一种3S,4S4氨基3羟基6甲基庚酸及其类似物的制备方法.pdf

本发明提供了一种(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸(Statine)及其类似物的制备方法，该方法采用四步反应，先将氮端用Fmoc保护的氨基酸a与Meldrum’s acid b在DMAP和羧基活化剂存在下反应得化合物c；化合物c经关环反应生成Tetramic acid化合物d；化合物d在醋酸存在的条件下被还原为4-羟基-吡咯烷酮类衍生物e；化合物e在稀盐酸中回流反应得氮端Fmoc保护的Statine类似物。氮端Fmoc保护的Statine类似物经常规的有机合成方法可以转化为Statine及其类似物。本发明能够从价廉易得的原料出发、经过四步较为常见的有机化学的方法得到光学纯度非常高的Statine及其类似物。该四步反应的产率为45-70％。所得化合物经过核磁共振氢谱、质谱和旋光分析确定，结构无误。

1.  一种(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸及其类似物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将氮端用Fmoc保护的氨基酸与丙二酸环(亚)异丙酯和4-二甲胺基吡啶按1∶1∶1.2-1.8的摩尔比混合，以二氯甲烷为溶剂，搅拌溶解后缓慢滴加1.1-1.5摩尔的羧基活化剂，室温下反应2-5小时后倒入0-5℃的乙酸乙酯中，取乙酸乙酯相洗涤，干燥、过滤，滤液浓缩后得1，3-二氧杂环己烷-4，6-二酮衍生物c；
2)将化合物c在乙酸乙酯中加热回流，关环生成1，5-二氢-4-羟基-2H-吡咯-2-酮衍生物d；
3)将化合物d与还原剂以1∶1.5-2.0的摩尔比混合后溶于二氯甲烷，加入相当于5-8倍摩尔当量的氮端用Fmoc保护的氨基酸的醋酸，在0-4℃冰浴条件下反应2-5小时后终止反应；分相，水相用二氯甲烷萃取；合并有机相，洗涤，干燥、过滤，滤液浓缩后，经分离得4-羟基-吡咯烷酮类衍生物e；
4)将化合物e溶于1，4-二氧六环，加入相当于2-3倍摩尔当量的4-羟基-吡咯烷酮类衍生物e的2N的盐酸，加热回流1-3小时后冷却至室温，加入乙酸乙酯稀释，用纯水洗涤后除去溶剂得氮端Fmoc保护的Statine类似物；氮端Fmoc保护的Statine类似物经常规的有机合成方法转化为Statine及其类似物。

2.  根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的羧基活化剂为二环己基碳二亚胺或二异丙基碳二亚胺。

3.  根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的羧基活化剂为二异丙基碳二亚胺。

4.  根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于，所述乙酸乙酯相依次用5％NaHSO₄冷水和饱和食盐水进行洗涤。

5.  根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤3中所述的还原剂为硼氢化钠、氢化铝锂或钯碳和氢气。

6.  根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的还原剂为硼氢化钠。

7.  根据权利要求1-6任意一项所述的方法，其特征在于，所述洗涤先后采用纯水和饱和食盐水进行洗涤。

8.  根据权利要求1-7任意一项所述的方法，其特征在于，所述分离采用硅胶柱层析处理，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇。

一种(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸及其类似物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种氨基酸类化合物的制备方法，具体地说，涉及一种(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸及其类似物的制备方法。
背景技术
Statine的化学名为(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸，是一种重要的非天然氨基酸，其结构式如下：

1970年，Umezawa从天然产物中分离出一种多肽Pepstatin，这种多肽是天冬氨酸蛋白酶(如肾素、胃蛋白酶、组织蛋白酶D)的抑制剂，具有抗炎症活性。动力学研究表明，它的生理活性与Statine和酶的作用密切相关。进一步的研究表明：Statine能模拟天冬氨酸蛋白酶底物活性部位的四面体水解过渡态，从而达到与酶能有效结合且本身不易被酶切割的目的。因此，引入Statine片段成为设计天冬氨酸蛋白酶类抑制剂的重要策略。同时，人们在多种具有药理活性的天然产物中发现了Statine的类似物。由于天然产物中发现的Statine及Statine的类似物都具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎症等生理活性，因此，寻找高立体选择性的合成方法来合成这些具有光学活性的化台物一直备受关注。这不仅是弥补天然产物稀少的重要手段，也是对这些天然产物进行改造，以期达到增强活性、降低毒性、能应用于临床的前提。因此，发现、发展新型的Statine及其类似物的合成方法对于它们在药物化学、生物医学等领域中的应用研究将产生重要意义。
同时，用Fmoc保护的Statine类化合物是重要的医药中间体，在合成天冬氨酸蛋白酶类抑制剂、特别当利用固相组合化学方法构建该类化合物库时，是关键的合成子。探索Fmoc保护的Statine类化合物的合成新方法具有重要的学术意义和工业应用价值。Statine类化合物的结构式如下所示：

