本发明涉及：包含抗原性片段的多肽，所述抗原性片段具有来自油体相关蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列，其中所述多肽包含或者不包含所述油体相关蛋白的截短的疏水结构域，并且其中所述油体相关蛋白选自包括油质蛋白(Oleosin)、油体钙蛋白(Caleosin)和油体固醇蛋白(Steroleosin)的组；包含所述多肽的药物组合物或疫苗；包含所述多肽和与之相结合的抗体的复合物；包含所述多肽的医学或诊断装置；编码所述多肽的核酸或者包含所述核酸的细胞；包含所述多肽的测试试剂盒；以及用于检测与所述多肽相结合的抗体的方法。
“8大”过敏原来源不仅包括乳、蛋、大豆、小麦、鱼类、贝类和花生，而且还包括种子和果仁，这“8大”过敏原来源对直至90％的针对食物的过敏反应负责。以200兆吨的年进口量，榛子和胡桃是德国最重要的坚果种类(Hanson,R.和A.Medina,2012,Tree nuts annual 2012,USDA Foreign Agriculture Service)。
过敏反应是免疫系统针对来自环境的非致病性物质的超敏性，由此导致形成临床疾病症状(von Pirquet,C.1906,“Allergie”[Allergy],Münchener medizinische Wochenschrift[Munich weekly medical journal]53,第1457-8页)。特别是在高度发展的工业国家中，以四分之一的人口，越来越多的人针对一种或多种过敏原被致敏(Galli,S.J.,M.Tsai和A.M.Piliponsky 2008,“The development of allergic inflammation”,Nature 454.7203,第445-54页)。所出现的症状从荨麻疹到呕吐和腹泻，直至过敏性休克。
对于明确诊断坚果过敏，开发出组分特异性体外过敏测试具有很大的益处。通过使用独个过敏原，可以鉴定初始致敏和交叉反应性，由此建立致敏模式。通过这样的模式，可以实现经改善的风险评估， 其导致经优化的治疗成套方案(Treudler,R.2012,“In-vitro-Allergiediagnostik aktuell”[Current in vitro allergy diagnostics],Journal of the German Society of Dermatology 2.10,第89-100页)。
榛子(欧洲榛(Corylus avellana))属于桦木科(Betulaceae)。Zuidmeer-Jongejan等人(“Oil body-associated hazelnut allergens including oleosins are underrepresented in diagnostic extracts but associated with severe symptoms”,Clinical and Translational Allergy4.1,第1-10页)证明了，在过敏原提取物中，由于制备过程，被鉴定为过敏原的油质蛋白(Cor a 12和Cor a 13)未得到充分描绘。怀疑油质蛋白触发强烈的全身反应，直至过敏性休克(Kleine-Tebbe,J.等人,2009,in-vitro-Diagnostik und molekulare Grundlagen von IgE-vermittelten Nahrungsmittelallergien[IgE-mediated food allergies–in vitro diagnostics and molecular bases],2015年1月18日,Gesellschaft fürAllergologie und Umweltmedizin e.V[German registered society for pediatric allergology and environmental medicine])。迄今为止，来自坚果的油质蛋白还很少被研究，这是因为由于长的疏水区段而导致其分离是一个巨大的挑战(Hsieh,K.和A.H.Huang 2004,“Endoplasmic Reticulum,Oleosins,and Oils in Seeds and Tapetum Cells”,Plant Physiology 136.3,第3427-34页)。在商业试验中，迄今还没有使用与油体相关的坚果过敏原。
英国胡桃(拉丁文：Juglans regia)，与美国山核桃一样，属于胡桃科(拉丁文：Juglandaceae)，并且是北美优选消费的胡桃种类(Roux,K.H.,S.S.Teuber和S.K.Sathe(2003).“Tree nut Allergens”.International Archives of Allergy and Immunology 131.4,第234-44页)。在2012年，欧盟(EU)内消费了239.5兆吨(Hanson,R.和A.Medina(2012)，Tree nuts annual 2012.USDA Foreign Agriculture Service)。已鉴定出的胡桃的主要过敏原为2S白蛋白(Jug r 1)、豌豆球蛋白(Jug r 2)、LTP(Jug r 3)以及11S球蛋白(Jug r 4)。针对胡桃的主要过敏原的致敏可以导致严重的全身反应，以至于由于食物消费可以触发过敏性休克(Agreiter,C.(2013).“Purification of seed storage proteins from tree nuts and peanut and their range of cross-reactivity-implication for the nut allergic patient”.Thesis for master‘s degree.University of Vienna)。由于Jug r 2和Ara h 1(花生的豌豆球蛋白)之间具有75％的同源性，因而针对Jug r 2的致敏可以导致针对花生的交叉反应性。同样地，发生胡桃和桃子之间的交叉反应性，这是因为LTP Jug r 3与来自桃子的LTP具有高的同源性(Roux,K.H.,S.S.Teuber和S.K.Sathe(2003).“Tree nut allergens”.International Archives of Allergy and Immunology 131.4,第234-44页)。
