《从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法.pdf（5页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610728085.4 (22)申请日 2016.08.25 (71)申请人 桂林益天成生物科技有限公司 地址 541004 广西壮族自治区桂林市七星 区空明西路新建区五号小区创业大厦 B座B303号房 (72)发明人 谢冬养黄健军陆美珍叶出良 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 周兆阳 (51)Int.Cl. C07J 63/00(2006.01) (54)发明名称 从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法 (57)摘要 本发明公开了一种。
2、从积雪草中提取羟基积 雪草酸的方法， 包括以下步骤： 1)将积雪草粉碎， 用6070v乙醇溶液回流提取， 将提取液过滤， 滤液回收溶剂， 再加4050水溶解， 过滤， 将滤 渣溶于5060v乙醇溶液， 得到粗提液； 2)往粗 提液加入稀土盐混合， 搅匀， 得到混合液； 3)将混 合液上X-5型号大孔树脂柱， 先水洗至无色， 然后 用体积浓度为2030v乙醇洗脱， 薄层层析跟 踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇洗脱液， 再用体 积浓度为4050的乙醇洗脱， 薄层层析跟踪检 测， 收集含羟基积雪草酸的乙醇洗脱液， 回收乙 醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 本发明提取的羟基 积雪草酸纯度高， 收率大。 。
3、权利要求书1页 说明书3页 CN 106336448 A 2017.01.18 CN 106336448 A 1.从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法， 其特征在于： 包括以下步骤： 1)将积雪草粉碎， 用6070v乙醇溶液回流提取， 将提取液过滤， 滤液回收溶剂， 再加 4050水溶解， 过滤， 将滤渣溶于5060v乙醇溶液， 得到粗提液； 2)往粗提液加入稀土盐混合， 搅匀， 得到混合液； 3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱， 先水洗至无色， 然后用体积浓度为2030v乙醇 洗脱， 薄层层析跟踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇洗脱液， 再用体积浓度为4050的乙醇 洗脱， 薄层层析跟踪检测， 收集。
4、含羟基积雪草酸的乙醇洗脱液， 将羟基积雪草酸洗脱液回收 乙醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 2.根据权利要求1所述的从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法， 其特征在于： 步骤1) 中， 乙醇的用量为积雪草重量的1020倍， 回流提取13次， 每次13h。 3.根据权利要求1所述的从积雪草中提取积雪草酸的方法， 其特征在于： 步骤2)中， 所 述稀土盐为稀土氯化物、 稀土硫酸盐或稀土硝酸盐。 4.根据权利要求1所述的从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法， 其特征在于： 步骤2) 中， 所述稀土盐的用量为粗提液重量的0.10.5。 5.根据权利要求1所述的从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法， 其特征在于： 。
5、步骤3) 中， 混合液上柱速度为0.50.8BV/h。 6.根据权利要求1所述的从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法， 其特征在于： 步骤3) 中， 2030v乙醇洗脱速度为22.5BV/h， 4050v的乙醇洗脱速度为23BV/h。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106336448 A 2 从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法 技术领域 0001 本发明属于生物提取技术领域， 具体涉及一种从积雪草中提取羟基积雪草酸的方 法。 背景技术 0002 积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)为伞形科积雪草树植物， 因其叶子酷似马 蹄状或半个铜钱， 所以又名马蹄草、 连钱草等， 民。