人们已经发展了多种方法来合成Statine和Fmoc-Statine及其类似物。对于Statine及其类似物而言，主要的合成策略包括：1)以光活性的α-氨基酸为原料，将其还原成α-氨基醛，将醛基对映选择性地转化成羟基并延长两个碳原子，得到光学活性的3-羟基-4-氨基酸。或将氨基酸转化为3-酮基-4-氨基酸酯，还原酮基得到3-羟基-4-氨基酸(PettitG R.J.Chem.Soc.Perkin Trans，1，1996，853-858及Williams R M.Tetrahedron Lett.，1994，35(50)，9371-9874及Franciotti M.TetrahedronLett.，1991，32(46)，6783-6786及Andrew R G.Tetrahedron Lett.，1987，28(52)，6535-6538及Schuda P F.J.Org.Chem.，1988，53(4)，878-875及Maibaum JJ.Org.Chem.，1988，55(4)，869-873及Midland M M.J.Am.Chem.Soc.1989，.111(12)，4368-4371)；2)以3-氨基-1，2-二醇衍生物为原料，将1-位羟基用氰基取代或将二醇转化为环氧化台物，然后用氰基亲核开环后，氰基水解得到Statine类似物(Castejon P.Tetrahedron，1996，52(20)，7063-7086及Bessodes M.J.Org.Chem.，1992，57(16)，4441-4444)；3)以光活性4-烯丙基-5-氧甲基(或苯硫基)-噁唑烷酮为原料，烷基通过亲核反应取代5-氧甲基(或苯硫基)，然后将双键臭氧化成羟基，得到5-烷基-4-羟基吡咯烷酮，经Cs₂CO₃/MeOH处理得Statine衍生物(Ishizuka T.Tetrahedron Lett.，1991，52(29)，8528-3526及Yamamoto T.J.Org.Chem.，1993，55(8)，1997-1998)；4)用其它原料的合成方法(Jouin P.J.Chem.Soc.Perkin Trans.1987，1，1177-1182及Fehrentz J A.Tetrahedron Lett.，1994，35(10)，1557-1560及Banziger M.J.Org.Chem.，1993，58(15)，4010-4012及Palamo C.Tetrahedron Lett.，1991，52(26)，3215-3218)。对于Fmoc-Statine及其类似物而言，目前的合成策略主要是以氮端Fmoc保护的酸酐衍生物为起始原料，合成Fmoc-Statine类化合物(Fehrentz J A.Tetrahedron Lett.，1994，35(10)，1557-1560)。
以上合成Statine和Fmoc-Statine及其类似物的策略和方法，通常具有容易得到消旋化产物和原料昂贵两个特点。由于一般采用亲核取代反应来增长碳链和生成羟基，所以产物或多或少都可能出现消旋化。此外，以上方法中都涉及到一些非常昂贵的试剂，这对于日后Statine和Fmoc-Statine及其类似物的规模化生产相当不利。因此，探索原料价廉易得、产物不发生消旋化的Statine和Fmoc-Statine及其类似物的合成新方法具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸(Statine)及其类似物的新方法。
为了实现本发明目的，本发明的一种(3S，4S)-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸(Statine)及其类似物的制备方法，包括如下步骤：
1)将氮端用Fmoc保护的氨基酸(a)与Meldrum’s acid(丙二酸环(亚)异丙酯)(b)和4-二甲胺基吡啶按1∶1∶1.2-1.8的摩尔比混合，以二氯甲烷为溶剂，搅拌溶解后缓慢滴加1.1-1.5摩尔的羧基活化剂，室温下反应2-5小时后倒入0-5℃的乙酸乙酯中，取乙酸乙酯相洗涤，干燥、过滤，滤液浓缩后得1，3-二氧杂环己烷-4，6-二酮衍生物(c)；
2)将1，3-二氧杂环己烷-4，6-二酮衍生物(c)在乙酸乙酯中加热回流，关环生成Tetramic acid化合物(1，5-二氢-4-羟基-2H-吡咯-2-酮衍生物)(d)；
3)将化合物d与还原剂以1∶1.5-2.0的摩尔比混合后溶于二氯甲烷，加入相当于5-8倍摩尔当量的氮端用Fmoc保护的氨基酸的醋酸，在0-4℃冰浴条件下反应2-5小时后终止反应；分相，水相用二氯甲烷萃取；合并有机相，洗涤，干燥、过滤，滤液浓缩后，经分离得4-羟基-吡咯烷酮类衍生物e；
4)将化合物e溶于1，4-二氧六环，加入相当于2-3倍摩尔当量的4-羟基-吡咯烷酮类衍生物e的2N的盐酸，加热回流1-3小时后冷却至室温，加入乙酸乙酯稀释，用纯水洗涤后除去溶剂得氮端Fmoc保护的Statine类似物；氮端Fmoc保护的Statine类似物经常规的有机合成方法转化为Statine及其类似物。
其中，步骤1)中所述的羧基活化剂为二环己基碳二亚胺(DCC)或二异丙基碳二亚胺(DIC)。优选的为二异丙基碳二亚胺(DIC)。
所述乙酸乙酯相依次用5％NaHSO₄、冷水和饱和食盐水进行洗涤。用无水硫酸镁进行干燥处理后过滤。
步骤3)中所述的还原剂为硼氢化钠(NaBH₄)、氢化铝锂(LiAlH₄)或钯碳(Pd/C)和氢气。优选的为硼氢化钠。
所述洗涤先后采用纯水和饱和食盐水进行洗涤，洗涤后可采用无水硫酸钠进行干燥处理。
所述分离采用硅胶柱层析处理，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇。
本发明Statine及其类似物的化学反应过程如下：

