技术领域
本发明涉及一种H5N6亚型流感病毒的检测方法，属于生物检测技术领域。
背景技术
近些年来禽流感病毒不断地偶发感染人类，由于较高的发病率和死亡率引起公众的广泛关注。甲型H5N1高致病性禽流感病毒(Highly pathogenic avian influenza，HPAI)于1996年在中国广东地区首次发现，而在1997年该病毒在中国香港首次感染人类。目前，H5亚型禽流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)基因不断演化成多个分支，重配了不同的神经氨酸酶 (neuraminidase,NA)基因形成一批新亚型病毒：2008年在鸭子中发现了新型H5N5重配病毒，2010年以后在中国部分地区活禽中也不断发现H5N2、H5N6和H5N8等新亚型禽流感病毒。2014年4月，中国四川省首次发现人感染H5N6禽流感病毒，12月广东省发现第二例 H5N6病例，2015年2月和7月云南省分别发现两例，而安徽省于2016年4月在宣城宁国市发现本省首例H5N6禽流感病例。因此对于禽流感感染病例的治疗和疫情的有效控制，需要建立一套快速、敏感、准确的序列分析方法，而常规监测只能针对该病毒型别进行判断，不能获得有效的全基因组信息，从而无法掌握该病毒的流行特点和变异情况。
发明内容
本发明目的在于提供一种H5N6亚型流感病毒全基因组测序试剂盒及其测序方法。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：一种H5N6亚型流感病毒全基因组测序试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括16对引物，其碱基序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.32 所示。
优选的技术方案为：所述引物两端含有不参与目的片段扩增的通用核苷酸序列，该通用核苷酸序列为13bp的通用测序引物互补序列的寡核苷酸片段。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：一种H5N6亚型流感病毒全基因组测序方法，包括下列步骤：
第一步：从待测样本中提取流感病毒RNA；
第二步：采用权利要求1或2所述引物进行一步法RT-PCR扩增；
第三步：对第二步所得扩增产物进行电泳，然后根据结果进行判断；当所述反应产物分别均为使用的上下游引物位置之差时，即获得特异性条带，则扩增得到H5N6亚型流感病毒全基因组；
第四步：如果扩增得到H5N6亚型流感病毒全基因组，则对第二步所得扩增产物进行纯化和回收，然后进行测序。
优选的技术方案为：根据GenBank数据库中2015至2017年中国地区和GISAID数据库中 H5N6亚型流感病毒的HA、NA、PA、PB1、PB2、NP、M和NS基因，设计出16对特异性引物，该特异性引物的碱基序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.32所示。
优选的技术方案为：第二步所得扩增产物的大小在400bp到1500bp之间。
优选的技术方案为：提取流感病毒RNA包括：将140μL样本加入含有5.6μg Carrier RNA 的560μL的AVL裂解液中，按QIAamp Viral RNA Mini Handbook说明书提取病毒RNA。
优选的技术方案为：所述扩增产物采用琼脂糖凝胶切割回收，包括：将25μl的RT-PCR 产物于质量分数为1％的琼脂糖凝胶中进行电泳；然后将含有目的片段的琼脂糖凝胶进行切割，去除多余的琼脂糖凝胶,将含有目的条带的凝胶放入1.5ml的离心管中；加入300ul至400ul QC溶液，50℃水浴，每隔5min颠倒一次，直至溶胶全部溶解；将得到的液体转入套有收集管的柱子中，12000rpm离心1min；弃去废液，加入500ul QG溶液，12000rpm离心1min；弃去废液，加入700ul PE溶液，1300rmp离心1min；弃去废液，空管离心，1300rpm离心1min，弃去废液；接着讲离心柱套在新的离心管中，加入30ul预热的纯水，室温放置3到5分钟，然后11000rpm离心2分钟，即得回收产物。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
本发明的H5N6亚型流感病毒全基因组测序试剂盒及其测序方法，基因扩增引物扩增的序列涵盖了各个基因开放读码框的区域，扩产物大小在400bp至1500bp之间，方便产物的纯化和回收以及测序后对序列组装的要求。扩增引物两端增加了通用测序引物的互补序列，在进行测序反应时一个流感病毒全基因组只需两条测序引物。同时，由于引物为各测序公司通用，因此将扩增产物送往测序公司进行测序服务时只需提供引物名称，而不用附带大量自行设计的测序引物。本发明所述的测序方法操作简单，应用方便。
附图说明
图1为本发明实施例的检测结果示意图；H5N6亚型流感病毒10稀释后RNA为模板,106copies/μl；环境样本分离H5N6亚型流感病毒100稀释后RNA为模板，105copies/μ l；环境样本分离H5N6亚型流感病毒1000稀释后RNA为模板，104copies/μl。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
实施例：一种H5N6亚型流感病毒全基因组测序试剂盒及其测序方法
下载GenBank数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/FLU/FLU.html)中2015 至2017年中国地区和GISAID(http://platform.gisaid.org/epi3/frontend)数据库中H5N6亚型流感病毒的HA、NA、PA、PB1、PB2、NP、M和NS基因，软件比对分析不同病毒各个基因序列的一致性，选择相对保守区设计全基因组特异性扩增引物序列。引物设计中允许同一变异位点允许4个及4个以下简并碱基。将所提取的备选引物满足以下要求进行筛选：①特异性扩增序列长度在18bp至26bp之间；②Tm值在50℃至62℃之间；③GC％在40％至60％之间；④polyN≤ 4bp；⑤Hairpin≤4bp；⑥覆盖率>90％；⑦进行BLAST筛选，特异性分数>L×0.4。
得到如下所示的引物序列。
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-PB1-F1(SEQ ID No.1) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGCA H5N6-PB1-R1208(SEQ ID No.2) CAGGAAACAGCTATGACCAGAGGTCTTATYTTYTCDATTTTCTY H5N6-PB1-F1089(SEQ ID No.3) TGTAAAACGACGGCCAGTATGTTCGARAGYAARAGYATGAAR H5N6-PB1-R2341(SEQ ID No.4) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGCATTT H5N6-PB2-F1(SEQ ID No.5) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGTCA H5N6-PB2-R1214(SEQ ID No.6) CAGGAAACAGCTATGACCCCTTGGAACATCCTAGTGTCT H5N6-PB2-F1123(SEQ ID No.7) TGTAAAACGACGGCCAGTGGRTATGARGARTTCACAATGG H5N6-PB2-R2341(SEQ ID No.8) CAGGAAACAGCTATGACCTAGTAGAAACAAGGTCGTTT H5N6-PA-F7(SEQ ID No.9) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAGGTACTGATCCAAAAT H5N6-PA-R1255(SEQ ID No.10) CAGGAAACAGCTATGACCAATTCRYTCTGRAYCCARCW H5N6-PA-F1137(SEQ ID No.11) TGTAAAACGACGGCCAGTTGAGAAYATGGCACCDGARA H5N6-PA-R2233(SEQ ID No.12) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGTACTTTTT H5N6-HA-F1(SEQ ID No.13) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAAAAGCAGGGGT H5N6-HA-R1115(SEQ ID No.14) CAGGAAACAGCTATGACCCCATTCCYTGCCAYCCTCC