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1、10申请公布号CN102001947A43申请公布日20110406CN102001947ACN102001947A21申请号201010577116322申请日20101208C07C69/732200601C07C67/4820060171申请人广西金宏昕生物科技有限公司地址546200广西壮族自治区来宾市忻城县红渡工业园区72发明人罗亚东关健敏74专利代理机构广西南宁汇博专利代理有限公司45114代理人邹超贤54发明名称一种金银花绿原酸的制备方法57摘要本发明公开了一种金银花绿原酸的制备方法，是采用金银花及其枝叶为原料，水提后用水溶性有机溶剂与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然。
2、后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为3050的分配平衡，再用与两水相不相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取剂进行萃取的三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，后经过脱色、结晶和干燥得到质量分数为95绿原酸产品。本发明减化了生产工艺，重复性较好，生产的绿原酸质量分数高，无污染物排放，适合工业化生产。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书5页附图1页CN102001957A1/2页21一种金银花绿原酸的制备方法，其特征在于采用水提液液萃取法将金银花。
3、有效成分绿原酸分离纯化方法，金银花用热水浸提，水提液浓缩，液相萃取，用水溶性有机溶剂与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为3050的分配平衡，再用与两水相不相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取剂进行萃取，后经脱色、结晶和干燥得到绿原酸产品，其工艺操作过程为1预处理将原料金银花经除杂，粗破碎或剪段后备用；2水提将预处理的金银花加入提取设备中，按原料与水13的比例加入水，并加入抗氧化剂，加热保温提取三次，控制温度为6070，保温时间为0515H，合并提取液；3浓缩将。
4、提取液导入浓缩设备进行减压浓缩，控制温度为60，真空度为008MPA，浓缩成7585波美度的浸膏；4萃取将浓缩的浸膏加入萃取设备中，加入原料金银花的重量100200倍的乙醇，并加入无机盐，搅拌，静置0515H形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的两相萃取剂萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂萃取，得到水溶相萃取液；5脱色将上步萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液；6结晶将上步纯化萃取液加入微量丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有机溶剂；7干燥真空干燥，控制温度为60，真空度为008MPA，得到高纯度绿原酸产品。2根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述。
5、的液液萃取法，是复合物辅助的无机盐水溶液水溶性有机溶剂水难溶性有机溶剂的三相萃取体系。3根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的原料金银花，包括金银花干或鲜的花、叶和枝杆中的一种或多种。4根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的抗氧化剂，包括亚硫酸氢钠和EDTA，使用量为万分之0520，调节溶液PH值为32。5根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的水难溶萃取剂，包括石油醚、乙酸乙酯、丁醇中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的115倍。6根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的水溶萃取剂，包括乙醇、甲基聚。
6、丙二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基葡聚糖、甲基纤维素、葡聚糖及其衍生物中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的0204。7根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的无机盐，为水溶性无机盐，包括硫酸铵、磷酸钾、磷酸氢钾和氯化钠中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的3545。8根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的搅拌，为离心分相均匀搅拌。9根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的提取设备、浓缩设备和萃取设备，包括采用不锈钢、搪瓷和铝合金制作的反应罐、反应釜和反应锅中的一权利要求书CN102001947。