美国山核桃(Carya illinoinensis)属于胡桃科。在2013年，在美国的美国山核桃消费据估计为大约4.4亿磅(Nature’s Finest Food,Ltd.,2013,US Domestic Pecan Consumption Rises.2015年2月7日)。在2010年，Sharma鉴定出了过敏原Car i 1、Car i 2和Car i 4，并且重组地制备了这些过敏原。在过敏原Car i 1(2S白蛋白)和Car i 4(11S球蛋白)的情况下，鉴定出了抗消化的表位。在Car i 1这种2S白蛋白的情况下，鉴定出了五个高度反应性的线性表位，其可能是Car i 1能够触发强烈的过敏反应的原因(Sharma G.M.等人,2011,“Cloning and characterization of 2S albumin,Car i 1,a major allergen in pecan”.Journal of Agricultural and Food Chemistry 59.8,第4130-9页)。过敏原Car i 4同样具有高度反应性的线性表位，其位于该11S球蛋白的酸性亚基上(Sharma G.M.等人,2011b,“Cloning and Characterization of an 11S Legumin,Car i 4,a Major Allergen in Pecan”,Journal of Agricultural and Food Chemistry 59.17,第9542-52页)。抑制试验证明了，针对胡桃的特异性IgE抗体与美国山核桃交叉反应(Teuber,S.S.,S.K.Sathe,K.H.Roux和W.R.Petersen,2000,“Cross-reactivity of walnut and other tree nuts by IgE immunoblot inhibition”,Journal of Allergy and Clinical Immunology105.1,第140页)。
过敏可以通过使用各种不同的测试原理来诊断。除了病史(其中医生通过有针对性的问题来收集关于患者的信息并且通过询问而得知关于可能的过敏起因的暗示)外，大多数情况下相组合地考虑多种检查方法以便查明原因。这些包括使用体内皮肤测试和体外实验室测试。例如，在体内皮肤单刺测试的情况下，将过敏原提取物或者独个过敏原涂抹在患者的皮肤上并且透过所述液滴轻轻地划破表皮。可以通过皮丘的形成来鉴定出阳性反应(Sicherer等人,2009,“Allergy Frontiers:Diagnosis and Health Economics.”,Springer Verlag)。
在体外，可以通过检测在患者血液中的过敏原特异性抗体来收集在分子水平上的信息(Renz等人,2010,“In-vitro-Allergiediagnostik–Leitlinie der Deutschen Gesellschaft für Allergologie und klinische Immunologie(DGAKI)unter Beteiligung desDeutscher Allergologender Gesellschaft fürAllergologie und Umweltmedizin(GPA)und der Deutschen Dermatologischen Gesellschaft(DDG)”[In vitro allergy diagnostics–guideline from the DGAKI(German society for allergology and clinical immunology)in cooperation with the(German allergologist medical association),the GPA(society for pediatric allergology and environmental medicine)and the DDG(German dermatological society)],Allergo Journal,19,第110-28页)。在这方面，通过将过敏原提取物或独个过敏原固定化在固相上并随后与患者血清一起进行温育来检测患者的致敏。为了进行检测，可以通过使用经标记的二抗来检测与过敏原相结合的特异性抗体(Lutmann等人,2009,“Der Experimentator–Immunologie”[The experimenter–immunology],Spektrum Akademischer Verlag)。在近些年，已实现了在血清学测试中使用独个过敏原(重组的以及天然且分离的)。称为“组分特异性诊断”的方法使得能够在多价过敏的情况下对于致敏模式进行更为差异化的陈述(Hemmer,W.(2009).“Allergiediagnostik–Extrakte oder Moleküle？”[Allergy diagnostics–extracts or molecules？]Wiener Medizinische Wochenschrift[Vienna weekly medical journal]6.8,第9-11页)。
其他的体外方法包括细胞试验，其中在功能性细胞系统中检查过敏反应。对此包括例如，在体外从外周白细胞中组胺释放的测定，嗜碱性白细胞的脱粒、嗜碱性粒细胞激活测试和淋巴细胞转化测试(Ring,J.,“Angewandte Allergologie”[Applied allergology],Urban&Vogel,Munich,2004,第3版)。
激发测试被认为是过敏诊断的金本位，其使得能够作出明确的诊断。对此，给患者供给剂量渐增的过敏原，直至症状显现(Bock等人,“Double-blind,placebo-controlled food challenge(DBPCFC)as an office procedure:a manual.”,Journal of Allergy and Clinical Immunology,1988,82.6,第986-97页；Niggemann等人,“Standardisierung von oralen Provokationstests bei Verdacht auf Nahrungsmittelallergie”[Standardization of oral provocation tests for suspected food allergy],Allergo Journal 2011,20:149-60；Riechelmann等人,2002,“Durchführung des nasalen Provokationstests bei Erkrankungen der oberen Atemwege”[Performance of the nasal provocation test for diseases of the upper airways],Allergo Journal2002,11:29-36)。
尽管众多的标准抗原常规地用于检测指示过敏的IgE，但是专业人员对于油体相关蛋白在常规测试的设计中迄今未被充分考虑感到遗憾。
