一种阿胶肽的提取方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201010540517.1

申请日:

2010.11.11

公开号:

CN102021215A

公开日:

2011.04.20

当前法律状态:

终止

有效性:

无权

法律详情:

未缴年费专利权终止IPC(主分类):C12P 21/02申请日:20101111授权公告日:20121212终止日期:20141111|||专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):C12P 21/02变更事项:专利权人变更前:湖北远成药业有限公司变更后:湖北远成赛创科技有限公司变更事项:地址变更前:430064 湖北省武汉市武昌区中山路496号变更后:430064 湖北省武汉市武昌区中山路496号|||文件的公告送达IPC(主分类):C12P 21/02收件人:湖北远成赛创科技有限公司专利负责人文件名称:视为未提出通知书|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12P 21/02申请日:20101111|||公开

IPC分类号:

C12P21/02

主分类号:

C12P21/02

申请人:

湖北远成药业有限公司

发明人:

叶传发; 张小东; 胡承四; 叶思

地址:

430064 湖北省武汉市武昌区中山路496号

优先权:

专利代理机构:

武汉宇晨专利事务所 42001

代理人:

王敏锋

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内容摘要

本发明公开了一种阿胶肽的提取方法,该方法采用阿胶为主要原料,经过配水升温蒸煮、复合蛋白酶酶解、风味蛋白酶外切、灭酶、脱色、膜分离,最后将得到的浓缩液干燥即得到产品阿胶肽。本发明方法生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质,所得产品的安全性高,可广泛应用于保健品、药品等领域。

权利要求书

1: 一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下 : 1)、以东阿阿胶为原料,加入原料重量的 6-8 倍的蒸馏水搅拌均匀,升温至 100℃ 蒸煮 6-8h ; 2)、蒸煮完毕后,冷却至 50-60 ℃,调 pH 值为 7-8,然后分别按原料阿胶重量的 1-
2: 5% 和 0.5-1% 的比例加入 25U/mg 的碱性蛋白酶和 35U/mg 的胰蛋白酶,恒温搅拌酶 解 6-10h,反应过程中保持体系 pH 值在 7-8 ;再按原料阿胶重量的 1-2% 加入 30U/mg 的 风味蛋白酶,搅拌酶解 5-8h,酶解过程中保持反应体系的 pH 值为 7-8 ;将得到的酶解液 升温至 90-100℃,保温 10-20min 灭酶 ; 3)、将酶解液离心后过滤,除去蛋白酶,上清液中按原料阿胶重量的 2-2.5% 加入 粉末状活性炭脱色,然后再使用膜分离手段进行分离,浓缩,将浓缩液干燥即得到阿胶 肽干品。 2. 如权利要求 1 所述的方法,其特征在于 :所述的活性炭脱色的温度和时间分别为 55℃和 1h。
3: 如权利要求 1 所述的方法,其特征在于 :所述的膜分离的膜孔径为 1nm。
4: 如权利要求 1 所述的方法,其特征在于 :所述的干燥为喷雾干燥。

