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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610959509.8 (22)申请日 2016.10.28 (71)申请人 中国科学院新疆理化技术研究所 地址 830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐 市北京南路40号附1号 (72)发明人 阿吉艾克拜尔艾萨 茹仙古丽肉孜买买提 (74)专利代理机构 乌鲁木齐中科新兴专利事务 所 65106 代理人 张莉 (51)Int.Cl. C07J 63/00(2006.01) C07J 71/00(2006.01) (54)发明名称 阿拉套大戟三萜类化合物及其制备方法 (57)摘。
2、要 本发明涉及一种阿拉套大戟中的两个三萜 类化合物及其制备方法， 该化合物以阿拉套大戟 药材为原料， 用溶剂提取， 溶剂萃取， 通过经硅胶 柱层析法、 反相柱层析法或葡聚糖凝胶LH-20柱 层析法中的一种或两种方式进行分离， 采取薄层 层析法检测分析， 得到2个新的三萜类化合物， 其 中化合物1为2， 3开环蒲公英赛二酸； 化合物2为 1-羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 106543259 A 2017.03.29 CN 106543259 A 1.一种阿拉套大戟三萜化合物， 其特征在于该化合物的结构式为： 其中： ( )为化合物1， 化学名称为。
3、2， 3开环蒲公英赛二酸； ()为化合物2， 化学名称为 1-羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 2.根据权利要求1所述的阿拉套大戟三萜化合物的制备方法， 其特征在于按下列步骤 进行： a、 以阿拉套大戟为原料， 粉碎后， 在室温下， 用5倍体积的丙酮或体积浓度为95的甲 醇或乙醇水溶液渗漉提取或丙酮回流提取， 然后真空浓缩得到浓缩液； b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈溶解分散处理， 再用环己烷或正己烷进行萃取3-5次， 真空蒸干溶剂， 得到萃取物浸膏； c、 将步骤b得到的萃取物浸膏经硅胶柱层析法、 反相柱层析法或葡聚糖凝胶LH-20柱层 析法中的一种或两种方式进行分离， 即得到蒲公英赛类三。
4、萜化合物， 其中化合物1为2， 3开 环蒲公英赛二酸； 化合物2为1-羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 3.根据权利要求2所述的阿拉套大戟三萜化合物的制备方法， 其特征在于步骤c中硅胶 柱层析法为常压或加压柱层析， 填料为硅胶， 洗脱剂为正己烷和乙酸乙酯的混合物或正己 烷和丙酮的混合物或石油醚和乙酸乙酯的混合物， 采用等度洗脱或梯度洗脱。 4.根据权利要求2所述的阿拉套大戟三萜化合物的制备方法， 其特征在于步骤c中反向 柱层析法为常压或加压柱层析， 洗脱剂为体积浓度为70乙腈水溶液等度洗脱， 或体积浓 度为80甲醇水溶液等度洗脱。 5.根据权利要求3所述的阿拉套大戟三萜类化合物的制备方法， 。
5、其特征在于步骤c中葡 聚糖凝胶LH-20柱层析法的洗脱剂为体积比1:1的甲醇:三氯甲烷等度洗脱或体积浓度10- 80甲醇水梯度洗脱。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106543259 A 2 阿拉套大戟三萜类化合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明为植物化学领域， 具体为中药有效成分的提取、 分离与制备工艺领域， 尤其 涉及从阿拉套大戟药材中提取、 分离具有药理活性的两个新的三萜类化合物。 背景技术 0002 阿拉套大戟(Euphorbia alatavica Boiss)是大戟科植物， 主要分布于中亚， 我国 主要分布在新疆伊地区， 生于山地草原， 草甸和林缘。 早在清代 “植物名。
6、实图考” 和 “生草药 性备要” 中记载了多种大戟科植物及疗效。 大戟科植物苦味， 性寒， 有毒， 具有逐水通便， 消 肿散结作用。 近几十年对药用植物资源的调查， 发现了多种大戟科药用植物及疗效。 例如， 对叶大戟在维吾尔传统医学里有悠久的使用历史并显示出了明确的临床疗效， 并在苏孜阿 甫片、 复方苏孜阿甫蜜膏、 加瓦日西库木尼、 依力提提蜜膏、 苏孜阿甫软膏、 苏扎甫散、 赛拉 尼散等十几种成熟的维吾尔医复方药中作为主要成分应用。 阿拉套大戟同属于大戟科植物 并在新疆地区有较丰富的植物资源， 为了研究阿拉套大戟的化学成分并筛选具有疗效成 分， 本课题对阿拉套大戟进行了化学成分研究。 查阅国。