对此的原因首先包括，此类蛋白质的差的可分离性和低的稳定性，特别是在苛求的气候条件下，其传统上作为全长蛋白质从坚果的油体级分中分离出来(Zuidmeer-Jongehan等人,2014)。此外，采用该方式仅能够以具有差地可再现的质量的批次获得低数量。在现有技术中还未描述过这样的方法，其允许以大规模分离足够稳定的抗原。
关于使用此类试剂设计出的测试的质量，专业人员表示不满意。明确地，低的灵敏度和不可靠性是令人遗憾的(Zuidmeer-Jongehan等人,2014)。
另一个问题在于，商购可得的测试不允许对于患者的过敏严重程度作出可靠的陈述，例如患者是仅遭受具有轻微症状的过敏之苦，还是可能发生严重的直至威胁生命的并发症。
在该背景下，对于下列存在巨大的需求：基于油体相关蛋白的新的试剂和方法，其用于检测食物过敏，特别是针对植物部分例如种子和果仁，更精确而言坚果的食物过敏。
本发明的目标是，克服现有技术中所描述的用于诊断针对坚果的过敏的试剂和方法的上述和其他的缺点。
进一步的目标是，提供用于诊断针对坚果的过敏的试剂和方法，其在特异性和/或灵敏度方面是有利的。特别地，应当减少假阳性和/或假阴性结果的比例。
进一步的目标是，提供常规地和/或大规模地在工业上可制备的试剂和适合于制备所述试剂的方法，以及具有可再现特性的用于检测坚果过敏的测试，其可以常规地和/或大规模地制备。
进一步的目标是，提供尽可能不敏感的试剂，其在非常极端的气候条件下可靠地发挥作用。
进一步的目标是，提供这样的测试、试剂和方法，其允许过敏的差异化诊断或预后，特别是患者所遭受的过敏的严重程度的评估。
这些目标和其他目标通过本申请的主题，特别地通过所附的独立权利要求的主题来实现，其中从从属权利要求中得出具体实施方案。
在第一个方面，作为本发明基础的目标通过包含抗原性片段的多肽来实现，所述抗原性片段具有来自油体相关蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列，其中所述多肽包含或者不包含所述油体相关蛋白的截短的疏水结构域，并且其中所述油体相关蛋白选自包括油质蛋白、油体钙蛋白和油体固醇蛋白的组。
在第一个方面的第一个优选的实施方案中，所述多肽包含
a)来自油体相关蛋白的N-末端亲水结构域的有着至少七个氨基酸的抗原性片段，和
b)来自油体相关蛋白的C-末端亲水结构域的有着至少七个氨基酸的抗原性片段，
其中a)和b)相互融合或者通过连接体相连接，并且其中所述油体相关蛋白选自包括油质蛋白和油体钙蛋白的组。
在第一个方面的第二个优选的实施方案(其也是第一个实施方案的一个实施方案)中，所述油体相关蛋白为油质蛋白。
在第三个优选的实施方案(其也是第一至第二个实施方案的一个实施方案)中，a)是来自SEQ ID NO 1及其变体的序列，和b)是来自SEQ ID NO 2及其变体的序列。
在第四个优选的实施方案(其也是第一至第三个实施方案的一个实施方案)中，a)是来自SEQ ID NO 3及其变体的序列，和b)是来自SEQ ID NO 4及其变体的序列。
在第五个优选的实施方案(其也是第一至第四个实施方案的一个实施方案)中，将所述多肽固定化，优选地在固体载体上，更优选地在微珠上。
在第二个方面，所述目标通过包含所述多肽的药物组合物或疫苗来实现。
在第三个方面，所述目标通过复合物来实现，所述复合物包含所述多肽以及与之相结合的抗体，优选地IgE类别的抗体。
在第四个方面，所述目标通过包含根据本发明的多肽的医学或诊断装置来实现。
在第四个方面的一个优选的实施方案中，所述装置是测试条、生物芯片或电泳凝胶。
在第五个方面，所述目标通过编码根据本发明的多肽的核酸或者包含所述核酸的细胞来实现。
在第六个方面，所述目标通过测试试剂盒来实现，所述测试试剂盒包含根据本发明的多肽，任选地另外还包含用于检测根据本发明的 复合物的工具。
在第七个方面，所述目标通过这样的方法来实现，所述方法包括在哺乳动物的样品中检测与根据本发明的多肽相结合的抗体的步骤，所述样品包含抗体，优选地IgE类别的抗体，所述哺乳动物优选地为人。
在第七个方面的第一个优选的实施方案中，所述哺乳动物具有至少一种过敏症状和/或怀疑所述哺乳动物遭受过敏之苦，所述过敏优选地为针对坚果的过敏。
在第七个方面的第二个优选的实施方案(其也是第一个方面的一个实施方案)中，所述方法包括下列步骤：
a)提供哺乳动物的样品，
b)使所述样品与根据本发明的多肽或者根据本发明的医学装置在与所述多肽和抗体之间的复合物的形成相容的条件下相接触，和
c)检测在步骤b)中所形成的复合物。
在第八个方面，所述目标通过根据本发明的多肽在制备测试试剂盒中的用途来实现，所述测试试剂盒用于在哺乳动物的样品中检测与所述多肽相结合的抗体，所述样品包含抗体，优选地IgE类别的抗体，所述哺乳动物优选地为人。
在第八个方面的第一个优选的实施方案中，所述哺乳动物具有至少一种过敏症状和/或怀疑所述哺乳动物遭受过敏之苦，所述过敏优选地为针对坚果的过敏。
在第八个方面的第二个优选的实施方案中，所述检测包括下列步骤：
a)提供哺乳动物的样品，
b)使所述样品与在所述测试试剂盒中所包含的根据本发明的多肽或者根据本发明的医学装置在与所述多肽和抗体之间的复合物的形成相容的条件下相接触，和
c)检测在步骤b)中所形成的复合物。
本发明基于发明人的令人惊讶的发现：现有技术中所描述的试剂 和方法的缺点可以通过使用根据本发明的多肽来克服。
在不希望束缚于任何理论的情形下，发明人猜测，其他多肽与油体相关蛋白的疏水结构域相结合，所述其他多肽污染用作用于诊断测试的抗原的油体相关蛋白。患者血液中的过敏特异性抗体和其他抗体均与这些污染物相结合，这损害了特异性，例如以假阳性结果的形式。
所述污染物不能结合具有截短的疏水结构域的根据本发明的重组油体相关蛋白，这是因为由于所述截短而导致不存在结合位点。因此，如果基于此类重组多肽设计诊断测试，那么假阳性结果的风险就会降低。
同样地在不希望束缚于任何理论的情形下，发明人猜测，在分离过程中，天然油体相关蛋白进入这样的构象或物理化学反应，所述构象或物理化学反应导致过敏相关表位的遮盖，这可能损害灵敏度，例如由于样品中的过敏特异性抗体不能结合所述抗原。
同样地在不希望束缚于任何理论的情形下，发明人还猜测，所述截短引起相比于天然全长蛋白质而言的重组抗原的物理化学稳定化。
本发明提供了具有截短的疏水结构域的来源于油体相关蛋白的重组多肽，所述油体相关蛋白选自包括油质蛋白、油体钙蛋白和油体固醇蛋白的组。
油质蛋白、油体钙蛋白和油体固醇蛋白所共同具有的是，它们属于植物中的油体相关蛋白。这些蛋白质的天然全长蛋白质被划分为疏水结构域和在C-末端与之相连接的亲水结构域。尽管油体固醇蛋白不具有其他结构域，但是油质蛋白和油体钙蛋白另外还具有N-末端亲水结构域。
