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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710374204.5 (22)申请日 2017.05.24 (71)申请人 贵州黔芝灵绿色农业科技发展有限 公司 地址 550040 贵州省黔南布依族苗族自治 州瓮安县雍阳办事处文峰北路黔中修 理厂内 (72)发明人 龙泗成 (74)专利代理机构 北京联创佳为专利事务所 (普通合伙) 11362 代理人 张梅 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种灵芝母种的制作方法 (57)摘要 本发明。
2、公开了一种灵芝母种的制作方法， 取 灵芝组织片， 接种到灭菌后的试管培养基上， 直 至菌丝长满斜面， 即得。 用本发明方法的到的母 种， 可使后期灵芝菌丝生长状态好， 得到的菌丝 洁白度、 紧密度好。 权利要求书1页 说明书5页 CN 107164236 A 2017.09.15 CN 107164236 A 1.一种灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 取灵芝组织片， 接种到灭菌后的试管培养基 上， 直至菌丝长满斜面， 即得。 2.如权利要求1所述的灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 取野生灵芝的子实体， 用水 冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连。
3、接中央处割 成1-3mm的菌肉组织片， 置于无菌培养皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在 2628条件下培养25d-35d， 至菌丝长满斜面， 即得。 3.如权利要求2所述的灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 所述培养基按重量份计算， 主要由葡萄糖10-30份、 酵母膏1-5份、 土豆泥150-250份、 蛋白胨1-5份、 琼脂15-35份、 维生 素E1-10份、 维生素B1 1-10份、 山楂25-35份、 麦芽1-10份、 丹参5-15份、 黄芪20-30份、 豆粕 45-55份、 枇杷枝20-40份、 玉米芯20-40份、 酒糟10-20份、 石膏10-30份、 茶渣。
4、25-45份、 桑树 条35-45份、 食盐5-15份和水900-1100份制成。 4.如权利要求3所述的灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 所述培养基按重量份计算， 主要由葡萄糖15-25份、 酵母膏1.5-2.5份、 土豆泥180-220份、 蛋白胨1.5-2.5份、 琼脂20-24 份、 维生素E 3-7份、 维生素B1 3-7份、 山楂28-32份、 麦芽2-8份、 丹参8-12份、 黄芪22-28份、 豆粕48-52份、 枇杷枝25-35份、 玉米芯25-35份、 酒糟12-18份、 石膏15-25份、 茶渣30-40份、 桑树条38-42份、 食盐8-12份和水950-1050份制。
5、成。 5.如权利要求4所述的灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 所述培养基按重量份计算， 主要由葡萄糖20份、 酵母膏2份、 土豆泥200份、 蛋白胨1-2份、 琼脂22份、 维生素E 5份、 维生 素B1 5份、 山楂30份、 麦芽5份、 丹参10份、 黄芪25份、 豆粕50份、 枇杷枝30份、 玉米芯30份、 酒 糟15份、 石膏20份、 茶渣35份、 桑树条40份、 食盐10份和水1000份制成。 6.如权利要求4或5所述的灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 所述培养基这样制作： 土 豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量40-60%的水煮沸。
6、20- 30分钟， 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次加入葡萄糖、 酵母膏、 土 豆泥、 蛋白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续加热30-50min， 加入维生素E和维生素B1， 搅 拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌20-30分钟后， 冷却至50-60度， 倾斜5- 15度放置， 30-35下烘干24-48h后， 取出， 保存， 即得。 7.如权利要求6所述的灵芝母种的制作方法， 其特征在于： 所述培养基这样制作： 土豆 泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量50%的水煮沸25分钟，。
7、 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥、 蛋 白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续加热40min， 加入维生素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分 装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌25分钟后， 冷却至50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35 下烘干35h后， 取出， 保存， 即得。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107164236 A 2 一种灵芝母种的制作方法 技术领域 0001 本发明涉及一种灵芝母种的制作方法， 特别是一种灵芝多糖含量高的灵芝母种制 作方法。 背景技术 0002 灵芝为多孔菌科真菌。