H5N6-HA-F928(SEQ ID No.15) TGTAAAACGACGGCCAGTATAAAYTCHAGYATGCC H5N6-HA-R1776(SEQ ID No.16) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACWAGGGTGTTTT H5N6-NP-F1(SEQ ID No.17) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAAAAGCAGGGTA H5N6-NP-R1167(SEQ ID No.18) CAGGAAACAGCTATGACCATKGYYTCCATGTTCTCATT H5N6-NP-F899(SEQ ID No.19) TGTAAAACGACGGCCAGTGTRGCYAGYGGRTAYGA H5N6-NP-R1565(SEQ ID No.20) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGGTATTTTT H5N6-NA-F1(SEQID No.21) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAAAAGCAGGGTSAA H5N6-NA-R1126(SEQ ID No.22) CAGGAAACAGCTATGACCCYTTRCTAATWGTYCTHCCAAGCC H5N6-NA-F841(SEQ ID No.23) TGTAAAACGACGGCCAGTCAYATHGARGARTGYTCNTGCC H5N6-NA-R1461(SEQ ID No.24) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAWACAAGGGTSTTTTT H5N6-MP-F1(SEQ ID No.25) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGTAGAT H5N6-MP-R674(SEQ ID No.26) CAGGAAACAGCTATGACCTCATWGCYTGCACCATYTGYCT H5N6-MP-F605(SEQ ID No.27) TGTAAAACGACGGCCAGTGGRTCDAGYGARCARGCAGC H5N6-MP-R1027(SEQ IDNo.28) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGTAGTTTTT H5N6-NS-F1(SEQ ID No.29) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGGTG H5N6-NS-R639(SEQ ID No.30) CAGGAAACAGCTATGACCTTCYCCAAGCGAATCTYTGTA H5N6-NS-F507(SEQ ID No.31) TGTAAAACGACGGCCAGTTCACCATTACCTTCTCTTCC H5N6-NS-R890(SEQ ID No.32) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGGTGTTTT
以上所述的32条16对引物中，每对引物中其中一条与病毒基因的正向序列互补，另一条与病毒基因的反向序列互补。
本实施例的H5N6亚型流感病毒全基因组测序试剂盒包括上述32条16对特异性引物。还包括下列测序方法中的试剂。
引物包括长度为32～46bp的用于扩增不同基因的寡核苷酸片段。
引物用于扩增不同基因中，所述基因包括PB1、PB2、PA、HA、NA、NP、MP和NS。
所述引物具体为：H5N6-PB1-F1和H5N6-PB1-R1208、H5N6-PB1-F1089和H5N6-PB1-R23417、 H5N6-PB2-F1和H5N6-PB2-R1214、H5N6-PB2-F1123和H5N6-PB2-R2341、H5N6-PA-F7和 H5N6-PA-R1255、H5N6-PA-F1137和H5N6-PA-R2233、H5N6-HA-F1和H5N6-HA-R1115、 H5N6-HA-F928和H5N6-HA-R1776、H5N6-NP-F1和H5N6-NP-R1167、H5N6-NP-F899和 H5N6-NP-R1565、H5N6-NA-F1和H5N6-NA-R1126、H5N6-NA-F841和H5N6-NA-R1461、H5N6-MP-F1 和H5N6-MP-R674、H5N6-MP-F605和H5N6-MP-R1027、H5N6-NS-F1和H5N6-NS-R639、H5N6-NS-F507 和H5N6-NS-R890；所述引物序列依次如SEQ ID No.1～SEQ ID No.32所示。
扩增PB1基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-PB1-F1(SEQ ID No.1) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGCA H5N6-PB1-R1208(SEQ ID No.2) CAGGAAACAGCTATGACCAGAGGTCTTATYTTYTCDATTTTCTY H5N6-PB1-F1089(SEQ ID No.3) TGTAAAACGACGGCCAGTATGTTCGARAGYAARAGYATGAAR H5N6-PB1-R2341(SEQ ID No.4) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGCATTT
扩增PB2基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-PB2-F1(SEQ ID No.5) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGTCA H5N6-PB2-R1214(SEQ ID No.6) CAGGAAACAGCTATGACCCCTTGGAACATCCTAGTGTCT H5N6-PB2-F1123(SEQ ID No.7) TGTAAAACGACGGCCAGTGGRTATGARGARTTCACAATGG H5N6-PB2-R2341(SEQ ID No.8) CAGGAAACAGCTATGACCTAGTAGAAACAAGGTCGTTT
扩增PA基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-PA-F7(SEQ ID No.9) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAGGTACTGATCCAAAAT H5N6-PA-R1255(SEQ ID No.10) CAGGAAACAGCTATGACCAATTCRYTCTGRAYCCARCW H5N6-PA-F1137(SEQ ID No.11) TGTAAAACGACGGCCAGTTGAGAAYATGGCACCDGARA H5N6-PA-R2233(SEQ ID No.12) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGTACTTTTT
扩增HA基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-HA-F1(SEQ ID No.13) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAAAAGCAGGGGT H5N6-HA-R1115(SEQ ID No.14) CAGGAAACAGCTATGACCCCATTCCYTGCCAYCCTCC H5N6-HA-F928(SEQ ID No.15) TGTAAAACGACGGCCAGTATAAAYTCHAGYATGCC H5N6-HA-R1776(SEQ ID No.16) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACWAGGGTGTTTT
扩增NP基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-NP-F1(SEQ ID No.17) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAAAAGCAGGGTA H5N6-NP-R1167(SEQ ID No.18) CAGGAAACAGCTATGACCATKGYYTCCATGTTCTCATT H5N6-NP-F899(SEQ ID No.19) TGTAAAACGACGGCCAGTGTRGCYAGYGGRTAYGA H5N6-NP-R1565(SEQ ID No.20) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGGTATTTTT
