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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710665686.X (22)申请日 2017.08.07 (83)生物保藏信息 CGMCC 14348 2017.07.03 (71)申请人 中国农业科学院烟草研究所 地址 266101 山东省青岛市崂山区科苑经 四路11号 申请人 福建省烟草公司南平市公司 (72)发明人 赵栋霖张成省李义强尤祥伟 邹平徐茜陈志厚孟晨袁源 徐辰生林伟荆常亮廖锦建 徐宗昌 (74)专利代理机构 青岛联信知识产权代理事务 所(普通合伙) 37227 代理人 亓晓莉 (51)Int.Cl. 。
2、C07C 50/18(2006.01) C12P 7/66(2006.01) A01N 35/06(2006.01) A01P 1/00(2006.01) C12R 1/77(2006.01) (54)发明名称 蒽醌类化合物、 制备方法及应用 (57)摘要 本发明提供了一种蒽醌类化合物、 制备方法 及应用， 属于化合物领域。 该蒽醌类化合物具有 抗植物病原细菌活性， 作为杀菌剂应用可用来预 防和治疗植物病原细菌引起的植物病害。 该蒽醌 类化合物提取自海洋真菌Fusariumequiseti GLY27， 所述海洋真菌FusariumequisetiGLY27 的保藏号是CGMCC14348。 。
3、该蒽醌类化合物用于 预防和治疗由植物病原细菌引起的植物病害， 其 中 所 述 植 物 病 原 细 菌 为 丁 香 假 单 胞 杆 菌 P.syringae、 燕麦食酸菌A.avenae、 胡萝 卜软腐欧 文氏菌E.carotovora。 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 CN 107473952 A 2017.12.15 CN 107473952 A 1.蒽醌类化合物， 其特征在于， 结构式如式(I)所示， 所述式(I)结构中R基团选自酮基或羟基。 2.权利要求1所述的蒽醌类化合物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 在菌种培养基中进行对海洋真菌Fusarium equiseti G。
4、LY27培养， 转入发酵培养基中 进行发酵； 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡后再用甲醇： 二氯甲烷体积比为1:1的溶液浸泡， 减压浓 缩， 过滤， 将剩余水相用乙酸乙酯萃取， 萃取物减压浓缩、 干燥后得粗提物； 将粗提物进行层析、 洗脱、 浓缩后获得式(I)所述化合物。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述菌种培养基为马铃薯葡萄糖平板 培养基， 配比为： 马铃薯5-6g/L、 葡萄糖15-20g/L、 琼脂18-20g/L， 其余为去离子水； 在菌种 培养基中28培养5-7天。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述发酵培养基为大米固体培养基， 500mL锥形瓶中。
5、加入大米40g， 水30mL， 接种真菌后， 28发酵培养30-40天。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡2次， 随 后用甲醇： 二氯甲烷为1:1的溶液浸泡2次。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述粗提物进行层析、 洗脱、 浓缩的步 骤包括： 将粗提物进行减压硅胶柱层析， 固定相为100-200目正相硅胶， 流动相为10乙酸乙 酯-石油醚混合溶剂， 再用100乙酸乙酯洗脱， 将100乙酸乙酯洗脱液浓缩； 浓缩后的洗脱液再进行ODS反相硅胶柱层析， 流动相为30、 40、 50、 60、 70、 80甲醇水溶液， 将50甲醇水溶液的。