7、ACN102001957A2/2页3种或多种设备。权利要求书CN102001947ACN102001957A1/5页4一种金银花绿原酸的制备方法技术领域0001本发明属于制药技术领域，涉及一种金银花绿原酸的制备方法。背景技术0002绿原酸CNOROGENICACID是植物体在有氧呼吸过程中合成的一种苯丙素类物质，它是许多中草药如金银花、杜仲、茵陈等的主要有效成分之一，也是众多水果蔬菜中的重要活性成分。金银花的绿原酸含量为181292，越冬期老叶绿原酸含量为花的141倍，叶中绿原酸含量相当于藤的4倍。越冬老叶和修剪枝叶的经济产量指数为金银花干花的15倍。因此，现代仅以花为药用原料及饮料、化妆品原。
8、料是自然资源的浪费。绿原酸具有清除自由基、抗茵消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利胆等多种功效，尤其近年来发现绿原酸类物质有抗癌、抗艾滋病的作用，可做为先导设计开发抗癌、抗艾滋病药物。同时，其抗氧化能力要强于咖啡酸、对经苯酸、阿魏酸、丁香酸等，是良好的抗氧化剂。绿原酸不仅应用于医药行业上，在日用化工、食品等领域都有广泛的应用。经检索，金银花中绿原酸的提取纯化方法摘录如下0003中国专利申请号011441704，金银花中绿原酸的提取纯化方法。该方法的技术方案是将金银花粗碎成小段，用稀乙醇对金银花进行二次回流提取，浓缩提取物再用絮凝法初步除杂纯化，最后采用大孔树脂法或酸性乙酸乙酯萃取法纯化精制。000。
9、4中国专利申请号2004100357585，从金银花中提取制各绿原酸的工艺。该工艺的技术方案是金银花加水或乙醇进行三次，每次时间为2535小时，金银花与水或乙醇之比为15回流提取，过滤，收集滤液并回收溶剂，加乙醇沉淀杂质，过夜，过滤，减压回收溶剂，加水适量，静置过夜，过滤，滤液上粒度为2060目的苯乙烯型树脂DM130或丙烯脂型树脂D101大孔树脂柱，用洗脱剂浓缩，收集含有绿原酸的组分，上聚酰胺柱，用洗脱剂水或乙醇洗脱，收集含有绿原酸的组分，浓缩，用有机溶剂指乙酸乙酯或异戊醇萃取精制，或用硅胶色谱柱纯化得到绿原酸。0005中国专利申请号2005100202659，金银花绿原酸提取技术。该技术是。
10、采用金银花鲜花、鲜叶、鲜藤为原料，将打浆、醇沉、膜分离工艺与超临界流体CO2萃取联用，提取出活性物质金银花绿原酸及附产物金银花总黄酮。0006中国专利申请号2009100479157，一种从金银花中提取分离绿原酸的方法。该方法的技术是通过如下制备步骤实现的1醇浸泡将金银花置于醇溶液中浸泡，加热回流3次，每次13小时，加水，冷藏12小时以上，过滤，减压浓缩；2脱脂所得滤液采用弱极性溶剂脱脂三次，取水层；3上大孔树脂富集2步所得水层溶液通过大孔树脂，水洗，收集流出液及水洗液，浓缩，调节PH值18221；4萃取采用中等极性溶剂萃取3步所得，取有机层，浓缩回收溶剂，得到淡黄色蓬松固体物；5重结晶。本发。
11、明采用醇提法以提高绿原酸的提取率和转移率，使绿原酸的最终转移率高达84，所得产品纯度可达98以上。0007中国专利申请号2009101163842，金银花中绿原酸的萃取方法。该方法技术要点说明书CN102001947ACN102001957A2/5页5是将粉碎的金银花用石油醚进行动态浸提，提取液经过滤回收石油醚后，浓缩获得金银花香浸膏；石油醚浸提后的金银花，再以乙酸乙酪进行回流提取，提取液经过滤后回收乙酸乙酪，浓缩获金银花总黄酮；乙酸乙酪回流提取后的金银花，加水，动态提取，提取液经过滤、减压、浓缩、醇沉、脱色、纯化、浓缩、干燥，即得金银花绿原酸。0008中国专利申请号2010101969137。
12、，从金银花中提取高纯度绿原酸的方法。该方法技术方案是将金银花物料用低温超音速气流粉碎，得到细胞级金银花微粉；经酶化，超声波处理，水提过滤，得到绿原酸初液，再经絮凝，脱色、纯化、浓缩干燥，即得高纯度绿原酸。0009中国专利申请号CN200510105658X，一种由金银花粗提物制备高纯度绿原酸的方法。该方法是将金银花粗提物醇沉过滤、逆流萃取、浓缩、配制水相、柱析、收集解吸液，结晶干燥，得到绿原酸含量5092的产品。但是该方法制备的绿原酸纯度较低，最高仅能达到92，且层析柱不适合商业化工业生产，实用意义不大。0010中国专利申请号2005100200808，金银花高纯度绿原酸提取工艺。该工艺是1是。
13、通过加入NAHS031收率促进剂和澄清剂，板框压滤，再通过大孔吸附树脂柱上柱，得浓缩液，喷雾干燥得口服液绿原酸；2是通过加入乙醇沉淀，再加水水沉，二次澄清处理得澄清液，经活性炭处理，减压浓缩，喷雾干燥得注射用金银花提取物；3将所述澄清液加入5CD络合反应，再加入环己酮解络、转型得绿原酸浓缩液，真空干燥得含量90左右的绿原酸，环己酮免回收，套用于下一批次；4是将3所述的浓缩液，用乙醇溶解，上硅胶层析柱，分段解析，用薄层层析，测定，合并相同部分，减压干燥，结晶，得含量95绿原酸。虽然该方法所得绿原酸含量事95。但同样为硅胶柱层析，而且所得纯度在95左右，不适合商业化工业生产，实用意义不大。0011。
