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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310705759.5 (22)申请日 2013.12.19 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104726341 A (43)申请公布日 2015.06.24 (73)专利权人 漳州市英格尔农业科技有限公司 地址 363000 福建省漳州市芗城区下洲路 16号龙江富成201室 (72)发明人 陈丽萍 (74)专利代理机构 厦门市首创君合专利事务所 有限公司 35204 代理人 李雁翔 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12R 1。
2、/645(2006.01) (56)对比文件 CN 1587375 A,2005.03.02, WO 02/065836 A3,2002.08.29, Qiong-Bo Hu et al.Investigation of destruxin A and B from 80 Metarhizium strains in China, and the optimization of cultural conditions for the strain MaQ10. Toxicon .2006,第48卷第491-498页. 张礼生等.绿僵菌生物农药的研制与应用. 中国生物防治 .2006,第22卷第。
3、141-146页. 审查员 刘东川 (54)发明名称 一种黑僵菌的培养方法 (57)摘要 本发明公开了一种黑僵菌的培养方法， 其包 括如下步骤：（1） 培养容器灭菌， 待用； 香蕉去皮, 高压灭菌后冷却， 加到培养容器上待用；（2） 接 种： 将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉 上；（3） 培养： 培养温度控制在2030， 培养室 相对湿度控制在95%以上,培养至菌丝体满布培 养基表面；（4） 获取： 待培养基表面菌丝全面复盖 变黑， 培养室的相对湿度缓慢降低,至培养基里 外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。 采用 本发明的方法， 培养周期可以缩短至5天， 而产品 的含孢子量可达到1000。
4、亿/g， 比现有技术提高10 倍以上。 本发明可采用次品香蕉， 其价格低廉， 成 本低。 权利要求书1页 说明书3页 CN 104726341 B 2018.11.27 CN 104726341 B 1.一种黑僵菌的培养方法， 其特征在于： 采用香蕉作为培养基， 将黑僵菌孢子或菌体接 种到培养基上进行培养， 其中， 所述的香蕉去果皮,高压灭菌后冷却， 加到培养容器上待用； 然后将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上进行培养； 培养温度控制在2030， 培 养室相对湿度控制在95以上,培养至菌丝体满布培养基表面。 2.如权利要求1所述的一种黑僵菌的培养方法， 包括如下步骤： (1)培养容器灭菌，。
5、 待用； 香蕉去果皮,高压灭菌后冷却， 加到培养容器上待用； (2)接种： 将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上； (3)培养： 培养温度控制在2030， 培养室相对湿度控制在95以上,培养至菌丝体 满布培养基表面； (4)获取： 待培养基表面菌丝全面复盖变黑， 培养室的相对湿度缓慢降低,至培养基里 外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。 3.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法， 其特征在于： 步骤(1)的所述的培养容 器为开放式的培养容器。 4.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法， 其特征在于： 步骤(1)的香蕉培养基在 培养容器上的厚度为1-5cm。 5.如权利要求3所述的一种黑。
6、僵菌的培养方法， 其特征在于： 步骤(2)的接种比例为， 按 重量比， 液固比为0.5-5： 10。 6.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法， 其特征在于： 步骤(3)培养室温度控制 在2024； 培养室相对湿度在24h内控制在95以上,2448h内控制在100,可通过每 天喷无菌水来调节培养室的相对湿度， 2d后停止喷水。 7.如权利要求6所述的一种黑僵菌的培养方法， 其特征在于： 步骤(4)中， 培养室的温度 提高到25-26,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至第5d,培养基里外都长满乳黄色的 孢子时可进行干燥处理。 权利要求书 1/1 页 2 CN 104726341 B 2 一种黑僵。
7、菌的培养方法 技术领域 0001 本发明涉及微生物培养领域， 具体的， 涉及一种黑僵菌的培养方法。 背景技术 0002 黑僵菌(Metarhizium anisopliae)为一种可以杀死昆虫的真菌， 其应用范围有鳞 翅目昆虫： 斜纹夜蛾(黑肚虫)、 甜菜夜蛾(管仔虫)、 小菜蛾(吊丝虫)、 玉米穗虫(青虫)等。 鞘 翅目昆虫： 金龟子(鸡母虫)、 叩头虫(金针虫)等。 直翅目昆虫： 蝗虫等。 黑僵菌分生孢子被害 虫摄食后， 沿肠道进入中肠， 在中肠中释放出毒素， 使中肠细胞内的线粒体和内质网结构改 变， 细胞核萎缩而死亡。 受黑僵菌感染死亡的幼虫之后体表满布分生孢子， 借由分生孢子的 传播于。
8、田间行成重复有效的感染源。 0003 现有的黑僵菌培养方法为谷壳、 麦麸等固体培养基进行培养， 孢子液接种， 7天后 开始收孢子， 其孢子量一般在100亿/克。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种新的黑僵菌的培养方法。 0005 本发明提供的技术方案如下： 0006 一种黑僵菌的培养方法， 其特征在于： 采用香蕉去皮之后作为培养基， 将黑僵菌孢 子或菌体接种到培养基上进行培养。 0007 较佳地， 前述的一种黑僵菌的培养方法， 包括如下步骤： 0008 （1） 培养容器灭菌， 待用； 香蕉去皮,高压灭菌后冷却， 加到培养容器上待用； 0009 （2） 接种： 将黑僵菌孢子或菌体接种到。
9、灭菌后的香蕉上； 0010 （3） 培养： 培养温度控制在2030， 培养室相对湿度控制在95%以上,培养至菌丝 体满布培养基表面； 0011 （4） 获取： 待培养基表面菌丝全面复盖变黑， 培养室的相对湿度缓慢降低,至培养 基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。 0012 较佳地， 步骤 （1） 的所述的培养容器为开放式的培养容器， 例如可以采用敞口容 器， 如盘状、 碗状、 长方体等各种形状。 0013 较佳地， 步骤 （1） 的香蕉培养基在培养容器上的厚度为1-5cm。 更佳地为3-4cm。 0014 较佳地， 步骤 （2） 的接种比例为， 按重量比， 接种的孢子液体与培养基之间的液。