8、赤芝或紫芝的干燥子实体。 灵芝是一种珍贵的药用真菌， 属 于担子菌纲多孔菌科灵芝属， 在我国有两千多年的药用史。 灵芝首载于 神农本草经 ， 历代 医家都认为灵芝能治疗多种疾病， 是滋补强壮扶正固本的珍贵药物。 灵芝多糖是灵芝中最 有效的成分之一， 存在于灵芝的子实体、 孢子粉和菌丝体中， 具有抑制肿瘤、 增强机体对自 由基清除的能力， 故能减少自由基对机体的损伤、 有延缓衰老之功效， 还可以提高免疫力、 抗炎症、 降血脂、 降血糖等作用。 0003 随着灵芝的保健功效被人们广泛的认识和接受， 野生灵芝已远远不能满足人们的 需求。 培养基是灵芝赖以生存的条件， 不同的培养原料和配方可对灵芝的菌。
9、丝生长、 产量和 活性成分等产生重要的影响。 其中， 灵芝母种用培养基对后期的成品灵芝的质量影响很大。 现有技术中制作灵芝母种所用的培养基大多数只含有葡萄糖、 土豆、 蛋白胨等。 这样制成的 培养基营养不充足， 使得后期菌丝生长状态不好， 得到的菌丝洁白度、 紧密度和长势不好。 发明内容 0004 本发明的目的， 是提供一种灵芝母种的制作方法。 用本发明方法的到的母种， 可使 后期灵芝菌丝生长状态好， 得到的菌丝洁白度、 紧密度好。 0005 本发明是这样实现的。 0006 一种灵芝母种的制作方法， 取灵芝组织片， 接种到灭菌后的试管培养基上， 直至菌 丝长满斜面， 即得。 0007 前述的灵。
10、芝母种的制作方法中， 取野生灵芝的子实体， 用水冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织 片， 置于无菌培养皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在2628条件下 培养25d-35d， 至菌丝长满斜面， 即得。 0008 前述的灵芝母种的制作方法中， 所述培养基按重量份计算， 主要由葡萄糖10-30 份、 酵母膏1-5份、 土豆泥150-250份、 蛋白胨1-5份、 琼脂15-35份、 维生素E1-10份、 维生素B1 1-10份、 山楂25-35份、 麦芽1-10份、 丹参5-15份、 黄芪20-30份、。
11、 豆粕45-55份、 枇杷枝20-40 份、 玉米芯20-40份、 酒糟10-20份、 石膏10-30份、 茶渣25-45份、 桑树条35-45份、 食盐5-15份 和水900-1100份制成。 0009 前述的灵芝母种的制作方法中， 所述培养基按重量份计算， 主要由葡萄糖15-25 份、 酵母膏1.5-2.5份、 土豆泥180-220份、 蛋白胨1.5-2.5份、 琼脂20-24份、 维生素E 3-7份、 维生素B1 3-7份、 山楂28-32份、 麦芽2-8份、 丹参8-12份、 黄芪22-28份、 豆粕48-52份、 枇杷 枝25-35份、 玉米芯25-35份、 酒糟12-18份、 石膏。
12、15-25份、 茶渣30-40份、 桑树条38-42份、 食 说明书 1/5 页 3 CN 107164236 A 3 盐8-12份和水950-1050份制成。 0010 前述的灵芝母种的制作方法中， 所述培养基按重量份计算， 主要由葡萄糖20份、 酵 母膏2份、 土豆泥200份、 蛋白胨1-2份、 琼脂22份、 维生素E5份、 维生素B15份、 山楂30份、 麦芽 5份、 丹参10份、 黄芪25份、 豆粕50份、 枇杷枝30份、 玉米芯30份、 酒糟15份、 石膏20份、 茶渣35 份、 桑树条40份、 食盐10份和水1000份制成。 0011 前述的灵芝母种的制作方法中， 所述培养基这样制。
13、作： 土豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量40-60的水煮沸20-30分钟， 滤渣弃去， 滤 液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥、 蛋白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续加热30-50min， 加入维生素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶 塞密封， 包好， 120-122度下灭菌20-30分钟后， 冷却至50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下 烘干24-48h后， 取出， 保存， 即得。 0012 前述的灵芝母种的制作方法中， 所述培养基这样制作： 土豆泥、 山楂、 丹参。
14、、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量50的水煮沸25分钟， 滤渣弃去， 滤液加入 剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥、 蛋白胨、 琼脂， 边加边 搅拌， 加完后， 继续加热40min， 加入维生素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包 好， 120-122度下灭菌25分钟后， 冷却至50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下烘干35h后， 取 出， 保存， 即得。 0013 申请人对灵芝母种的制备进行了大量的研究， 部分如下： 0014 实验例.菌丝生长情况考察 0015 1材料 0016 1.1灵芝子。
