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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410114146.9 (22)申请日 2014.03.26 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104945399 A (43)申请公布日 2015.09.30 (73)专利权人 南京优科生物医药研究有限公司 地址 210046 江苏省南京市经济技术开发 区恒竞路28号 专利权人 南京优科制药有限公司 南京优科生物医药集团股份有限 公司 (72)发明人 闵涛陆晨光车晓明张峰 薛峪泉 (51)Int.Cl. C07D 471/04(2006.01) (56)对比。
2、文件 CN 102267994 A,2011.12.07, CN 103396416 A,2013.11.20, CN 103467466 A,2013.12.25, 徐颖等.HPLC法测定盐酸莫西沙星含量及其 有关物质. 中国药科大学学报 .2012,第43卷 (第1期),第46-50页. 审查员 章磊 (54)发明名称 一种莫西沙星杂质C的制备方法 (57)摘要 本发明报道了一种莫西沙星杂质C的制备方 法， 具体是以莫西沙星杂质E为起始原料， 经过氨 基的Boc保护、 乙基化、 酯水解以及脱除Boc保护 共计四步反应， 最后经一次重结晶操作， 即可得 到高纯度的莫西沙星杂质C精制品。 本发。
3、明具有 合成路线简短， 操作简单， 所得杂质产物纯度较 高， 可应用与对照品研究等特点。 权利要求书2页 说明书10页 CN 104945399 B 2017.01.04 CN 104945399 B 1.一种制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 该方法包括如下步骤： (1)将莫西沙星杂质E(式II， 即： 1-环丙基-7- (S,S)-2,8-重氮-二环4.3.0壬-8- 基 -6-氟-8-羟基-1,4-二氢-4-氧-3-喹啉羧酸)溶解于体积比1:1的1,4-二氧六环/水的混 合溶剂中， 加入氢氧化钠， 待内温降至05， 缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(Boc)2O的1,4-二 氧六环溶液， 滴。
4、毕， 保持内温05反应23h， 升至内温3035， 搅拌反应1214h， 反应 完毕后， 降温至05， 滴加0.5mol/L柠檬酸水溶液至pH3， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取 二氯甲烷层， 浓缩至干， 得式III化合物； (2)将式III化合物溶解于无水THF中， 加入缚酸剂， 搅拌均匀， 待内温降至05， 缓慢 滴加乙基化试剂的无水THF溶液， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至回流反应10 12h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液进行搅拌， 加入二氯甲烷， 搅拌萃取， 静 置分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式IV化合物； (3)将式IV化合物溶解于乙醇中， 加入1。
5、mol/L氢氧化钠溶液， 5055搅拌反应1 1.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加1mol/L盐酸溶液， 调节pH至3， 加入二氯甲烷， 萃 取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得式V化合物； (4)在温度05， 将式V化合物溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二氯甲烷的混合溶剂 中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 依次用饱和碳 酸氢钠溶液和0.5mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干燥， 滤液浓缩得式I化合物， 即莫西沙星杂质C。 2.根据权利要求1所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 步骤(1)中式II化合 物： 氢氧化。
