改良液固一步解脲支原体培养基.pdf

本发明涉及一种改良液固一步解脲支原体培养基，特别是一种解脲脲原体和人型支原体液固一步法培养基及其制备方法。其主要成分是蛋白胨、氯酚红、胰蛋白胨、复合生长因子、酵母浸膏、马血清、氯化钠、混合抗生素、尿素、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐。该培养基能够检测生殖道支原体阳性结果，具有指导临床诊断和治疗的作用，为防止滥用抗菌药物也具有重要意义。本发明具有以下优点：(1)改良液固一步法解脲支原体培养基营养丰富、配制简单；(2)选择性强、变色灵敏、检出率高、污染小，临床应用效果满意；(3)接种样本24小时后，既能得到液体筛选增菌，又能达到固体观察菌落生长情况，检测方法简单、时间短、准确性强；(4)灵敏度高、特异性强、稳定性好。

1、  本发明涉及一种改良液固一步解脲支原体培养基，特别是一种解脲脲原体和人型支原体液固一步法培养基包括(1)固体培养基(2)液体培养基及其制备方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸馏水)：蛋白胨9.0-10；氯酚红0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；复合生长因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；无菌马血清80-100ml氯化钠5.0-6.0；混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2；精氨酸盐酸盐3.0-4.0；琼脂粉(固体)14.0-16.0；蒸馏水加至1000；pH6.3±0.3(25℃)培养基呈橙黄色、澄清透明。

2、  一种权利要求1所述改良液固一步解脲支原体培养基的制备方法，其特征在于具有如下的步骤：
1)、将蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化钠、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐按比例进行加温、溶解；
2)、将复合生长因子、琼脂(液体基不加琼脂)按比例加热溶解于蒸馏水中，冷至54℃；
3)、将溶解的1)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷却后调PH6.1-6.3；
4)、加氯酚红、分装后，压力蒸汽灭菌115℃，20-30min。冷至50℃，在无菌条件下加马血清、混合抗生素、尿素混合均匀；
5)、在无菌条件下将固体基分装试管，制备成斜面培养基；冷却凝固；
6)、在无菌条件下将液体基分装凝固的斜面培养基里，每支加2ml，冷藏备用。

