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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310455400.7 (22)申请日 2013.09.30 C12N 1/14(2006.01) A61K 36/815(2006.01) A23L 33/00(2016.01) A61P 13/12(2006.01) A61K 35/20(2006.01) (73)专利权人 涂峰 地址 810003 青海省西宁市经济技术开发区 生物科技产业园经 4 路 26 号青海久实 虫草生物科技有限公司 (72)发明人 涂峰 李桂全 张玉业 CN 1158893 A,1997.09.10, CN 101423799 A,2009.05.06。
2、, 李春如等.中国被毛孢RCEF0273培养工艺的 研究 .安徽农业大学学报 .2004, 第 31 卷 ( 第 04 期 ),460-465. 武忠伟等 . 中草药提取液对冬虫夏草深层培 养的影响 .食品科学 .2005, 第 26 卷 ( 第 06 期 ),116-119. (54) 发明名称 一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法 (57) 摘要 一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 本 发明涉及一种发酵枸杞的生产方法， 主要应用于 用中国被毛孢真菌发酵枸杞 ； 其特点是包括如 下步骤 ： 步骤一 ： 将 30 60枸杞和 40 70乳按重量百分比制成培养基， 置入培养容器， 培养基占培养容。
3、器容积的 1 10 7 10， 在 115 140湿热灭菌 30 分钟， 接入占培养基重 量 0.5 1的中国被毛孢菌种 ； 在 15 22 培养315天， 培养基表面长满菌丝， 完成发酵过 程 ； 步骤二 ： 将容器内物质干燥、 粉碎、 过筛即得 中国被毛孢发酵枸杞产品 ； 本发明首次实现了中 国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 肾保健效果明显， 易于大规模工业化生产， 是种绿色安全的生产方 法。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 江炜 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书4页 CN 103520365 B 2016.04.27 CN 10。
4、3520365 B 1.一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于包括如下步骤： 步骤一： 将3060枸杞和4070乳按重量百分比制成培养基， 置入培养容器， 培养基占培养容器容积的1 107 10， 在115140湿热灭菌30分钟， 接入占培养基重量 0.51的中国被毛孢菌种， 1522培养315天， 培养基表面长满菌丝， 完成发酵过 程； 步骤二： 将容器内物质干燥、 粉碎、 过筛即得中国被毛孢发酵枸杞产品。 2.如权利要求1所述的一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于步骤一中 所述的枸杞为鲜果枸杞。 3.如权利要求1所述的一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于步。
5、骤一中 所述的枸杞为粉碎干果枸杞。 4.如权利要求1所述的一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于步骤一中 所述的枸杞为枸杞汁。 5.如权利要求1所述的一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于步骤一中 所述的乳为牛乳。 6.如权利要求1所述的一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于步骤一中 所述的乳为羊乳。 7.如权利要求1所述的一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法， 其特征在于步骤一中 所述的乳为马乳。 权利要求书 1/1 页 2 CN 103520365 B 2 一种用中国被毛孢发酵枸杞的生产方法 技术领域 0001 本发明涉及一种发酵枸杞的生产方法， 特别是涉及一种。