此处所使用的术语“油质蛋白”是指这样的多肽，其具有序列SEQ ID NO 5，优选地SEQ ID NO 6，更优选地与选自包括SEQ ID NO 7和SEQ ID NO 8的组的序列相组合，以及所述序列的各自变体。在一个优选的实施方案中，它是选自包括具有下列序列的那些油质蛋白的组的油质蛋白：由数据库代码Q647G5(Ara h 10)、Q45W87(Ara h 11)、75148112(Q84T21，Cor a 12)、75298094(Q84T91，Cor a 13)、 G8H6H8(Jug r油质蛋白-1)、G8H6H9(Jug r油质蛋白-2)、Q9FUJ9(Ses i 4)、Q9XHP2(Ses i 5)和O04925(Ses i油质蛋白)所代表的序列，特别优选地由Q647G5所代表的序列，以及所述序列的各自变体。所有的数据库代码相应于可以在2015年4月30日从各个数据库中检索到的那些序列。
在油质蛋白的情况下，所述疏水结构域的特征在于，它包含SEQ ID NO 9及其变体，以及在此之前位于N-末端的32个，更优选地29个，更优选地27个，更优选地24个，更优选地20个，更优选地18个，更优选地12个，更优选地0个氨基酸，以及在此之后位于C-末端的28个，更优选地25个，更优选地15个，更优选地10个，更优选地0个氨基酸。更优选地，在油质蛋白的情况下，所述疏水结构域的特征在于，它包含SEQ ID NO 10及其变体，以及在此之前位于N-末端的32个，更优选地29个，更优选地27个，更优选地24个，更优选地20个，更优选地18个，更优选地12个，更优选地0个氨基酸，以及在此之后位于C-末端的28个，更优选地25个，更优选地15个，更优选地10个，更优选地0个氨基酸。
此处所使用的术语“油体钙蛋白”是指这样的多肽，其具有序列SEQ ID NO 11，优选地SEQ ID NO 12，以及所述序列的各自变体。在一个优选的实施方案中，它是选自包括具有下列序列的那些油体钙蛋白的组的油体钙蛋白：由数据库代码Q9SQ57-1(peroxy Ses)、O81270-1(peroxy ara t(拟南芥(Arabidopsis thaliana)))、Q9FLN9-1(PXG2Ara t)、O23959-1(Gly m Cal1)、M5WJM8-1(Pru p Cal1)所代表的序列，特别优选地由Q9SQ57-1所代表的序列，以及所述序列的各自变体。
在油体钙蛋白的情况下，所述疏水结构域的特征在于，它包含SEQ ID NO 13及其变体，以及在此之前位于N-末端的23个，更优选地20个，更优选地10个，更优选地0个氨基酸，以及在此之后位于C-末端的7个，更优选地5个，更优选地3个，更优选地2个，更优选地0个氨基酸。更优选地，在油体钙蛋白的情况下，所述疏水结构 域的特征在于，它包含SEQ ID NO 14及其变体，以及在此之前位于N-末端的23个，更优选地20个，更优选地10个，更优选地0个氨基酸，以及在此之后位于C-末端的7个，更优选地5个，更优选地3个，更优选地2个，更优选地0个氨基酸。
此处所使用的术语“油体固醇蛋白”是指这样的多肽，其具有序列SEQ ID NO 15，优选地SEQ ID NO 16，更优选地与选自包括SEQ ID NOs 18、19、20和21的组的序列相组合，以及所述序列的各自变体。在一个优选的实施方案中，它是选自包括具有下列序列的那些油体固醇蛋白的组的油体固醇蛋白：由数据库代码A7LB59(Ara h Ster)、Q93W57(Ses i Ster 1)、C3S7G7(Bra n Ster 1)、C3S7G9(Bra n Ster 2)、Q8LKV5(Ses i Ster 2)、A7LB60(Ara h Ster 2)、C3S7H0(Bra n Ster 3)和C3S7H1(Bra n Ster 4)所代表的序列，特别优选地由A7LB59所代表的序列，以及所述序列的各自变体。
在油体固醇蛋白的情况下，所述疏水结构域的特征在于，它包含SEQ ID NO 17及其变体，以及在此之前位于N-末端的所有氨基酸，以及在此之后位于C-末端的7个，更优选地5个，更优选地3个，更优选地2个，更优选地0个氨基酸。
在一个优选的实施方案中，术语“亲水结构域”是指在油质蛋白、油体钙蛋白或油体固醇蛋白中处于疏水结构域之外的任何结构域。在N-末端亲水结构域的情况下，它是在一级序列中位于疏水结构域之前的结构域。在C-末端亲水结构域的情况下，它是在一级序列中位于疏水结构域之后的结构域。
根据本发明的多肽包含抗原性片段，所述抗原性片段具有来自油体相关蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列，其中所述多肽包含或者不包含所述油体相关蛋白的截短的疏水结构域，这意味着在一个优选的实施方案中，缺乏来自相应的野生型蛋白质的完整的疏水结构域。截短的疏水结构域具有其在相应的野生型多肽中的长度的99％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％的长度，以优选度渐增的顺序。在这方面，所述疏水结构 域优选地如此进行截短，即不发生跨膜结构域的形成。在一个优选的实施方案中，术语“来自多肽的‘抗原性片段’”是指具有至少7、10、15、20、30或40个连续氨基酸残基的取自该多肽的氨基酸序列，其特异性地与来自具有相应过敏的患者的IgE类别的抗体相结合。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的多肽另外还包含增加在水溶液中的溶解度的多肽。专业人员知晓众多合适的融合蛋白，例如MPB、GST、G蛋白B1结构域、硫氧还蛋白、NusA、泛素、SUMO和T7基因10。所述增加溶解度的多肽可以布置在所述抗原性片段的N-末端或C-末端或者在所述抗原性片段之间；优选地，它位于N-末端。
在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“连接体”是指柔韧的氨基酸链，其优选地具有1至100、2至80、3至50或4至40个氨基酸的长度。所述连接体的目的是以共价方式将片段连接在一起，而不限制其空间可接近性。一个可能的连接体序列显示在SEQ ID NO 22中，并因此示例性的总构建体显示在SEQ ID NO 23中。
本发明的教导不仅可以通过使用具有本文所提及的精确氨基酸序列或核酸序列的大分子(例如，油体相关蛋白的抗原性片段)来实施，而且还可以通过使用这样的大分子的变体来实施，所述变体可以通过一个或多于一个氨基酸或核酸的缺失、添加或置换来获得。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“核苷酸序列或氨基酸序列的‘变体’”是指相对于最先提及的核酸序列或氨基酸序列而言具有70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、96％、98％、99％或更高百分比(以优选度渐增的顺序)的同源性的不同序列，其中优选地，在相应的表达出的氨基酸序列中改变了除了对于生物学活性来说重要的氨基酸之外的其他氨基酸。在这方面，术语“同源性”意指氨基酸同一性或者保守置换成另一氨基酸，优选地同一性。在一个更优选的实施方案中，保守置换在这种情况下是指，将来自下列各组的氨基酸置换成来自同一组的其他氨基酸：疏水氨基酸(V、L、I)、含羟基基团的氨基酸(T、S)、酸性氨基酸(D、E)、酰胺氨基酸(N、Q)、 碱性氨基酸(K、R)和芳香族氨基酸(F、W)。