说明书


一种阿胶肽的提取方法

    【技术领域】
     本发明方法涉及阿胶的深加工技术领域,具体涉及一种阿胶肽的提取方法,是 一种以阿胶为原料,利用生物复合酶酶解阿胶从而获取阿胶肽的方法。背景技术
     阿胶为马科动物驴的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。 性味甘、平, 归肺肝肾经,功能补血、止血、滋阴润燥,主治血虚症,另可用于肿瘤的辅助治疗。 阿 胶主含胶原蛋白,但胶原蛋白的消化吸收需要蛋白酶参与降解,而适应症人群则常见脾 胃虚弱或有胃肠道反应,服用阿胶不仅会造成患者消化系统的负担,而且药效也不能得 到充分的发挥。
     而采用现代生物酶切技术对阿胶进行处理得到的小分子阿胶肽,可以有效克服 上述问题,为人类健康带来福音。 阿胶肽具有以下特性 :1、阿胶肽对缺铁性贫血有明显 的补血作用。 它具有升高红细胞和血红蛋白的作用,可促进造血功能 ;能升高白细胞、 血小板和提高血氧含量。 2、阿胶肽能增加血清钙含量,调节人体内钙的平衡,提高耐缺 氧,耐疲劳能力。 3、阿胶肽具有止血、抗疲劳、抗休克、抗辐射、抗肌痿、耐寒冷、提 高肌体免疫力、滋阴补肾、强筋健骨以及利尿消肿等作用。 此外,它能扩张微血管,扩 大血容量,降低血粘度和降低血管壁通透性作用。
     目前,提取阿胶肽的方法主要有碱液提取法和生物酶解法,前者在提取过程中 使用了大量的碱处理,既对环境造成污染又对人体存在安全隐患,还破坏了蛋白质的成 分。 中国专利申请阿胶低肽的制备方法,公开号 CN 101294186A 中使用的是胃蛋白酶和 胰蛋白酶进行水解,继而用超滤柱进行超滤,接着用大孔吸附树脂分离纯化,减压,低 温浓缩,干燥得成品,该方法操作步骤繁琐,不适合工业化生产,而浓缩操作容易破坏 产品的品相,也没有用到膜分离技术,影响了产品的质量。 本发明在复合酶水解的基础 上,进而采用风味蛋白酶进行定向外切,得到的产品的总蛋白中,分子量在 500-3000 道 尔顿的阿胶肽在 97%以上。 发明内容
     针对现有技术中存在的不足,本发明的目的在于提供了一种阿胶肽的提取方 法,以阿胶为原料,无需用碱处理,利用复合酶酶解,然后再通过膜分离技术脱盐和浓 缩,提取出阿胶肽。 本发明操作简便,对环境友好,非常适合工业化生产。
     为了实现上述技术目的,本发明采取以下技术措施 :
     一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下 :
     1、以正宗东阿阿胶块 ( 蛋白质 60-80wt% ) 为原料,加入原料重量的 6-8 倍的蒸 馏水搅拌均匀,升温至 100℃蒸煮 6-8h ;
     2、冷却至 50-60 ℃,调 pH 值为 7-8,然后分别按原料阿胶重量的 1-2.5 %和 0.5-1 %的比例加入碱性蛋白酶和胰蛋白酶,反应过程中用氢氧化钠溶液维持体系 pH在 7-8,恒温搅拌酶解 6-10h ;再按原料阿胶重量的 1-2 %加入风味蛋白酶,搅拌酶解 5-8h,酶解过程中保持反应体系的 pH 值为 7-8 ;将得到的酶解液升温至 90-100℃,保持 10-20min 灭酶 ;
     3、将酶解液离心后过滤,除去蛋白酶,上清液中按原料阿胶重量的 2-2.5%加 入粉末状活性炭,55℃搅拌吸附 1h 脱色,然后再使用膜分离手段进行分离,浓缩,将浓 缩液干燥即得到阿胶肽干品。
     本发明方法中使用的碱性蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶的酶活力分别为 : 25U/mg、35U/mg 和 30U/mg。
     与现有技术相比,本发明方法的优点和有益效果如下 :
     1、有效避开了化学手段处理所带来的环境污染及对人体伤害的问题 ;
     2、本发明方法生产出来的阿胶肽产品的纯度高,而且其总蛋白质中分子量在 500-3000 道尔顿的肽含量达到 97%以上,分子量 ≥3000 道尔顿的在 3%以内 ;
     3、本发明方法生产出来的阿胶肽的分子量小,人体容易吸收,吸收率达 90%以 上;
     4、本发明方法采用了活性炭脱色,所得产品为白色均匀粉末,保证了产品的天 然洁白度 ; 5、本发明方法的生产周期短、操作简便、成本低、安全无毒副作用,可广泛应 用于多功能保健品、药品等领域。
     具体实施方式
     下面通过具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。
     实施例 1 :
     一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下 :
     1、称取正宗东阿阿胶块 ( 蛋白质 60-80wt% )1kg,然后加入蒸馏水 7kg,搅拌均 匀后,升温至 100℃蒸煮 8h ;