6、洗脱液浓缩后进行Sephadex LH-20凝胶柱层析， 流 动相为50二氯甲烷-甲醇溶液， 浓缩后即得式(I)化合物。 7.权利要求1所述的蒽醌类化合物的应用， 其特征在于， 所述蒽醌类化合物用于预防和 治疗由植物病原细菌引起的植物病害。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述植物病原细菌为丁香假单胞杆菌 P.syringae、 燕麦食酸菌A.avenae、 胡萝 卜软腐欧文氏菌E.carotovora。 9.植物病原细菌杀菌剂， 其特征在于， 该植物病原细菌杀菌剂的有效成分为权利要求 1-8任意一项所述的蒽醌类化合物， 还包括溶剂或助剂。 10.根据权利要求9所述的植物病原细菌。
7、杀菌剂， 其特征在于， 所述植物病原细菌杀菌 剂为所述蒽醌类化合物溶解于二甲基亚砜后， 再配制成为水溶液， 蒽醌类化合物的浓度 3.91 g/mL， 二甲基亚砜终浓度1。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107473952 A 2 蒽醌类化合物、 制备方法及应用 技术领域 0001 本发明涉及化合物领域， 尤其涉及一种蒽醌类化合物、 制备方法及应用。 背景技术 0002 植物病害严重危害农业生产， 每年造成巨大的经济损失。 据联合国粮农组织(FAO) 统计， 每年农作物因遭受病害造成的减产损失平均为总产量的1015。 其中， 植物细菌 病害带来的问题尤为严重， 随着农用硫酸链霉素的停用， 极。
8、为缺乏有效的防治药剂， 而铜制 剂等防治效果一般， 且属于化学农药， 易造成环境污染和食品安全问题， 同时还会造成病原 菌抗药性的出现。 因此研发新型环境友好型高效低毒生物农药用来防治植物细菌病害成为 迫在眉睫的课题。 0003 海洋真菌由于能够产生结构新颖、 生物活性显著的次级代谢产物而引起了人们的 关注。 自2007年以来， 每年从海洋真菌中获得的新化合物数目在100个以上， 仅2015年， 就报 道了400多个新的海洋真菌次级代谢产物。 这些化合物当中很多都具有诸如抗菌、 抗炎、 抗 癌、 酶抑制等显著地生物活性。 0004 然而目前对于海洋真菌次级代谢产物的活性研究大多集中于人类医学方。
9、面， 对于 其在农业方面的应用很少， 特别是在防治植物病原细菌方面， 文献调研发现， 目前并没有对 于海洋真菌次级代谢产物防治植物细菌病害的报道。 因此从海洋真菌中获得具有抗植物病 原细菌活性的化合物具有十分广阔的发展前景。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种蒽醌类化合物、 制备方法及应用， 该蒽醌类化合物自 海洋真菌Fusarium equiseti GLY27中分离得到， 具有抗植物病原细菌活性， 作为杀菌剂应 用可用来预防和治疗植物病原细菌引起的植物病害。 0006 本发明一方面提供了一种蒽醌类化合物， 其结构式如式(I)所示， 0007 0008 所述式(I)结构中R基团选自。
10、酮基或羟基。 0009 该蒽醌类化合物提取自海洋真菌Fusarium equiseti GLY27， 所述海洋真菌 Fusarium equiseti GLY27已在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏， 保藏号是CGMCC 14348。 0010 本发明另一方面提供了上述蒽醌类化合物的制备方法， 包括以下步骤： 0011 在菌种培养基中进行对海洋真菌Fusarium equiseti培养， 转入发酵培养基中进 说明书 1/6 页 3 CN 107473952 A 3 行发酵； 0012 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡后再用甲醇： 二氯甲烷为1:1的溶液浸泡， 减压浓 缩， 过滤， 将剩余水相用乙酸。
11、乙酯萃取， 萃取物减压浓缩、 干燥后得粗提物； 0013 将粗提物进行层析、 洗脱、 浓缩后获得式(I)所述化合物。 0014 作为优选技术方案， 所述菌种培养基为马铃薯葡萄糖平板培养基， 配比为： 马铃薯 5-6g/L、 葡萄糖15-20g/L、 琼脂18-20g/L， 其余为去离子水； 在菌种培养基中28培养5-7 天。 0015 作为优选技术方案， 所述马铃薯葡萄糖平板培养基作为优选技术方案， 所述发酵 培养基为大米固体培养基， 500mL锥形瓶中加入大米40g， 水30mL， 接种真菌后， 28发酵培 养30-40天。 0016 作为优选技术方案， 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡2次， 随。