扩增NA基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-NA-F1(SEQID No.21) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCAAAAGCAGGGTSAA H5N6-NA-R1126(SEQ ID No.22) CAGGAAACAGCTATGACCCYTTRCTAATWGTYCTHCCAAGCC H5N6-NA-F841(SEQ ID No.23) TGTAAAACGACGGCCAGTCAYATHGARGARTGYTCNTGCC H5N6-NA-R1461(SEQ ID No.24) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAWACAAGGGTSTTTTT
扩增MP基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-MP-F1(SEQ ID No.25) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGTAGAT H5N6-MP-R674(SEQ ID No.26) CAGGAAACAGCTATGACCTCATWGCYTGCACCATYTGYCT H5N6-MP-F605(SEQ ID No.27) TGTAAAACGACGGCCAGTGGRTCDAGYGARCARGCAGC H5N6-MP-R1027(SEQ IDNo.28) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGTAGTTTTT
扩增NS基因的引物包括：
引物名称 引物序列(5’-3’) H5N6-NS-F1(SEQ ID No.29) TGTAAAACGACGGCCAGTAGCRAAAGCAGGGTG H5N6-NS-R639(SEQ ID No.30) CAGGAAACAGCTATGACCTTCYCCAAGCGAATCTYTGTA H5N6-NS-F507(SEQ ID No.31) TGTAAAACGACGGCCAGTTCACCATTACCTTCTCTTCC H5N6-NS-R890(SEQ ID No.32) CAGGAAACAGCTATGACCAGTAGAAACAAGGGTGTTTT
优选地，所述引物两端含有不参与目的片段扩增的通用核苷酸序列。
优选地，所述通用核苷酸序列为13bp的通用测序引物互补序列的寡核苷酸片段。
第二方面，本发明提供了一种H5N6亚型流感病毒全基因组扩增方法，包括以下步骤：从待测样本中提取流感病毒RNA，采用权利要求1所述引物进行一步法RT-PCR扩增。
优选地，所述扩增产物大小在400bp到1500bp之间。
第三方面，本发明提供了一种H5N6亚型流感病毒的检测方法，采用前述扩增方法对待测样本中提取的流感病毒RNA进行一步法RT-PCR扩增，所得扩增产物进行电泳，然后根据结果进行判断；所述反应产物分别均为使用的上下游引物位置之差时，即获得特异性条带，则扩增得到H5N6亚型流感病毒全基因组。
第四方面，本发明提供了一种H5N6亚型流感病毒全基因组测序方法，包括以下步骤：
从待测样本中提取流感病毒RNA，采用权利要求1所述引物进行一步法RT-PCR扩增，所得 RT-PCR扩增产物进行纯化和回收后，进行测序。
本发明针对H5N6亚型流感病毒PB1,PB2,PA,HA,NP,NA,MP和NS基因保守区域设计了覆盖基因全长(开放读码框)16对共32条寡核苷酸引物序列，如SEQ ID No.1～SEQ ID No.32所示，并在正反向扩增引物的两端增加了M13正反向引物序列，简化了基因扩增后的测序反应步骤。同时公开了待检样本的处理、RT-PCR反应体系及反应条件、测序反应体系和反应条件。本发明可以实现对我国大陆流行的H5N6亚型流感病毒全基因组扩增,从而获得H5N6亚型流感病毒的全基因组序列信息，操作简单、应用方便，为我国流行的H5N6亚型流感病毒病原学研究及分子进化分析提供了可行的技术方法。
H5N6亚型流感病毒全基因组测序方法包括下列步骤：
一、检测未知病毒。
1.病毒RNA的提取：
取140μL样本(血浆，血清，尿液，细胞培养基，无细胞体液)，加入含有5.6μg Carrier RNA的560μL的AVL裂解液中，按QIAamp Viral RNA Mini Handbook(Qiagen公司， catalog#52904/52906)说明书提取病毒RNA，洗脱体积50μL。
2.rRT-PCR反应：
1)体系配置：使用Takara的PrimeScriptTM One Step RT-PCR Kit Ver.2(RR055A)反应液，配置组分如下：
2)rRT-PCR：将加好上述反应体系的反应管放于PCR仪进行rRT-PCR，反应程序如下：
3.RT-PCR产物检测：各取1ul产物于1％Agrorose gel进行电泳观察结果。
4.结果判断：16个反应产物均分别为使用的上下游引物位置之差时(获得特异性条带)，则扩增得到H5N6亚型流感病毒全基因组；若所有反应无特异性条带，则扩增H5N6亚型流感病毒全基因组失败。若部分反应得到特异性条带，则只能获得H5N6亚型流感病毒部分基因序列。
5.检测评价：
灵敏度评价：选择一株人咽拭子标本分离的H5N6亚型流感病毒毒株进行10倍梯度稀释，当反应体系中核酸的拷贝数大于10000个拷贝时，用本发明的16对引物对模板进行PCR反应扩增即可得到所有阳性产物。如图1所示。当拷贝数为104、105、106时，均可得到所有阳性产物 (见图1)。
通用性评价：共选取我国近两年流行H5N6亚型流感病毒6株，96个反应全部获得阳性扩增产物。
二、回收RT-PCR产物。
将经扩增获得的扩增产物采用琼脂糖凝胶切割回收，具体如下：
1)将25μlRT-PCR产物于1％的琼脂糖凝胶中进行电泳。
2)将含有目的片段的琼脂糖凝胶进行切割，尽可能去除多余的琼脂糖凝胶,将含有目的条带的凝胶放入1.5ml的离心管中，写好编号。
3)加入300ul至400ul QC溶液(Qiagen试剂盒，catalog#28706)，50℃水浴，每隔5min 颠倒一次，直至溶胶全部溶解。
4)将步骤3溶解得到的液体转入套有收集管的柱子中，12000rpm离心1min。
5)弃去废液，加入500ul QG溶液，12000rpm离心1min。
6)弃去废液，加入700ul PE溶液(PE溶液事先加入无水乙醇)，1300rmp离心1min。
7)弃去废液，空管离心，1300rpm离心1min，弃去废液。
8)将步骤7中的离心柱套在新的离心管中，加入30ul预热的纯水，室温放置3到5分钟，然后11000rpm离心2分钟。即得回收产物。
三、回收产物测序方法。
将经实施例3回收得到的产物进行测序，具体步骤如下：
1.在96孔板中进行测序反应体系配置( Terminator Cycle Sequencing kit, AppliedBiosystem,catalog#4336921)如下：
2.测序反应程序
3.按照每个反应加入如下试剂对测序反应产物进行纯化(XterninatorTM purification kit catalog#4376486)。
用封板膜将反应板进行密封后置于混匀仪上，1800rpm混匀30分钟。混匀结束后，离心机中1000rpm离心一分钟。
4.将反应板放入Applied Biosystem DNA analyzer中，选择运行模块进行序列读取，运行结束后对序列进行拼接即可获得H5N6亚型流感病毒的全基因组序列，如SEQ ID No.33所示。
综上所述，本发明提供了32条用扩增H5N6亚型流感病毒8个基因的寡核苷酸引物序列，并提供了RT-PCR的扩增基因、RT-PCR产物回收以及回收产物测序反应。
本发明可以将RT-PCR技术应用FluH5N6亚型流感病毒全基因组的扩增中，后续测序反应只需两种通用测序引物即可进行测序反应，简化了基因扩增后的测序反应中引物的选择。本发明涵盖的H5N6亚型流感病毒全基因组扩增引物通用性强，能有效扩增得到该亚型病毒的8个基因序列，为H5N6亚型流感病毒以基因序列为基础的分子进化以及病原学研究提供了技术手段。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
序列表
<110>安徽省疾病预防控制中心
<120>一种H5N6亚型流感病毒全基因组测序试剂盒及其测序方法
<160>33
<210>1
<211>32
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CRAAAGCAGG CA
<210>2
<211>44
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