     2、冷却至 55℃,用 0.1M 的食品级片状氢氧化钠溶液调 pH 至 7-8,然后加入 25g 碱性蛋白酶和 10g 胰蛋白酶,在 55℃下搅拌酶解 10h,酶解过程中用上述 0.1M 氢氧化钠 溶液保持反应体系的 pH 值稳定在 7-8 ;再加入 10g 风味蛋白酶,55℃搅拌酶解 8h,酶解 过程中用上述 0.1M 的氢氧化钠溶液保持反应体系 pH 值在 7-8 ;然后升温至 95℃,保温 15min 灭酶 ;
     3、将酶解液过滤,得上清液 ;上清液中加入 25g 粉末状活性炭,55℃搅拌吸附 1h 脱色,滤除活性炭 ;滤液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩 ;浓 缩液经喷雾干燥,得到 415g 白色 ( 本发明中采用活性炭脱色,所得产品的色泽为白色, 优于国家标准规定的淡黄色 ) 粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表 1。
     表 1 实施例 1 所得产品的检测报告
     实施例 2 :
     一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下 :
     1、称取正宗东阿阿胶块 ( 蛋白质 60-80wt% )2kg,然后加入蒸馏水 14kg,搅拌 均匀后,升温至 100℃蒸煮 6h ;
     2、冷却至 50℃,用 0.1M 的食品级片状氢氧化钠的溶液调 pH 至 7-8,然后加入 20g 碱性蛋白酶和 10g 胰蛋白酶,在 50℃下搅拌酶解 8h,酶解过程中用上述 0.1M 的氢氧 化钠溶液保持反应体系的 pH 值稳定在 7-8 ;再加入 30g 风味蛋白酶,50℃搅拌酶解 7h, 酶解过程中用上述 0.1M 的氢氧化钠溶液保持反应体系 pH 值在 7-8 ;然后升温至 100℃, 保温 10min 灭酶 ;
     3、将酶解液过滤,得上清液 ;上清液中加入 45g 粉末状活性炭,55℃搅拌吸附 1h 脱色,滤除活性炭 ;滤液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩 ;浓 缩液经喷雾干燥,得到 835g 白色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表 2。
     表 2 实施例 2 所得产品的检测报告
     实施例 3 :
     一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下 :
     1、称取正宗东阿阿胶块 ( 蛋白质 60-80wt% )10kg,然后加入蒸馏水 80kg,搅拌 均匀后,升温至 100℃蒸煮 7h ;
     2、冷却至 55℃,用 0.1M 的食品级片状氢氧化钠的溶液调 pH 至 7-8,然后加入 200g 碱性蛋白酶和 100g 胰蛋白酶,在 55℃下搅拌酶解 7h,酶解过程中用上述 0.1M 的氢 氧化钠溶液保持反应体系的 pH 值稳定在 7-8 ;再加入 200g 的风味蛋白酶,55℃搅拌酶 解 5h,酶解过程中用上述 0.1M 的氢氧化钠溶液保持反应体系 pH 值在 7-8 ;然后升温至 90℃,保温 20min 灭酶 ;
     3、将酶解液过滤,得上清液 ;上清液中加入 250g 粉末状活性炭,55℃搅拌吸 附 1h 脱色,滤除活性炭 ;滤液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩 ; 浓缩液经喷雾干燥,得到 4.16kg 白色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表 3。
     表 3 实施例 3 所得产品的检测报告
     实施例 4 :
     一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下 :
     1、称取正宗东阿阿胶块 ( 蛋白质 60-80wt% )100kg,然后加入蒸馏水 600kg,搅 拌均匀后,升温至 100℃蒸煮 6h ;
     2、冷却至 60℃,用 0.1M 的食品级片状氢氧化钠的溶液调 pH 至 7-8,然后加入 1.5kg 碱性蛋白酶和 0.75kg 胰蛋白酶,在 60℃下搅拌酶解 6h,酶解过程中用上述 0.1M 的 氢氧化钠溶液保持反应体系的 pH 值稳定在 7-8 ;再加入 1.8kg 的风味蛋白酶,60℃搅拌 酶解 6h,酶解过程中用上述 0.1M 的氢氧化钠溶液保持反应体系 pH 值在 7-8 ;然后升温 至 95℃,保温 15min 灭酶 ;
     3、将酶解液过滤,得上清液 ;上清液中加入 2kg 粉末状活性炭,55℃搅拌吸附 1h 脱色,滤除活性炭 ;滤液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩 ;浓 缩液经喷雾干燥,得到 42.5kg 白色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表 4。
     表 4 实施例 4 所得产品检测报告
     8

