一种等离子体灭菌带电粒子作用因子的定量分析方法.pdf

本发明公开一种等离子体灭菌带电粒子作用因子的定量分析方法，其步骤如下：首先准备1×1cm的带菌滤膜块；然后将铁丝筛网覆盖在培养皿上，滤掉等离子体组分中的带电粒子，将等离子体消毒器置于培养皿中带菌滤膜块正上方，进行等离子体处理；等离子体处理后立即将带菌滤膜块进行稀释和培养，并分析对比细菌数量变化结果。这种方法通过铁丝筛网滤掉了等离子体中的带电粒子，较好的实现了等离子体组分的分离和带电粒子的定量分析。

1.  一种等离子体灭菌带电粒子作用因子的定量分析方法，其特征在于该方 法的步骤如下：(1)、将0.5mm直径的0.22微米孔径的混合纤维素酯滤膜剪成 1×1cm的滤膜块，然后将菌膜块逐一分装到干燥、无菌的培养皿中，打开培养 皿在紫外灯下将滤膜块正反面各灭菌5min待用，然后取10μl上述原始菌液滴在 滤膜块上，待液体被滤膜块完全吸收之后进行后续处理；(2)、将导电性能良好 的铁丝筛网覆盖在去盖的培养皿上，滤掉等离子体组分中的带电粒子，将等离 子体消毒器置于培养皿中带菌滤膜块正上方，进行等离子体处理；(3)、等离子 体处理后立即将带菌滤膜块放入无菌、装有10ml无菌水的50ml旋口离心管里， 每个离心管相对应进行标记编号，将带菌滤膜块、10ml无菌水的离心管用漩涡 振荡器振荡60s，并将离心管放到支架上，用移液枪取900μL的无菌水稀释液注 入离心管内，标明稀释倍数；取100μL细菌溶液注入第一个离心管中，并反复， 使之混合均匀，此即稀释至10倍；更换枪头，从10倍管中取100μL细液放入 第二支离心管中并混合均匀，即稀释至100倍，同法可将菌液稀释至10ⁿ倍； (4)、取稀释好的细菌溶液接种培养皿，每个培养皿接种100μL菌液，一式三 份，用无菌玻璃棒将液体均匀涂抹于整个培养皿；涂完后将玻璃棒在酒精灯火 焰上灼烧灭菌一遍，用酒精棉球擦拭后，然后再在火焰上灼烧一遍，放回支架； (5)将接种后的培养皿倒置于37℃的培养箱中，待培养24h后计数。