6、钠： (Boc)2O的摩尔比为1： 1.31.6： 1.11.4。 3.根据权利要求1所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述的缚 酸剂是指氢氧化钾， 氢化钠， 乙醇钠， 叔丁醇钾中的一种； 乙基化试剂是指碘乙烷， 溴乙烷， 硫酸二乙酯中的一种。 4.根据权利要求3所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 所述的式III化合 物： 缚酸剂： 乙基化试剂摩尔比为1： 4： 4。 5.根据权利要求4所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 所述的缚酸剂是叔 丁醇钾， 乙基化试剂是溴乙烷。 6.根据权利要求4所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 所述的缚。
7、酸剂是氢 氧化钾， 乙基化试剂是硫酸二乙酯。 7.根据权利要求4所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 步骤(4)中， 式V化合 权利要求书 1/2 页 2 CN 104945399 B 2 物与三氟乙酸/二氯甲烷的混合溶剂的重量体积比为1： 57， w/v， 单位g/mL。 8.根据权利要求1所述的制备莫西沙星杂质C的方法， 其特征在于， 步骤(4)中还可包括 莫西沙星杂质C的精制步骤， 即： 将上述杂质C粗品加入异丙醇和水的混合溶剂中， 加入活性 炭， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品。 9.根据权利要求8所述的制备莫西沙星杂质C的方。
8、法， 其特征在于， 精制步骤中混合溶 剂的体积配比为异丙醇： 水3:1。 权利要求书 2/2 页 3 CN 104945399 B 3 一种莫西沙星杂质C的制备方法 技术领域 0001 本发明属于药物化学领域， 具体涉及一种莫西沙星杂质C的制备方法。 背景技术 0002 盐酸莫西沙星 （Moxifloxacinhydrochloride） 化学名为： 1-环丙基-6-氟-1,4-二 氢-8-甲氧基-7- （4 S,7 S） -八氢-6H-吡咯并3,4-b吡啶-6-基-4-氧代-3-喹啉羧酸盐 酸盐， CasNo.:151096-09-2， 具有下式所示的化学结构： 0003 0004 盐酸莫西。
9、沙星是德国拜耳医药公司研制的超广谱喹诺酮类抗生素， 于1999年9月 首次在德国上市， 同年12月获FDA批准在美国上市。 盐酸莫西沙星具有广谱的抗菌活性， 尤 其是对革兰氏阳性、 支原体、 衣原体、 军团菌等活性远优于环丙沙星， 并且对厌氧菌有效。 它 在人体半衰期长， 每日给药1次400mg。 临床主要用于治疗急性窦腺炎、 慢性支气管炎的急性 发作、 社区获得性肺炎， 以及无并发症的皮肤感染和皮肤软组织感染。 本品具有广谱， 高效， 低毒， 呈低水平耐药， 几乎没有光敏反应等优点， 被认为是 “治疗呼吸道感染接近理想的药 物” 。 0005 盐酸莫西沙星的质量标准在英国药典、 欧洲药典和美。
10、国药典中已有收载， 其中明 确指出可能含有的A、 B、 C、 D、 E这5种杂质， 此5种杂质的结构如下： 0006 0007 在上述质量标准中， 该5种杂质采用混合对照的方法进行系统适应性试验以控制 杂质， 但是并未采用杂质对照品法进行定量控制。 现有文献中也未见有关于制备莫西沙星 说明书 1/10 页 4 CN 104945399 B 4 杂质C的高效的合成方法。 0008 化学药物杂质研究的技术指导原则（ 【H】 GPH3-1， 第67页） 指出： 有机杂质的检 测一般多采用HPLC法。 如采用HPLC法， 须采用峰面积法， 具体定量方法采用外标法 （杂质对 照品法） ， 外标法定量比较。
11、准确。 0009 莫西沙星杂质C是莫西沙星质量标准中所需关注的重点杂质之一， 其对于莫西沙 星杂质的相关研究意义非常重大。 因此， 提供一种简便高效制备高纯度的莫西沙星杂质C的 方法， 对于莫西沙星杂质的相关研究意义重大。 它可以用于莫西沙星生产中的杂质定性和 定量的分析， 从而可以提高莫西沙星的质量标准， 为人民群众安全用药提供重要的指导意 义。 发明内容 0010 为了提高盐酸莫西沙星的质量， 降低临床用药的风险， 本发明的目的是提供一种 莫西沙星杂质C的制备方法， 通过该法能够快速、 简便、 高效地得到杂质对照品， 对采用外标 法 （即杂质对照品法） 严格控制盐酸莫西沙星的质量等方面做出。