12、后用甲醇： 二氯甲烷体 积比为1:1的溶液浸泡2次。 0017 作为优选技术方案， 所述粗提物进行层析、 洗脱、 浓缩的步骤包括： 0018 将粗提物进行减压硅胶柱层析， 固定相为100-200目正相硅胶， 流动相为10乙酸 乙酯-石油醚混合溶剂， 再用100乙酸乙酯洗脱， 将100乙酸乙酯洗脱液浓缩； 0019 浓缩后的洗脱液再进行ODS反相硅胶柱层析， 流动相为30、 40、 50、 60、 70、 80甲醇水溶液， 将50甲醇水溶液的洗脱液浓缩后进行Sephadex LH-20凝胶柱层 析， 流动相为50二氯甲烷-甲醇溶液， 浓缩后即得式(I)化合物。 0020 流动相为30-80甲醇水。
13、溶液， 30-80甲醇洗脱液浓缩后进行Sephadex LH-20 凝胶柱层析， 流动相为50二氯甲烷-甲醇溶液， 浓缩后即得式(I)化合物。 0021 本发明的再一方面提供了上述蒽醌类化合物的应用， 所述蒽醌类化合物用于预防 和治疗由植物病原细菌引起的植物病害。 0022 作为优选技术方案， 所述植物病原细菌为丁香假单胞杆菌P.syringae、 燕麦食酸 菌A.avenae、 胡萝 卜软腐欧文氏菌E.carotovora。 0023 本发明的又一方面提供了一种植物病原细菌杀菌剂， 其有效成分为上述蒽醌类化 合物， 还包括溶剂或助剂。 0024 作为优选技术方案， 所述植物病原细菌杀菌剂为所。
14、述蒽醌类化合物溶解于二甲基 亚砜后， 再配制成为水溶液， 蒽醌类化合物的浓度3.91 g/mL， 二甲基亚砜终浓度1。 0025 与现有技术相比， 本发明所具有的优势及有益效果在于： 0026 1、 本发明首次发现了海洋真菌Fusarium equiseti GLY27提取的化合物的抗植物 病原细菌活性， 杀菌活性高、 效果好， 低浓度下可发挥优异的杀菌性能， 并首次确定了其结 构中手性碳的绝对构型； 0027 2、 本发明的蒽醌类化合物， 可作为农用杀菌剂主要成分用来预防和治疗植物病原 细菌引起的病害， 并且对由丁香假单胞杆菌P.syringae、 燕麦食酸菌A.avenae、 胡萝 卜软腐。
15、 欧文氏菌E.carotovora引起的植物细菌病害防治效果显著； 0028 3、 本发明的蒽醌类化合物可以通过真菌发酵进行大规模生产， 成本低， 制备效率 高， 不受资源限制， 应用前景广阔。 附图说明 说明书 2/6 页 4 CN 107473952 A 4 0029 图1为本发明实施例所提供的蒽醌类化合物A的1H NMR谱图； 0030 图2为本发明实施例所提供的蒽醌类化合物A的13C NMR谱图； 0031 图3为本发明实施例所提供的蒽醌类化合物A的HRESIMS谱图； 0032 图4为本发明实施例所提供的蒽醌类化合物B的1H NMR谱图； 0033 图5为本发明实施例所提供的蒽醌类化。
16、合物B的13C NMR谱图； 0034 图6为本发明实施例所提供的蒽醌类化合物B的HRESIMS谱图； 0035 图7为本发明实施例所提供的蒽醌类化合物B的ECD谱图。 具体实施方式 0036 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完整地描述， 显然， 所描述的实施 例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。 基于本发明中的实施例， 本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例， 都属于本发明保护的范 围。 0037 本发明的一实施例提供了一种蒽醌类化合物， 其结构式如式(I)所示， 0038 0039 所述式(I)结构中R基团选自酮基或羟基。 0040 。