CAGGAAACAG CTATGACCAG AGGTCTTATY TTYTCDATTT TCTY
<210>3
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
TGTAAAACGA CGGCCAGTAT GTTCGARAGY AARAGYATGA AR
<210>4
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<400>4
CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAAACAAG GCATTT
<210>5
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
<400>5
TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CRAAAGCAGG TCA
<210>6
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<400>6
CAGGAAACAG CTATGACCCC TTGGAACATC CTAGTGTCT
<210>7
<211>40
<212>DNA
<213>人工序列
<400>7
TGTAAAACGA CGGCCAGTGG RTATGARGAR TTCACAATGG
<210>8
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>8
CAGGAAACAG CTATGACCTA GTAGAAACAA GGTCGTTT
<210>9
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>9
TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CAGGTACTGA TCCAAAAT
<210>10
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>10
CAGGAAACAG CTATGACCAA TTCRYTCTGR AYCCARCW
<210>10
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>10
CAGGAAACAG CTATGACCAA TTCRYTCTGR AYCCARCW
<210>11
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>11
TGTAAAACGA CGGCCAGTTG AGAAYATGGC ACCDGARA
<210>12
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<400>12
CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAAACAAG GTACTTTTT
<210>13
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
<400>13
TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CAAAAGCAGG GGT
<210>14
<211>37
<212>DNA
<213>人工序列
<400>14
CAGGAAACAG CTATGACCCC ATTCCYTGCC AYCCTCC
<210>15
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<400>15
TGTAAAACGA CGGCCAGTAT AAAYTCHAGY ATGCC
<210>16
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>16
CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAAACWAG GGTGTTTT
<210>17
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
<400>17
TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CAAAAGCAGG GTA
<210>18
<211>38
<212>DNA
<213>人工序列
<400>18
CAGGAAACAG CTATGACCAT KGYYTCCATG TTCTCATT
<210>19
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<400>19
TGTAAAACGA CGGCCAGTGT RGCYAGYGGR TAYGA
<210>20
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<400>20
CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAAACAAG GGTATTTTT
<210>21
<211>35
<212>DNA
<213>人工序列
<400>21
TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CAAAAGCAGG GTSAA
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CAGGAAACAG CTATGACCCY TTRCTAATWG TYCTHCCAAG CC
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TGTAAAACGA CGGCCAGTCA YATHGARGAR TGYTCNTGCC
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CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAWACAAG GGTSTTTTT
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TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CRAAAGCAGG TAGAT
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CAGGAAACAG CTATGACCTC ATWGCYTGCA CCATYTGYCT
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TGTAAAACGA CGGCCAGTGG RTCDAGYGAR CARGCAGC
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CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAAACAAG GTAGTTTTT
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TGTAAAACGA CGGCCAGTAG CRAAAGCAGG GTG
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CAGGAAACAG CTATGACCTT CYCCAAGCGA ATCTYTGTA
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TGTAAAACGA CGGCCAGTTC ACCATTACCT TCTCTTCC
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CAGGAAACAG CTATGACCAG TAGAAACAAG GGTGTTTT
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<400>33
ATGGAGAAAA TAGTGCTTCT TCTTGCAGTG GTTAGCCTTG TTAAAGGTGA TCAGATTTGC 60
ATTGGTTACC ATGCAAACAA CTCGACTGAG CAGGTTGACA CGATAATGGA AAAAAACGTC 120
ACTGTTACAC ATGCTCAAGA CATACTGGAA AAGACACACA ACGGGAAGCT CTGCGATCTG 180
AATGGAGTGA AACCTCTGAT TTTAAAGGAT TGTAGTGTAG CTGGATGGCT TCTTGGAAAC 240