式中R为含碳数为C₁-C₉的取代或未取代的直链或支链脂肪族烷基取代基或C₁-C₉的取代或未取代的芳香环取代基。
本发明所采用的原料比较便宜，且均可市售获得。
本发明所采用的方法与现有的合成Statine及其类似物的制备方法相比，本发明最大的优点在于能够从价廉易得的原料出发、经过四步较为常见的有机化学的方法得到光学纯度非常高的Statine及其类似物。
本发明得到的目标产物经分离提纯后，四步反应的产率为45-70％。所得化合物经过核磁共振氢谱(¹H NMR)、质谱(MS)和旋光分析确定，结构无误。由于本发明中涉及的反应条件均比较温和，易于操作和放大，因此本发明为工业生产Statine及其类似物奠定了一定的基础。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1Fmoc-Statine和Statine的合成(R＝(CH₃)₂CHCH₂-异丙基亚甲基)
在圆底烧瓶中加入氮端用Fmoc保护的氨基酸(a)(R为异丙基亚甲基)884mg(2.5mmol)，二氯甲烷10mL，Meldrum’s acid(b)360mg(2.5mmol)和DMAP(4-二甲胺基吡啶)452mg(3.7mmol)。搅拌溶解后缓慢滴入DIC 0.47mL(3.0mmol)，室温反应3.5h后倒入120mL 0℃冷的乙酸乙酯中，用冷的5％NaHSO₄水溶液(3×30mL)，冷水(3×30mL)及用饱和食盐水30mL洗涤。乙酸乙酯有机层用无水MgSO₄干燥6h。过滤后，滤液经旋转蒸发浓缩至约30mL，于水浴锅上在乙酸乙酯中加热回流1h，减压蒸除溶剂得浅红色胶状物d粗品。
然后加入二氯甲烷10mL和醋酸1mL，0℃冰水浴冷却下慢慢加入NaBH₄145mg(3.8mmol)，维持0℃继续搅拌反应3.5h。反应液倒入60mL冰水中终止反应。分出二氯甲烷溶液，水层用二氯甲烷(2×50mL)萃取，合并有机层，用纯水(2×30mL)和饱和食盐水30mL洗涤，无水NaSO₄干燥过夜。过滤，浓缩滤液，浓缩物经柱层析[洗脱液：V(MeOH)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶60]纯化得白色无定型固体e 708mg，收率75％。核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.76(d，J＝7.6Hz，2H)，7.59(d，J＝7.4Hz，2H)，7.40(m，2H)，7.32(m，2H)，4.55(d，J＝7.3Hz，2H)，4.52(m，1H)，4.30(t，J＝7.3Hz，1H)，4.20(m，1H)，2.78(dd，J＝17.1，7.2Hz，1H)，2.65(dd，J＝17.9，7.6Hz，1H)，1.75(m，2H)，1.52(m，1H)，0.93(d，J＝6.4Hz，3H)，0.91(d，J＝6.4Hz，3H)。
在圆底烧瓶中加入e 645mg(1.7mmol)，1，4-二氧六环20mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L盐酸2.6mL，于100℃下反应3h。冷却后加入乙酸乙酯100mL稀释反应液，用纯水(2×30mL)洗涤，浓缩除去溶剂得固体，用少量有机溶剂洗涤得白色固体f 558mg，收率85.1％，m.p.101℃-103℃；核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.78(d，J＝7.4Hz，2H)，7.60(d，J＝7.2Hz，2H)，7.38(m，2H)，7.30(m，2H)，4.86(m，1H)，4.42(d，J＝6.9Hz，2H)，4.18(t，J＝6.9Hz，1H)，4.02(m，1H)，3.68(br，1H)，2.52(d，J＝6.3Hz，2H)，1.54(m，2H)，1.35(m，1H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)，0.90(d，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS398(M+1)。