一种等离子体灭菌带电粒子作用因子的定量分析方法
技术领域
本发明属于消毒技术领域，特别是提供了一种等离子体灭菌带电粒子作用因 子的定量分析方法。
背景技术
等离子体在消毒领域被拓展到各种运用中时，人们也把越来越多的目光投向 对等离子体杀菌机理的理解上。迄今为止，虽然人们做出了巨大的努力，然而 还是没有完善确立其机理。对于大气压低温等离子体，虽然大量实验已经证实 了其对细菌、芽孢、真菌、病毒等微生物具有强大的杀灭作用，但其杀菌作用 因子和机制各种观点还不统一。等离子体对细菌相互作用的精确机理并未被充 分揭示，但在等离子体杀菌过程中作用因素已经被广泛研究：电场，加热效应， 紫外辐射，带电粒子以及活性物质。定性研究表明，其中等离子体产生的带电 粒子作用可能是由于带电粒子在细菌的细胞膜表面聚集，产生的静电力超过细 胞膜的表面张力而使其破裂死亡，但对带电粒子作用因子的定量研究偏少。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出一种等离子体灭菌带电粒子作用因子的定量分 析方法。
本发明为达到以上目的，是通过以下的技术方案来实现的：
包括的步骤如下：(1)、将0.5mm直径的0.22微米孔径的混合纤维素酯滤膜 剪成1×1cm的滤膜块，然后将菌膜块逐一分装到干燥、无菌的培养皿中，打开 培养皿在紫外灯下将滤膜块正反面各灭菌5min待用，然后取10μl上述原始菌液 滴在滤膜块上，待液体被滤膜块完全吸收之后进行后续处理；(2)、将导电性能 良好的铁丝筛网覆盖在去盖的培养皿上，滤掉等离子体组分中的带电粒子，将 等离子体消毒器置于培养皿中带菌滤膜块正上方，进行等离子体处理；(3)、等 离子体处理后立即将带菌滤膜块放入无菌、装有10ml无菌水的50ml旋口离心 管里，每个离心管相对应进行标记编号，将带菌滤膜块、10ml无菌水的离心管 用漩涡振荡器振荡60s，并将离心管放到支架上，用移液枪取900μL的无菌水稀 释液注入离心管内，标明稀释倍数；取100μL细菌溶液注入第一个离心管中， 并反复，使之混合均匀，此即稀释至10倍；更换枪头，从10倍管中取100μL 细液放入第二支离心管中并混合均匀，即稀释至100倍，同法可将菌液稀释至 10ⁿ倍；(4)、取稀释好的细菌溶液接种培养皿，每个培养皿接种100μL菌液， 一式三份，用无菌玻璃棒将液体均匀涂抹于整个培养皿；涂完后将玻璃棒在酒 精灯火焰上灼烧灭菌一遍，用酒精棉球擦拭后，然后再在火焰上灼烧一遍，放 回支架；(5)将接种后的培养皿倒置于37℃的培养箱中，待培养24h后计数。
附图说明
图1为本发明方法的带电粒子分离示意图。
图中：1等离子体消毒器、2等离子体射流、3铁丝筛网、4培养皿、5带菌 滤膜块。
图2为带电粒子定量分析图。
具体实施方式
实施例
在超净工作台中，制备含有大肠杆菌菌种(编号：ATTC25922)的0.22微米 孔径的混合纤维素酯滤膜，然后进行定量研究，(1)、将0.5mm直径的0.22微 米孔径的混合纤维素酯滤膜剪成1×1cm的滤膜块，然后将菌膜块逐一分装到干 燥、无菌的培养皿中，打开培养皿在紫外灯下将滤膜块正反面各灭菌5min待用， 然后取10μl(细菌数约为10⁷)上述原始菌液滴在滤膜块上，待液体被滤膜块完 全吸收之后(即滤膜上无明显水滴)进行后续处理；(2)、如附图1，将导电性 能良好的300目铁丝筛网3覆盖在去盖的培养皿4(直径约为9cm，高约为1.7cm) 上，滤掉等离子体组分中的带电粒子，将等离子体消毒器1置于培养皿4中带 菌滤膜块5正上方，等离子体消毒器的喷嘴距离皿中心2cm处，将气体流量调 为5L/min进行灭菌，等离子体射流2处理时间分别取0、30、60、90和120s； (3)、处理后立即将带菌滤膜块放入无菌、装有10ml无菌水的50ml旋口离心 管里，注意每个离心管相对应进行标记编号，将带菌滤膜块、10ml无菌水的离 心管用漩涡振荡器振荡60s，并将离心管(1.5mL容量)放到支架上，标明稀释 倍数，用数字式移液枪取900μL的无菌水稀释液注入离心管内；取100μL细菌 溶液注入第一个离心管中，并反复，使之混合均匀(漩涡振荡器振荡10s)，此 即稀释至10倍；更换枪头，从10倍管中取100μL细液放入第二支离心管中并 混合均匀，即稀释至100倍，同法可将菌液稀释至10ⁿ倍；(4)、取稀释好的细 菌溶液接种培养皿，每个培养皿接种100μL菌液，一式三份，用无菌玻璃棒将 液体均匀涂抹于整个培养皿；涂完后将玻璃棒在酒精灯火焰上灼烧灭菌一遍， 用酒精棉球擦拭后，然后再在火焰上灼烧一遍，放回支架；(5)将接种后的培 养皿倒置于37℃的培养箱中，待培养24h后计数。细菌数量变化结果如附图2 所示，这里需要注意的是，结果中并不是带电粒子的灭菌效果，而是去除带电 粒子后的灭菌效果，通过与未分离的等离子体效果比较可得到带电粒子的灭菌 效果。从附图2中可以看出，去除带电粒子的等离子体灭菌效果与未分离的等 离子体的效果相差并不大，在30s时，前者细菌对数浓度为4.58，后者的对数浓 度为5.7，两者相差了1.12，在60s时两者分别是0和1.48，而在90s内两者都 实现了细菌的全杀灭，这不仅说明去除了带电粒子之后的微等离子体射流仍然 具有较强的灭菌能力，也证明了射流中的带电粒子存在一定的灭菌效果，但是 并不是大多数细菌(约80％)死亡的主要因素。因此可以认为，在等离子体射 流中起主要灭菌作用的并不是带电粒子，但是带电粒子在等离子体射流的灭菌 过程中起到了明显的积极作用。