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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710626818.8 (22)申请日 2017.07.28 (71)申请人 浙江理工大学 地址 310018 浙江省杭州市下沙高教园区2 号大街浙江理工大学 (72)发明人 王秉李津梁军龙陈茹茹 何宇杰 (74)专利代理机构 嘉兴永航专利代理事务所 (普通合伙) 33265 代理人 江程鹏 (51)Int.Cl. C07K 14/435(2006.01) C07K 1/14(2006.01) (54)发明名称 一种桑蚕丝素蛋白的提取方法 (57)摘要 本发明涉及丝素蛋白提。
2、取领域， 公开了一种 桑蚕丝素蛋白的提取方法， 将桑蚕丝经脱胶烘干 处理； 将异辛烷， 正辛醇， 双 （2乙基己基） 琥珀 酸酯磺酸钠， 聚乙烯基吡啶季铵盐优选配比， 混 匀； 配制碳酸盐缓冲溶液； 将桑蚕丝， 碳酸盐缓冲 溶液， 混匀后的异辛烷， 正辛醇， 双 （2乙基己 基） 琥珀酸酯磺酸钠， 聚乙烯基吡啶季铵盐溶液 按一定比例混合， 混匀后搅拌， 离心， 取上层溶 液； 配制氯化钠溶液， 与离心后所得上层溶液按 比例混匀， 混匀后搅拌， 离心， 取下层溶液； 对下 层溶液进行透析， 透析结束后对剩余溶液进行冷 冻干燥， 得到桑蚕丝素蛋白。 本发明提供的方法 操作简单， 获得的丝素蛋白纯度。
3、高。 权利要求书1页 说明书4页 CN 107383180 A 2017.11.24 CN 107383180 A 1.一种桑蚕丝素蛋白的提取方法， 其特征在于步骤如下： A） 称取15g桑蚕丝并将其以1:45-55的浴比添加至去离子水中， 加入2.25-3.75g碳酸 钠， 于90-98水浴下恒温脱胶55-65min， 结束后调节pH至中性， 反复操作多次， 将脱胶后的 桑蚕丝加入去离子水中浸泡， 然后烘干； B） 将450-550mL异辛烷与900-1100mL正辛醇混合， 搅拌混匀得到混合油性溶剂， 称取 0.3-0.5mol的双 （2乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠， 0.3-0.5mol的。
4、聚乙烯基吡啶季铵盐溶于 450-550mL前述混合油性溶剂中； C） 称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠， 加入到700-800mL去离子水中， 搅拌溶解后定容至 1000mL， 调节pH至9.5-9.7， 得到碳酸盐缓冲溶液； 取步骤A） 中烘干后的桑蚕丝5g溶于45- 55mL碳酸盐缓冲溶液中， 搅拌至完全溶解后加入至45-55mL步骤B） 所得的混合油性溶剂中， 混合均匀， 再搅拌处理， 然后离心处理， 取上层溶液备用； D） 称取29.2g氯化钠， 加入到450-550mL去离子水中， 搅拌溶解后定容至1000mL， 调节pH 至9.4-9.5， 取步骤C） 所得上层溶液， 按体积比。
5、0.9-1.1:1与氯化钠溶液混合， 混匀后搅拌处 理， 然后离心处理， 取下层水相； E） 取步骤D） 所得下层水相， 倒入透析袋中进行透析， 透析后对透析袋中剩余溶液进行 冷冻干燥， 对干燥后获得的样品进行研磨， 得到桑蚕丝素蛋白。 2.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白的提取方法， 其特征在于， 步骤A)中， 将脱胶 后的桑蚕丝加入至180-220mL去离子水中浸泡1.5-2.5h， 然后在55-65下烘干。 3.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白的提取方法， 其特征在于， 步骤C） 和步骤D） 中， 搅拌时间为4-6min， 离心速率为11000-13000r/min， 离心时间为8-。
6、12min。 4.如权利要求1所述的一种桑蚕丝素蛋白的提取方法， 其特征在于， 步骤E） 中， 透析袋 的分子截留量为8000， 透析过程中每5-7h换一次水， 透析2-3天。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107383180 A 2 一种桑蚕丝素蛋白的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及丝素蛋白提取领域， 尤其涉及一种桑蚕丝素蛋白的提取方法。 0002 背景技术 0003 桑蚕丝是一种动物蛋白纤维材料， 主要由丝素蛋白和丝胶蛋白组成， 其中丝素蛋 白约70%， 是蚕丝的主要成分。 丝胶和丝素具有不同的结构和性能： 丝胶为球状蛋白， 组成氨 基酸中含有大量极性亲水侧基， 稳定性差， 可。
