)化合物类似的方法进行制备。
其中Xa代表S的式(Ⅴ)化合物可以按下法制备：使相应的式(Ⅲ)化合物与式R1SSR1化合物以亲核取代的标准条件进行反应。其中Xa代表SO的式(Ⅴ)化合物可以由其中Xa代表S的相应化合物用过酸进行氧化制得。
式(Ⅵ)化合物可按下法制备：按实质上已知的一般方法，使式(Ⅱ)化合物与式(ⅩⅩⅩⅩA)化合物或其酸衍生物如酰卤(例如酰氯)或其受保护的衍生物反应。
通常应用式(ⅩⅩⅩⅩA)化合物的保护了的形式(如用CBZ使N-受保护)。
式(ⅩⅩⅩⅩ)和(ⅩⅩⅩⅩA)化合物或者是已知的，或者可以按实质上已知的一般方法制备。
其中R3代表C2-8烷基或-(CH2)nAr的式(ⅩⅩⅩⅩ)较特殊的化合物，可以按常规条件通过式(ⅩⅩⅩⅩA)化合物的还原性胺化制得。
举例来说，式(ⅩⅩⅩⅩ)或(ⅩⅩⅩⅩA)化合物可以通过相应腈类化合物的水解制备，而该腈类化合物可以由相应的羟基化合物制备。其中a代表1的式(ⅩⅩⅩⅩ)或式(ⅩⅩⅩⅩA)化合物的化学在Anderson和Lok(1972)，J．Org．Chem．37(24)，3953-3955及在该论文提及的参考文献中已有叙述。
显然，反应路线1、2、3和4可以改变，以便应用同手性起始原料(如在反应路线1中S-甲硫氨酸或在反应路线4中S-二氨基丁酸)制备同手性产物，或通过进行另外的手性拆分步骤。
如果按照反应路线1由外消旋的甲硫氨酸制备外消旋的式(Ⅻ)化合物，那么我们发现，式(Ⅻ)化合物的各个异构体可以通过高效率的拆分方法进行解析。因此，可以将外消旋的式(Ⅻ)化合物用同手性的二-对甲苯酰酒石酸在作为催化剂的3，5-二氯-2-羟基苯甲醛存在下，在惰性溶剂如THF中进行反应。产生式(Ⅻ)化合物同手性的盐。然后用三氟乙酸甲酯在N-甲基吗啉存在下进行反应，得式(ⅩⅢ)化合物。
式(Ⅻ)化合物的二种对映体也可以按类似的方法，用以S-甲硫氨酸为基础的合成方法制得。
熟悉本技术领域的专业人员明白，上述制备式(Ⅰ)化合物的合成方法可以改变，以便在实验条件例行优化过程中包括或省去保护基，或者应用另外的保护基(例如参见T．W．Greene“Protective Groups inOrganic Synthesis”，第2版(1991)，J．Wiley＆Sons)。
在上述手性和析分部分中新的手性中间体也形成了本发明的重要内容。
作为本发明的一个方面，本发明还提供了中间体的制备方法。
与类似的已知化合物相比，本发明化合物的优点是它们更有效，具有较大的选择性，副作用较少，具有较长的持续作用，优选给药途径具有较高的生物利用度，具有更吸引起人的药效学或药代动力学性质或具有其他更期望的性质。
以下非限制性实施例详细叙述了本发明。
缩写
BOC 叔丁氧基羰基
CBZ 苄氧基羰基
(BOC)2O 二叔丁基焦碳酸酯
THF 四氢呋喃
LHMDS 双(三甲硅烷基)氨基化锂
DMPU 1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢2(1H)-嘧啶酮
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
EDC 1-(3-N，N-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
DEAD 二乙基偶氮二羧酸酯
DCM 二氯甲烷
TMEDA 四甲基乙二胺
HOBT 1-羟基苯并三唑
HATU 六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓
TBTU 四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓
DMSO 二甲基亚砜中间体中间体1：2，4-二氨基-丁酸甲酯二盐酸盐
于0℃在1／2小时内向D，L-二氨基丁酸二盐酸盐(350g)的甲醇(1．6L)溶液中加入亚硫酰氯(200ml)。回流3小时后真空除去溶剂，残余物与甲苯(650ml)一起研磨得到标题化合物，为白色固体(385g)。游离碱的质谱，MH+(测定值)133，MH+(计算值)133。中间体2：3-氨基-吡咯烷-2-酮