6、用中国被毛孢发酵枸杞的 生产方法。 背景技术 0002 如中国专利CN101423799公开的中国被毛孢菌粉生产方法所述： 需将谷类、 豆类、 水按重量百分比配比后置入培养容器， 接入中国被毛孢菌种， 培养至培养基表面长满菌丝， 后在培养容器中补加液体培养基， 培养后得中国被毛孢菌粉。 其缺点是培养基复杂， 操作步 骤繁多， 不易于大规模生产， 菌粉中肾保健作用有效成分较低。 中国专利CN102827728A公开 的一种枸杞酒酿造的方法将枸杞干果破碎， 向破碎后的枸杞干果中加入水， 利用复合酶酶 解后， 在酶解液中加入酵母进行发酵， 得枸杞酒的一种方法。 其方法只是一种酒的生产方 法， 利用酵。
7、母菌发酵枸杞产生的次级代谢产物。 发明内容 0003 本发明的目的是克服现有技术的不足， 提供一种用中国被毛孢菌发酵枸杞的方 法。 0004 为解决上述问题， 本发明的技术方案为， 其特点是包括以下步骤： 0005 步骤一： 将3060枸杞和4070乳按重量百分比制成培养基， 置入培养 容器， 培养基占培养容器容积的1 107 10， 在115140湿热灭菌30分钟； 置入超净工作 台， 至室温， 接入占培养基重量0.51的中国被毛孢菌种； 在1522培养315天， 培 养基表面长满菌丝， 完成发酵过程； 0006 步骤二： 将容器内物质干燥、 粉碎、 过筛即得中国被毛孢发酵枸杞产品。 000。
8、7 本发明的另一特点是步骤一中所述的枸杞为鲜果枸杞； 0008 本发明的另一特点是步骤一中所述的枸杞为粉碎干果枸杞； 0009 本发明的另一特点是步骤一中所述的枸杞为枸杞汁； 0010 本发明的另一特点是步骤一中所述的乳为牛乳； 0011 本发明的另一特点是步骤一中所述的乳为羊乳； 0012 本发明的另一特点是步骤一中所述的乳为马乳。 0013 本发明与现有技术相比具有以下优点： 0014 1、 本发明生产方法所得发酵产品具有显著的肾保健效果。 经实验证明具有显著的 益肾生物学活性， 可明显降低大鼠血清肌酐和尿素氮的水平， 明显提高肾组织SOD、 GST的活 性， 降低MDA水平， 明显改善庆。
9、大霉素引起的肾损伤病理改变。 0015 益肾的生物学活性实验方法数据如下： 0016 采用健康纯系雄性Wistar大鼠60只， 体重180220g。 分为正常对照组、 模型对照 组、 1号(普通中国被毛孢)组， 2号(中国被毛孢发酵枸杞产品)低、 高剂量组， 每组12只。 每只 灌胃给予相应剂量的中国被毛孢1、 2号， 给药第三天开始， 每天给药后6小时， 腹腔注射庆大 说明书 1/4 页 3 CN 103520365 B 3 霉素注射液100mg kg d， 连续7天； 模型对照组腹腔注射庆大霉素注射液100mg kg d， 正常 对照组腹腔注射与庆大霉素等体积的生理盐水， 连续7天。 00。
10、17 实验期间， 观察小鼠造模前后进食及饮水、 大便、 活动、 皮毛等状态变化。 0018 血清生化检测： 分别在用药前及第8、 10天采血， 测定血清肌酐， 尿素氮。 尾静脉取 血测定血清肌酐(苦味酸法)， 尿素氮(酶法)。 0019 肾匀浆的制备及生化指标测定： 第10天采血后， 剖腹迅速取出肾脏， 置-30冰箱 速冻， 将速冻后的肾脏取出， 冰浴下切下肾皮质组织0.5g， 加入4.5mLPBS液(pH7.4， 0.1mM， 加入前置4冰箱预冷)， 置组织匀浆器中反复研磨， 制成10的肾皮质组织匀浆， 按试剂盒 方法测定SOD活性及MDA含量。 0020 肾脏病理检查： 采血后每组取大鼠4。