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1、10申请公布号CN102021215A43申请公布日20110420CN102021215ACN102021215A21申请号201010540517122申请日20101111C12P21/0220060171申请人湖北远成药业有限公司地址430064湖北省武汉市武昌区中山路496号72发明人叶传发张小东胡承四叶思74专利代理机构武汉宇晨专利事务所42001代理人王敏锋54发明名称一种阿胶肽的提取方法57摘要本发明公开了一种阿胶肽的提取方法,该方法采用阿胶为主要原料,经过配水升温蒸煮、复合蛋白酶酶解、风味蛋白酶外切、灭酶、脱色、膜分离,最后将得到的浓缩液干燥即得到产品阿胶肽。本发明方法生产周。

2、期短、成本低、不产生任何有毒有害物质,所得产品的安全性高,可广泛应用于保健品、药品等领域。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页CN102021229A1/1页21一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下1)、以东阿阿胶为原料,加入原料重量的68倍的蒸馏水搅拌均匀,升温至100蒸煮68H;2)、蒸煮完毕后,冷却至5060,调PH值为78,然后分别按原料阿胶重量的125和051的比例加入25U/MG的碱性蛋白酶和35U/MG的胰蛋白酶,恒温搅拌酶解610H,反应过程中保持体系PH值在78;再按原料阿胶重量的12加入30U/MG的风味蛋白酶,搅拌酶解58H,。

3、酶解过程中保持反应体系的PH值为78;将得到的酶解液升温至90100,保温1020MIN灭酶;3)、将酶解液离心后过滤,除去蛋白酶,上清液中按原料阿胶重量的225加入粉末状活性炭脱色,然后再使用膜分离手段进行分离,浓缩,将浓缩液干燥即得到阿胶肽干品。2如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的活性炭脱色的温度和时间分别为55和1H。3如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的膜分离的膜孔径为1NM。4如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的干燥为喷雾干燥。权利要求书CN102021215ACN102021229A1/6页3一种阿胶肽的提取方法技术领域0001本发明方法涉及阿胶的深加工技术领域,具体。

4、涉及一种阿胶肽的提取方法,是一种以阿胶为原料,利用生物复合酶酶解阿胶从而获取阿胶肽的方法。背景技术0002阿胶为马科动物驴的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。性味甘、平,归肺肝肾经,功能补血、止血、滋阴润燥,主治血虚症,另可用于肿瘤的辅助治疗。阿胶主含胶原蛋白,但胶原蛋白的消化吸收需要蛋白酶参与降解,而适应症人群则常见脾胃虚弱或有胃肠道反应,服用阿胶不仅会造成患者消化系统的负担,而且药效也不能得到充分的发挥。0003而采用现代生物酶切技术对阿胶进行处理得到的小分子阿胶肽,可以有效克服上述问题,为人类健康带来福音。阿胶肽具有以下特性1、阿胶肽对缺铁性贫血有明显的补血作用。它具有升高红细胞和血。

5、红蛋白的作用,可促进造血功能;能升高白细胞、血小板和提高血氧含量。2、阿胶肽能增加血清钙含量,调节人体内钙的平衡,提高耐缺氧,耐疲劳能力。3、阿胶肽具有止血、抗疲劳、抗休克、抗辐射、抗肌痿、耐寒冷、提高肌体免疫力、滋阴补肾、强筋健骨以及利尿消肿等作用。此外,它能扩张微血管,扩大血容量,降低血粘度和降低血管壁通透性作用。0004目前,提取阿胶肽的方法主要有碱液提取法和生物酶解法,前者在提取过程中使用了大量的碱处理,既对环境造成污染又对人体存在安全隐患,还破坏了蛋白质的成分。中国专利申请阿胶低肽的制备方法,公开号CN101294186A中使用的是胃蛋白酶和胰蛋白酶进行水解,继而用超滤柱进行超滤,接。

6、着用大孔吸附树脂分离纯化,减压,低温浓缩,干燥得成品,该方法操作步骤繁琐,不适合工业化生产,而浓缩操作容易破坏产品的品相,也没有用到膜分离技术,影响了产品的质量。本发明在复合酶水解的基础上,进而采用风味蛋白酶进行定向外切,得到的产品的总蛋白中,分子量在5003000道尔顿的阿胶肽在97以上。发明内容0005针对现有技术中存在的不足,本发明的目的在于提供了一种阿胶肽的提取方法,以阿胶为原料,无需用碱处理,利用复合酶酶解,然后再通过膜分离技术脱盐和浓缩,提取出阿胶肽。本发明操作简便,对环境友好,非常适合工业化生产。0006为了实现上述技术目的,本发明采取以下技术措施0007一种阿胶肽的提取方法,其。

7、步骤如下00081、以正宗东阿阿胶块蛋白质6080WT为原料,加入原料重量的68倍的蒸馏水搅拌均匀,升温至100蒸煮68H;00092、冷却至5060,调PH值为78,然后分别按原料阿胶重量的125和051的比例加入碱性蛋白酶和胰蛋白酶,反应过程中用氢氧化钠溶液维持体系PH说明书CN102021215ACN102021229A2/6页4在78,恒温搅拌酶解610H;再按原料阿胶重量的12加入风味蛋白酶,搅拌酶解58H,酶解过程中保持反应体系的PH值为78;将得到的酶解液升温至90100,保持1020MIN灭酶;00103、将酶解液离心后过滤,除去蛋白酶,上清液中按原料阿胶重量的225加入粉末状。