12、贡献。 0011 本发明提供一种莫西沙星杂质C （式I化合物） 的制备方法， 其特征在于， 该方法包 括如下步骤： 0012 0013 （1） 将莫西沙星杂质E （式II， 即： 1-环丙基-7- （S,S） -2,8-重氮-二环4.3.0壬- 8-基 -6-氟-8-羟基-1,4-二氢-4-氧-3-喹啉羧酸） 溶解于体积比1:1的1,4-二氧六环/水的 混合溶剂中， 加入氢氧化钠， 待内温降至05， 缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(Boc)2O的1,4- 二氧六环溶液， 滴毕， 保持内温05反应23h， 缓慢升至内温3035， 继续搅拌反应12 14h， 反应完毕后， 降温至05， 滴加0.5mol/。
13、L柠檬酸水溶液至pH=3， 加入二氯甲烷， 搅 拌萃取， 静置分层， 取二氯甲烷层， 浓缩至干， 得式III化合物； 0014 （2） 将式III化合物溶解于无水四氢呋喃THF中， 加入缚酸剂， 搅拌均匀， 待内温降 至05， 缓慢滴加乙基化试剂的无水THF溶液， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至 回流反应1012h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液进行搅拌， 加入二氯甲 烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得式IV化合物； 0015 （3） 将式IV化合物溶解于乙醇中， 加入1mol/L氢氧化钠溶液， 5055搅拌反应 11.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢。
14、滴加1mol/L盐酸溶液， 调节pH至3， 加入二氯甲 说明书 2/10 页 5 CN 104945399 B 5 烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得式V化合物； 0016 （4） 在温度05， 将式IV化合物溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二氯甲烷的混合 溶剂中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 依次用饱 和碳酸氢钠溶液和0.5mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干燥， 滤液浓缩得式I化 合物， 即莫西沙星杂质C。 0017 进一步地， 步骤 （1） 中式II化合物： 氢氧化钠：（Boc）2O的摩尔比为1： 1.31.6： 1.1。
15、 1.4。 0018 进一步地， 步骤 （2） 中所述的缚酸剂是指氢氧化钾， 氢化钠， 乙醇钠， 叔丁醇钾中的 一种； 乙基化试剂是指碘乙烷， 溴乙烷， 硫酸二乙酯中的一种。 0019 更进一步地， 所述的式III化合物： 缚酸剂： 乙基化试剂摩尔比为1： 4： 4。 0020 优选地， 所述的缚酸剂是叔丁醇钾， 乙基化试剂是溴乙烷， 或者： 缚酸剂是氢氧化 钾， 乙基化试剂是硫酸二乙酯。 0021 优选地， 式IV化合物与三氟乙酸/二氯甲烷的混合溶剂的重量体积比为1： 57 （w/v， 单位g/mL） 。 0022 进一步地， 步骤 （4） 中还可包括莫西沙星杂质C的精制步骤， 即： 将上述。
16、杂质C粗品 加入异丙醇和水的混合溶剂中， 加入活性炭， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶7 8h， 得到莫西沙星杂质C的精制品。 0023 更进一步优选地， 精制步骤中混合溶剂的体积配比为异丙醇： 水=3:1。 0024 本发明方案公开了一种简捷的制备莫西沙星杂质C的方法。 从化学结构角度分析， 杂质E、 杂质C以及莫西沙星同属于一种喹诺酮甲酸的化学母核， 区别在于8位的取代基不 同。 莫西沙星8位是甲氧基， 杂质E是羟基， 杂质C是乙氧基。 杂质E可由莫西沙星去甲基化得 到； 以杂质E为基础进行乙基化， 即可方便地制得莫西沙星杂质C。 0025 但是， 申请人在具体的试验过程中遇。
17、到了化学选择性问题， 申请人通过选择恰当 的合成路线， 选用合适的试剂和步骤， 最终解决了相关问题， 实现了本发明目的。 本发明方 案具备的技术优势， 以及取得的有益技术进步， 详述如下： 0026 （1） 以莫西沙星杂质E为起始原料， 通过官能团的转换， 快捷制得杂质C， 避免了从 相关的苯甲酸衍生物起始， 一步步地构建喹诺酮母核的冗长步骤， 提高了合成效率。 莫西沙 星杂质E可由莫西沙星进行去甲基化反应得来， 十分方便。 0027 （2） 在使用乙基化试剂对杂质E的8位羟基进行乙基化的同时， 由于化学选择性较 差的原因， 壬烷环的氮原子上很可能也发生N-乙基化； 同时， 裸露的羧基在强碱条。