在圆底烧瓶中加入f 199mg(0.5mmol)(R＝(CH₃)₂CHCH₂-)，1，4-二氧六环10mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L氢氧化钠溶液1mL，于室温下反应2h。用2mol/L盐酸调节体系pH值为3。用乙酸乙酯(50mL×5)萃取反应体系，分别用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤乙酸乙酯相。浓缩除去溶剂得固体70mg，收率80％；核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)4.66(br，2H)，3.96(m，1H)，2.66(m，1H)，2.52(d，J＝6.3Hz，2H)，1.66(m，1H)，1.54(m，2H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)，0.90(d，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS 176(M+1)。
实施例2Fmoc-Statine的合成(R＝(CH₃)₂CHCH₂-异丙基亚甲基)
在圆底烧瓶中加入a 22.1g(62.5mmol)，二氯甲烷250mL，b9.0g(62.5mmol)和DMAP13.0g(106.3mmol)。搅拌溶解后缓慢滴入DIC 13.6mL(87.5mmol)，室温反应3.5h后倒入1500mL 4℃冷的乙酸乙酯中，用冷的5％NaHSO₄水溶液(3×500mL)，冷水(3×500mL)及用饱和食盐水250mL洗涤。有机层用无水MgSO₄干燥6h。过滤后，滤液经旋转蒸发浓缩至约500mL，于水浴锅上在乙酸乙酯中加热回流3h，减压蒸除溶剂得浅红色胶状物d粗品。
然后加入二氯甲烷250mL和醋酸20mL，4℃冰水浴冷却下慢慢加入NaBH₄3.6g(93.8mmol)，维持0℃继续搅拌反应3.5h。反应液倒入1500mL冰水中终止反应。分出二氯甲烷溶液，水层用二氯甲烷(3×500mL)萃取，合并有机层，用纯水(3×500mL)和饱和食盐水500mL洗涤，无水NaSO₄干燥过夜。过滤，浓缩滤液，浓缩物经柱层析[洗脱液：V(MeOH)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶60]纯化得白色无定型固体e 15.34g，收率65％。
在圆底烧瓶中加入e 12.90g(34mmol)，1，4-二氧六环400mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L盐酸50mL，于100℃下反应3h。冷却后加入乙酸乙酯1500mL稀释反应液，用纯水(3×400mL)洗涤，浓缩除去溶剂得固体，用少量有机溶剂洗涤得白色固体f11.8g，收率90％，m.p.102℃-104℃；
实施例3Fmoc-Statine类似物及Statine类似物的合成(R＝Benzyl苄基)
在圆底烧瓶中加入a(R为苄基)9.69g(25mmol)，二氯甲烷100mL，b 3.6mg(25mmol)和DMAP5.5g(45mmol)。搅拌溶解后缓慢滴入DIC 4.3mL(27.5mmol)，室温反应3.5h后倒入1200mL 4℃冷的乙酸乙酯中，用冷的5％NaHSO₄水溶液(3×300mL)，冷水(3×300mL)及用饱和食盐水300mL洗涤。有机层用无水MgSO₄干燥6h。过滤后，滤液经旋转蒸发浓缩至约200mL，于水浴锅上在乙酸乙酯中加热回流1h，减压蒸除溶剂得浅红色胶状物d粗品。
然后加入二氯甲烷100mL和醋酸11.4mL，0℃冰水浴冷却下慢慢加入NaBH₄1.9g(50mmol)，维持0℃继续搅拌反应3.5h。反应液倒入600mL冰水中终止反应。分出二氯甲烷溶液，水层用二氯甲烷(3×400mL)萃取，合并有机层，用纯水(3×300mL)和饱和食盐水300mL洗涤，无水NaSO₄干燥过夜。过滤，浓缩滤液，浓缩物经柱层析[洗脱液：V(MeOH)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶50]纯化得白色无定型固体e 7.24g，收率70％。核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.76(m，4H)，7.38(m，4H)，7.21-7.08(m，5H)，4.55(d，J＝7.3Hz，2H)，4.52(m，1H)，4.30(t，J＝7.3Hz，1H)，4.20(m，1H)，2.78(dd，J＝17.1，7.2Hz，1H)，2.65(dd，J＝17.9，7.6Hz，1H)，1.75(m，2H)，1.52(m，1H)，0.93(d，J＝6.4Hz，3H)，0.91(d，J＝6.4Hz，3H)。