11、只处死， 取222mm肾皮质组织块于10福 尔马林中固定， 石蜡包埋， 切片， HE染色， 光镜下观察肾脏结构的改变。 实验结果见(表一、 表 二) 0021 表一、 对庆大霉素致肾损伤大鼠血清肌酐和尿素氮的影响 0022 0023 注： 与正常对照组比较， *P0.01； 与模型对照组比较， P0.05， P0.01 0024 表二、 对庆大霉素致肾损伤大鼠肾组织中SOD、 GST和MDA的影响 0025 0026 注： 与正常对照组比较， *P0.01； 与模型对照组比较， P0.05， P0.01。 0027 结论 0028 1号普通中国被毛孢和2号中国被毛孢发酵枸杞产品均明显降低大鼠血。
12、清肌酐和 尿素氮的水平， 明显提高肾组织SOD、 GST的活性， 降低MDA水平， 明显改善庆大霉素引起的肾 损伤病理改变。 0029 普通中国被毛孢菌和中国被毛孢发酵枸杞产品对庆大霉素引起的大鼠急性肾损 伤具有保护作用， 且中国被毛孢发酵枸杞产品优于普通中国被毛孢菌， 所以肾保健效果明 显。 0030 2、 本发明首次实现了中国被毛孢发酵枸杞的生产方法。 说明书 2/4 页 4 CN 103520365 B 4 0031 3、 本发明所需原材料简单， 容易放大， 因此易于大规模工业化生产。 0032 4、 本发明原材料仅利用枸杞和乳， 不添加任何工业化工原料,从而是一种绿色安 全的生产方法。。
13、 0033 、 本发明利用枸杞中的碳水化合物， 更有利于中国被毛孢菌的生长。 具体实施方式 0034 实施例1 0035 步骤一： 将干果枸杞50g破碎， 过10目筛后与50g牛乳混合， 置入培养容器， 培养基 占培养容器体积的5 10， 在125下湿热灭菌30分钟， 置入超净工作台， 至室温， 接入0.5g中 国被毛孢菌种； 在22条件下培养4天， 即可在培养基表面长满白色菌丝； 0036 步骤二： 取出培养物置入干燥箱烘干、 粉碎， 过120目筛即得28g中国被毛孢发酵枸 杞产品。 0037 实施例2 0038 步骤一： 将鲜枸杞60g与40g羊乳混合， 置入培养容器， 培养基占培养容器体。
14、积的6 10， 在125条件下湿热灭菌30分钟； 置入超净工作台， 至室温， 接入0.6g中国被毛孢菌种在 15条件下培养7天， 培养基表面长满菌丝； 0039 步骤二： 取出培养物置入干燥箱烘干、 粉碎， 过120目筛， 即得24g中国被毛孢发酵 枸杞产品。 0040 实施例3 0041 步骤一： 将30g枸杞汁与70g牛乳混合， 置入培养容器， 培养基占培养容器体积的7 10， 在130下湿热灭菌30分钟； 置入超净工作台， 至室温， 接入0.7g中国被毛孢菌种； 在18 条件下培养15天， 即可在培养基表面长满白色菌丝： 0042 步骤二： 取出培养物置入干燥箱烘干、 粉碎， 过120目。
15、筛， 即25g中国被毛孢发酵枸 杞产品。 0043 实施例4 0044 步骤一： 将干果枸杞40g破碎， 过10目筛后与60g马乳混合， 置入培养容器， 培养基 占培养容器体积的5 10， 在125下湿热灭菌30分钟； 置入超净工作台， 至室温， 接入0.8g中 国被毛孢菌种， 在17条件下培养10天， 培养基表面长满菌丝； 0045 步骤二： 取出培养物置入干燥箱烘干、 粉碎， 过120目筛， 即得34g中国被毛孢发酵 枸杞产品。 0046 实施例5 0047 步骤一： 将55g鲜果枸杞与45g牛乳混合， 置入培养容器， 培养基占培养容器体积的 4 10， 在121下湿热灭菌30分钟； 置入。
16、超净工作台， 至室温， 接入0.9g中国被毛孢菌种， 在 20条件下培养5天， 即可在培养基表面长满白色菌丝； 0048 步骤二： 取出培养物置入干燥箱烘干、 粉碎， 过120目筛， 即得23g中国被毛孢发酵 枸杞产品。 0049 实施例6 0050 步骤一： 将干果枸杞48g破碎， 过10目筛后与52g马乳混合， 置入培养容器， 培养基 占培养容器体积的3 10， 在125下湿热灭菌30分钟； 置入超净工作台， 至室温， 接入1g中国 说明书 3/4 页 5 CN 103520365 B 5 被毛孢菌种在22条件下培养3天， 培养基表面长满菌丝； 0051 步骤二： 取出培养物置入干燥箱烘干、 粉碎， 过120目筛， 即得27g中国被毛孢发酵 枸杞产品。 说明书 4/4 页 6 CN 103520365 B 6 。