17、该蒽醌类化合物提取自海洋真菌Fusarium equiseti GLY27， 所述海洋真菌 Fusarium equiseti GLY27的保藏号是CGMCC 14348。 该海洋真菌为木贼镰刀菌， 已在中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏日期为2017年7月3日， 保藏地址为 北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。 0041 本发明的另一实施例提供了蒽醌类化合物的制备方法， 包括以下步骤： 0042 在菌种培养基中进行对海洋真菌Fusarium equiseti GLY27培养， 转入发酵培养 基中进行发酵； 0043 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡后再用甲醇。
18、： 二氯甲烷体积比为1:1的溶液浸泡， 减 压浓缩， 过滤， 将剩余水相用乙酸乙酯萃取， 萃取物减压浓缩、 干燥后得粗提物； 0044 将粗提物进行层析、 洗脱、 浓缩后获得式(I)所述化合物。 0045 本实施例中， 海洋真菌经过菌种活化和发酵扩大培养后能够产生代谢产物， 利于 提取物的制备， 发酵后的发酵产物经过乙酸乙酯浸泡， 再经过甲醇： 二氯甲烷体积比为1:1 的溶液浸泡， 能够充分提取其中的次级代谢产物。 乙酸乙酯的萃取能够保证提取物活性的 基础上进行浓缩和提纯。 层析、 洗脱、 浓缩能够获得纯化的化合物。 0046 在一优选的实施例中， 所述菌种培养基为马铃薯葡萄糖平板培养基， 在。
19、菌种培养 基中28培养5-7天； 其中， 马铃薯葡萄糖平板培养基配比为： 马铃薯5-6g/L、 葡萄糖15- 20g/L、 琼脂18-20g/L， 其余为去离子水。 本实施例中， 可以理解的是， 菌种的培养温度可以 在28左右， 培养的时间可以根据培养的情况进行略微调整。 培养基中马铃薯和葡萄糖的 说明书 3/6 页 5 CN 107473952 A 5 配比是针对Fusarium equiseti GLY27进行了优化和选择的， 能够有效的促进Fusarium equiseti GLY27的生长。 0047 在一优选的实施例中， 所述发酵培养基为大米固体培养基， 500mL锥形瓶中加入大 米。
20、40g， 水30mL， 接种真菌后， 28发酵培养30-40天。 本实施例中， 可以理解的是， 菌种的发 酵温度可以在28左右， 具体发酵的时间可以根据发酵的情况进行缩短或延长。 发酵培养 基中大米的浓度是针对Fusarium equiseti进行了优化和选择的， 能够有效的促进 Fusarium equiseti的菌丝生长和次生代谢产物的产生。 0048 在一优选的实施例中， 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡2次， 随后用甲醇： 二氯甲烷 体积比为1:1的溶液浸泡2次。 本实施例中， 浸泡2次能够充分提取， 可以理解的是， 浸泡多次 也可以充分提取， 但是比较费时。 0049 在一优选的实施例中，。
21、 为获得纯化的蒽醌类化合物， 层析、 洗脱、 浓缩的具体步骤 包括： 0050 将粗提物进行减压硅胶柱层析， 固定相为100-200目正相硅胶， 流动相为10乙酸 乙酯-石油醚混合溶剂， 再用100乙酸乙酯洗脱， 将100乙酸乙酯洗脱液浓缩； 0051 浓缩后的洗脱液再进行ODS反相硅胶柱层析， 流动相为30、 40、 50、 60、 70、 80甲醇水溶液， 将50甲醇水溶液的洗脱液浓缩后进行Sephadex LH-20凝胶柱层 析， 流动相为50二氯甲烷-甲醇溶液， 浓缩后即得式(I)化合物。 本实施例的上述步骤可以 充分提取和纯化蒽醌类化合物， 同时保证蒽醌类化合物的活性， 但是可以理解。
22、的是， 本领域 其它的纯化化合物的方法和具体参数也可用于上述化合物的纯化过程。 0052 本发明的再一实施例为上述蒽醌类化合物的应用， 上述蒽醌类化合物用于预防和 治疗由植物病原细菌引起的植物病害。 本实施例中， 上述蒽醌类化合物对于植物病原细菌 引起的植物细菌病害疗效显著。 其中， 针对丁香假单胞杆菌P.syringae、 燕麦食酸菌 A.avenae、 胡萝 卜软腐欧文氏菌E.carotovora引起的植物病害防治疗效特别显著。 具体的， 本发明的上述蒽醌类化合物可主要用来预防和治疗由丁香假单胞杆菌P.syringae引起的 角斑病， 燕麦食酸菌A.avenae引起的果斑病， 胡萝 卜软腐。