在本发明的一个更优选的实施方案中，氨基酸序列或核酸序列的变体，优选地除了具有上面提及的序列同源性外，还具有野生型分子或原始分子的基本上相同的生物学活性。例如，特异性地与特定抗体结合的多肽的变体具有与野生型分子相同的或基本上相同的结合特异性。在一个特别的实施方案中，术语“基本上相同的结合特异性”是指这样的解离常数，其与在相同的抗体与最先提及的原始序列之间的结合反应的解离常数的差异少于1000倍，更优选地500倍，更加优选地100倍，更加优选地50倍，更加优选地20倍，更加优选地10倍，更加优选地2倍。
核酸序列或氨基酸序列的变体具有最先提及的原始序列的相同长度或者其片段，例如具有至少7个，更优选地10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、150或200个氨基酸的片段，其中所述片段可以开始于位于疏水结构域的N-末端的亲水结构域的C-末端、N-末端或其之间，优选地N-末端，或者所述片段可以处于位于疏水结构域的C-末端的亲水结构域的N-末端。优选地，所述片段包含各个N-末端或C-末端结构域的氨基酸的20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％，以优选度渐增的顺序。
必要的是，多肽的变体具有这样的生物学活性，即特异性地结合在来自具有坚果过敏的患者的样品中的坚果过敏特异性抗体，优选地IgE类别的抗体。用来自遭受坚果过敏之苦的患者的血清，和用通常的检测方法，优选地用Western印迹，可以检查是否存在所述生物学活性。
为了实施本发明，可以以任何形式和以任何纯度提供根据本发明的多肽，从表达所述多肽的组织或细胞，优选地过表达所述多肽的细胞，此类细胞的粗制的或经富集的裂解物，直至经纯化的和/或经分离的多肽，其基本上是纯的。根据本发明的多肽可以是未折叠的、化学合成的肽。根据本发明的多肽可以是经折叠的多肽。在一个优选的实施方案中，所述多肽是重组的多肽，其中此处所使用的术语“重组的” 是指这样的多肽，其通过采用基因技术方法在生产过程的任一阶段制备得到，例如通过将编码所述多肽的核酸与用于在细胞或组织中过表达的较强启动子相融合，或者通过改变所述多肽或编码所述多肽的核酸本身的序列。本领域专业人员熟知包括用于改变核酸和多肽的基因技术方法的操作方法(参见例如，Sambrook,J.、Fritsch,E.F.和Maniatis,T.(1989),Molecular Cloning,CSH；或Brown T.A.(1986),Gene Cloning–an introduction,Chapman&Hall)，并且能够制备和纯化重组多肽(参见例如，由GE Healthcare Life Sciences公开的手册“Strategies for Protein Purification”,“Antibody Purification”,“Purifying Challenging Proteins”,“Recombinant Protein Purification”,“Affinity Chromatography”,“Ion Exchange Chromatography”,“Gel Filtration(Size Exclusion Chromatography)”,“Hydrophobic Interaction Chromatography”,“Multimodal Chromatography”(2009/2010)，其在Burgess,R.R.,Deutscher,M.P.(2009),Guide to Protein Purification中)。在一个优选的实施方案中，多肽是纯的，如果在各个样品中的总多肽的至少60％、70％、80％、90％、95％或99％由所述多肽组成，如可以在SDS-PAGE及随后的考马斯蓝染色之后通过目视检定来进行评估的。
如果以重组细胞的形式提供所述多肽，那么所述细胞可以是真核细胞，例如酵母细胞，或者原核细胞，例如大肠杆菌(Escherichia coli)。例如，所述细胞可以是用功能性地编码根据本发明的多肽的核酸进行转染的HEK293细胞。本领域专业人员熟知用于制备、转染和培养此类细胞的方法，如例如在Phelan,M.C.(2001),Basic Techniques in Mammalian Cell Tissue Culture,John Wiley中所描述的。
对用于实施根据本发明的教导的多肽以及任何其变体进行设计，以便展示出被患者血清中的抗体所识别的表位，所述患者遭受疾病之苦，优选地遭受过敏之苦，更优选地遭受针对植物部分，更优选地针对种子和果仁，更加优选地针对坚果的过敏之苦。
此类多肽具有来自油体相关蛋白的有着至少7、8、9、10、11、 12、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个连续氨基酸的区段。本领域专业人员熟知可以用于设计具有足够免疫原性的肽的指导方针，如例如在Jackson,D.C.,Fitzmaurice,C.J.,Brown,L.E.,Zeng,W.(1999),Preparation and properties of totally synthetic immunogenes,Vaccine,第18卷,第3–4期,1999年9月,第355–361页；和Black,M.,Trent,A.,Tirrell,M.和Olive,C.(2010),Advances in the design and delivery of peptide subunit vaccines with a focus on Toll-like receptor agonists,Expert Rev Vaccines,2010年2月,9(2):157–173中所描述的。简而言之，所述肽应当尽可能多地具有下列特性：(a)它是高度亲水的；(b)它包含至少一个选自天冬氨酸、脯氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的残基；(c)它与其他已知的肽或多肽没有同源性或仅具有低的同源性，以便达到高的特异性；(d)它必须是足够可溶的；和(e)它不包含糖基化或磷酸化位点，除非由于特殊原因这些位点是必需的。备选地，可以使用生物信息学方法，例如在Moreau,V.,Fleury,C.,Piquer,D.,Nguyen,C.,Novali,N.,Villard,S.,Laune,D.,Granier,C.和Molina,F.(2008),PEPOP:Computational design of immunogenic peptides,BMC Bioinformatics 2008,9:71中所描述的那些。