将中间体1(1g)、水(70ml)和Dowex2×8-400目(16．4ml)搅拌1小时。然后滤除树脂，滤液经真空浓缩得到标题化合物，为白色固体(0．40g)，硅胶薄层色谱(18∶3乙酸乙酯∶甲醇)Rf为0．07。中间体3：2，2，2-三氟-N-(2-氧-吡咯烷-3-基)-乙酰胺
将中间体2(181g)、三氟乙酸甲酯(218ml)和甲醇(2．6L)的混悬液搅拌2小时。然后真空除去溶剂得到标题化合物，为米色固体(355g)。质谱，MNH4+(测定值)214，MNH4+(计算值)214。中间体4∶2-氧-3-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-吡咯烷-1-羧酸苄基酯
于-70℃向中间体3(3．5g)的四氢呋喃(100ml)溶液中加入六甲基二硅烷基胺基锂(20ml)。1／4小时后，加入氯甲酸苄基酯(2．8ml)。将混合物温至室温1小时，加入1M盐酸(25ml)。用乙酸乙酯(3×25ml)萃取后，合并的萃取液用2％氨水溶液、2M盐酸和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。除去溶剂后，白色固体用乙酸乙酯∶己烷5∶1重结晶，得到标题化合物(4．2g)，硅胶薄层色谱(18∶2乙酸乙酯∶甲醇)Rf为0．7。中间体5：2-乙氧基-3(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-吡咯烷-1-羧酸苄基酯
于-5℃向中间体4(34g)的乙醇(1070ml)溶液中加入硼氢化钠(9．86g)。然后再滴加4M氯化氢的1，4-二噁烷溶液(20ml)。间歇地再加入-部分4M氯化氢的1，4-二噁烷溶液(2×5ml，1×10ml)和硼氢化钠(2g)。3小时后，加入浓硫酸(11ml)，并将混合物温至室温2小时。然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(300ml)，真空除去乙醇和二噁烷。残余物用水(500ml)稀释，并用乙酸乙酯(3×500ml)萃取。合并的萃取液用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂，残余物经硅胶9385行闪式色谱纯化，用乙醚洗脱，得到标题化合物(21g)。质谱，MNH4+(测定值)378，MNH4+(计算值)378。中间体6：反式-2-(1-乙氧基羰基-2-甲基-丙基)-3-(2，2，2-三氟乙酰氨基)-吡咯烷-1-羧酸苄基酯
将中间体5(10g)、乙基三甲基硅烷基异丙基缩乙烯酮(ethyltrimethylsilyl isopropylketene acetal)(11ml)和二氯甲烷(250ml)冷至5℃，并在1／4小时内加入三氟化硼醚配合物(17ml)。1小时后，再加入三氟化硼醚配合物(3．4ml)和缩乙烯酮(ketene acetal)(11ml)。再过1小时后，加入1M盐酸(200ml)，分离有机层，用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂得到标题化合物(16．7g)，硅胶薄层色谱(2∶1乙醚∶环己烷)Rf为0．18和0．27。中间体7：反式-3氨基-2-(1-乙氧基羰基-2-甲基-丙基)-吡咯烷-1-羧酸苄基酯
将中间体6(31g)、碳酸钾(71g)、水(930ml)和乙醇(930ml)于60℃加热3小时。真空除去乙醇，含水残余物用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。合并的萃取液用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到标题化合物，为棕色油状物(17．5g)。质谱，MH+(测定值)349，MH+(计算值)349。中间体8：rel-(3R，3aR，6aS)-6-异丙基-5-氧-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-1-羧酸苄基酯