6、间也有地方称其为胡薄荷、 地钱草等。 积雪 草在许多国家和地区的传统医药领域中的应用历史悠久， 我国中医中药对积雪草的内服和 外用已有两千年历史， 最早被 神农本草经 一书所收载。 据 本草纲目 记载， 积雪草味苦、 辛， 性寒， 无毒， 归肝、 脾、 肾、 胃经， 其功效为活血、 消肿止痛， 并有清热解毒、 利尿等。 积雪草 的化学成分主要有三萜类、 黄酮类、 多炔烯类和挥发油类等。 三萜类主要有三萜皂苷类， 如 积雪草苷、 羟基积雪草苷等， 和三萜酸类， 如积雪草酸、 羟基积雪草酸等。 积雪草的化学成分 中， 三萜酸类物质是研究最早， 生物学活性研究最深入的一大类组分。 积雪草三萜酸类物质。
7、 主要由积雪草酸和羟基积雪草酸组成， 它们属于乌苏烷型的五环三萜酸类， 具有治疗皮肤 创伤， 抗炎、 抗抑郁、 抗肿瘤和修复神经损伤、 保护心脑血管等多种药理作用。 羟基积雪草酸 一般先用溶剂法提取， 然后采用有机溶剂萃取， 最后过硅胶色谱柱， 用石油醚-丙酮体系洗 脱。 然而上述方法不仅繁琐， 有机溶剂不易分离， 目标成分的损耗较大， 收率较低， 而且提取 的羟基积雪草酸的纯度也较小。 发明内容 0003 本发明解决的技术问题是提供一种从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法， 该方法 提取得到的羟基积雪草酸收率大， 纯度高。 0004 本发明提供的技术方案是提供一种从积雪草中提取羟基积雪草酸的方法。
8、， 包括以 下步骤： 0005 1)将积雪草粉碎， 用6070v乙醇溶液回流提取， 将提取液过滤， 滤液回收溶剂， 再加4050水溶解， 过滤， 将滤渣溶于5060v乙醇溶液， 得到粗提液； 0006 2)往粗提液加入稀土盐混合， 搅匀， 得到混合液； 0007 3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱， 先水洗至无色， 然后用体积浓度为2030v 乙醇洗脱， 薄层层析跟踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇洗脱液， 再用体积浓度为4050的 乙醇洗脱， 薄层层析跟踪检测， 收集含羟基积雪草酸的乙醇洗脱液， 将羟基积雪草酸洗脱液 回收乙醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 0008 步骤1)中， 乙醇的用量为积。
9、雪草重量的1020倍， 回流提取13次， 每次13h。 0009 体积浓度为6070的乙醇可充分溶解积雪草中的三萜类物质， 包括三萜类皂苷 和三萜酸类物质。 由于积雪草皂苷的分子中往往结合有多数糖分子， 羟基数目多， 能表现出 一定的亲水性， 但是亲水性不强， 微溶于水中， 而三萜酸类极性较小， 不能溶于水中。 因此采 用4050温水可帮助积雪草总皂苷溶解， 积雪草三萜酸类物质不溶于热水中， 将滤液过 说明书 1/3 页 3 CN 106336448 A 3 滤， 取滤渣溶于乙醇， 可达到去除积雪草总皂苷的目的。 0010 步骤2)中， 所述稀土盐为稀土氯化物、 稀土硫酸盐或稀土硝酸盐。 稀土。
10、氯化物可以 是氯化镧、 氯化铈、 氯化镨、 氯化钕、 氯化钐、 氯化铕、 氯化钆、 氯化铽、 氯化镝、 氯化钬、 氯化 铒、 氯化铥、 氯化镱、 氯化镥、 氯化钪和氯化钇； 稀土硫酸盐可以是硫酸镧、 硫酸铈、 硫酸镨、 硫酸钕、 硫酸钐、 硫酸铕、 硫酸钆、 硫酸铽、 硫酸镝、 硫酸钬、 硫酸铒、 硫酸铥、 硫酸镱、 硫酸镥、 硫酸钪和硫酸钇； 稀土硝酸盐可以是硝酸镧、 硝酸铈、 硝酸镨、 硝酸钕、 硝酸钐、 硝酸铕、 硝酸 钆、 硝酸铽、 硝酸镝、 硝酸钬、 硝酸铒、 硝酸铥、 硝酸镱、 硝酸镥、 硝酸钪和硝酸钇。 0011 稀土元素与三萜酸类物质上羟基、 羧基上的氧原子形成配位键和， 形成。
11、化学亲和 力， 根据软硬酸碱理论， 由于稀土是硬酸， 积雪草三萜酸类是软碱， 因此， 两者的结合不是特 别稳固。 0012 所述稀土盐的用量为粗提液重量的0.10.5。 此时， 稀土元素可与三萜酸类物 质充分配位。 0013 步骤3)中， X-5型号大孔树脂为非极性树脂， 粒径为0.31.25mm， 比表面积为500 600m2/g， 平均孔径为2930nm。 其孔径远远大于三萜酸类物质的分子粒径， 孔径越大， 截 留的物质越少， 杂质越少。 而稀土的配位数较大， 与三萜酸类物质进行配位键和的含氧官能 团数目往往达不到其最高配位数， 因此稀土还会与大孔树脂中的C产生交联， 以达到吸附的 效果。。
12、 0014 为了保证稀土元素与大孔树脂的交联， 混合液的上柱速度越小， 效果越好， 经申请 人大量实验， 混合液上柱速度为0.50.8BV/h， 交联效果最好。 0015 由于稀土元素与三萜酸类物质的结合十分不稳固， 而三萜酸类物质与乙醇的亲和 力极强， 采用乙醇溶液将三萜酸类物质顺利从树脂柱中洗脱下来。 又由于积雪草酸三个位 点上有羟基， 这三个位点都是配位原子与稀土原子进行配位， 而羟基积雪草酸比积雪草酸 多一个羟基， 配位能力更强。 因此， 在洗脱时， 积雪草酸先被洗脱下来， 羟基积雪草酸后被洗 脱下来。 采用体积浓度为2030的乙醇可优先将积雪草酸洗脱， 而不混入羟基积雪草酸， 乙醇洗。