18、件下与活 性卤代烷也容易发生酯化反应。 申请人通过大量的试验摸索， 发现： 首先， 在步骤 （1） 和步骤 （4） 进行氨基的Boc保护和脱除， 起到了事先将氨基保护起来， 避免产生N-乙基化副产物的 作用； 其次， 针对在使用乙基化试剂之后， 难以避免产生的酯化双取代物， 可以使用中等浓 度的氢氧化钠溶液将羧基上的乙酯选择性水解， 而不影响氧原子上的乙基醚结构， 巧妙地 解决了两个 “选择性” 较差的技术问题。 0028 （3） 对于莫西沙星杂质C的重结晶研究是一个复杂的探索过程， 经过溶剂筛选和纯 度比对， 申请人最终确定采用异丙醇： 水=3:1 （v/v） ， 并且低温 （-10-5） 。
19、静置析晶的方 式， 可以将精制品的HPLC的纯度达到99.699.8%， 重现性良好。 0029 综上所述， 本发明报道的莫西沙星杂质C的制备方法， 是将盐酸莫西沙星杂质E为 说明书 3/10 页 6 CN 104945399 B 6 起始原料， 经过氨基的Boc保护、 乙基化、 酯水解以及脱除Boc保护基共计四步反应， 仅外加 一次重结晶操作， 即可得到高纯度的莫西沙星杂质C精制品。 本发明方案具有合成路线简 短， 操作简单， 所得杂质产物纯度较高 （HPLC纯度99.6%99.8%） ， 可应用于对照品研究等特 点。 具体实施方式 0030 下面结合具体的实施例， 对本发明的技术方案做进一。
20、步的说明。 0031 实施例1 0032 将莫西沙星杂质E （20.0g， 0.052mol） 溶解于体积比1:1的1,4-二氧六环/水的混合 溶剂220mL中， 加入氢氧化钠 （1.0g， 0.026mol） ， 待内温降至0， 缓慢滴加二碳酸二叔丁酯 (Boc)2O （12.4g， 0.057mol） 的1,4-二氧六环溶液， 滴毕， 保持内温0反应2h， 缓慢升至内温 30， 继续搅拌反应12h， 反应完毕后， 降温至0， 滴加0.5mol/L柠檬酸水溶液至pH=3， 加 入二氯甲烷， 搅拌萃取， 静置分层， 取二氯甲烷层， 浓缩至干， 得到式III化合物21.4g， 收率 85%。 0。
21、033 将式III化合物 （21.4g， 0.04mol） 溶解于无水THF100mL中， 加入氢氧化钾 （8.9g， 0 .16mol） ， 搅拌均匀， 待内温降至05， 缓慢滴加乙基化试剂硫酸二乙酯 （24 .7g， 0.16mol） 的无水THF溶液40mL， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至回流反应10h， 反 应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液40mL进行搅拌， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二 氯甲烷层， 浓缩得到式IV化合物20.0g， 收率84%。 0034 将式IV化合物 （20.0g， 0.037mol） 溶解于乙醇80mL中， 加入1mol/L氢氧化钠溶。
22、液 80mL， 50搅拌反应11.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加1mol/L盐酸溶液25mL， 调节pH至3， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式V化合物17.0g， 收率90%。 0035 在温度05， 将式V化合物 （17.0g， 0.033mol） 溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二 氯甲烷的混合溶剂85mL中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯 甲烷层， 依次用饱和碳酸氢钠溶液和0.5mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干燥， 滤液浓缩得到式I化合物11.7g， 收率86%， 即莫西沙星杂质C。 0036 。
23、将杂质C粗品11.7g加入体积比3:1的异丙醇/水混合溶剂中110mL， 加入活性炭 0.8g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品 10.5g， 收率90%。 HPLC纯度99.8%。 0037 实施例2 0038 将莫西沙星杂质E （15g， 0.038mol） 溶解于体积比1:1的1,4-二氧六环/水的混合溶 剂150mL中， 加入氢氧化钠 （2.3g， 0.057mol） ， 待内温降至5， 缓慢滴加(Boc)2O （10.7g， 0.049mol） 的1,4-二氧六环溶液， 滴毕， 保持内温5反应23h， 缓慢升至内温35， 继续搅 拌反。