10、固 比为0.5-5： 10。 0015 较佳地， 步骤 （3） 培养室温度控制在2024； 培养室相对湿度在24h内控制在95% 以上,2448h内控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度， 2d后停止喷 水。 0016 较佳地， 步骤 （4） 中， 培养室的温度提高到25-26,培养室的相对湿度缓慢降 低,培养至第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。 0017 采用本发明的方法， 培养周期可以缩短至5天， 而产品的含孢子量可达到1000亿/ 说明书 1/3 页 3 CN 104726341 B 3 g， 比现有技术提高10倍以上。 本发明可采用次品香蕉， 。
11、其价格低廉， 成本低。 具体实施方式 0018 实施例1 0019 香蕉去皮作为固体培养基。 固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2,保压 60min,冷却后待用常压灭菌， 利用蒸气消毒柜消毒， 100保温2h,冷却待用。 0020 洗干净培养盘， 所述的培养盘为长方形,规格为50cm*75cm*10cm， 然后放于常压灭 菌柜灭菌30min,冷却待用。 拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦 洗,培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。 培养支架用4脚式 长方体钢架结构,上、 下间距20cm,支架先用新洁尔灭擦洗,然后与培养室一起进行熏蒸灭 菌。
12、。 0021 采用拌种机进行接种,黑僵菌孢子接种液 （含孢子105-106个/ml） 与培养基的液固 比为0.5:1.5,固体培养基厚度为3-4cm。 0022 培养室温度控制在2024,特别在第2464h降低室温,以控制室温不超过30 。 培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,2448h内控制在100%,可通过每天喷无菌水 来调节培养室的相对湿度,2d后停止喷水,这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。 0023 揭盖、 培养3d后,待培养基表面菌丝全面复盖变黑,可揭去培养盘表面的簸箕,两 盘对合,中间留些间隙,培养室的温度可提高到25,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至 第5d,培养基里。
13、外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。 0024 5天开始收孢， 收孢后， 产品含孢量超过1000亿/克。 0025 实施例2 0026 香蕉去皮作为固体培养基。 固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2,保压 60min,冷却后待用常压灭菌， 利用蒸气消毒柜消毒， 100保温2h,冷却待用。 0027 洗干净培养盘， 所述的培养盘为长方形,规格为50cm*75cm*10cm， 然后放于常压灭 菌柜灭菌30min,冷却待用。 拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦 洗,培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。 培养支架用4脚式 长方体钢架结构,。
14、上、 下间距20cm,支架先用新洁尔灭擦洗,然后与培养室一起进行熏蒸灭 菌。 0028 采用拌种机进行接种,黑僵菌孢子接种液 （含孢子105-106个/ml） 与培养基的液固 比为2:10,固体培养基厚度为2-3cm。 0029 培养室温度控制在2024。 培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,2448h内 控制在100%,可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度,2d后停止喷水,这时培养基的 内外已长满菌丝在培养基表面。 0030 揭盖、 培养3d后,待培养基表面菌丝全面复盖变黑,可揭去培养盘表面的簸箕,两 盘对合,中间留些间隙,培养室的温度可提高到25,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至。
15、 第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。 0031 5天开始收孢， 收孢后， 产品含孢量超过1000亿/克。 0032 实施例3 0033 香蕉去皮作为固体培养基。 固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2,保压 说明书 2/3 页 4 CN 104726341 B 4 60min,冷却后待用常压灭菌， 利用蒸气消毒柜消毒， 100保温2h,冷却待用。 0034 洗干净培养盘,所述的培养盘为长方形， 规格为50cm*75cm*10cm， 然后放于常压灭 菌柜灭菌30min,冷却待用。 拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦 洗,培养室每立方米空间用5。
16、ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。 培养支架用4脚式 长方体钢架结构,上、 下间距20cm,支架先用新洁尔灭擦洗,然后与培养室一起进行熏蒸灭 菌。 0035 采用拌种机进行接种,黑僵菌孢子接种液 （含孢子105-106个/ml） 与培养基的液固 比为1:10,固体培养基厚度为5cm。 0036 培养室温度控制在2024,特别在第2464h降低室温,以控制室温不超过30 。 培养室相对湿度在24h内控制在95%以上,2448h内控制在100%,可通过每天喷无菌水 来调节培养室的相对湿度,2d后停止喷水,这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。 0037 揭盖、 培养3d后,待培养基表面菌丝全面复盖变黑,可揭去培养盘表面的簸箕,两 盘对合,中间留些间隙,培养室的温度可提高到25,培养室的相对湿度缓慢降低,培养至 第5d,培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。 0038 5天开始收孢， 收孢后， 产品含孢量超过1000亿/克。 0039 上述仅为本发明的具体实施例， 但本发明的设计构思并不局限于此， 凡利用此构 思对本发明进行非实质性的改动， 均应属于侵犯本发明保护范围的行为。 说明书 3/3 页 5 CN 104726341 B 5 。