可以以任何构象提供根据本发明的多肽，例如所述多肽可以是基本上未折叠的或者部分地或完全地经折叠的。在一个优选的实施方案中，所述多肽在下述意义上是经折叠的：对于结合抗体来说所需的表位采用了天然蛋白质在其天然环境中所采用的折叠。本领域专业人员熟知使得能够测定多肽是否经折叠，和如果是，采用哪种结构的方法，例如有限蛋白水解、NMR光谱学、CD光谱学或X-射线晶体学(参见例如，Banaszak L.J.(2008),Foundations of Structural Biology,Academics Press；或Teng Q.(2013),Structural Biology:Practical Applications,Springer)。
为了进行纯化或固定化，根据本发明的多肽可以具有标签，即能够特异性地与配体相结合的序列或结构域，例如选自包括CBD、CBP、 FLAG、c-Myc、Strep-标签、多聚精氨酸、His-标签、硫氧还蛋白、MBP和GST的组的标签。
根据本发明的多肽可以是经固定化的多肽。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“经固定化的”是指结合至在水溶液中不溶的固体载体的分子，更优选地通过共价键、静电相互作用、包囊或包载，例如通过球状多肽在凝胶中的变性，更优选地通过疏水相互作用，最优选地通过一个或多于一个共价键。在文献中，例如在Kim等人,Protein immobilization techniques for microfluidic assays,Biomicrofluidics 7(4),041501中，描述了各种不同的合适的载体，例如纸、聚苯乙烯、金属、有机硅或玻璃表面、微观流体通道、膜、微珠例如磁性微珠、柱色谱法介质、生物芯片、聚丙烯酰胺凝胶等。以这种方式可以容易地将经固定化的分子与不溶性载体一起与水溶液相分开，例如通过过滤、离心或滗析。经固定化的分子可以是可逆地或不可逆地进行固定化的。例如，在下列情况下，固定化是可逆的：如果所述分子与所述载体通过离子相互作用(其可以通过添加高浓度的盐来进行掩蔽)来进行相互作用；或者如果所述分子通过可脱离的共价键，例如二硫键(其可以通过添加含巯基的试剂来进行切割)进行结合。所述多肽可以间接地进行固定化，例如通过使抗体或其他与所述多肽具有亲和力的分子固定化，随后形成复合物，其中效果是将多肽-抗体复合物固定化。在文献中，例如在Kim等人中，描述了各种不同的用于使多肽固定化的方法。用于固定化反应的各种不同的试剂和试剂盒是商购可得的，例如从Pierce Biotechnology。
本发明提供了试剂盒，其优选地用于诊断疾病。这样的试剂盒可以包含关于使用该试剂盒的说明书，和用于使根据本发明的多肽与来自受试者(优选地，人受试者)的液体身体样品相接触的工具，例如线印迹(line blot)，其中将根据本发明的多肽固定化在线印迹上。基于线印迹的测试的实施及其设计描述在现有技术中(Raoult,D.和Dasch,G.A.(1989),The line blot:an immunoassay for monoclonal and other antibodies.Its application to the serotyping of gram-negative bacteria.J.Immunol.Methods,125(1-2),57–65；WO2013041540)。
此外，所述试剂盒可以包含阳性对照，例如已知与根据本发明的多肽相结合的抗体，和阴性对照，例如对于根据本发明的多肽不具有可检测的亲和力的蛋白质，例如牛血清白蛋白。最后，这样的试剂盒可以包含用于校准目的的抗体或多肽的标准溶液。
本发明提供了能够特异性地与根据本发明的多肽相结合的抗体。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“抗体”是指任何基于免疫球蛋白的结合实体，更优选地至少一个免疫球蛋白重链和至少一个免疫球蛋白轻链，其包括但不限于单克隆和多克隆抗体以及抗体的变体，更特别地，能够结合抗原(优选地高度特异性地进行结合)的片段。在一个特别的实施方案中，此处所使用的术语“特异性地结合”是指，所述结合比以解离常数(尤其是1×10-5M，更优选地1×10-7M，更优选地1×10-8M，更优选地1×10-9M，更优选地1×10-10M，更优选地1×10-11M，更优选地1×10-12M的解离常数)为特征的结合反应更强，所述解离常数通过使用Biacore仪器在25℃下在PBS缓冲液(pH 7)中通过表面等离子体共振来测定。所述抗体可以以分离的形式和以在包含其他抗体、多肽、代谢物、细胞等的混合物中的形式存在。
可以使用在本申请中所描述的试剂、装置、方法和用途来用于诊断疾病。在一个优选的实施方案中，所述疾病是过敏。在一个更优选的实施方案中，所述疾病是针对坚果，优选地针对至少一种选自包括榛子、芝麻、花生、胡桃和美国山核桃的组的坚果的过敏。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“诊断”是指任何类型的旨在下列目的的程序：获得信息，所述信息支持评估受试者是否在过去已经遭受了特定疾病之苦、在诊断之时正在遭受特定疾病之苦或者在未来将会遭受特定疾病之苦，或者这比在具有相似临床症状的平均比较受试者的情况下是更可能的；或者发现疾病是如何进展了的或在未来如何可能进展；或者评价患者对于特定类型的治疗的应答。换言之，术 语“诊断”不仅包括疾病的诊断，而且还包括疾病的预后或疾病过程的监测。
在许多情况下，抗体的单纯检测是足够的，换言之，测定在样品中是否存在可检测浓度的抗体。如果检测到抗体，那么这是一条对于主管医生的诊断来说意义重大的信息，并且指明了增加的患者遭受疾病之苦的可能性。在一个优选的实施方案中，可以将在血清中抗体的相对浓度与在平均健康受试者中所发现的浓度进行比较。根据本发明的方法可以包括测定抗体的浓度是否以至少0.1倍，优选地以0.2、0.5、1、2、5、10、20、25、50、100、200、500、1000、10000或100000倍比在平均健康受试者中所发现的浓度高。
本领域专业人员承认，从业的负责治疗的医生并不仅仅基于单一的诊断参数来作出其诊断，而是必须考虑许多方面，例如其他抗体的存在、标志物、血液参数、患者症状的临床检查或者成像或其他非侵入性方法的结果，以便建立总的诊断。诊断试剂或诊断方法的价值也可以在于，排除一种或多种疾病和由此允许间接诊断另一种疾病。在一个优选的实施方案中，在本申请中所提及的每种症状或疾病的含义被视为与在申请日时专业人员的理解相一致，如它在所述日期由教科书和科学出版物所描绘的那样。
因此，术语“诊断”优选地不是表示，根据本发明的诊断方法或试剂将会产生明确的和充分的结果。基于独个测试或甚至参数最终作出诊断可以意味着对于“鉴别诊断”即对于系统诊断程序的贡献，所述系统诊断程序基于一系列诊断参数考虑了一系列疾病的可能性。术语“诊断”还可以表示，使用方法或试剂来区分具有相似症状的两种或更多种疾病。
术语“诊断”还可以表示，从两种或更多种可用的选项中确定哪种试剂或治疗方法对于患者来说是最有希望的。