24、应1214h， 反应完毕后， 降温至5， 滴加0.5mol/L柠檬酸水溶液至pH=3， 加入二氯甲 烷， 搅拌萃取， 静置分层， 取二氯甲烷层， 浓缩至干， 得到式III化合物15.6g， 收率83%。 0039 将式III化合物 （15.6g， 0.032mol） 溶解于无水THF95mL中， 加入氢化钠 （5.1g， 含 量60%， 0.128mol） ， 搅拌均匀， 待内温降至05， 缓慢滴加乙基化试剂碘乙烷 （20.0g， 0.128mol） 的无水THF溶液48mL， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至回流反应12h， 反 应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液45mL进。
25、行搅拌， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二 说明书 4/10 页 7 CN 104945399 B 7 氯甲烷层， 浓缩得到式IV化合物13.9g， 收率80%。 0040 将式IV化合物 （13.9g， 0.025mol） 溶解于80mL乙醇中， 加入1mol/L氢氧化钠溶液 80mL， 55搅拌反应11.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加1mol/L盐酸溶液25mL， 调节pH至3， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式V化合物11.7g， 收率89%。 0041 在温度05， 将式V化合物 （11.7g， 0.022mol） 溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二 。
26、氯甲烷的混合溶剂82mL中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯 甲烷层， 依次用饱和碳酸氢钠溶液和0.5mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干燥， 滤液浓缩得到式I化合物8.1g， 收率85%， 即莫西沙星杂质C。 0042 将杂质C粗品8.1g加入体积比2:1的异丙醇/水混合溶剂中85mL， 加入活性炭0.5g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品7.3g， 收率 89%。 HPLC纯度99.6%。 0043 实施例3 0044 将莫西沙星杂质E （10g， 0.026mol） 溶解于体积比1:1的。
27、1,4-二氧六环/水的混合溶 剂95mL中， 加入氢氧化钠 （1.4g， 0.036mol） ， 待内温降至05， 缓慢滴加(Boc)2O （6.7g， 0.031mol） 的1,4-二氧六环溶液， 滴毕， 保持内温3反应2.5h， 缓慢升至内温33， 继续搅 拌反应13h， 反应完毕后， 降温至05， 滴加0.5mol/L柠檬酸水溶液至pH=3， 加入二氯甲 烷， 搅拌萃取， 静置分层， 取二氯甲烷层， 浓缩至干， 得到式III化合物10.2g， 收率81%。 0045 将式III化合物 （10.2g， 0.021mol） 溶解于无水THF100mL中， 加入乙醇钠 （5.7g， 0.084。
28、mol） ， 搅拌均匀， 待内温降至05， 缓慢滴加乙基化试剂溴乙烷 （9.1g， 0.084mol） 的 无水THF溶液30mL， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至回流反应1012h， 反应完毕 后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液30mL进行搅拌， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷 层， 浓缩得到式IV化合物9.3g， 收率82%。 0046 将式IV化合物 （9.3g， 0.017mol） 溶解于乙醇50mL中， 加入1mol/L氢氧化钠溶液 50mL， 53搅拌反应11.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加1mol/L盐酸溶液15mL， 调节pH至3， 加入二氯。