7、内外文献， 至今尚未见有关阿拉套大 戟化学成分研究报道。 发明内容 0003 本发明的目的在于， 提供阿拉套大戟药材中的三萜类化合物及其制备方法， 该化 合物以阿拉套大戟药材为原料， 用溶剂提取， 溶剂萃取， 经硅胶柱层析法、 反相柱层析法或 葡聚糖凝胶LH-20柱层析法中的一种或两种方式进行分离， 采取薄层层析法检测分析， 得到 2个新的三萜类化合物， 其中化合物1为2， 3开环蒲公英赛二酸； 化合物2为1-羟基， 2， 3闭环 蒲公英赛内酯。 0004 本发明所述的阿拉套大戟三萜化合物， 该化合物的结构式为： 0005 说明书 1/8 页 3 CN 106543259 A 3 0006 0。
8、007 其中： ( )为化合物1， 化学名称为2， 3开环蒲公英赛二酸； ()为化合物2， 化学名 称为1-羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0008 所述阿拉套大戟三萜化合物的制备方法， 按下列步骤进行： 0009 a、 以阿拉套大戟为原料， 粉碎后， 在室温， 用5倍体积的丙酮或体积浓度95甲醇 或乙醇水溶液渗漉提取或丙酮回流提取， 然后真空浓缩得到浓缩液； 0010 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈溶解分散处理， 再用环己烷或正己烷进行萃取3-5 次， 真空蒸干溶剂， 得到萃取物浸膏； 0011 c、 将步骤b得到的萃取物浸膏经硅胶柱层析法、 反相柱层析法或葡聚糖凝胶LH-20 柱层析。
9、法中的一种或两种方式进行分离， 即得到蒲公英赛类三萜化合物， 其中化合物1为2， 3开环蒲公英赛二酸； 化合物2为1-羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0012 步骤c中硅胶柱层析法为常压或加压柱层析， 填料为硅胶， 洗脱剂为正己烷和乙酸 乙酯的混合物或正己烷和丙酮的混合物或石油醚和乙酸乙酯的混合物， 采用等度洗脱或梯 度洗脱。 0013 步骤c中反向柱层析法为常压或加压柱层析， 洗脱剂为体积浓度为70乙腈水溶 液等度洗脱， 或体积浓度为80甲醇水溶液等度洗脱。 0014 步骤c中葡聚糖凝胶LH-20柱层析法的洗脱剂为体积比1:1的甲醇:三氯甲烷等度 洗脱或体积浓度10-80甲醇水梯度洗脱。。
10、 附图说明 0015 图1为本发明化合物1的1H谱图； 0016 图2为本发明化合物1的13CNMR谱图； 0017 图3为本发明化合物1的高分辨质谱图； 0018 图4为本发明化合物2的1H谱图； 0019 图5为本发明化合物2的13CNMR谱图； 0020 图6为本发明化合物2的高分辨质谱图。 具体实施方式 0021 实施例1： 0022 a、 取阿拉套大戟13Kg， 粉碎后， 室温下用5倍体积的丙酮溶液渗漉提取， 然后真空 浓缩得到浓缩液； 0023 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈溶解分散处理， 再用环己烷萃取3次， 真空蒸干溶 说明书 2/8 页 4 CN 106543259 A 4。
11、 剂， 得到萃取物浸膏； 0024 c、 将步骤b得到的萃取物浸膏用硅胶柱色谱分离(色谱分离 )， 用体积比100:0-0: 100的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比40:1的正己烷-乙酸乙酯等度的洗脱下来 的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物1的流分， 再将流分经体积比100: 0-5:1的正己烷-乙酸乙酯(色谱分离)硅胶柱子分离及纯化， 用100-150mL体积比30:1的 正己烷-乙酸乙酯的洗脱液进行等度洗脱， 合并流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到 化合物1， 再进一步用正己烷-乙酸乙酯洗脱纯化， 即得到纯的化合物1， 化学名称为2， 3开环 。
12、1- 蒲公英赛二酸； 再用体积比25:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱的流分， 经硅胶薄层检测 分析， 得到含有化合物2的粗流分， 再将粗流分经硅胶柱子柱进行纯化(色谱分离)， 经体 积比100:0-5:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比35:1的正己烷-乙酸乙酯等度 洗脱下来的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到纯的化合物2， 化学名称为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0025 实施例2 0026 a、 取阿拉套大戟药材13Kg， 粉碎后， 室温下用体积浓度95的甲醇水溶液渗漉提 取， 然后真空浓缩得到浓缩液； 0027 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈溶解分散处理。