14、中国专利申请号2009101156694，一种绿原酸提取的方法。绿原酸提取工艺流程为水提4过柱萃取分相、重结晶。1水提对原料金银花或杜仲叶、杜仲皮进行预处理。将原料干燥，粉碎；粉碎后的原料经水提，过滤；2过柱将步骤1所得滤液调节PH153，上大孔树脂柱，洗脱，洗脱液浓缩；3萃取将调节步骤2所得浓缩液PH153，加乙酸乙酪萃取；4分相将步骤3所得萃取液加入分相剂，混合，收集下层水相5重结晶将步骤4所得水相结晶，重结晶。获得绿原酸成品。0012李萍等用低极性溶剂提取，然后用乙醇提取忍冬属植物叶，得到的浸膏水溶解，然后上大孔树脂柱，先用010乙醇洗脱，收集010乙醇洗脱液；再用2040乙醇洗脱，收集。
15、2040乙醇洗脱液。然后取010乙醇洗脱液，浓缩后，先加入乙醇至含醇量为4560，除去沉淀，上清液浓缩，再加入乙醇至含醇量为7585，除去沉淀，取上清液浓缩，得绿原酸粗品。0013目前，绿原酸的市售产品多从植物杜仲里边提取，而且所含杂质较多，从金银花中提取分离绿原酸尚未形成大规模商业化的生产。金银花中绿原酸进行提取的传统工艺有水煮法、水提醇沉、萃取、大孔树脂吸附等。但是由于绿原酸的不稳定特性，在提取分离过程中常常伴随着绿原酸的分解，很难得到高含量产品。一些已有技术中去杂纯化过程中因沉淀量大而导致的过滤困难，大孔树脂法存在的主要问题是，需要时间长，处理原料量底下、产品纯度低。一根大孔树脂柱，每次。
16、处理的浸膏样品量仅为吸附填料的5，而浸膏中目标物质的含量为0110，甚至更低经过分离后得到的粗产品产量很少，一根装填一吨填料的大孔树脂柱，一个流程仅能生产数公斤的粗产品。一个流程包括浸膏溶解成约5水说明书CN102001947ACN102001957A3/5页6溶液，加到层析住上，需要十数小时；然后水洗把未被吸附的游离物质洗去，又需十数小时；然后用一定比例的水溶剂乙醇进行第一次洗脱，除去非有效物质，需要数十小时；之后再用另一种溶剂体系把有效物质部位洗脱下来，又耗时数十小时。最后用纯溶剂乙醇洗脱柱子，洗去可溶解物质。若柱子污染程度较轻，乙醇洗后，用水把乙醇替换，即可进行下一次的分离。若柱子污染严。
17、重，醇洗、水洗后，还要进行碱溶液洗涤，然后水洗至中性；再用酸溶液洗涤，然后再用水洗至中性，再生过程才得以完成。从投溶液上柱，直到组分完全洗下，柱子再生，整个流程需要4天甚至更长时间。某些实验室的制备方法虽然能获得较高的纯度，却无法进行规模化工业生产。因此，虽然绿原酸的疗效确切，却一直由于提取分离的技术原因而无法申报国家一类新药。发明内容0014本发明的目的是克服已有技术中金银花处理量小，去杂纯化过程中因沉淀量大而导致的过滤困难，工艺流程长，难进行连续操作，绿原酸分离效果不理想，难工业化生产的技术问题，提供一种金银花绿原酸的制备方法。0015本发明的技术方案是将水提取金银花提取液采用无机盐水溶液。
18、水溶性有机溶剂水难溶性有机溶剂的液相萃取体系，分离过程不经过层析住分离工序，分离均在液相中进行。从总提取物中分离纯化，浓缩、结晶得到绿原酸产品。0016本发明是这样实现的0017金银花绿原酸的制备方法，是采用水提液液萃取法将金银花有效成分绿原酸分离纯化方法，将金银花用热水浸提，浓缩水提液，液相萃取，用水溶性有机溶剂与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为3050的分配平衡，然后用与两水相不相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取剂进行萃取，后径脱色、结晶和干燥得到绿原。
19、酸产品，其工艺操作过程为00181、预处理将原料金银花经除杂，粗破碎或剪段后备用。00192、水提将预处理的金银花加入提取设备中，按原料与水13的比例加入水，并加入抗氧化剂，加热保温提取三次，控制温度为6070，保温时间为0515H，合并提取液。00203、浓缩将提取液导入浓缩设备进行减压浓缩，控制温度为60，真空度为008MPA，浓缩成7585波美度的浸膏。00214、萃取将浓缩的浸膏加入萃取设备中，加入原料金银花的重量100200倍的乙醇，并加入无机盐，搅拌，静置0515H形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的两相萃取剂萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂萃取，得到水溶相萃取液。
20、。00225、脱色将上步萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液。00236、结晶将上步纯化萃取液加入丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有机溶剂。00247、干燥真空干燥，控制温度为60以下，真空度为008MPA，得到高纯度绿原酸产品。0025以上所述的液液萃取法，是复合物辅助的无机盐水溶液水溶性有机溶剂水难说明书CN102001947ACN102001957A4/5页7溶性有机溶剂的三相萃取体系。0026以上所述的原料金银花，包括金银花干或鲜的花、叶和枝杆中的一种或多种。0027以上所述的抗氧化剂，包括亚硫酸氢钠和EDTA，使用量为万分之0520，调节溶液PH值为32。0028以上所。