CCAATGTGCG ACGAGTTCAT CAGAGTGCCG GAATGGTCTT ACATAGTGGA AAGGGCTAAC 300
CCAGCCAATG ACCTCTGTTA CCCAGGGAAC CTCAATGACT ATGAAGAACT GAAACACCTA 360
TTGAGCAGAA TAAATCATTT TGAGAAGACT CTGATCATCC CCAAGAGTTC TTGGCCCAAT 420
CATACATCAC CAGGGGTGAG CGCAGCATGT CCATACCTGG GAATGCCCTC CTTTTTCAGA 480
AATGTGGTAT GGCTTACCAA GAAGAACGAT TCATACCCAA CAATAAAGAT GAGCTACAAT 540
AACACCAATA GGGAAGATCT TTTGATACTG TGGGGGATTC ATCATTCCAA CAATGCAGCA 600
GAGCAGACAA ATCTCTATAA AAACCCAACC ACCTATGTTT CCGTTGGGAC ATCAATATTA 660
AACCAGAGAT TGGTGCCAAA AATAGCTACT AGATCCCAAG TAAACGGGCA AAGTGGAAGA 720
ATGGATTTCT TCTGGACAAT TTTAAAACCG AACGATGCAA TCCACTTTGA AAGTAATGGA 780
AATTTTATTG CTCCAGAATA TGCATACAAA ATTGTCAAGA AAGGGGACTC AACAATTATG 840
AAAAGTGAAA TGGAATATGG CCATTGCAAC ACCAAATGTC AAACTCCAAT AGGGGCGATA 900
AACTCTAGTA TGCCATTCCA CAATATACAT CCTTTCACTA TCGGGGAGTG CCCCAAATAC 960
GTGAAATCAA ACAAATTAGT CCTTGCGACT GGGCTCAGAA ATAGTCCTCT AAGAGAAAGA 1020
AGAAGAAAAA AAAGAGGACT ATTTGGAGCC ATAGCAGGGT TTATAGAGGG AGGATGGCAA 1080
GGAATGGTAG ATGGTTGGTA TGGGTACCAC CATAGCAATG AGCAAGGGAG TGGGTATGCT 1140
GCAGACAGAG AATCCACCCA AAAGGCAATA GATGGAGTTA CCAATAAGGT CAACTCGATA 1200
ATTGACAAAA TGAACACTCA ATTTGAGGCC GTTGGAAGGG AATTTAATAA CTTAGAACGG 1260
AGAATAGAGA ATTTAAATAA GAAAATGGAA GACGGATTCC TAGATGTCTG GACTTATAAT 1320
GCTGAACTTT TAGTTCTCAT GGAAAATGAG AGAACTCTAG ATTTCCATGA TTCAAATGTC 1380
AAGAATCTTT ATGACAAAGT CCGACTACAG CTTAGGGATA ATGCAAAGGA GCTGGGTAAT 1440
GGTTGTTTCG AGTTCTATCA CAAATGTGAT AATGAATGTA TGGAAAGTGT GAGAAATGGG 1500
ACGTATGACT ACCCCCAGTA TTCAGAAGAA GCAAGATTAA AAAGGGAAGA AATAAGCGGA 1560
GTGAAATTGG AATCAATAGG AACTTACCAA ATACTGTCAA TTTATTCAAC AGTGGCGGGT 1620
TCCCTAGCAC TGGCAATCAT TGTGGCTGGT CTATCTTTAT GGATGTGCTC CAATGGGTCG 1680
TTACAATGCA GAATTTGCAT TTAAATTTGT GAGCTCAGAT TGTAATTAA 1729
ATGAGTCTTC TAACCGAGGT CGAAACGTAC GTTCTCTCTA TCATTCCATC AGGCCCCCTC 1789
AAAGCCGAAA TCGCGCAGAG ACTTGAGGAT GTTTTTGCAG GGAAGAACGC AGATCTCGAG 1849
GCTCTCATGG AGTGGATAAA GACAAGACCA ATCTTGTCAC CTCTGACTAA GGGGATTTTA 1909
GGGTTTGTGT TCACGCTCAC CGTGCCCAGT GAGCGAGGAC TGCAGCGTAG ACGTTTTGTC 1969
CAAAACGCCC TAAATGGGAA TGGAGACCCA AACAACATGG ACAAGGCAGT TAAATTGTAC 2029
AAGAAACTGA AGAGAGAAAT GACATTTCAT GGAGCTAAGG AAGTTGCACT CAGTTACTCA 2089
ACTGGTGCGC TTGCCAGCTG CATGGGTCTC ATATACAACA GGATGGGGAC AGTAACTGCA 2149
GAAGGGGCTC TTGGACTAGT ATGTGCCACT TGTGAGCAGA TTGCTGACGC ACAACATCGG 2209
TCCCACAGGC AGATGGCGAC TACTACCAAC CCACTAATTA GGCATGAGAA TAGAATGGTA 2269
CTAGCCAGCA CTACAGCTAG GGCTATGGAG CAGATGGCTG GATCAAGTGA ACAGGCAGCG 2329
GAAGCCATGG AAGTCGCAAG TCAGGCCAGG CAAATGGTGC AGGCTATGAG AACAGTCGGG 2389
ACACACCCTA ACTCCAGTAC AGGTCTAAAG GATGATCTTA TTGAAAATTT GCAGGCTTAC 2449
CAAAACCGGA TGGGAGTGCA ACTGCAGCGA TTCAAGTGAT CCCCTCGTTG TTGCAGCTAA 2509
CATTATTGGG ATATTGCACC TGATATTGTG GATTCTTGAT CGTCTTTTCT TCAAATGCAT 2569
TTATCGTCGC TTTAAATACG GTTTGAAAAG AGGGCCTTCT ACGGAAGGGA TACCTGAGTC 2629
TATGAGGGAA GAATATCGGC AGGAACAGCA GAATGCTGTG GATGTTGACG ATGGTCATTT 2689
TGTCAACATA GAGCTGAAGT AA 2711
ATGAATCCAA ATCAAAAGAT AACATGCATT TCAGCAACAG GAGTAACACT ATCCGTAGTA 2771
AGCCTACTAA TAGGAATCGC CAATTTGGGC CTAAATATCG GACTACACTA CAGAGTGAGT 2831
GATTCAACAA CTATAAACAC CCCAAACATG AATGAGACCA ACCCAACAAC AACAAACATC 2891
ACCAACATTA TAGTGAATAA GAACGAAGAA AGAACATTTC TCAACTTGAT CAAGCCGCTA 2951
TGTGAAGTCA ACTCATGGCA CATTCTATCA AAAGACAATG CAATAAGAAT AGGTGAGGAT 3011
GCTCATATAC TGGTCACTAG GGACCCTTAC TTGTCCTGTG ACCCACAGGG ATGCAGAATG 3071
TTTGCTCTGA GTCAAGGCAC AACACTCAGA GGGCGACATG CGAATGGAAC CATACATGAT 3131
AGGGGCCCAT TTCGAGCTCT TATAAGTTGG GAAATGGGTC AGGCACCCAG TCCATATAAT 3191
ACTAGGGTCG AATGCATAGG ATGGTCAAGC ACGTCATGCC ATGATGGCAT ATCAAGGATG 3251
TCAATATGCA TATCAGGACC GAATGACAAT GCATCGGCAG TGGTGTGGTA CAGGGGAAGA 3311
CCAGTAACAG AAATCCCATC ATGGGTAGGG AACATTCTCA GGACTCAAGA ATCAGAATGT 3371
GTATGCCATA AAGGAATCTG CCCAGTGGTC ATGACAGATG GTCCAGCWAA CAACAAGGCA 3431
GCAACTAAAA TAATCTACTT CAAGGAGGGA AAGATACAGA AAGTTGAAGA ACTGCAGGGG 3491