根据本发明的多肽可以与其他过敏特异性抗原相组合地进行使用。在这方面，可以使用包含多种在空间上分开的且经纯化的抗原的混合物或组合，优选地以固定化形式，更加优选地在医学装置例如线 印迹上。通过组合各种不同的分离的过敏原，可以对于每位患者建立个体致敏模式，并因此获得关于存在的过敏的严重程度或者关于未来疾病过程的信息。
可以将根据本发明的多肽(其包含抗原性片段，所述抗原性片段具有源于来自花生油质蛋白、花生油体钙蛋白或花生油体固醇蛋白，优选地来自花生油质蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列)与一种或多于一种选自包括Ara h 1(P43238)、Ara h 2(Q6PSU2)、Ara h 6(Q647G9)、Ara h 9(B6CG41)的组的过敏原或其变体相组合，更优选地与一种或多于一种选自包括Ara h 1、Ara h 2、Ara h6的组的过敏原或其变体相组合，更加优选地与一种或多于一种选自包括Ara h 2和Ara h 6的组的过敏原或其变体相组合，最优选地与Ara h 2相组合。
可以将根据本发明的多肽(其包含抗原性片段，所述抗原性片段具有源于来自榛子油质蛋白、榛子油体钙蛋白或榛子油体固醇蛋白，优选地来自榛子油质蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列)与一种或多于一种选自包括Cor a 1(Q9SWR4)、Cor a 2(Q9AXH5)、Cor a 8(Q9ATH2)、Cor a 9(Q8W1C2)和Cor a 14(D0PWG2)的组的过敏原或其变体相组合，更优选地与一种或多于一种选自包括Cor a 1、Cor a 8、Cor a 9和Cor a 14的组的过敏原或其变体相组合，更优选地与一种或多于一种选自包括Cor a 1、Cor a 9和Cor a 14的组的过敏原或其变体相组合，更加优选地与一种或多于一种选自包括Cor a 9和Cor a 14的组的过敏原或其变体相组合，最优选地与Cor a 14相组合。
可以将根据本发明的多肽(其包含抗原性片段，所述抗原性片段具有源于来自芝麻油质蛋白、芝麻油体钙蛋白或芝麻油体固醇蛋白，优选地来自芝麻油质蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列)与一种或多于一种选自包括Ses i 1(Q9AUD1)、Ses i 2(Q9XHP1)、Ses i 3(Q9AUD0)、Ses i 6(Q9XHP0)和Ses i 7(Q9AUD2)的组的过敏原或其变体相组合，更优选地与一种或多于一种选自包括Ses i 1、Ses i 2、Ses i 3和Ses i 6的组的过敏原或其变体相组合，更加优选地与一种或多于一种选自包括Ses i 1、Ses i 2和Ses i 3的组的过敏原或其变体相组合，更加优选地与一种或多于一种选自包括Ses i 1和Ses i 2的组的过敏原或其变体相组合，最优选地与Ses i 2相组合。
在一个优选的实施方案中，使用选自包括免疫扩散技术、免疫电泳技术、光散射免疫测定法、凝集技术、标记技术的组的方法来进行复合物的检测，所述方法例如选自包括放射免疫测定法、酶免疫测定法、化学发光免疫测定法和免疫荧光技术的组。本领域专业人员熟知这些方法，其也描述在现有技术中，例如描述在Zane,H.D.(2001),Immunology–Theoretical&Practical Concepts in Laboratory Medicine,W.B.Saunders Company中，特别是在第14章中。
“使包含抗体的液体样品与根据本发明的多肽相接触”这一步骤在合适的条件下进行。在一个优选的实施方案中，术语“与复合物的形成相容的条件”是指这样的条件，其允许特异的抗原-抗体相互作用从而建立包含所述多肽和所述抗体的复合物。在一个优选的实施方案中，此类条件可以包括将所述多肽在于PBS缓冲液中以1:100稀释的样品中在25℃下温育30分钟。可以将任何数据(包括包含抗体和根据本发明的多肽的复合物的存在或不存在)与参考数据相关联。例如，检测出复合物可以指明，该样品所来源自的患者已经遭受了疾病之苦或者在未来将会遭受疾病之苦。如果患者先前已进行了诊断并且再次施行了诊断方法，那么可以将在这两轮中检测到的复合物的量相关联，以便评价疾病的进展和/或治疗的成功。例如，如果复合物的量增加，那么这暗示疾病正在进展并且可能在未来表现出来，和/或治疗不成功。
用于根据本发明的诊断方法的样品必须包含抗体，其也称为免疫球蛋白。通常，所述样品包含代表性量的待检查的受试者的全部抗体。但是，样品也可以在提供之后进行加工，这可以包括全部抗体或特定抗体类别的分级分离、离心、富集或分离，这可以影响各种不同类别的免疫球蛋白的相对分布，从而使得它偏离原始分布。在一个优选的 实施方案中，IgE类别的免疫球蛋白被富集。
治疗性多肽可以在治疗上进行使用，或者用于制备药物，例如用于脱敏或作为疫苗的试剂。在这方面，所述多肽以药学上可接受的形式存在，例如与载体相组合。
根据本发明的抗体或根据本发明进行检测的抗体为IgE类别或IgG类别的抗体，例如IgG4，特别优选地IgE类别的抗体。本领域专业人员熟知用于纯化抗体的技术，例如在Hermanson等人中所描述的那些。
本申请和所附的序列表涉及一系列序列，即：
在下面，将会借助于示例性的实施方案并参考附图来阐明本发明。所描述的实施方案在任何方面将仅理解为示例性的而非限制性的，并且所引用的特征的各种组合涵盖在本发明的范围之内。
图1显示了经IMAC纯化的重组Cor a 12的SDS-PAGE分析。该分析借助于4-12％的bis-Tris凝胶和随后的考马斯蓝染色来进行。泳道1：宽范围的分子量标准；泳道2：经纯化的重组Cor a 12(非还原性的)；泳道3：经纯化的重组Cor a 12(还原性的)。
图2显示了涂有Cor a 12的线印迹。
图3显示了在Euroline系统中根据本发明的榛子Cor a 12多肽的反应性分析。该反应性分析通过使用来自榛子过敏者的血清来进行。所结合的来自患者血清的抗体的评价通过使用EAST参考系统来进行。
图4显示了涂有根据SEQ ID NO 25和SEQ ID NO 24的构建体的硝酸纤维素膜，其中向其施加了三种不同的患者血清。血清1：在消费了坚果后具有临床症状的患者1；血清2：患者2，没有针对坚果的特异性IgE的花粉过敏者；血清3：患者3，没有针对坚果的特异性IgE的花粉过敏者。
实施例1：Cor a 12的克隆、重组表达和纯化
经修饰的Cor a 12(SEQ ID NO 23)的编码区通过基因合成(Eurofins Genomics GmbH)来产生，通过聚合酶链式反应来进行扩增，并且通过使用ThioFusionTM表达试剂盒(Invitrogen)而亚克隆到重组载体中。将融合蛋白按照制造商的说明书在大肠杆菌中进行表达，并且借助于镍基质(IMAC)通过亲和层析进行纯化。