改良液固一步解脲支原体培养基
技术领域
本发明涉及一种改良液固一步解脲支原体培养基，特别是一种解脲脲原体和人型支原体液固一步法培养基及其制备方法。包括(1)固体培养基(2)液体培养基，其主要成分是蛋白胨、氯酚红、胰蛋白胨、复合生长因子、酵母浸膏、马血清、氯化钠、混合抗生素、尿素、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐。该培养基能够检测生殖道支原体阳性结果，具有指导临床诊断和治疗的作用，为防止滥用抗菌药物也具有重要意义。解脲支原体是人类泌尿生殖道的条件致病性病原体，它可引起泌尿生殖道多种疾病的发生。该培养基采用优质的支原体基础培养基，富含高营养物和其所需的基质(尿素)及特殊的抑菌剂，并添加氯酚红指示剂组成，可快速准确地检测出临床标本中的解脲支原体。引起非淋菌性尿道炎的支原体有解脲支原体、人型支原体和生殖支原体。不同的支原体使用不同的培养基。包括液体和固体培养基。检测解脲支原体和人型支原体最可靠的方法是先接种于液体培养基，待有生长后(液体颜色发生改变)，再接种于固体培养基上，72小时后，如无菌落生长可视为阴性。生殖支原体主要用于液体培养基14天后无生长可视为阴性。检测方法复杂、时间长、准确性差。
背景技术
本发明的目的在于提供一种解脲与人型支原体改良液固一步法解脲支原体培养基，对泌尿生殖道标本支原体进行快速检测，与传统的培养基比较.改良液固一步法解脲支原体培养基以布氏肉汤为基础，并增加小牛血清含量；将传统培养基中的抑菌剂青霉素改为万古霉素、氟康唑与多粘菌素；将解脲培养基中的酚红指示剂改为氯酚红.结果改良液固一步法解脲支原体培养基与其它类培养基相比具备下列特点：改良液固一步法解脲支原体培养基营养丰富、配制简单、选择性强和变色灵敏，与传统培养基比较，检出率高，污染小，临床应用效果满意.接种样本24小时后，即能得到液体筛选增菌，又能达到固体观察菌落生长情况，检测方法简单、时间短、准确性强。
发明内容
本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种改良液固一步法解脲支原体培养基。
本发明选择的培养基配方如下(克/每升蒸馏水)蛋白胨9.0-10；氯酚红0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；复合生长因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；无菌马血清80-100ml氯化钠5.0-6.0；混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2；精氨酸盐酸盐3.0-4.0；琼脂粉(固体)14.0-16.0。蒸馏水加至1000。pH6.3±0.3(25℃)培养基呈橙黄色、澄清透明。
培养基中含有蛋白胨、酵母抽提物、马血清、生长因子等营养物，并加有尿素、精氨酸底物及酚红指示剂；当有Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸被分解，生成的碱性物质引起pH值上升，培养基由黄变红。培养基内加有混合抗生素，可抑制泌尿生殖道中G+、G-细菌和真菌生长。养基中不加葡萄糖，分别加入精氨酸及尿素，观察pH变化情况。Mg不能水解精氨酸及尿素，因此不发生pH变化。脲原体产生的集落稍大而呈深棕色，故甚易检出。
解脲支原体和人型支原体将先接种于液体培养基，待有生长后(液体颜色发生改变)，再接种于固体培养基上，72小时后，观察无菌落生长。而改良液固一步法，接种样本24小时后，即能得到液体筛选增菌，又能达到固体观察菌落生长情况，检测方法简单、时间短、准确性强。人型支原体菌落则呈典型“煎蛋”样，直径可达200-300um。生殖道支原体集落常小得多，且外观很多都不典型。培养到的微生物需作品种鉴定，而分离过程中常规测定的某些非特征，可能提拱线索。如由生殖泌尿道分离到的标本，产生碱性颜色改变而使含精氨酸的基质混浊，则以含人型支原体的可能性最大；在含脲基质中产生类似改变，则几可肯定为脲原体。提高了试剂的灵敏度、特异性和稳定性。
本发明产品的制备方法是：
1)、将蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化钠、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐按比例进行加温、溶解；
2)、将复合生长因子、琼脂(液体基不加琼脂)按比例加热溶解于蒸馏水中，冷至54℃；
3)、将溶解的1)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷却后调PH6.1-6.3；
4)、加氯酚红、分装后，压力蒸汽灭菌¨5℃，20-30min。冷至50℃，在无菌条件下加马血清、混合抗生素、尿素混合均匀；
5)、在无菌条件下将固体基分装试管，制备成斜面培养基；冷却凝固；
6)、在无菌条件下将液体基分装凝固的斜面培养基里，每支加2ml，冷藏备用。
本发明具有以下优点：(1)改良液固一步法解脲支原体培养基营养丰富、配制简单；(2)选择性强、变色灵敏、检出率高、污染小，临床应用效果满意；(3)接种样本24小时后，即能得到液体筛选增菌，又能达到固体观察菌落生长情况，检测方法简单、时间短、准确性强；(4)灵敏度高、特异性强、稳定性好。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明：
按照下表所列数据(克/每升蒸馏水)及其所述步骤进行配置：
配方一：
蛋白胨9.0-10.0；氯酚红0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；复合生长因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；无菌马血清80-100ml氯化钠5.0-6.0；混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2；精氨酸盐酸盐3.0-4.0；琼脂粉(固体)14.0-16.0。蒸馏水加至1000。pH6.3±0.3(25℃)培养基呈橙黄色、澄清透明。
                                                                               
配方二：
蛋白胨9.5-10.0；氯酚红0.05-0.06；胰蛋白胨4.5-6.0；复合生长因子15.0-20.0；酵母浸膏3.0-4.0；无菌马血清85-100ml氯化钠5.5-6.0；混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)12-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2；精氨酸盐酸盐3.5-4.0；琼脂粉(固体)15.0-16.0。蒸馏水加至1000。pH6.3±0.3(25℃)培养基呈橙黄色、澄清透明。
                                                                               
配方三：
蛋白胨9.0-9.5；氯酚红0.05-0.06；胰蛋白胨4.5-5.5；复合生长因子10.0-18.0；酵母浸膏2.0-3.0；无菌马血清80-90ml氯化钠5.0-5.5；混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)10-13ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2；精氨酸盐酸盐3.0-3.5；琼脂粉(固体)14.0-15.0。蒸馏水加至1000。pH6.3±0.3(25℃)培养基呈橙黄色、澄清透明。