AACGCCCAAC ACATCGAAGA GTGTTCATGC TACGGAGCTG CAGGGATGAT CAAATGTGTA 3551
TGCAGAGACA ATTGGAAGGG GGCAAATAGA CCAATAATCA CTATAGATCC CGAAATGATG 3611
ACCCACACAA GCAAATACTT GTGTTCAAAA ATCTTAACCG ACACAAGTCG TCCTAATGAC 3671
CCCACCAATG GGAACTGTGA TGCGCCAATA ATAGGAGGGA GCCCAGACCC AGGGGTAAAA 3731
GGGTTTGCAT TCCTAGATGG GGAGAATTCA TGGCTTGGAA GGACAATTAG CAAAGACTCC 3791
AGATCAGGCT ACGAAATGTT AAAGGTCCCA AATGCAGAAA CTGACACTCA ATCAGGGCCA 3851
ACCTCATACC AGCTGATTGT CAACAACCAA AATTGGTCAG GGTACTCAGG GGCATTTATA 3911
GACTACTGGG CAAACAAGGG ATGCTTCAAC CCTTGCTTTT ATGTGGAGCT AATCAGAGGG 3971
AGACCCAAAG AGATTGATGT ACAGTGGACT TCCAGTAGCA TGGTAGCTCT CTGTGGATCC 4031
AGGGAGCGAT TGGGATCATG GTCCTGGCAT GATGGTGCAG AAATCATCTA CTTTAAGTAG 4091
AAAAGTTAA 4100
ATGGCGTCTC AAGGCACCAA ACGATCCTAT GAACAGATGG AAACTGGTGG GGAACGCCAG 4160
AATGCTACTG AGATCAGGGC ATCTGTTGGA AGAATGGTCA GCGGAATTGG GAGATTCTAC 4220
ATACAGATGT GTACAGAACT CAAACTCAGT GACAATGAAG GGAGGCTGAT TCAGAACAGT 4280
ATAACAATAG AGAGAATGGT ACTCTCTGCA TTTGATGAAC GAAGGAACAG ATACCTGGAA 4340
GAGCACCCCA GTGCAGGAAA GGACCCTAAG AAAACTGGAG GTCCAATTTA CAGGAGAAGA 4400
GACGGAAAAT GGGTGAGAGA GCTGATCCTA TATGACAAAG AGGAAATCAG GAGAATTTGG 4460
CGACAAGCGA ACAATGGAGA GGATGCAACT GCTGGTCTTA CCCATCTGAT GATATGGCAT 4520
TCCAACCTGA ATGATGCTAC CTATCAGAGA ACGAGAGCTC TTGTGCGTAC TGGAATGGAT 4580
CCCCGGATGT GCTCTCTGAT GCAAGGATCA ACTCTCCCGA GGAGATCTGG AGCTGCAGGT 4640
GCAGCAGTGA AGGGGATAGG GACAATGGTG ATGGAACTGA TTCGGATGAT AAAACGAGGG 4700
ATCAACGACC GGAATTTCTG GAGAGGCGAA AATGGAAGAA GGACAAGAAT TGCATATGAG 4760
AGAATGTGCA ACATCCTCAA AGGGAAATTC CAAACAGCAG CACAAAGAGC AATGATGGAT 4820
CAAGTGCGAG AAAGCAGAAA TCCTGGGAAT GCTGAAATAG AAGATCTCAT TTTTCTGGCA 4880
AGGTCTGCAC TCATCCTGAG AGGATCAGTG GCTCATAAAT CCTGCTTGCC TGCCTGTGTG 4940
TACGGGCTTG CAGTGGCTAG TGGATATGAC TTTGAGAGAG AAGGGTACTC CTTGGTTGGA 5000
ATAGATCCTT TCCGTCTGCT TCAAAACAGC CAGGTCTTTA GTCTCATTAG ACCAAATGAG 5060
AACCCAGCAC ACAAGAGCCA ACTAGTGTGG ATGGCATGCC ACTCTGCAGC GTTTGAGGAC 5120
CTTAGGGTCT CAAGTTTCAT TAGAGGAACA AGAATGGTTC CAAGAGGACA GCTGTCCACT 5180
AGAGGAGTTC AAATTGCTTC AAATGAGAAC ATGGAAGCAA TGGACTCCAA TACTCTTGAA 5240
CTGAGAAGTA GATATTGGGC TATAAGAACC AGAAGCGGAG GGAACACCAA CCAACAGAGG 5300
GCATCTGCAG GACAGGTCAG CGTTCAACCC ACTTTCTCAG TACAGAGAAA CCTTCCTTTC 5360
GAAAGAGCAA CCATTATGGC AGCATTTACA GGAAATACTG AGGGTAGAAC GTCTGACATG 5420
AGGACTGAAA TCATAAGAAT GATGGAAAGT GCCAGACCAG AAGATGTGTC ATTCCAGGGG 5480
CGGGGAGTCT TCGAGCTCTC GGACGAAAAG GCAACGAACC CGATCGTGCC TTCCTTTGAC 5540
ATGAATAATG AAGGATCTTA TTTCTTCGGA GACAATGCAG AGGAGTATGA CAATTGA 5597
ATGGATTCCA ACACTGTGTC AAGCTTCCAG GTAGACTGCT TTCTTTGGCA TGTCCGCAAA 5657
CGGTTTGCAG ACCAAGAACT GGGTGATGCC CCATTTCTAG ACCGGCTTCG CCGAGACCAG 5717
AAGTCCCTGA GAGGAAGAAG CAGCACTCTT GGTCTGGACA TCAGAACAGC AACTCGTGAA 5777
GGAAAGCATA TAGTGGAGCG AATTTTGGAG GAAGAGTCAG ACGAAGCATT TAAAATGACT 5837
ATTGCTTCAG TGCCAGCTCC ACGCTATCTA ACTGACATGA CTCTTGAAGA AATGTCAAGA 5897
AATTGGTTGA TGCTCATACC CAAACAGAAA GTGACAGGGT CCCTTTGTAT TAAAATGGAC 5957
CAAGCAATAG TGGACAAAAC CATCACATTG AAAGCAAATT TCAGTGTAAT TTTCAATCGA 6017
TTGGAAGCCC TAATACTACT TAGAGCTTTT ACGGATGAAG GAGCAATAGT GGGCGAAATC 6077
TCACCATTAC CTTCTCTTCC AGGACATACT GACAAGGATG TCAAAAATGC AATTGAGGTC 6137
CTCATCGGAG GATTTGAATG GAATGATAAC ACAGTTCGAG TCTCTGAAAC TCTACAGAGA 6197
TTCGCTTGGA GAAGCAGCGA TGAGGATGGG AGACCTCCAC TCTCTCCAAA GTAGGAACGG 6257
AAAATGGAGA GAACAATTAA GCCAGAAGTT CGAAGAAATA AGATGGTTGA TTGAAGAAGT 6317
ACGACATAGG TTAAAGATTA CAGAGAATAG CTTTGAACAA ATAACTTTTA TGCAAGCCTT 6377
ACAACTATTG CTTGAAGTGG AGCAAGAGAT AAGAACTTTC TCGTTTCAGC TTATTTAATG 6437
ATAA 6441
ATGGAAGGCT TTGTGCGACA GTGCTTCAAT CCAATGATTG TCGAGCTTGC GGAAAAGGCA 6501
ATGAAAGAAT ATGGGGAAGA TCCGAAAATC GAAACAAACA AATTCGCATC AATATGCACA 6561
CACTTAGAAG TCTGCTTCAT GTACTCTGAT TTCCACTTCA TCGACGAACG AGGCGAATCA 6621
ACTATAATAG AATCTGGCGA TCCAAATGCG CTGCTGAAAC ACCGATTTGA AATAATCGAA 6681
GGGAGAGACC GAACAATGGC CTGGACAGTG GTGAATAGTA TCTGCAACAC CACAGGAGCC 6741