通过SDS-PAGE来分析该重组构建体；图1显示了经考马斯蓝染色的SDS凝胶。每个泳道加载了3μg蛋白质。
实施例2：线印迹(EUROLINE)的制备
为了制备Euroline，借助于精密分配器(Zeta Corporation)将根据本发明的蛋白质直接涂在硝酸纤维素膜(Schleicher&Schüll)上。在此，划出均一的线。随后，将膜按照制造商的说明书进行封闭，并且洗涤和切成3mm宽的条。
实施例3：根据本发明的测试的实施
使每个条分开地与1ml的在洗涤缓冲液(20mM Tris,pH 7.5)中进行1:10(v/v)稀释的患者样品相接触，并且在室温下温育16小时；移去血清，并且随后将所述条用1ml的洗涤缓冲液洗涤3次，每次5分钟。在倒掉洗涤缓冲液后，将每个条与1ml的缀合有AP的抗-人IgE抗体(Abcam，在洗涤缓冲液中进行1:1000(v/v)稀释)一起在室温下进行温育。在一个小时后，弃去缀合物，将所述条用1ml的洗涤缓冲液再次洗涤三次并与BCIP/NBT底物一起温育10分钟，并且最后使用蒸馏水来终止反应。
借助于扫描仪和程序(EUROIMMUN)来进行评价。可以借助于IgE校准曲线按照WHO标准(75/502)来进行半定量评估。浓度以国际单位kU/L(千IgE单位/升)来给出。对于解释结果来说可得的参考系统的实例为RAST系统(Radio-Allergo-Sorbent-Test(放射性过敏原吸附测试))，其在过敏诊断中是广泛使用的并且由Pharmacia公司(现在的Thermo Scientific)开发(Buhl等人,“Allergologie–Handbuch”[Allergology–a manual],K.Mohr编,Stuttgart:Schattauer 2011)。EUROLINE-Scan程序自动地将Euroline的条带强度换算为EAST(Enzyme-Allergo-Sorbent-Test(酶过敏原吸附测试))等级，其在浓度分级方面相应于RAST系统。EAST(Enzyme-Allergo-Sorbent-Test(酶过敏原吸附测试))等级的划分显示在表1中：
表1：EAST等级
EAST等级 浓度[kU/L] 0 <0.35 1 0.35-0.7 2 0.7-3.5 3 3.5-17.5 4 17.5-50 5 50-100 6 >100
用于具有Cor a 12的Euroline的患者血清为经预表征的来自榛子过敏者的血清。对于阴性对照，不与血清一起温育。
实施例4：比较实验，其基于常规Ara h 15抗原和根据本发明的具有截短的疏水结构域的Ara h 15
未修饰的Ara h 15(SEQ ID NO 24)和经修饰的Ara h 15(SEQ ID NO 25)的编码区借助于基因合成(Eurofins Genomics GmbH)来产生，通过聚合酶链式反应来进行扩增，并且通过使用ThioFusionTM表达试剂盒(Invitrogen)而亚克隆到重组载体中。借助于镍基质(NICKEL RAPID RUN,ABT Agarose Bead Technologies(琼脂糖珠技术))通过亲和层析来纯化在大肠杆菌中表达出的构建体。
将以该方式制备出的构建体如在实施例2中所描述的那样涂在硝酸纤维素膜上，并且如在实施例3中所描述的那样进行温育。使用来自在消费了坚果后具有临床症状的患者的血清(血清1)，以及两个来自没有针对坚果的特异性IgE的过敏者的血清(血清2和血清3)。如在实施例3中所描述的那样，借助于所引述的程序来进行评价。
图4显示了，如果使用具有截短的疏水结构域的Ara h 15构建体来捕获IgE抗体，那么仅能够在患者1中检测到针对Ara h 15的IgE抗体。相反地，使用全长Ara h 15的试验产生了假阴性结果。在遭受除了坚果过敏外的其他过敏之苦的患者中不能检测到IgE。这显示，根据本发明的试验是特异性的，并且比现有技术的试验更灵敏。
本发明的一些实施方案如下：
1.包含抗原性片段的多肽，所述抗原性片段具有来自油体相关蛋白的亲水结构域的有着至少七个氨基酸的序列，其中所述多肽包含或者不包含所述油体相关蛋白的截短的疏水结构域，并且其中所述油体相关蛋白选自包括油质蛋白、油体钙蛋白和油体固醇蛋白的组。
2.根据实施方案1的多肽，其包含
a)来自油体相关蛋白的N-末端亲水结构域的有着至少七个氨基酸的抗原性片段，和
b)来自油体相关蛋白的C-末端亲水结构域的有着至少七个氨基酸的抗原性片段，
其中a)和b)相互融合或者通过连接体相连接，并且其中所述油体相关蛋白选自包括油质蛋白和油体钙蛋白的组。
3.根据实施方案1的多肽，其中所述油体相关蛋白为油质蛋白。
4.根据实施方案1至2之一的多肽，其中a)是来自SEQ ID NO 1及其变体的序列，和b)是来自SEQ ID NO 2及其变体的序列。
5.根据实施方案1至2之一的多肽，其中a)是来自SEQ ID NO 3及其变体的序列，和b)是来自SEQ ID NO 4及其变体的序列。
6.根据实施方案1至5之一的多肽，其中将所述多肽固定化，优选地在固体载体上，更优选地在微珠上。
7.药物组合物或疫苗，其包含根据实施方案1至6之一的多肽。
8.复合物，其包含根据实施方案1至6之一的多肽以及与之相结合的抗体，优选地IgE类别的抗体。
9.医学或诊断装置，其包含根据实施方案1至5之一的多肽。
10.根据实施方案9的医学或诊断装置，其中所述装置是测试条、生物芯片或电泳凝胶。
11.编码根据实施方案1至5之一的多肽的核酸，或者包含所述核酸的细胞。
12.测试试剂盒，其包含根据实施方案1至5之一的多肽，任选 地另外还包含用于检测根据实施方案8的复合物的工具。
13.方法，其包括在哺乳动物的样品中检测与根据实施方案1至5之一的多肽相结合的抗体的步骤，所述样品包含抗体，优选地IgE类别的抗体，所述哺乳动物优选地为人。
14.根据实施方案13的方法，其中所述哺乳动物具有至少一种过敏症状和/或怀疑所述哺乳动物遭受过敏之苦，所述过敏优选地为针对坚果的过敏。
15.根据实施方案13至14之一的方法，其包括下列步骤：
a)提供哺乳动物的样品，
b)使所述样品与根据实施方案1至5之一的多肽或者根据实施方案9至10之一的医学装置在与所述多肽和抗体之间的复合物的形成相容的条件下相接触，和
c)检测在步骤b)中所形成的复合物。
16.根据实施方案1至5之一的多肽在制备测试试剂盒中的用途，所述测试试剂盒用于在哺乳动物的样品中检测与所述多肽相结合的抗体，所述样品包含抗体，优选地IgE类别的抗体，所述哺乳动物优选地为人。
17.根据实施方案16的用途，其中所述哺乳动物具有至少一种过敏症状和/或怀疑所述哺乳动物遭受过敏之苦，所述过敏优选地为针对坚果的过敏。
18.根据实施方案16至17之一的用途，其中所述检测包括下列步骤：
a)提供哺乳动物的样品，
b)使所述样品与在所述测试试剂盒中所包含的根据实施方案1至5之一的多肽或者根据实施方案9至10之一的医学装置在与所述多肽和抗体之间的复合物的形成相容的条件下相接触，和
c)检测在步骤b)中所形成的复合物。