将中间体7(17．5g)的四氢呋喃(1800ml)溶液冷却至-5℃，在1／2小时内加入1M氯化叔丁基镁的四氢呋喃溶液(204ml)。2小时后加入1M盐酸(250ml)和盐水(300ml)。然后混合物用乙酸乙酯(250ml)萃取。真空浓缩萃取液至一半体积后，萃取液用盐水洗涤并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂，随后与乙醚(60ml)一起研磨得到白色固体。该白色固体用乙酸乙酯重结晶得到标题化合物(3．4g)。质谱，MH+(测定值)303，MH+(计算值)303。中间体9：rel(3R，3aR，6aS)-6-异丙基-4-甲磺酰基-5-氧-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-1-羧酸苄基酯
于-74℃在氮气氛下向搅拌的中间体8(15．01g)在无水四氢呋喃(950ml)的溶液中滴加1．0M六甲基二硅烷基胺基锂的四氢呋喃溶液(69．5ml)。于-74℃搅拌10分钟后，在45分钟内将混合物温至0℃，然后在该温度下保持20分钟。再冷却至-76℃，滴加甲磺酰氯(9．61ml)，并在该温度下搅拌1．5小时。然后温热至-50℃，加入饱和氯化铵溶液(480ml)使反应中止，并使其温热至室温。混合物在水(300ml)和乙酸乙酯(750ml)之间分配，水层再用乙酸乙酯(750ml)萃取，合并的有机萃取液用盐水(450ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩至呈米色固体。经硅胶(Merck9385)闪式柱色谱纯化，用乙酸乙酯∶环己烷(1∶3，1∶2，1∶1，然后3∶1)洗脱，得到标题化合物，为白色晶状固体(13．65g)。硅胶薄层色谱(二氯甲烷)Rf为0．22，质谱MNH4+(测定值)398，MNH4+(计算值)398。中间体10：rel-(3R，3aR，3aS)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮
向20％氢氧化钯(湿的)-炭(3．16g)中加入中间体9(13．63g)的乙酸乙酯(900ml)混悬液，得到的黑色混悬液在氢气下于室温剧烈搅拌90分钟。混合物再经Harborlite J2过滤，并真空浓缩得到标题化合物，为细的白色粉末(8．63g)。硅胶薄层色谱(甲醇∶二氯甲烷1∶9)Rf为0．50。质谱MH+(测定值)247，MH+(计算值)247。中间体11：rel-(3R，3aR，6aS)-3-(6-异丙基-4-甲磺酰基-5-氧-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-1-羰基)-氮杂环丁烷-1-羧酸苄基酯
1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-酸(0．235g)、中间体10(0．246g)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亚胺盐酸盐(0．230g)和乙腈(5ml)于室温搅拌6小时。真空除去溶剂，并加入乙酸乙酯(25ml)。溶液用1M盐酸(2×25ml)、8％碳酸氢盐溶液(25ml)和盐水(10ml)洗涤并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂得到标题化合物，为无色油状物(0．392g)。质谱MNH4+(测定值)481，MNH4+(计算值)481。中间体12：rel-(3R，3aR，6aS)-4-(氮杂环丁烷-3-羰基)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮乙酸盐
中间体11(0．090g)的乙酸(15ml)溶液用氧化铂催化剂(0．227g)氢化3小时。然后滤除催化剂，滤液真空浓缩。残余物与甲苯(10ml)一起共沸蒸馏，得到标题化合物，为一油状物(0．077g)。质谱，MH+(测定值)330，MH+(计算值)330。中间体13：1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-酸