GAAAAACCCA AATTTCTCCC GGATCTGTAT GACTACAAGG AAAACCGTTT CATTGAAATT 6801
GGAGTGACGA GGAGGGAAGT TCACATATAT TACCTAGAGA AAGCCAACAA AATAAAATCC 6861
GAGAAGACAC ACATCCATAT TTTTTCATTC ACTGGAGAAG AGATGGCCAC CAAAGCAGAT 6921
TACACTCTTG ACGAAGAAAG CAGGGCAAGA ATCAAAACCA GGCTGTTCAC CATAAGGCAG 6981
GAAATGGCCA GCAGGGGTCT ATGGGATTCC TTTCGTCAGT CCGAAAGAGG CGAAGAAACA 7041
ATTGAAGAAA GATTTGAAAT CACAGGAACC ATGCGCAGGC TTGCCGACCA AAGTCTCCCA 7101
CCGAACTTCT CCAGCCTTGA AAACTTTAGA GCCTATGTGG ATGGATTCGA ACCGAACGGT 7161
TGCATTGAGG GCAAGCTTTC TCAGATGTCA AAAGAAGTGA ACGCCAGAAT TGAGCCATTT 7221
CTAAGAACAA CACCACGCCC TCTCAGATTG CCCAATGGGC CTCTCTGCTC TCAGCGGTCG 7281
AAGTTCTTGC TGATGGATGC TCTGAAACTA AGCATTGAGG ACCCGAGCCA CGAAGGGGAG 7341
GGAATACCGC TACATGATGC GATCAAATGC ATGAAAACGT TCTTCGGGTG GAAAGAGCCC 7401
AACATCATCA AACCACATGA GAAAGGCATA AACCCCAATT ATCTCCTGGC TTGGAAGCAA 7461
GTGCTAGCAG AACTTCAGGA CATTGAAAAT GAAGAGAAGA TTCCAAGGAC AAAGAACATG 7521
AAGAAAACAA GCCAATTAAA GTGGGCACTA GGTGAAAACA TGGCACCGGA GAAGGTGGAC 7581
TTTGAGGATT GCAAAGATGT CAACGACTTG AAACAGTACA ACAGTGATGA GCCAGAGCCC 7641
AGATCACTAG CATGTTGGAT CCAGAATGAA TTCAACAAGG CGTGTGAACT GACTGACTCA 7701
AGTTGGGTAG AACTTGATGA AATAGGGGAA GATGTTGCCC CAATCGAACA CATTGCAAGC 7761
ATGAGACGGA ACTATTTTAC AGCAGAGGTG TCCCACTGTA GAGCTACTGA GTATATAATG 7821
AAGGGAGTGT ACATAAATAC AGCTTTGCTC AATGCATCTT GCGCAGCCAT GGATGACTTT 7881
CAATTGATTC CAATGATAAG CAAATGTAGA ACCAAAGAAG GAAGACGGAA AACAAACCTG 7941
TATGGATTCA TTGTAAAAGG AAGATCTCAT TTGAGGAATG ATACCGACGT GGTAAACTTT 8001
GTAAGTATGG AATTTTCCCT TACCGACCCA AGGTTGGAGC CACATAAATG GGAAAAGTAT 8061
TGTGTTCTTG AAATAGGGGA CATGCTCCTG CGAACTGCAG TAGGCCAAGT GTCAAGACCC 8121
ATGTTTCTGT ATGTGAGAAC CAATGGGACC TCCAAGATCA AGATGAAATG GGGTATGGAA 8181
ATGAGACGCT GCCTTCTTCA ATCTCTCCAA CAGATTGAGA GCATGATTGA AGCTGAATCC 8241
TCCGTCAAAG AGAAAGACCT GACCAAAGAA TTCTTTGAAA ACAAATCAGA AACATGGCCA 8301
ATTGGAGAGT CACCTAAAGG AGTGGAGGAA GGTTCCATCG GGAAGGTGTG CAGAACCTTA 8361
CTAGCAAAAT CTGTATTCAA CAGCCTGTAC GCATCTCCGC AACTCGAGGG GTTCTCAGCT 8421
GAGTCGAGAA AACTGCTACT CATTGTTCAG GCGCTTAGGG ATAACCTGGA ACCTGGGACC 8481
TTTGATCTTG AAGGGCTATA TGAAGCAATC GAGGAGTGCC TGATTAATGA TCCCTGGGTT 8541
TTGCTTAATG CATCTTGGTT CAACTCCTTC CTCACACATG CACTAAGATA G 8592
ATGGATGTCA ATCCGACTTT ACTTTTCTTG AAAGTGCCAG TGCAAAATGC TATAAGTACC 8652
ACTTTCCCTT ATACTGGAGA CCCTCCATAC AGCCATGGGA CAGGAACAGG ATACACCATG 8712
GACACAGTCA ACAGAACACA TAAATACTCA GAAAAAGGAA AATGGACAAC GAACACAGAA 8772
ACTGGAGCAC CCCAACTCAA TCCAATTGAT GGACCATTAC CTGAGGACAA TGAGCCGAGT 8832
GGGTATGCAC AAACGGATTG TGTATTGGAA GCAATGGCTT TCCTTGAAGA ATCTCACCCA 8892
GGGATTTTTG AAAACTCGTG TCTCGAAACG ATGGAAATTG TTCAGCAAAC AAGAGTGGAT 8952
AAACTAACCC AAGGCCGCCA GACCTATGAC TGGACGTTGA ATAGAAATCA GCCGGCTGCT 9012
ACCGCATTGG CCAACACTAT AGAGGTGTTT AGATCAAATG GCCTGACAGC CAATGAATCA 9072
GGAAGGTTGA TCGATTTCCT CAAGGATGTG ATGGATTCAA TGGACAAGGA AGAAATGGAG 9132
ATTACAACAC ATTTCCAGAG GAAGAGGAGA GTGAGGGACA ACATGACCAA GAAAATGGTA 9192
ACACAAAGAA CAATAGGGAA GAAAAAGCAA AGACTGAACA AAAGGAGCTA CTTAATAAGA 9252
GCACTGACAT TGAACACAAT GACAAAGGAT GCTGAAAGAG GCAAGCTGAA AAGGAGGGCA 9312
ATCGCAACAC CCGGGATGCA AATCAGAGGA TTCGTGTATT TTGTGGAAGC ACTAGCGAGG 9372
AGCATCTGTG AGAAACTTGA GCAATCTGGC CTCCCTGTCG GAGGGAATGA GAAGAAAGCT 9432
AAATTGGCAA ATGTTGTGAG GAAGATGATG ACTAATTCAC ATGATACAGA GCTCTCCTTC 9492
ACAATTACTG GGGACAACAC CAAATGGAAT GAGAATCAAA ACCCCCGGAT GTTTCTAGCA 9552
ATGATAACAT ACATTACAAG AAACCAGCCA GAATGGTTTA GAAATGTCTT AAGCATTGCT 9612
CCTATAATGT TCTCAAACAA GATGGCGAGA TTAGGAAAAG GGTACATGTT CGAAAGTAAG 9672
AGTATGAAGT TACGGACACA AGTACCAGCG GAAATGCTCG CAAATATTGA CCTGAAATAC 9732
TTCAACAAAT CAACAAGAGA GAAAATCGAG AAAATAAGAC CTCTACTGAT AGATGGCACA 9792
GCTTCATTGA GTCCTGGGAT GATGATGGGC ATGTTCAACA TGTTGAGCAC AGTCTTAGGA 9852
GTTTCAATTC TGAATCTCGG GCAGAAGAAG TACACCAAAA CCACATATTG GTGGGACGGA 9912
CTCCAATCCT CAGATGACTT CGCCCTCATA GTGAATGCAC CGAACCATGA GGGAATACAG 9972