15、实体： 同一批灵芝子实体， 由贵州黔芝灵绿色农业科技发展有限公司提 供。 0017 1.2培养基1： 按实施例1进行制作。 0018 1.3培养基2： 0019 原料： 葡萄糖20kg、 酵母膏4kg、 土豆200kg、 蛋白胨2.0kg、 琼脂20kg和细胞分裂素 0.4kg。 0020 制作工艺： 0021 (1)土豆切片， 加6倍量水煮沸25分钟， 过滤， 滤渣加6倍量水继续， 加热至50-60， 得A品； 0022 (2)A品中依次加入葡萄糖、 蛋白胨、 酵母膏、 细胞分裂素和琼脂， 边加边搅拌， 搅匀 后， 得B品； 0023 (3)B品分装至180ml试管的1/5， 硅胶塞密封， 。
16、7支用报纸包好， 120-122下灭菌 25min后， 冷却至50-60， 倾斜10度放置于20-35的烘箱中， 放置36小时后， 取出， 即得。 0024 2试验方法和结果 0025 将同一批灵芝子实体平均分成2组， 即处理组1和处理组2。 0026 处理组1： 按实施例1的方法制备灵芝母种， 将得到的灵芝母种分别转接入各复壮 培养基试管中， 塞入试管塞， 放入25-28的恒温箱中培养5-7天， 剔除带杂的试管； 待种块 萌发、 进入菌丝交集后， 继续置于25-28的恒温箱中进行培养5-7天， 即得复壮后的菌丝。 过程中观察菌丝的生长情况， 并作记录。 说明书 2/5 页 4 CN 1071。
17、64236 A 4 0027 处理2： 处理方法同实施例1， 但制备灵芝母种时， 采用的培养基为培养基2。 0028 记录结果见表1和表2。 0029 表1不同复壮培养基上菌丝爬壁情况 0030 0031 表2生长形状观察结果 0032 组别菌丝洁白度紧密度菌丝长势 处理组1洁白紧密很旺盛 处理组2暗辉紧密旺盛 0033 由表可知， 本发明方法得到的灵芝母种， 可使得后期的灵芝菌丝长势好。 0034 与现有技术相比， 用本发明方法的到的母种， 可使后期灵芝菌丝生长状态好， 得到 的菌丝洁白度、 紧密度好。 具体实施方式 0035 实施例1。 0036 培养基原料： 葡萄糖20kg、 酵母膏2k。
18、g、 土豆泥200kg、 蛋白胨1-2kg、 琼脂22kg、 维生 素E 5kg、 维生素B15kg、 山楂30kg、 麦芽5kg、 丹参10kg、 黄芪25kg、 豆粕50kg、 枇杷枝30kg、 玉 米芯30kg、 酒糟15kg、 石膏20kg、 茶渣35kg、 桑树条40kg、 食盐10kg和水1000kg。 0037 培养基制作方法： 土豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量50的水煮沸25分钟， 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次 加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥、 蛋白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续。
19、加热40min， 加入维生 素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌25分钟后， 冷却至 50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下烘干35h后， 取出， 保存， 即得。 0038 母种制作方法： 取野生灵芝的子实体， 用水冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸 干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片， 置于无菌培养 皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在2628条件下培养30d， 至菌丝长 满斜面， 即得。 0039 实施例2. 0040 培养基原料： 葡萄糖25kg、 酵母膏2.5。
20、kg、 土豆泥220kg、 蛋白胨2.5kg、 琼脂24kg、 维 生素E 7kg、 维生素B17kg、 山楂32kg、 麦芽8kg、 丹参12kg、 黄芪28kg、 豆粕52kg、 枇杷枝35kg、 玉米芯35kg、 酒糟18kg、 石膏25kg、 茶渣40kg、 桑树条42kg、 食盐12kg和水1050kg。 0041 培养基制作方法： 土豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量60的水煮沸30分钟， 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次 加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥、 蛋白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续。
21、加热50min， 加入维生 素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌30分钟后， 冷却至 50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下烘干48h后， 取出， 保存， 即得。 说明书 3/5 页 5 CN 107164236 A 5 0042 母种制作方法： 取野生灵芝的子实体， 用水冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸 干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片， 置于无菌培养 皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在2628条件下培养35d， 至菌丝长 满斜面， 即得。 0043 实施例3。
