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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710358519.0 (22)申请日 2017.05.19 (71)申请人 太仓新亚逊生物科技有限公司 地址 215400 江苏省苏州市太仓市开发区 北京东路88号中B幢 (72)发明人 陈华成 (74)专利代理机构 北京华仲龙腾专利代理事务 所(普通合伙) 11548 代理人 李静 (51)Int.Cl. C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称 一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的 方法 (57)摘要 本发明涉及一种通过生物技术扩增脱氧胸 苷三磷酸的方。
2、法， 其包括： 脱氧胸苷三磷酸模版 DNA、 限制性切刻酶、 至少一种具有链置换能力的 DNA聚合酶、 至少一种具有链置换能力的DNA聚合 酶、 至少两种与靶核酸序列3 末端互补的寡核苷 酸引物、 聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂表面活 性剂。 本发明基本上在恒温的条件下扩增靶核酸 序列， 以外通过添加限制性切刻酶而不需要额外 添加任何另外的试剂， 而且时间短， 工艺结构简 单， 降低了生产成本。 权利要求书1页 说明书2页 CN 107164363 A 2017.09.15 CN 107164363 A 1.一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其特征在于： 其包括： 脱氧胸苷三磷 酸模版。
3、DNA、 限制性切刻酶、 DNA聚合酶、 脱氧核苷三磷酸、 与靶核酸序列3 末端互补的寡核 苷酸引物、 表面活性剂， 所述方法包括以下步骤： a、 在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所选限制位点切割 DNA的限制性切刻酶， 该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3 末端； b、 加入寡核苷酸引物， 该启动子引物5 区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序 列， 且其3 区域与步骤a形成的DNA特定的3 末端互补； c、 向样品中加入DNA聚合酶， 脱氧核苷三磷酸， 表面活性剂； d、 控制温度， 将如此形成的混合物保持足够的时间， 以进行扩增。 2.根据权利。
4、要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其特征在于： 至 少两种与靶核酸序列3 末端互补的寡核苷酸引物。 3.根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其特征在于： 至 少一种具有链置换能力的DNA聚合酶。 4.根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其特征在于： 至 少一种脱氧核苷三磷酸。 5.根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其特征在于： 所 述表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂。 6.根据权利要求1所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其特征在于： 所 述培养液的温度控制在4050内。 7。
5、.根据权利要求16任意一项所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其 特征在于： 所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为4560分钟。 8.根据权利要求16任意一项所述一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其 特征在于： 所述溶液的PH值控件在7.08.0。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107164363 A 2 一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种生物技术， 尤其涉及一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方 法。 背景技术 0002 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction， PCR)由美国Centus公司。
6、的Kary Mullis发明， 于1985年由Saiki等在Science杂志上首次报道， 是近年来开发的体外快速扩 增DNA的技术。 通过PCR可以简便、 快速地从微量生物材料中以体外扩增的方式获得大量特 定的核酸， 并且有很高的灵敏度和特异性， 可在动物检疫中用于微量样品的检测。 0003 DNA分子是由四种脱氧核糖核苷酸分子结合成的两条互补多聚核苷酸链。 合成这 些多聚核苷酸的前体是四种脱氧核苷三磷酸， 脱氧胸苷三磷酸作为四种原料之一参与核酸 分子的体内或体外扩增。 附着生物技术工业的发展特别是DNA生物合成和聚合酶链式反应 的推广， 市场上对DNA扩增所需要的脱氧核苷三磷酸的需求量将会。
7、明显地持续升高。 另外， 由于脱氧胸苷三磷酸在抗病毒抗肿瘤， 治疗心血管疾病等方面应用的推广， 同样也会对本 发明所阐述的产品， 脱氧胸苷三磷酸的需求量的提高起到促进作用。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 采用的 技术方案是： 0005 一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其包括： 脱氧胸苷三磷酸模版 DNA、 限制性切刻酶、 DNA聚合酶、 脱氧核苷三磷酸、 与靶核酸序列3 末端互补的寡核苷酸引 物、 表面活性剂， 所述方法包括以下步骤： 0006 a、 在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所选限制位点 切割。
8、DNA的限制性切刻酶， 该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3 末端； 0007 b、 加入寡核苷酸引物， 该启动子引物5 区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动 子序列， 且其3 区域与步骤a形成的DNA特定的3 末端互补； 0008 c、 向样品中加入DNA聚合酶， 脱氧核苷三磷酸， 表面活性剂； 0009 d、 控制温度， 将如此形成的混合物保持足够的时间， 以进行扩增。 0010 至少两种与靶核酸序列3 末端互补的寡核苷酸引物。 0011 至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶。 0012 至少一种脱氧核苷三磷酸。 0013 所述表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂。 0。
9、014 所述培养液的温度控制在4050内。 0015 所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为4560分钟。 0016 所述溶液的PH值控件在7.08.0。 0017 本发明的有益效果是： 本发明基本上在恒温的条件下扩增靶核酸序列， 以外通过 说明书 1/2 页 3 CN 107164363 A 3 添加限制性切刻酶而不需要额外添加任何另外的试剂， 而且时间短， 工艺结构简单， 降低了 生产成本。 具体实施方式 0018 一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法， 其包括： 脱氧胸苷三磷酸模版 DNA、 限制性切刻酶、 至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、 至少一种具有链置换能力的 DNA。
10、聚合酶、 至少两种与靶核酸序列3 末端互补的寡核苷酸引物、 聚氧乙烯失水山梨醇单脂 肪酸脂表面活性剂， 所述方法包括以下步骤： a、 在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加 入一种或多种能够在所选限制位点切割DNA的限制性切刻酶， 该限制性切刻酶在该DNA的一 条链上形成特定的3 末端； b、 加入寡核苷酸引物， 该启动子引物5 区域包含被DNA的RNA聚 合酶所识别的启动子序列， 且其3 区域与步骤a形成的DNA特定的3 末端互补； c、 向样品中 加入DNA聚合酶， 脱氧核苷三磷酸， 表面活性剂； d、 控制温度， 将如此形成的混合物保持足够 的时间， 以进行扩增。 所述培养液的温度控制在4050内， 所述溶液在基本恒温的条件 下进行扩增的时间为4560分钟， 所述溶液的PH值控件在7.08.0。 说明书 2/2 页 4 CN 107164363 A 4 。