在6小时内于室温在氮气氛下，向氮杂环丁烷-3-羧酸(0．50g)、碳酸钾(0．82g)、二噁烷(5ml)和水(10ml)中加入氯甲酸苄基酯(0．74ml)。然后加入哌嗪(5滴)。1／2小时后在真空下除去二噁烷，残余物用2M盐酸(25ml)稀释。用乙酸乙酯(35ml)萃取后，有机层用盐水(10ml)洗涤并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂得到中间体13，为无色油状物(1．07g)。质谱，MNH4+(测定值)253，MNH4+(计算值)253。中间体14：(3S，3aS，6aR)-3-(6-异丙基-4-甲磺酰基-5-氧六氢-吡咯并[3，2-b ]吡咯-1-羰基)-氮杂环丁烷-1-羧酸苄基酯
在氮气氛下将(3S，3aS，6aR)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮(中间体122，国际专利申请WO 97／36903)(0．90g)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(0．91g)和乙腈(12ml)的混合物搅拌5分钟，此后加入中间体13(0．90g)的乙腈(30ml)溶液。18小时后真空除去溶剂，残余物用2M盐酸(30ml)处理，并用乙酸乙酯(90ml)萃取。有机层用2M盐酸(30ml)、饱和碳酸氢钠溶液(2×30ml)、盐水(30ml)洗涤，并干燥(MgSO4)和真空浓缩。残余物经硅胶(Merck 9385)快速色谱纯化，用10％，再用20％乙腈的二氯甲烷溶液洗脱，得到中间体14，为无色泡沫状物(0．80g)。质谱，MH+(测定值)464，MH+(计算值)464。中间体15：(3S，3aS，6aR)-4-(氮杂环丁烷-3-羰基)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮乙酸盐
氧化铂(Ⅳ)(1．0g)和乙酸(50ml)预氢化1／2小时，然后加入中间体14(0．30g)的乙酸(50ml)溶液。在氢气氛下剧烈搅拌19小时后，通过3MEmpore C18萃取园盘柱体过滤，并真空浓缩。残余的胶状物与甲苯(3×50ml)一起共沸蒸馏并与乙醚(2×20ml)一起研磨，得到中间体15，为白色粉末(0．63g)。质谱，MH+(测定值)330，MH+(计算值)330。实施例实施例1：rel-(3R，3aR，6aS)-4-(1-环丙基甲基)-氮杂环丁烷-3-羰基)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮盐酸盐
中间体12(0．019g)、乙酸(1滴)、三乙酰氧基硼氢化钠(0．021g)、环丙烷甲醛(0．075ml)和二氯甲烷(1ml)于室温搅拌3天。混合物用二氯甲烷(5ml)稀释，与8％碳酸氢钠溶液(5ml)-起搅拌，并分离。浓缩有机层，随后经制备薄层色谱纯化，用二氯甲烷∶乙醇∶氨水(100∶8∶1)洗脱，得到无色油状物(0．007g)。该油状物溶于氯仿(1ml)中。加入1M氯化氢乙醚溶液(1ml)，并真空除去溶剂得到标题化合物，为白色固体(0．009g)。硅胶薄层色谱，用二氯甲烷∶乙醇∶氨水(100∶8∶1)展开，Rf为0．39。质谱，MH+(测定值)384，MH+(计算值)384。实施例2：rel-(3R，3aR，6aS)-4-(1-苄基-氮杂环丁烷-3-羰基)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b ]吡咯-2-酮盐酸盐
实施例2按实施例1类似的方法，用中间体12和苯甲醛(0．011ml)制备，得到标题化合物，为白色固体(0．009g)。硅胶薄层色谱，用二氯甲烷∶乙醇∶氨水(100∶8∶1)展开，Rf为0．46。质谱，MH+(测定值)420，MH+(计算值)420。实施例3：rel-(3R，3aR，6aS)-4-[1-(2，2-二甲基-丙基)-氮杂环丁烷-3-羰基]-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮盐酸盐