22、. 0044 培养基原料： 葡萄糖15kg、 酵母膏1.5kg、 土豆泥180kg、 蛋白胨1.5kg、 琼脂20kg、 维 生素E 3kg、 维生素B13kg、 山楂28kg、 麦芽2kg、 丹参8kg、 黄芪22kg、 豆粕48kg、 枇杷枝25kg、 玉米芯25kg、 酒糟12kg、 石膏15kg、 茶渣30kg、 桑树条38kg、 食盐8kg和水950kg。 0045 培养基制作方法： 土豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量40的水煮沸20分钟， 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次 加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆。
23、泥、 蛋白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续加热30min， 加入维生 素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌20分钟后， 冷却至 50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下烘干24h后， 取出， 保存， 即得。 0046 母种制作方法： 取野生灵芝的子实体， 用水冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸 干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片， 置于无菌培养 皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在2628条件下培养25d， 至菌丝长 满斜面， 即得。 0047 实施例4. 0。
24、048 培养基原料： 葡萄糖30kg、 酵母膏5kg、 土豆泥250kg、 蛋白胨5kg、 琼脂35kg、 维生素 E10kg、 维生素B110kg、 山楂35kg、 麦芽10kg、 丹参15kg、 黄芪30kg、 豆粕55kg、 枇杷枝40kg、 玉 米芯40kg、 酒糟20kg、 石膏30kg、 茶渣45kg、 桑树条45kg、 食盐15kg和水1100kg。 0049 培养基制作方法： 土豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量55的水煮沸28分钟， 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次 加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥。
25、、 蛋白胨、 琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续加热45min， 加入维生 素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌28分钟后， 冷却至 50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下烘干40h后， 取出， 保存， 即得。 0050 母种制作方法： 取野生灵芝的子实体， 用水冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸 干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片， 置于无菌培养 皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在2628条件下培养25d， 至菌丝长 满斜面， 即得。 0051 实施例5. 00。
26、52 培养基原料： 葡萄糖10kg、 酵母膏1kg、 土豆泥150kg、 蛋白胨1kg、 琼脂15kg、 维生素 E1kg、 维生素B11kg、 山楂25kg、 麦芽1kg、 丹参5kg、 黄芪20kg、 豆粕45kg、 枇杷枝20kg、 玉米芯 20kg、 酒糟10kg、 石膏10kg、 茶渣25kg、 桑树条35kg、 食盐5kg和水900kg。 0053 培养基制作方法： 土豆泥、 山楂、 丹参、 黄芪、 枇杷枝、 桑树条、 茶渣和玉米芯， 切碎， 加配方量43的水煮沸24分钟， 滤渣弃去， 滤液加入剩余量水,继续加热至50-60度后， 依次 加入葡萄糖、 酵母膏、 土豆泥、 蛋白胨、 。
27、琼脂， 边加边搅拌， 加完后， 继续加热37min， 加入维生 素E和维生素B1， 搅拌均匀后， 分装， 硅胶塞密封， 包好， 120-122度下灭菌23分钟后， 冷却至 50-60度， 倾斜5-15度放置， 30-35下烘干30h后， 取出， 保存， 即得。 说明书 4/5 页 6 CN 107164236 A 6 0054 母种制作方法： 取野生灵芝的子实体， 用水冲洗干净， 切去菌柄， 再消毒、 洗净后吸 干水分， 菌盖切成两半， 在菌盖和菌柄连接中央处割成1-3mm的菌肉组织片， 置于无菌培养 皿内， 再将组织片接种于试管斜面培养基上， 培养， 在2628条件下培养25d， 至菌丝长 满斜面， 即得。 说明书 5/5 页 7 CN 107164236 A 7 。