29、甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式V化合物8.04g， 收率91%。 0047 在温度05， 将式V化合物 （8.04g， 0.016mol） 溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二 氯甲烷的混合溶剂48mL中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯 甲烷层， 依次用饱和碳酸氢钠溶液和0.5mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干燥， 滤液浓缩得到式I化合物5.5g， 收率85%， 即莫西沙星杂质C。 0048 将杂质C粗品5.5g加入体积比3:1的异丙醇/水混合溶剂中60mL， 加入活性炭0.8g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶。
30、78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品4.9g， 收率 90%。 HPLC纯度99.6%。 0049 实施例4 0050 将莫西沙星杂质E （30g， 0.077mol） 溶解于体积比1:1的1,4-二氧六环/水的混合溶 剂300mL中， 加入氢氧化钠 （4.6g， 0.116mol） ， 待内温降至2， 缓慢滴加(Boc)2O （21.8g， 0.10mol） 的1,4-二氧六环溶液， 滴毕， 保持内温2反应23h， 缓慢升至内温3035， 继 续搅拌反应1214h， 反应完毕后， 降温至05， 滴加0.5mol/L柠檬酸水溶液至pH=3， 加 入二氯甲烷， 搅拌萃取， 静置分层， 取二氯甲烷。
31、层， 浓缩至干， 得到式III化合物32.5g， 收率 86%。 说明书 5/10 页 8 CN 104945399 B 8 0051 将式III化合物 （32.5g， 0.066mol） 溶解于无水THF300mL中， 加入叔丁醇钾 （29.6g， 0.264mol） ， 搅拌均匀， 待内温降至05， 缓慢滴加乙基化试剂溴乙烷 （28.7g， 0.264mol） 的无水THF溶液55mL， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至回流反应10 12h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液40mL进行搅拌， 加入二氯甲烷， 萃取分 层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式IV化合物31.0。
32、g， 收率86%。 0052 将式IV化合物 （31.0g， 0.057mol） 溶解于乙醇130mL中， 加入1mol/L氢氧化钠溶 液130mL， 52搅拌反应1.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加1mol/L盐酸溶液25mL， 调节pH至3， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式V化合物27.0g， 收率92%。 0053 在温度05， 将式V化合物 （27.0g， 0.052mol） 溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二 氯甲烷的混合溶剂135mL中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二 氯甲烷层， 依次用饱和碳酸氢钠溶液和0.5。
33、mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干 燥， 滤液浓缩得到式I化合物18.8g， 收率86%， 即莫西沙星杂质C。 0054 将杂质C粗品18.8g加入体积比3:1的异丙醇/水混合溶剂中200mL， 加入活性炭 1.0g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品 17.1g， 收率91%。 HPLC纯度99.8%。 0055 实施例5 0056 将莫西沙星杂质E （40g， 0.103mol） 溶解于体积比1:1的1,4-二氧六环/水的混合溶 剂380mL中， 加入氢氧化钠 （6.6g， 0.164mol） ， 待内温降至4， 缓慢滴加(B。