实施例3是按实施例1类似的方法，用中间体12和新戊醛(0．011ml)制备，得到标题化合物，为白色固体(0．010g)。硅胶薄层色谱，用二氯甲烷∶乙醇∶氨水(100∶8∶1)展开，Rf为0．44。质谱，MH+(测定值)400，MH+(计算值)400。实施例4：rel-(3R，3aR，6aS)-4-[1(2，6-二氯-苄基)-氮杂环丁烷-3-羰基]-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮盐酸盐
实施例4按实施例1类似的方法，用中间体12和2，6-二氯苯甲醛(0．017g)制备，与乙醚(3×1ml)一起研磨后得到标题化合物，为白色固体(0．003g)。硅胶薄层色谱，用二氯甲烷∶乙醇∶氨水(100∶8∶1)展开，Rf为0．51。质谱，MH+(测定值)488，490，MH+(计算值)488，490。实施例5：rel(3R，3aR，6aS)-4-(1-丁基-氮杂环丁烷-3-羰基)-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮盐酸盐
实施例5是按实施例1类似的方法，用中间体12和丁醛(0．009ml)制备，得到标题化合物，为白色固体(0．006g)。硅胶薄层色谱，用二氯甲烷∶乙醇∶氨水(100∶8∶1)展开，Rf为0．46。质谱，MH+(测定值)386，MH+(计算值)386。实施例6：(3S，3aS，6aR)-4-[1-(2，2-二甲基-丙基)-氮杂环丁烷-3-羰基]-3-异丙基-1-甲磺酰基-六氢-吡咯并[3，2-b]吡咯-2-酮
向中间体15(0．625g)的二氯甲烷(90ml)溶液中加入乙酸(9滴，约100μL)、三乙酰氧基硼氢化钠(0．680g)和新戊醛(0．24ml)。18小时后，将混合物真空浓缩，残余物用乙酸乙酯(90ml)处理。用1M盐酸(3×30ml)萃取，合并的萃取液用固体碳酸氢钠调节至pH8。再用二氯甲烷(3×30m1)萃取，合并的萃取液经干燥(MgSO4)和真空浓缩。残余物经硅胶(Merck9385)快速色谱纯化，用200∶8∶1二氯甲烷∶乙醇∶氨水洗脱，得到胶状物(0．466g)。将该产物溶于二氯甲烷(20ml)中，用1M氯化氢的乙醚溶液(5ml)处理，并真空浓缩。用7％水的异丙醇溶液(75ml)重结晶，得到实施例6化合物，为白色粉末(0．298g)。M．p．194-195℃。1H-NMR(CD3OD，57℃，400MHz)δ4．40(t，2H)，4．28(bs，2H)，3．88(m，1H)，3．83-3．71(m，3H)，3．59(sextet，1H)，3．36(t，1H)，3．23(s，3H)，3．10(s，2H)，3．03-2．96(m，1H)，2．95-2．90(m，1H)，2．52(quintet，1H)，2．12(quintet，1H)，1．27(d，3H)，1．04(s，9H)，1．02(d，3H)。IR(KBr漫反射)3479，3415，2966，2608，1738，1661cm-1。质谱，MH+(测定值)400．226259，MH+(预期值)400．227004(1．9ppm)。二氧化硅薄层色谱(100∶8∶1二氯甲烷∶乙醇∶氨水)Rf0．56。元素分析：C19H33N3O4S 0．8H2O HCl测定值：C，50．80；H，7．76；N，9．37；S，6．97％计算值：C，50．67；H，7．97；N，9．33；S，7．12％HPLC(Inertsil ODS2-IK5，40℃，215nm，1mL／分钟，溶剂AH2O+0．1％H3PO4，溶剂B 95％ MeCN／H2O+0．1％ H3PO4，梯度洗脱0％B2分钟，至100％B40分钟，100％B10分钟)，保留时间为14．247分钟。(Chiralcel OD-H，25℃，215nm，1mL／分钟，恒溶剂成分60％EtOH的庚烷溶液)保留时间为7．796分钟。生物数据
1．按上面所述体外弹性蛋白酶试验，测定的实施例1～6化合物的IC50值列于下表：
实施例 IC50(nM)
1 194
2 229
3 83
4 210
5 93
6 37
2．按上面所述体内仓鼠IL-8试验测定实施例3化合物，在剂量小于10mg／kg下，其作用的持续时间至少为6小时。
3．按上面所述人全血弹性蛋白酶抑制试验，测定实施例1～6化合物的IC50值列于下表：
实施例 IC50(μM)
1 5．4
2 0．81
3 0．46
4 1．2
5 1．7
6 0．19