在圆底烧瓶中加入e 1.65g(4mmol)，1，4-二氧六环50mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L盐酸6mL，于100℃下反应3h。冷却后加入乙酸乙酯200mL稀释反应液，用纯水(2×100mL)洗涤，浓缩除去溶剂得固体，用少量有机溶剂洗涤得白色固体f 1.16g，收率67％，m.p.182℃-183℃；核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.74(d，J＝7.6Hz，2H)，7.60(d，J＝7.5Hz，2H)，7.22(m，9H)，4.28(dd，J＝10.6，7.0Hz，1H)，4.16(dd，J＝10.8，7.2Hz，1H)，4.20(m，2H)，3.88(m，1H)，2.88(dd，J＝13.6，5.6Hz，1H)，2.74(dd，J＝13.8，5.8Hz，1H)，2.36(m，2H)。
在圆底烧瓶中加入f 863mg(2mmol)(R为苄基)，1，4-二氧六环30mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L氢氧化钠溶液4mL，于室温下反应3h。用2mol/L盐酸调节体系pH值为3。用乙酸乙酯(50mL×5)萃取反应体系，分别用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤乙酸乙酯相。浓缩除去溶剂得固体368.2mg，收率88％；核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.44(m，2H)，7.30(m，3H)，4.68(br，2H)，3.92(m，1H)，2.86(dd，J＝13.6，5.6Hz，1H)，2.70(dd，J＝13.8，5.8Hz，1H)，2.62(m，1H)，2.54(d，J＝6.6Hz，2H)。ESI-MS 210(M+1)。
实施例4Fmoc-Statine类似物的合成(R＝(CH₃)₃CCH₂-叔丁基亚甲基)
在圆底烧瓶中加入氮端用Fmoc保护的氨基酸(a)(R为叔丁基亚甲基)735mg(2.0mmol)，二氯甲烷8mL，Meldrum’s acid(b)288mg(2.0mmol)和DMAP(4-二甲胺基吡啶)293mg(2.4mmol)。搅拌溶解后缓慢滴入DIC 0.47mL(3.0mmol)，室温反应3.5h后倒入95mL 0℃冷的乙酸乙酯中，用冷的5％NaHSO₄水溶液(3×25mL)，冷水(3×25mL)及用饱和食盐水25mL洗涤。乙酸乙酯有机层用无水MgSO₄干燥6h。过滤后，滤液经旋转蒸发浓缩至约25mL，于水浴锅上在乙酸乙酯中加热回流1h，减压蒸除溶剂得浅红色胶状物d粗品。
然后加入二氯甲烷8mL和醋酸1mL，0℃冰水浴冷却下慢慢加入NaBH₄152mg(4.0mmol)，维持0℃继续搅拌反应3.5h。反应液倒入50mL冰水中终止反应。分出二氯甲烷溶液，水层用二氯甲烷(2×50mL)萃取，合并有机层，用纯水(2×25mL)和饱和食盐水25mL洗涤，无水NaSO₄干燥过夜。过滤，浓缩滤液，浓缩物经柱层析[洗脱液：V(MeOH)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶60]纯化得白色无定型固体e 511.6mg，收率65％。核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.78(m，4H)，7.40(m，4H)，4.58(d，J＝7.3Hz，2H)，4.56(m，1H)，4.33(t，J＝7.3Hz，1H)，4.22(m，1H)，2.80(dd，J＝17.1，7.2Hz，1H)，2.68(dd，J＝17.3，7.0Hz，1H)，1.68(m，2H)，0.92(s，9H)。