34、oc)2O （31.4g， 0.144mol） 的1,4-二氧六环溶液， 滴毕， 保持内温2反应3h， 缓慢升至内温32， 继续搅拌 反应1214h， 反应完毕后， 降温至05， 滴加0.5mol/L柠檬酸水溶液至pH=3， 加入二氯 甲烷， 搅拌萃取， 静置分层， 取二氯甲烷层， 浓缩至干， 得到式III化合物42.3g， 收率84%。 0057 将式III化合物 （42.3g， 0.086mol） 溶解于无水THF350mL中， 加入叔丁醇钾 （38.5g， 0.344mol） ， 搅拌均匀， 待内温降至05， 缓慢滴加乙基化试剂碘乙烷 （53.6g， 0.344mol） 的无水THF溶液。
35、70mL， 滴毕， 保持内温05反应2h， 继续升温至回流反应1012h， 反应完 毕后， 降温至05， 缓慢滴加氨水溶液50mL进行搅拌， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲 烷层， 浓缩得到式IV化合物40.3g， 收率86%。 0058 将式IV化合物 （40.3g， 0.074mol） 溶解于乙醇160mL中， 加入1mol/L氢氧化钠溶 液160mL， 51搅拌反应11.5h， 反应完毕后， 降温至05， 缓慢滴加1mol/L盐酸溶液 25mL， 调节pH至3， 加入二氯甲烷， 萃取分层， 取二氯甲烷层， 浓缩得到式V化合物34.3g， 收 率90%。 0059 在温度05， 将式。
36、V化合物 （34.3g， 0.066mol） 溶解于体积比1:1的三氟乙酸/二 氯甲烷的混合溶剂175mL中， 搅拌反应2h， 反应完毕后， 加入水和二氯甲烷， 萃取分层， 取二 氯甲烷层， 依次用饱和碳酸氢钠溶液和0.5mol/L柠檬酸水溶液洗涤， 分取二氯甲烷层， 干 燥， 滤液浓缩得到式I化合物23.7g， 收率86%， 即莫西沙星杂质C。 0060 将杂质C粗品23.7g加入体积比3:1的异丙醇/水混合溶剂中240mL， 加入活性炭 1.0g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品 21.3g， 收率90%。 HPLC纯度99.7%。 006。
37、1 实施例6 0062 莫西沙星杂质E的制备方法 说明书 6/10 页 9 CN 104945399 B 9 0063 取盐酸莫西沙星 （20g， 0.05mol） ， 用水400mL溶解， 用饱和碳酸氢钠溶液调节pH=7 8， 再加入乙酸乙酯 （300ml2） 萃取水相， 乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥1h， 过滤， 滤液浓 缩至干， 将剩余物溶于N,N-二甲基甲酰胺DMF200mL中。 0064 在氮气保护下， 将六甲基二硅氧烷 （21.1g， 0.13mol） 和铝粉 （4.3g， 0.16mol） 在温 度65加热搅拌， 缓慢加入固体碘 （33g， 0.13mol） ， 升温至150， 回。
38、流反应2h， 缓慢降至室 温， 过滤除去不溶物， 得到新鲜制备的三甲基碘硅烷的粗品油状物， 约50g。 在氮气保护下， 将所得三甲基碘硅烷油状物 （50g， 0.25mol） 加入到莫西沙星游离碱溶液中， 加入碘化钠 （4.5g， 0.03mol） ， 70回流反应11h， 薄层板监测反应进程。 反应结束后， 浓缩反应液， 加入 二氯甲烷溶解残余物， 缓慢滴加到冷却的碳酸氢钠溶液中， 5搅拌0.5h， 缓慢滴加冰醋酸 调节pH=7； 过滤， 将滤液分取二氯甲烷层， 浓缩至干， 得到莫西沙星杂质E粗品固体15.1g， 收 率85%。 将上述杂质E粗品15.1g， 加入体积比为1:1的乙醇/水混合。
39、溶剂230mL中， 加入活性炭 0.3g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质E的精制品12.5g， 精制 收率83%， 总收率71%。 HPLC纯度99.7%。 0065 实施例7对比试验例 0066 莫西沙星杂质C的精制 0067 将杂质C粗品 （10g， 0.024mol） 加入无水乙醇210mL中加热回流， 溶解清澈较困难， 无水乙醇体积使用量需是粗品重量的20倍 （体积重量比， 单位mL/g） ； 接着， 加入活性炭 0.8g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的精制品 8.1g， 收率81%。 HPLC纯度98.3。