13、， 再用正己烷萃取4次， 真空蒸干溶 剂， 得到萃取物浸膏； 0028 c、 将步骤b得到的萃取物浸膏经硅胶柱色谱分离(色谱分离 )， 用体积比100:0- 10:100的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比40:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来 的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物1的流分； 再将流分经葡聚糖凝胶 LH-20色谱柱分离(色谱分离)， 用300-400mL体积比1:1的甲醇:氯仿洗脱液进行洗脱纯 化， 合并流分， 得到纯的化合物1， 化学名称为2， 3开环1- 蒲公英赛二酸； 再用25:1的正己 烷-乙酸乙酯等度洗脱的流分， 经硅胶薄层检测分析， 得到。
14、含有化合物2的粗流分， 再将粗流 分经硅胶柱子柱进行纯化(色谱分离)， 用体积比100:0-5:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度 洗脱， 将体积比35:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测 分析， 得到纯的化合物2， 化学名称为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0029 实施例3 0030 a、 取阿拉套大戟药材13Kg， 粉碎后， 用丙酮溶液在温度35进行回流提取， 然后真 空浓缩得到浓缩液； 0031 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈溶解分散， 再用正己烷萃取5次， 真空蒸干溶剂， 得 到萃取物浸膏； 0032 c、 将步骤b得到的萃取物浸膏经硅胶柱色谱。
15、分离(色谱分离 )， 用体积比100:0- 10:100的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比40:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来 的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物1的流分， 再将流分经硅胶柱色谱 分析(色谱分离)， 用体积比100:0-15:1的正己烷:丙酮进行梯度洗脱纯化， 将体积比50:1 正己烷:丙酮等度洗脱下来的流分， 经硅胶薄层析检测分析， 得到纯的化合物1， 化学名称为 2， 3开环1- 蒲公英赛二酸； 再用体积比25:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来的流分， 经硅 胶薄层检测分析， 得到含有化合物2的粗流分， 将粗流分经硅胶柱子柱进行纯化(色谱分。
16、离 )， 以体积比100:0-5:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比35:1的正己烷-乙酸 说明书 3/8 页 5 CN 106543259 A 5 乙酯等度洗脱下来的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到纯的化合物2， 化学名称为 1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0033 实施例4 0034 a、 取阿拉套大戟药材13Kg， 粉碎后， 室温下用200L的体积浓度为95的乙醇水溶 液渗漉提取， 然后真空浓缩得到浓缩液； 0035 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈溶解分散处理， 再用正己烷萃取3次， 真空蒸干溶 剂， 得到萃取物浸膏； 0036 c、 将步骤b得到的萃。
17、取物浸膏经硅胶柱色谱分离(色谱分离 )， 用体积比100:0- 10:100的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比40:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来 的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物1的流分， 将流分经反相柱(C185 m4.6*250mm)进行分离纯化(色谱分离)， 用体积浓度70的乙腈水溶液等度洗脱进行纯 化， 得到纯的化合物1， 化学名称为2， 3开环1- 蒲公英赛二酸； 再用体积比25:1的正己烷-乙 酸乙酯等度洗脱下来的流分， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物2的粗流分， 再将流分 经反相柱(色谱分离)进行纯化， 用体积浓度56的乙腈水溶液等度洗。