在圆底烧瓶中加入e 472mg(1.2mmol)，1，4-二氧六环15mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L盐酸1.5mL，于100℃下反应3h。冷却后加入乙酸乙酯80mL稀释反应液，用纯水(2×30mL)洗涤，浓缩除去溶剂得固体，用少量有机溶剂洗涤得白色固体f 395mg，收率80％，m.p.98℃-100℃；核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.78(d，J＝7.6Hz，2H)，7.60(d，J＝7.4Hz，2H)，7.40(m，2H)，7.34(m，2H)，4.88(m，1H)，4.50(d，J＝6.6Hz，2H)，4.22(t，J＝6.6Hz，1H)，4.04(m，1H)，3.65(br，1H)，2.50(d，J＝6.3Hz，2H)，1.58(m，2H)，0.92(s，9H)。ESI-MS 413(M+1)。
实施例5Fmoc-Statine类似物的合成(R＝CH₃(CH₂)₃CH₂-正戊基)
在圆底烧瓶中加入氮端用Fmoc保护的氨基酸(a)(R为正戊基)368mg(1.0mmol)，二氯甲烷5mL，Meldrum’s acid(b)144mg(1.0mmol)和DMAP(4-二甲胺基吡啶)220mg(1.8mmol)。搅拌溶解后缓慢滴入DIC 0.24mL(1.5mmol)，室温反应3.5h后倒入50mL 0℃冷的乙酸乙酯中，用冷的5％NaHSO₄水溶液(3×20mL)，冷水(3×20mL)及用饱和食盐水20mL洗涤。乙酸乙酯有机层用无水MgSO₄干燥6h。过滤后，滤液经旋转蒸发浓缩至约20mL，于水浴锅上在乙酸乙酯中加热回流1h，减压蒸除溶剂得浅红色胶状物d粗品。
然后加入二氯甲烷8mL和醋酸1mL，0℃冰水浴冷却下慢慢加入NaBH₄76mg(2.0mmol)，维持0℃继续搅拌反应3.5h。反应液倒入50mL冰水中终止反应。分出二氯甲烷溶液，水层用二氯甲烷(2×50mL)萃取，合并有机层，用纯水(2×25mL)和饱和食盐水25mL洗涤，无水NaSO₄干燥过夜。过滤，浓缩滤液，浓缩物经柱层析[洗脱液：V(MeOH)∶V(CH₂Cl₂)＝1∶50]纯化得白色无定型固体e 283.3mg，收率72％。核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.75(m，4H)，7.36(m，4H)，4.68(d，J＝7.5Hz，2H)，4.52(m，1H)，4.32(t，J＝7.5Hz，1H)，4.18(m，1H)，2.78(dd，J＝17.8，7.4Hz，1H)，2.66(dd，J＝17.5，7.2Hz，1H)，1.51(m，2H)，1.35(m，2H)，1.22(m，4H)，0.90(t，J＝6.6Hz，3H)。
在圆底烧瓶中加入e 315mg(0.8mmol)，1，4-二氧六环10mL，搅拌，待固体溶解后加入2mol/L盐酸1.2mL，于100℃下反应3h。冷却后加入乙酸乙酯50mL稀释反应液，用纯水(2×30mL)洗涤，浓缩除去溶剂得固体，用少量有机溶剂洗涤得白色固体f230.5mg，收率70％，m.p.80℃-83℃；核磁共振氢谱(¹H NMR，200M，CDCl₃)7.75(d，J＝7.6Hz，2H)，7.62(d，J＝7.4Hz，2H)，7.42(m，2H)，7.36(m，2H)，4.88(m，1H)，4.52(d，J＝6.6Hz，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，1H)，4.00(m，1H)，3.65(br，1H)，2.54(d，J＝6.3Hz，2H)，1.58(m，2H)，1.35(m，2H)，1.22(m，4H)，0.90(t，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS 413(M+1)。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。