《抑制厚朴愈伤组织褐化的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抑制厚朴愈伤组织褐化的方法.pdf（4页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN102115727A43申请公布日20110706CN102115727ACN102115727A21申请号201010594053222申请日20101217C12N5/0420060171申请人浙江农林大学地址311300浙江省杭州市临安市环城北路88号东湖校区72发明人崔永一童再康徐步青74专利代理机构绍兴市越兴专利事务所33220代理人蒋卫东54发明名称抑制厚朴愈伤组织褐化的方法57摘要本发明公开了一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法，包括A、选取厚朴种子萌发出的子叶为组织培养的外植体；B、对外植体进行消毒处理；C、将消毒好的外植体放入培养基中诱导出愈伤组织；D、将愈伤组织。
2、转移到新的增殖用培养基中。本发明优点在于抑制愈伤组织诱导和增殖过程中的褐变，提高愈伤组织增殖系数，可用于生物反应器培养。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页CN102115729A1/1页21一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法，其特征是，它包括A、选取厚朴种子萌发出的子叶为组织培养的外植体；B、对外植体进行消毒处理；C、将消毒好的外植体放入培养基中诱导出愈伤组织；D、将愈伤组织转移到新的增殖用培养基中。2根据权利要求1所述的一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法，其特征在于所述的愈伤组织诱导培养基组分和培养条件为MS（MURASHIGESKOOG）培养基和。
3、附加成份，附加成份为2,4D2,4DICHLOROPHENOXYACETICACID075MG/L、NAAANAPHTHALENEACETICACID02MG/L、PVP（POLYVINYLPYRROLIDONE）20G/L、琼脂74G/L、蔗糖30G/L，暗培养24天，培养温度为2426。3根据权利要求1所述的一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法，其特征在于所述的愈伤组织增殖培养基组分为MS（MURASHIGESKOOG）培养基和附加成份，附加成份为2,4D2,4DICHLOROPHENOXYACETICACID075MG/L、NAAANAPHTHALENEACETICACID02MG/L、PVP。
4、（POLYVINYLPYRROLIDONE）20G/L、谷氨酰胺015035G/L、水解硌蛋白0103MG/L、琼脂74G/L、蔗糖30G/L。权利要求书CN102115727ACN102115729A1/2页3抑制厚朴愈伤组织褐化的方法技术领域0001本发明涉及植物细胞工程技术领域，更具体涉及一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法。背景技术0002厚朴是我国特有的、常用的珍贵中药材，被列为国家珍稀濒危植物和二级保护中药材药用厚朴包括厚朴MAGNOLIAOFFICINALISREHDETWILSSUBSPOFFICINALIS和凹叶厚朴（MOFFICINALISSUBSPBILOBAREHDETWIL。
5、SLAW）及其中间类型刘玉壶等，1996。厚朴药材含挥发油成分30余种、酚性化合物9种、生物碱9种以及一些其它化学成分。其中，厚朴酚（MAGNOLOL，5,5DI2PROPENYL1,1BIPHENYL2,2DIOL）及其异构体和厚朴酚（HONOKIOL，3,5DI2PROPENYL1,1BIPHENYL2,4DIOL）占绝对优势。一直以来评价厚朴药材品质优劣主要利用这二种酚的含量。厚朴具有抗病毒、抗肿瘤、防龋、抗菌、抗溃疡、肌肉松弛、抗痉挛、镇痛、抗炎及毒性等药理作用（王承南和夏传格，2003。厚朴因其特殊的分类地位和资源的日益枯竭而先后被列为国家珍稀濒危植物和二级保护中药材（傅立国，199。
6、1）。0003据研究，厚朴的人工栽培受种源、栽培气候等诸多因素的影响，而且不同树龄厚朴酚含量差异很大，这直接影响厚朴药材的产品质量、采收次数及厚朴酚的产量（赵中振等，1992；曾燕如等，1999；）。另外，我国的可耕地面积有限，这也制约了其大面积栽培。因此，唯有利用植物组织和细胞培养技术来获得更多的厚朴酚才是解决这一问题的根本途径。0004目前，国内外有关厚朴组织培养方面的研究报道甚少，而且厚朴属于木兰科植物，在组织培养过程中褐化现象非常严重，导致抑制愈伤组织的生物量增加，甚至其逐步死亡，影响后续研究工作的开展。发明内容0005本发明的目的在于提供一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法。该方法操作简便。
7、，抑制褐变效果好，为探究厚朴愈伤组织悬浮培养及厚朴酚规模化生产提供新的方法。0006为了达到上述目的，本发明采用了以下技术措施步骤一，将消毒好的子叶接入配制好的培养基中，培养基的有效成分为MS（MURASHIGESKOOG）培养基和附加成份，附加成份为2,4D2,4DICHLOROPHENOXYACETICACID0510MG/L、NAAANAPHTHALENEACETICACID0105MG/L、PVP（POLYVINYLPYRROLIDONE）0530G/L、琼脂6080G/L、蔗糖1535G/L，暗培养24天，温度为2426；步骤二，诱导出的愈伤组织转到步骤一所述的培养基组分上再添加谷氨。
8、酰胺015035G/L和水解硌蛋白0103MG/L，暗培养24天，培养温度为2426。0007本发明具有如下的优点或效果1、有关本发明的效果请见下表说明书CN102115727ACN102115729A2/2页42、本发明无需增加专用设备，操作方便，同时促进愈伤组织的快速生长。0008下面对本发明的实施例作进一步详细描述一种抑制厚朴愈伤组织褐化的方法，它采用如下步骤步骤一，以厚朴种子播种后萌发出的子叶为外植体，用洗洁精清洗，用75酒精浸泡20或25或30秒，用01氯化汞消毒5或6或7分钟，用无菌水冲洗4或5或6次；步骤二，将消毒好的子叶接入配制好的培养基中，培养基的有效成分为MS（MURASH。
9、IGESKOOG）培养基和附加成份，附加成份为2,4D2,4DICHLOROPHENOXYACETICACID075MG/L、NAAANAPHTHALENEACETICACID02MG/L、PVP（POLYVINYLPYRROLIDONE）20G/L、琼脂74G/L、蔗糖30G/L，暗培养24天，温度为24或25或26；步骤三，诱导出的愈伤组织转到步骤二所述的培养基组分上添加谷氨酰胺015035G/L和水解硌蛋白0103MG/L，暗培养24天，温度为24或25或26；实施例1经实验证明，厚朴子叶培养诱导愈伤组织褐化率五峰684，鹤峰816，景宁842；而本方法中步骤二所述的培养基上培养厚朴外植体，褐变率为五峰413，鹤峰431，景宁430。0009实施例2经实验证明，诱导出的愈伤组织增殖过程中褐化率五峰643，鹤峰614，景宁622；而本方法中步骤三所述的培养基上培养的愈伤组织褐变率为五峰121，鹤峰94，景宁110。说明书CN102115727A。