8、活性炭,55搅拌吸附1H脱色,然后再使用膜分离手段进行分离,浓缩,将浓缩液干燥即得到阿胶肽干品。0011本发明方法中使用的碱性蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶的酶活力分别为25U/MG、35U/MG和30U/MG。0012与现有技术相比,本发明方法的优点和有益效果如下00131、有效避开了化学手段处理所带来的环境污染及对人体伤害的问题;00142、本发明方法生产出来的阿胶肽产品的纯度高,而且其总蛋白质中分子量在5003000道尔顿的肽含量达到97以上,分子量3000道尔顿的在3以内;00153、本发明方法生产出来的阿胶肽的分子量小,人体容易吸收,吸收率达90以上;00164、本发明方法采用了活性炭。

9、脱色,所得产品为白色均匀粉末,保证了产品的天然洁白度;00175、本发明方法的生产周期短、操作简便、成本低、安全无毒副作用,可广泛应用于多功能保健品、药品等领域。具体实施方式0018下面通过具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。0019实施例10020一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下00211、称取正宗东阿阿胶块蛋白质6080WT1KG,然后加入蒸馏水7KG,搅拌均匀后,升温至100蒸煮8H;00222、冷却至55,用01M的食品级片状氢氧化钠溶液调PH至78,然后加入25G碱性蛋白酶和10G胰蛋白酶,在55下搅拌酶解10H,酶解过程中用上述01M氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值稳定在7。

10、8;再加入10G风味蛋白酶,55搅拌酶解8H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后升温至95,保温15MIN灭酶;00233、将酶解液过滤,得上清液;上清液中加入25G粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到415G白色本发明中采用活性炭脱色,所得产品的色泽为白色,优于国家标准规定的淡黄色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表1。0024表1实施例1所得产品的检测报告0025说明书CN102021215ACN102021229A3/6页500260027实施例20028一种阿胶肽的。

11、提取方法,其步骤如下00291、称取正宗东阿阿胶块蛋白质6080WT2KG,然后加入蒸馏水14KG,搅拌均匀后,升温至100蒸煮6H;00302、冷却至50,用01M的食品级片状氢氧化钠的溶液调PH至78,然后加入20G碱性蛋白酶和10G胰蛋白酶,在50下搅拌酶解8H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值稳定在78;再加入30G风味蛋白酶,50搅拌酶解7H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后升温至100,保温10MIN灭酶;00313、将酶解液过滤,得上清液;上清液中加入45G粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM。

12、的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到835G白色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表2。0032表2实施例2所得产品的检测报告0033说明书CN102021215ACN102021229A4/6页600340035实施例30036一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下00371、称取正宗东阿阿胶块蛋白质6080WT10KG,然后加入蒸馏水80KG,搅拌均匀后,升温至100蒸煮7H;00382、冷却至55,用01M的食品级片状氢氧化钠的溶液调PH至78,然后加入200G碱性蛋白酶和100G胰蛋白酶,在55下搅拌酶解7H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值稳。

13、定在78;再加入200G的风味蛋白酶,55搅拌酶解5H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后升温至90,保温20MIN灭酶;00393、将酶解液过滤,得上清液;上清液中加入250G粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到416KG白色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表3。0040表3实施例3所得产品的检测报告0041说明书CN102021215ACN102021229A5/6页700420043实施例40044一种阿胶肽的提取方法,其步骤如下00451、称取正宗东阿阿胶块蛋白质。

14、6080WT100KG,然后加入蒸馏水600KG,搅拌均匀后,升温至100蒸煮6H;00462、冷却至60,用01M的食品级片状氢氧化钠的溶液调PH至78,然后加入15KG碱性蛋白酶和075KG胰蛋白酶,在60下搅拌酶解6H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值稳定在78;再加入18KG的风味蛋白酶,60搅拌酶解6H,酶解过程中用上述01M的氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后升温至95,保温15MIN灭酶;00473、将酶解液过滤,得上清液;上清液中加入2KG粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到425KG白色粉末状阿胶肽,所得产品的检测报告见表4。0048表4实施例4所得产品检测报告0049说明书CN102021215ACN102021229A6/6页80050说明书CN102021215A。

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