40、%。 0068 将杂质C粗品 （10g， 0.024mol） 加入体积比1:1的无水乙醇/水混合溶剂175mL中， 再 加入活性炭0.8g， 搅拌回流， 过滤， 滤液在-10-5静止析晶78h， 得到莫西沙星杂质C的 精制品8.5g， 收率85%。 HPLC纯度97.9%。 0069 实施例8 0070 莫西沙星杂质C的结构确证数据： 0071 0072 质谱(AGILENT1100LC/MS质谱仪， 溶剂甲醇， ESI(+)， 70V) 0073 MS （ESI） ： 416.5M+H+ 0074 核磁氢谱数据 说明书 7/10 页 10 CN 104945399 B 10 0075 007。
41、6 氢谱共有16组峰， 3组活泼氢， 2组是溶剂DMSO和水峰， 除溶剂外， 比例是1:1:1:1: 1:2:5:1:1:1:1:4:3:1:2:1， 与分子组成C22H27ClFN3O4相符。 0.8245-0.8663(m， 1H)， 1.0170-1.0926(m， 2H)， 1.1791-1.2826(m， 1H)仲碳氢， 归属为H13， H13+H12， H12； 在COSY 谱中与这三组峰相关的 4.0799-4.1610 （m， 2H） 其中之一归属为H11， 1.2546-1.2826 （t， 3H） ， 伯碳氢， 归属为H22； 在COSY谱中与相关的 3.6753-3.89。
42、13 （m， 5H） 其中两个氢归属为 H21； 1.6808-1.8292(m， 4H)， 仲碳氢， 归属为H17， H18； 在COSY谱中与H17， H18相关的叔碳 氢； 2.6478-2.6550(d， 1H)归属为H19； 仲碳氢 2.8990-2.9430(t， 1H)， 3.1538-3.1790(d， 1H)， 归属为H16； 3.3142， H2O； 在COSY谱图中与与H19相关的 3.6753-3.8913(m， 5H)中叔碳 氢归属为H15， 仲碳氢为H20； 从HSQC谱图知 3.5721-3.5964(d， 1H)； 4.0799-4.1610 （m， 2H） 对。
43、应同一个仲碳， 所以归属为H14； 即 3.5721-3.5964(d， 1H)为H14， 4.0799-4.1610 （m， 2H） 为H14， H11； 3.6753-3.8913(m， 5H)为H20， H21， H15。 0077 核磁碳谱数据 说明书 8/10 页 11 CN 104945399 B 11 0078 0079 根据HSQC谱和氢谱， 碳谱归属如下： 8.58， 仲碳， C13； 9.84， 仲碳， C12； 13.83， 伯碳， C22； 17.84， 仲碳， C17； 20.49， 仲碳， C18； 34.09-34.12， 叔碳， C19； 38.66-40.33。
44、， DMSO; 40.76， 叔碳， C11； 41.47， 仲碳， C16； 51.66-51.77， 仲碳， C20； 54.03， 叔碳， C15； 54.46-54.51， 仲碳， C14； 69.72， 仲碳， C21； 106.14-106.46， 叔碳， C5； 150.50， 叔碳， C2； 175.95， 羰基季碳， 在HMBC中与H2， H5相关归属为H4； 165.74， 羰基季碳， 在HMBC中与H2相 关归属为H23； 154.24， 150.93， 季碳， 在HMBC谱中与H5相关， 归属为C6， C8； 138.81- 138.90， 季碳， 在HMBC谱中与H2。
45、， H14， H20相关， 归属为C7； 136.81-136.94， 季碳， 在HMBC谱 中与H5相关， 归属为C9； 134.87， 季碳， 在HMBC谱中与H2， H5相关归属为C10， 117.31， 季 碳， 归属为C3。 说明书 9/10 页 12 CN 104945399 B 12 0080 HPLC纯度测定方法 0081 取莫西沙星杂质C适量， 加缓冲溶液 （配置方法： 0.5g四丁基硫酸氢铵， 1.0g磷酸二 氢钾， 加水500ml溶解后， 加2ml磷酸， 用水稀释至1000ml， 摇匀,即得） 制得供试品液.采用 Agilent苯基柱 （5 m， 4.6250mm） ， 调整流动相比例为缓冲溶液-甲醇 （76： 24） ， 控制流速 1.5ml/min,检测波长为293nm， 柱温为45， 分别精密量取10 L的供试品溶液注入液相色谱 仪 （岛津LC-20A高效液相色谱仪） ， 记录色谱图和结果。 0082 应当说明的是， 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用于限制本发明的 范围， 凡在本发明的精神和原则之内所作出的任何修改、 等同的替换和改进等， 均应包含在 本发明的保护范围之内。 说明书 10/10 页 13 CN 104945399 B 13 。