从红豆杉植物细胞培养液絮凝物中分离纯化紫杉醇的方法.pdf

下面结合实施例，对本发明作进一步的描述。

实施例使用的分析纯试剂有：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲
烷、石油醚(广州化学试剂二厂生产)。色谱纯试剂有：甲醇、乙腈(进口分装)、
丙酮(天津四友生物医学技术有限公司生产)。高压液相色谱仪由美国Waters公司
生产。柱层析硅胶(100～200目)、薄层层析硅胶H(10～40μm)、薄层层析硅胶
HF254(10～40μm)(青岛海洋化工集团公司生产)。

实施例一

取中国红豆杉细胞培养液的絮凝物267g(未干燥)，其中含紫杉醇210mg(HPLC
测定)，(细胞培养液絮凝物的获得方法参考中国专利“从红豆杉植物细胞培养液中
初分离紫杉醇的方法”，申请号00122083.7)，用95％食用乙醇室温浸提4次，每次
20小时，浸提过程中定时搅拌，乙醇添加量以浸没絮凝物并高出絮凝物3～4厘米
为宜。每次浸提物用布氏漏斗减压抽滤，各次滤液合并，在63℃水浴，-0.08Mpa
的真空度用旋转蒸发器回收乙醇至流浸膏，趁热拌50g柱层析硅胶(100～200目)，
50℃下真空干燥、磨碎、过100目筛，在100cm×3cm的玻璃层析柱中用正己烷湿
法装入柱层析硅胶，高度60cm，用正己烷平衡后，在硅胶顶部均匀装填拌入样品的
硅胶，用含丙酮5％、15％、20％、25％、30％的正己烷梯度洗脱，在20％～30％丙酮的正
己烷梯度洗脱部分，紫杉醇被洗脱下来，回收溶剂后，用HF254硅胶薄板层析检查，
标样对照，展开剂为正己烷∶乙酸乙酯体积比为2∶3。含紫杉醇的洗脱部分合并，
回收溶剂至干，共得固体物268.7mg，定容后，用HPLC测紫杉醇含量为195.2mg，
紫杉醇纯度72.6％，回收率为93％。含紫杉醇固体物用丙酮溶解后，拌入5g薄层层
析硅胶H(10～40μm)，45℃下真空干燥、磨碎。在60cm×3cm的低压玻璃层析柱
中用正己烷湿法均匀装填薄层层析硅胶H(10～40μm)30cm，待正己烷平衡后，将
拌有样品的薄层硅胶均匀装入硅胶顶部，用3.5W小型气泵加压，用正己烷洗脱后，
再先后用含3％丙酮、4％丙酮、5％丙酮的二氯甲烷梯度洗脱，回收溶剂，用硅胶HF254
薄板层析检查，标样对照，展开剂同上。合并含紫杉醇的部分，回收溶剂至干，重
206mg，HPLC测紫杉醇含量为185.5mg，紫杉醇纯度90％，回收率95％，将回收溶剂
后的固体紫杉醇在乙酸乙酯和正己烷混合溶剂重结晶6次，乙酸乙酯与正己烷体积
比为(1.6∶1)，HPLC检测紫杉醇，重结晶紫杉醇纯度为97.5％。

实施例二

取含278mg紫杉醇的中国红豆杉细胞培养液絮凝物370g，絮凝物在通风厨中用
甲醇室温浸提5次，每次浸提24小时，定时搅拌，浸提时，甲醇的加入量以浸没絮
凝物且高出絮凝物3～4厘米为宜。浸提完成后，用布氏漏斗减压抽滤，各次滤液合
并，在-0.06Mpa的真空度下，用旋转蒸发器回收甲醇，水浴温度53℃，浓缩物用甲
醇溶解，在搅拌下加入等量水，搅拌均匀后，先用30℃～60℃石油醚萃取4次，去
脂溶性杂质，接着用二氯甲烷萃取4次，回收二氯甲烷至少量，加入柱层析硅胶15g
(100～200目)，搅拌均匀，在50℃真空下烘干、磨碎，过100目筛，进行硅胶柱
层析，梯度洗脱过程与实施例一相同。含紫杉醇的柱层析产物317.2mg，用HPLC检
测，含紫杉醇247.4mg，回收率89％，紫杉醇纯度78％。将经柱层析后的紫杉醇粗
品进一步用薄层硅胶H(10-40μm)低压柱层析分离，含紫杉醇的低压柱层析产物
回收溶剂至干重245mg，用HPLC检测，含紫杉醇225mg，回收率90％，紫杉醇纯度
92％，用丙酮和正己烷混合溶剂重结晶8次，丙酮与正己烷体积比为1∶1.7，重结
晶的紫杉醇用HPLC检测，紫杉醇纯度98.1％。