23、欧文氏菌E.carotovora引起的软腐 病。 0053 本发明的又一实施例提供了一种植物病原细菌杀菌剂， 其有效成分为上述蒽醌类 化合物， 还包括溶剂或助剂。 本实施例中， 以上述蒽醌类化合物为有效成分， 可配合其他的 溶剂或助剂配制成为具有优异杀菌效果的杀菌剂。 其中溶剂可以为能够有效溶解上述蒽醌 类化合物的任意溶剂， 助剂包括能够促进该蒽醌类化合物发挥杀菌作用的有效助剂以及在 具体施用杀菌剂过程中促进施用效果的有效助剂， 另外， 本领域常见的杀菌剂配合助剂也 可用于本发明的植物病原杀菌剂中， 例如表面活性剂、 分散剂、 润湿剂、 增稠剂、 消泡剂、 填 料等。 0054 在一优选的实施。
24、例中， 所述蒽醌类化合物溶解于二甲基亚砜后， 再配制成为水溶 液， 蒽醌类化合物的浓度3.91 g/mL， 二甲基亚砜终浓度1。 本实施例中， 所述植物病 原细菌杀菌剂杀菌的最低浓度为3.91 g/mL， 具体应用过程中可以根据病原细菌引起的病 害程度以及实施方式具体选择合适的浓度。 0055 为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的蒽醌类化合物、 制备方法及应用， 以下将结合具体实施例进行说明。 说明书 4/6 页 6 CN 107473952 A 6 0056 实施例1海洋真菌Fusarium equiseti GLY27的培养和发酵 0057 海洋真菌Fusarium equiseti 。
25、GLY27的菌种培养采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基， 含有马铃薯6g/L、 葡萄糖20g/L、 琼脂20g/L， 其余为水， 使用时制成平板培养基， 菌株在28 下培养5-7天； 0058 (2)海洋真菌Fusarium equiseti GLY27的发酵培养采用大米固体培养基， 每 500mL锥形瓶中加入大米40g， 水30mL， 发酵3瓶， 真菌菌株于28下培养30-40天。 0059 实施例2蒽醌类化合物的制备 0060 将所得发酵物用乙酸乙酯浸泡2遍， 再用甲醇： 二氯甲烷体积比为1:1的溶液浸泡， 减压浓缩， 过滤， 将剩余水相用乙酸乙酯萃取， 萃取物减压浓缩、 干燥后得粗提物； 006。
26、1 将粗提物进行减压硅胶柱层析， 固定相为100-200目正相硅胶， 流动相为10乙酸 乙酯-石油醚混合溶剂洗脱， 然后用100乙酸乙酯洗脱， 将100乙酸乙酯洗脱液浓缩后， 再进行ODS(48-63 m)反相硅胶柱层析， 流动相为30、 40、 50、 60、 70、 80甲醇水 溶液， 50甲醇洗脱液浓缩后， 进行Sephadex LH-20凝胶柱层析， 流动相为50二氯甲烷- 甲醇溶液， 根据TLC分别浓缩后， 获得两种橘黄色的固体a 4.4mg,b 2.2mg。 0062 通过质谱、 核磁、 旋光和圆二色谱的方法确定了化合物A和B的结构， 图谱， 参见图 1-图7， 所得化合物A和B的。
27、波谱数据为： 0063 A： 0064 orange powder； 1H NMR(500MHz,DMSO, ,ppm):13.04(1H,s,1-OH),8.42(1H,s,H- 8),7.51(1H,s,H-5),7.10(1H,d,J2.0Hz,H-4),6.59(1H,J2.0Hz,H-2),2.67(3H,s,H- 12). 13C NMR(125MHz,DMSO, ,ppm):200.1(C,C-11),184.6(C,C-9),181.8(C,C-10),165.4 (C,C-6),164.7(C,C-3),164.6(C,C-1),136.9(C,C-4b),135.1(C,C。