GCAGGAGTAG ATAGGTTCTA TAGAACCTGC AAATTAGTTG GGATAAACAT GAGCAAGAAG 10032
AAATCCTACA TAAATCGGAC AGGAACATTC GAATTCACAA GCTTTTTCTA CCGCTATGGA 10092
TTCGTAGCTA ACTTCAGTAT GGAGTTGCCC AGTTTTGGAG TGTCCGGGAT TAATGAATCA 10152
GCTGACATGA GCGTTGGTGT TACAGTAATA AAGAACAATA TGATAAACAA CGATCTTGGA 10212
CCAGCAACAG CCCAAATGGC CCTTCAGCTA TTTATCAAAG ACTACAGATA CACATACCGA 10272
TGTCACAGGG GTGATACGCA AATTCAAACA AGGAGAGCAT TCGAGCTGAA GAAGCTGTGG 10332
GAGCAGACCC GTTCGAAGGC TGGACTGTTG GTTTCAGATG GAGGGCCAAA CCTGTACAAT 10392
ATCCGGAACC TCCACATTCC CGAGGTCTGC TTGAAATGGG AATTGATGGA TGAAGATTAC 10452
CAAGGCAGAT TGTGTAATCC TATGAACCCG TTTGTCAGTC ATAAGGAAAT TGATTCAGTC 10512
AACAATGCTG TGGTGATGCC AGCTCATGGC CCCGCCAAAA GCATGGAGTA TGATGCCGTT 10572
GCAACCACAC ATTCATGGAT CCCTAAGAGG AATCGCTCCA TTCTCAACAC CAGCCAAAGG 10632
GGGATTCTTG AGGACGAACA GATGTACCAG AAGTGCTGCA ACCTATTCGA AAAGTTCTTC 10692
CCCAGCAGTT CGTACAGGAG GCCAGTTGGA ATTTCTAGCA TGGTGGAGGC CATGGTGTCT 10752
AGGGCCCGAA TTGACGCACG AATTGACTTC GAATCTGGAA GGATTAAGAA AGAAGAGTTT 10812
GCTGAGATCA TGAAGATCTG TTCCACCATT GAAGAGCTCA GACGGCAAAA ATAGTGAATT 10872
TAGCTTGTCC TTCATGAA 10890
ATGGAAAGAA TAAAAGAACT AAGAGATTTG ATGTCACAGT CTCGCACTCG CGAGATACTG 10950
ACAAAAACAA CAGTGGACCA TATGGCCATA ATCAAGAAAT ATACATCAGG AAGACAGGAA 11010
AAGAATCCTG CCCTTAGGAT GAAGTGGATG ATGGCGATGA AATATCCAAT CACAGCAGAC 11070
AAAAGGATAA TGGAGATGAT CCCGGAAAGA AATGAGCAAG GTCAGACCCT TTGGAGCAAG 11130
ACAAATGATG CCGGATCAGA CAGGGTGATG GTGTCACCTC TGGCTGTGAC GTGGTGGAAT 11190
AGAAACGGAC CAACAACAAG CACAGTCCAT TATCCAAAGG TCTACAAAAC CTATTTTGAA 11250
AAGGTCGAAA GGCTAAAACA TGGAACCTTT GGCCCCGTTC ACTTCCGAAA CCAAGTTAAA 11310
ATACGCCGCA GGGTTGACAT AAACCCAGGT CATGCAGATC TTAGTGCTAA AGAAGCACAA 11370
GATGTCATCA TGGAGGTCGT ATTCCCAAAC GAAGTTGGAG CCAGAATACT GACATCAGAG 11430
TCACAGTTAA CGATAACCAG AGAAAAGAAG GAGGAGCTTC AGGACTGCAA AATTGCTCCT 11490
TTAATGGTGG CATACATGTT GGAGAGAGAA CTGGTTCGCA AAACAAGGTT TCTACCAGTG 11550
GCTGGAGGGA CAAGCAGTGT GTATATCGAA GTATTGCATT TGACTCAAGG GACCTGCTGG 11610
GAGCAAATGT ACACACCAGG AGGGGAAGTG AGAAATGATG ATGTTGATCA GAGTTTAATT 11670
ATTGCTGCTA GAAATATTGT CAGAAGAGCA ACAGTATCAG CAGACCCGTT GGCTTCGCTT 11730
TTGGAGATGT GCCATAGTAC ACAGATTGGA GGGGTTAGGA TGGTTGACAT CCTTAGACAA 11790
AACCCAACAG AGGAACAGGC TGTGGATATA TGCAAAGCAG CAATGGGTCT AAGGATCAGT 11850
TCATCCTTCA GCTTTGGAGG TTTCACTTTT AAAAGGACAA GTGGGTCATC TGTCAAAAGG 11910
GAAGAAGAAG TGCTCACAGG CAACCTCCAA ACATTGAAAA TAAGAGTACA TGAAGGATAT 11970
GAGGAATTCA CAATGGTTGG GAGAAGAGCA ACAGCCATTC TAAGGAAAGC AACCAGGAGA 12030
CTGATTCAAC TGATAGTGAG TGGGAAAGAC GAGCAATCAA TCGCTGAGGC GATCATAGTG 12090
GCAATGGTGT TCTCACAAGA GGATTGTATG ATAAAGGCAG TGAGAGGTGA TTTGAACTTT 12150
GTCAACAGAG CGAACCAGCG GCTAAATCCC ATGCATCAAC TCCTGAGGCA TTTCCAAAAG 12210
GATGCAAAGG TCCTGTTTCA AAACTGGGGA ATTGAGCCCA TTGACAATGT AATGGGGATG 12270
ATCGGAATAT TGCCTGACAT GACCCCCAGC ACAGAGATGT CCTTGAGAGG AGTGAGAGTT 12330
AGTAAAATGG GAGTAGATGA ATATTCCAGT ACAGAGAGAG TGGTCGTGAG TATTGATCGT 12390
TTCTTGAGGG TTCGAGACCA GAGAGGAAAC ATACTCCTGT CTCCTGAGGAG GTTAGTGAA 12450
ACACAGGGAA CAGAAAAGCT GACTATAACA TATTCATCGT CCTTGATGTGG GAAATCAAT 12510
GGTCCGGAAT CAGTGCTAGT TAACACATAT CAATGGATCA TTAGAAATTGG GAAACTGTA 12570
AAGATTCAAT GGTCTCAGGA CCCTACAATT CTGTACAATA AGATGGAATTT GAACCCTTT 12630
CAATCCCTAG TGCCCAAAGC TGCCAGAGGC CAATATAGTG GATTCGTAAGG GTCCTATTC 12690
CAGCAGATGC GTGACGTACT GGGGACTTTC GACACCGTCC AAATAATAAAG CTACTACCA 12750
TTTGCAGCAG CCCCGCCGAA ACAGAGTAGG ATGCAGTTCT CTTCTCTAACT GTGAACGTA 12810
AGAGGTTCAG GAATGAGAGT GGTTGTGAGA GGCAATTCTC CAGTGTTCAAC TACAACAAG 12870
GCAACAAAGA GGCTTACAGT GCTTGGGAAG GATGCAGGTG CATTAATGGAA GACCCAGAC 12930
GAGGGAACAG CAGGAGTAGA ATCTGCGGTA TTGAGAGGAT TTCTGATTCTA GGCAAAGAA 12990
GACAAAAGAT ATGGGCCAGC GTTGAGCATC AACGAGTTGA GCAACCTTGCG AAGGGGGAA 13050
AAGGCTAATG TGTTGATAGG GCAAGGAGAC GTGGTGTTGG TAATGAAACGG AAACGGGAC 13110
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