13、脱速度为22.5BV/h为宜。 然后采用体积浓度为4050的乙醇溶液可将羟基积雪 草酸洗脱下来， 洗脱速度以23BV/h为宜。 0016 与现有技术相比， 本方法针对目标成分进行吸附和解吸附， 提取的羟基积雪草酸 收率高达95以上， 纯度高达99.5以上。 具体实施方式 0017 以下具体实施例对本发明作进一步阐述， 但不作为对本发明的限定。 0018 以下百分数为体积百分数。 0019 实施例1 0020 1)将积雪草粉碎， 加入积雪草总重10倍的60乙醇溶液回流提取1次， 每次1h， 将 提取液过滤， 滤液回收溶剂， 再加40水溶解， 过滤， 将滤渣溶于50v乙醇溶液， 得到粗提 液； 0。
14、021 2)往粗提液加入其重量0.1的氯化镧混合， 搅匀， 得到混合液； 0022 3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱， 上柱速度为0.5BV/h， 先水洗至无色， 然后用体 积浓度为20v乙醇洗脱， 洗脱速度为2BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇洗 说明书 2/3 页 4 CN 106336448 A 4 脱液； 再用体积浓度为40的乙醇洗脱， 洗脱速度为2BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含羟基 积雪草酸的乙醇洗脱液， 将羟基积雪草酸洗脱液回收乙醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 0023 经HLPC分析， 羟基积雪草酸的回收率为95.20以上， 纯度高达99.51以上。。
15、 0024 实施例2 0025 1)将积雪草粉碎， 加入积雪草总重20倍的70乙醇溶液回流提取3次， 每次3h， 将 提取液合并， 过滤， 滤液回收溶剂， 再加50水溶解， 过滤， 将滤渣溶于60v乙醇溶液， 得到 粗提液； 0026 2)往粗提液加入其重量0.5的硫酸铈混合， 搅匀， 得到混合液； 0027 3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱， 上柱速度为0.8BV/h， 先水洗至无色， 然后用体 积浓度为30v乙醇洗脱， 洗脱速度为2.5BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇 洗脱液； 再用体积浓度为50的乙醇洗脱， 洗脱速度为3BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含羟 基积。
16、雪草酸的乙醇洗脱液， 将羟基积雪草酸洗脱液回收乙醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 0028 经HLPC分析， 羟基积雪草酸的回收率为95.13以上， 纯度高达99.53以上。 0029 实施例3 0030 1)将积雪草粉碎， 加入积雪草总重15倍的65乙醇溶液回流提取2次， 每次2h， 将 提取液合并， 过滤， 滤液回收溶剂， 再加45水溶解， 过滤， 将滤渣溶于55v乙醇溶液， 得到 粗提液； 0031 2)往粗提液加入其重量0.3的硝酸镨混合， 搅匀， 得到混合液； 0032 3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱， 上柱速度为0.6BV/h， 先水洗至无色， 然后用体 积浓度为25v乙醇洗脱。
17、， 洗脱速度为2.2BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇 洗脱液； 再用体积浓度为45的乙醇洗脱， 洗脱速度为2.5BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含 羟基积雪草酸的乙醇洗脱液， 将羟基积雪草酸洗脱液回收乙醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 0033 经HLPC分析， 羟基积雪草酸的回收率为95.15以上， 纯度高达99.60以上。 0034 实施例4 0035 1)将积雪草粉碎， 加入积雪草总重10倍的70乙醇溶液回流提取3次， 每次1h， 将 提取液合并， 过滤， 滤液回收溶剂， 再加50水溶解， 过滤， 将滤渣溶于50v乙醇溶液， 得到 粗提液； 0036 2)往粗提液加入其重量0.1的氯化铒混合， 搅匀， 得到混合液； 0037 3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱， 上柱速度为0.8BV/h， 先水洗至无色， 然后用体 积浓度为20v乙醇洗脱， 洗脱速度为2.5BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含积雪草酸的乙醇 洗脱液； 再用体积浓度为40的乙醇洗脱， 洗脱速度为3BV/h， 薄层层析跟踪检测， 收集含羟 基积雪草酸的乙醇洗脱液， 将羟基积雪草酸洗脱液回收乙醇， 干燥， 得到羟基积雪草酸。 0038 经HLPC分析， 羟基积雪草酸的回收率为95.35以上， 纯度高达99.56以上。 说明书 3/3 页 5 CN 106336448 A 5 。