21、述的水难溶萃取剂，包括石油醚、乙酸乙酯、丁醇中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的115倍。0029以上所述的水溶萃取剂，包括乙醇、甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚氧乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基葡聚糖、甲基纤维素、葡聚糖及其衍生物中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的0204。0030以上所述的无机盐，为水溶性无机盐，包括硫酸铵、磷酸钾、磷酸氢钾和氯化钠中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的3545。0031以上所述的搅拌，为离心分相均匀搅拌。0032以上所述的提取设备、浓缩设备和萃取设备，包括采用不锈钢、搪瓷和铝合金制作的反应罐、反应釜和反应锅中的一种或多种设备。0。
22、033本发明的特点为0034本发明的金银花绿原酸的制备方法，是利用聚合物辅助的双水相有机溶剂三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，分离过程不经过层析住分离工序，分离均在液相中进行。经过脱色、浓缩、结晶后得到95高纯绿原酸。该方法与以往传统的硅胶柱层析、大孔吸附树脂层析方法相比，具有处理量大，工艺流程短，可进行连续操作、分离效率高的优点，其生产效率是传统方法的310倍，而且为均相体系，易于连续生产操作。附图说明0035图1是本发明的工艺流程示意图；具体实施方案0036下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。0037实施例一0038将经除杂、粗破碎或剪段的原料金银花干花、叶枝。
23、杆5重量份加入不锈钢反应罐中，按原料与水13的重量份比例加入去离子水，并加入抗氧化剂亚硫酸氢钠使用量为总投料量的万分之10，调节PH值为32，加热保温提取三次，控制温度为6567，保温时间为12H，合并提取液。然后将提取液导入不锈钢反应罐进行减压浓缩，控制温度为60，真空度为008MPA，浓缩成8波美度的浸膏。再将浓缩的浸膏加入不锈钢反应釜中，加入原料金银花的重量份180倍的乙醇，并加入无机盐硫酸铵40重量份，搅拌均匀，静置15H形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的两相萃取剂乙酸乙脂石油醚4重量份51，V/V萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂丁醇乙酸乙脂重量份08份萃取，得到水。
24、溶相萃取液。将萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液。将纯化萃取液加入微量丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有机溶剂，最后控制温度为60以下，真空度为008MPA以上进行真空干燥，得到高纯度绿原酸产品。说明书CN102001947ACN102001957A5/5页80039产品绿原酸得率为05，产品用高效液相色谱法测定纯度为953。0040实施例二0041将经除杂、粗破碎或剪段的原料金银干花5重量份加入铝合金反应罐中，按原料与水13的重量份比例加入去离子水，并加入抗氧化剂亚硫酸氢钠为总投料量的万分之14，调节PH值为32，加热保温提取三次，控制温度为6769，保温时间为115H，合并。
25、提取液。然后将提取液导入搪瓷反应釜进行减压浓缩，控制温度为60，真空度为008MPA，浓缩成78波美度的浸膏。再将浓缩的浸膏加入搪瓷反应釜中，加入原料金银花200重量份的乙醇，甲基聚丙二醇0113重量份，并加入无机盐硫酸铵40重量份，搅拌均匀，静置1H形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的两相萃取剂乙酸乙脂石油醚4重量份51，V/V萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂丁醇乙酸乙脂4重量份萃取，得到水溶相萃取液。将萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液。将纯化萃取液加入微量丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有机溶剂，最后控制温度为60以下，真空度为008MPA以上进行真空干燥，得到高纯度绿原酸产品。0042产品绿原酸得率为07，产品用高效液相色谱法测定纯度为951。说明书CN102001947ACN102001957A1/1页9图1说明书附图CN102001947A。