18、脱进行纯化， 得到 纯的化合物2， 化学名称为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0037 实施例5 0038 a、 取阿拉套大戟13Kg， 粉碎后， 室温下用5倍体积的丙酮溶液渗漉提取， 然后真空 浓缩得到浓缩液； 0039 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈分散处理， 再用环己烷萃取4次， 真空蒸干溶剂， 得 到萃取物浸膏； 0040 c、 将步骤b得到的萃取物浸膏经硅胶柱色谱分离(色谱分离 )， 用体积比100:0- 10:100的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比40:1的正己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来 的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物1的流分， 将流。
19、分经反相柱(C185 m4.6*250mm)进行分离纯化(色谱分离)， 用体积浓度80的甲醇水溶液等度洗脱进行纯 化， 得到纯的化合物1， 化学名称为2， 3开环1- 蒲公英赛二酸； 再用体积比25:1的正己烷-乙 酸乙酯等度洗脱下来的流分， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物2的粗流分， 将粗流分 经反相柱(色谱分离)进行纯化， 用体积浓度71的甲醇水溶液等度洗脱进行纯化， 得到 纯的化合物2， 化学名称为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0041 实施例6： 0042 a、 取阿拉套大戟13Kg， 粉碎后， 室温下用5倍体积的丙酮溶液渗漉提取， 然后真空 浓缩得到浓缩液； 004。
20、3 b、 将步骤a得到的浓缩液用乙腈分散处理， 再用环己烷萃取5次， 真空蒸干溶剂， 得 到萃取物浸膏； 0044 c、 将步骤b得到的萃取物浸膏经硅胶柱色谱分离(色谱分离 )， 用体积比100:0- 10:100的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比40:1的石油醚-乙酸乙酯等度洗脱下来 的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物1的流分， 再将流分经硅胶柱色谱 分析(色谱分离)， 用体积比100:0-15:1的正己烷:乙酸乙酯进行梯度洗脱纯化， 将体积比 50:1正己烷:乙酸乙酯洗等度脱下来的流分， 经硅胶薄层析检测分析， 得到纯的化合物1， 化 学名称为2， 3开环1。
21、- 蒲公英赛二酸； 再用体积比25:1的石油醚-乙酸乙酯等度洗脱下来的 说明书 4/8 页 6 CN 106543259 A 6 流分， 经硅胶薄层检测分析， 得到含有化合物2的粗流分， 将粗流分经硅胶柱子柱进行纯化 (色谱分离)， 以体积比100:0-5:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱， 将体积比35:1的正 己烷-乙酸乙酯等度洗脱下来的流份， 回收溶剂， 经硅胶薄层检测分析， 得到纯的化合物2， 化学名称为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯。 0045 实施例7 0046 本发明所述的阿拉套大戟三萜类化合物及其制备方法， 所得的2个三萜化合物采 用薄层层析法检测分析进行结构确定： 0。
22、047 化合物1化学名称为2， 3开环1- 蒲公英赛二酸， 为白色粉末状固体， 薄层板喷浓硫 酸-甲醇显色剂溶液， 显深紫色， HR-TOF-MS(m/z)给出的准分子离子峰M-H -471.3490 (cal.471.3068)， 确定分子式为C30H48O4； 0048 1H NMR和13C NMR数据见表1； 0049 表1.化合物1的1H NMR数据400MHz, (ppm)(JHz)150MHz(13C)CDCl3 0050 说明书 5/8 页 7 CN 106543259 A 7 0051 0052 根据1H NMR和13C NMR及二维谱数据确定化合物1的结构为2， 3开环， 1。
23、 蒲公英赛二酸； 0053 化合物2化学名称为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公英赛内酯， 为白色粉末状固体， 薄层板 说明书 6/8 页 8 CN 106543259 A 8 喷浓硫酸-甲醇显色剂溶液， 显深紫色， HR-TOF-MS(m/z)给出的准分子离子峰M-H - 442.2319(cal.442.1308)， 确定分子式为C29H46O3； 0054 1H NMR和13C NMR数据见表2； 0055 表2.化合物2的1H NMR数据400MHz, (ppm)(JHz)150MHz(13C)CDCl3 0056 说明书 7/8 页 9 CN 106543259 A 9 0057 0058 根据1H NMR和13C NMR及二维谱数据确定化合物2的结构为1- 羟基， 2， 3闭环蒲公 英赛内酯。 说明书 8/8 页 10 CN 106543259 A 10 图1 图2 说明书附图 1/4 页 11 CN 106543259 A 11 图3 说明书附图 2/4 页 12 CN 106543259 A 12 图4 图5 说明书附图 3/4 页 13 CN 106543259 A 13 图6 说明书附图 4/4 页 14 CN 106543259 A 14 。