28、-4a),130.5(CH,C-8), 128.0(C,C-7),122.2(C,C-8a),116.5(CH,C-5),109.4(C,C-8b),108.0(CH,C-2),107.9 (CH,C-4),30.3(CH3,C-12).HRESIMS m/z 297.0399(calcd for C16H9O6,297.0394)。 0065 B: 0066 orange powder； 20D-22.6 (c 0.10,MeOH)； ECD(1.11mM,MeOH) max( )203( -0.43),224( -0.04),239( -0.15),260( -0.04),268nm( -。
29、0.05),288nm( + 0.002),308(-0.08)； 1H NMR(500MHz,DMSO, ,ppm):13.04(1H,s,1-OH),8.27(1H,s,H-8), 7.49(1H,s,H-5),7.09(d,J2.0Hz,H-4),6.56(1H,J2.0Hz,H-2),5.01(1H,q,J6.5Hz, H-11),1.32(3H,d,J6.5Hz,H-12)； 13C NMR(125MHz,DMSO, ,ppm):185.7(C,C-9),182.0 (C,C-10),164.9(C,C-3),164.5(C,C-1),159.4(C,C-6),141.0(C,C-7。
30、),135.1(C,C-4a), 133.3(C,C-4b),125.1(CH,C-8),124.6(C,C-8a),112.2(CH,C-5),109.0(C,C-8b),108.1 (CH,C-4) ,107.7(CH,C-2) ,62.9(CH,C-11) ,23.8(CH3,C-12) .HRESIMS m/z 299.0563 (calcd for C16H9O6,299.0561)。 0067 通过上述数据确定化合物a和b的结构分别为： 0068 A 7-acetyl-1,3,6-trihydroxyanthracene-9,10-dione 说明书 5/6 页 7 CN 1074。
31、73952 A 7 0069 0070 B(S)-1,3,6-trihydroxy-7-(1-hydroxyethyl)anthracene-9,10-dione 0071 0072 实施例3蒽醌类化合物抗菌活性测定 0073 测试对6株植物病原细菌： 丁香假单胞杆菌P.syringae、 燕麦食酸菌A.avenae、 稻 生黄单胞菌Xanthomonas oryzae、 胡萝 卜软腐欧文氏菌E.carotovora、 密执安棍状杆菌 C.michiganensis和青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum的抗菌活性。 0074 上述6株植物病原细菌经LB培养基120rpm/m。
32、in震荡培养24h。 取细菌培养液制备菌 悬液， 调整菌液浓至2-5105cfu/mL， 待测化合物1.0mg用50 L DMSO溶解， 加950 L无菌水， 配制成1.0mg/mL的母液； 在96孔板每列第1-8孔中分别加入50 L无菌水， 再往第1孔中加入 50 L母液混匀， 采用二倍稀释法将1-8孔梯度稀释， 后补入50 L菌液， 使待测化合物浓度为 250， 125， 62.5， 31.3， 15.6， 7.85， 3.93， 1.97 g/mL， 37培养24h， 以最后一个澄清的孔中化 合物浓度为最小抑菌浓度， 或通过酶标仪630nm下测量吸光度来测量抑菌率， 确定能够有效 抑菌的。
33、最低浓度， 结果如下表1。 0075 表1本发明的式(I)化合物对细菌的抑制活性 0076 0077 通过表1可以看出， 本发明的化合物对丁香假单胞杆菌P.syringae、 燕麦食酸菌 A.avenae和胡萝 卜软腐欧文氏菌E.carotovora具有显著的抗菌活性。 因此， 上述试验充分说 明本发明的蒽醌类化合物对于上述细菌抗菌活性优异， 相比现有的抗细菌药剂， 低浓度下 能够取得显著的抗菌效果。 说明书 6/6 页 8 CN 107473952 A 8 图1 图2 说明书附图 1/4 页 9 CN 107473952 A 9 图3 图4 说明书附图 2/4 页 10 CN 107473952 A 10 图5 图6 说明书附图 3/4 页 11 CN 107473952 A 11 图7 说明书附图 4/4 页 12 CN 107473952 A 12 。