7、溶于热水、 酸、 碱、 蛋白酶以及低浓度碳酸钠等 溶液中； 而丝素为纤维状蛋白， 天然丝素纤维含有大量分子内和分子间氢键, 结晶度较高 而难溶解于一般溶剂。 丝胶包围在丝素纤维表层， 起胶粘作用。 丝胶和丝素具有不同的结构 和性能： 丝胶为球状蛋白， 二级结构以无规卷曲为主， 稳定性差， 可溶于热水、 酸、 碱、 蛋白酶 以及低浓度碳酸钠等溶液中； 丝素为纤维状蛋白， 含有大量的结晶结构， 性能稳定， 可溶于 高浓度氯化钙、 氯化钙乙醇水混合液和溴化锂等溶液中。 因此， 可以根据蚕丝蛋白在不同溶 液中的溶解性差异和实际应用需求， 选择合适的溶解液进行提取处理， 获得各种具有不同 结构与性能的蚕。
8、丝蛋白， 用于加工制备化妆品和食品添加剂、 生物组织修复材料、 高吸水材 料、 药物载体和细胞培养基等不同形态功能材料。 0004 目前已有的方法常采用强酸、 强碱、 高浓度的盐溶液如高浓度CaCl2溶液、 铜氨溶 液、 溴化锂溶液、 硫氰化锂溶液等对桑蚕丝丝素蛋白进行溶解, 但是采用以上的方法提取 蚕丝蛋白往往不彻底， 不能将蚕茧中的蚕丝蛋白完全提取出来， 从而造成了材料的浪费， 因 此需要开发一种能够尽可能完全提取蚕茧中蚕丝蛋白的方法， 提高原材料的利用率。 0005 发明内容 0006 为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种桑蚕丝素蛋白的提取方法。 本发明提 供的方法制备蚕丝蛋白过程简。
9、单， 且蛋白质的提取率高。 0007 本发明的具体技术方案为： 一种桑蚕丝素蛋白的提取方法， 步骤如下： A） 称取15g桑蚕丝并将其以1:45-55的浴比添加至去离子水中， 加入2.25-3.75g碳酸 钠， 于90-98水浴下恒温脱胶55-65min， 结束后调节pH至中性， 反复操作多次， 将脱胶后的 桑蚕丝加入去离子水中浸泡， 然后烘干。 0008 B） 将450-550mL异辛烷与900-1100mL正辛醇混合， 搅拌混匀得到混合油性溶剂， 称 取0.3-0.5mol的双 （2乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠， 0.3-0.5mol的聚乙烯基吡啶季铵盐溶 于450-550mL前述混合油性溶。
10、剂中。 0009 与现有方法相比， 本发明采用双 （2乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠和聚乙烯基吡啶 季铵盐复配， 这两种成分能相互作用， 提升蛋白质的提取率， 同时对蛋白质结构没有损害。 0010 C） 称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠， 加入到700-800mL去离子水中， 搅拌溶解后定 容至1000mL， 调节pH至9.5-9.7， 得到碳酸盐缓冲溶液； 取步骤A） 中烘干后的桑蚕丝5g溶于 说明书 1/4 页 3 CN 107383180 A 3 45-55mL碳酸盐缓冲溶液中， 搅拌至完全溶解后加入至45-55mL步骤B） 所得的混合油性溶剂 中， 混合均匀， 再搅拌处理， 然后离心处。
11、理， 取上层溶液备用。 0011 D） 称取29.2g氯化钠， 加入到450-550mL去离子水中， 搅拌溶解后定容至1000mL， 调 节pH至9.4-9.5， 取步骤C） 所得上层溶液， 按体积比0.9-1.1:1与氯化钠溶液混合， 混匀后搅 拌处理， 然后离心处理， 取下层水相。 0012 本发明的步骤C） 和步骤D)前后两次进行混匀离心， 使蛋白质来回溶解在油相和水 相中， 对提高蛋白质的提取率有显著作用。 0013 E） 取步骤D） 所得下层水相， 倒入透析袋中进行透析， 透析后对透析袋中剩余溶液 进行冷冻干燥， 对干燥后获得的样品进行研磨， 得到桑蚕丝素蛋白。 0014 作为优选，。
12、 步骤A)中， 将脱胶后的桑蚕丝加入至180-220mL去离子水中浸泡1.5- 2.5h， 然后在55-65下烘干。 0015 作为优选， 步骤C） 和步骤D） 中， 搅拌时间为4-6min， 离心速率为11000-13000r/ min， 离心时间为8-12min。 0016 作为优选， 步骤E） 中， 透析袋的分子截留量为8000， 透析过程中每5-7h换一次水， 透析2-3天。 0017 与现有技术对比， 本发明的有益效果是： 1、 本发明采用双 （2乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠和聚乙烯基吡啶季铵盐复配， 这两种 成分能相互作用， 提升蛋白质的提取率， 同时对蛋白质结构没有损害。 0018。
13、 2、 本发明的步骤C） 和步骤D)前后两次进行混匀离心， 使蛋白质来回溶解在油相和 水相中， 对提高蛋白质的提取率有显著作用。 0019 3、 本发明提供的方法提取工艺简单， 蚕丝蛋白的提取率高， 能减少蚕丝蛋白资源 的浪费， 同时提取得到的蛋白质结构完整。 0020 具体实施方式 0021 下面结合实施例对本发明作进一步的描述。 0022 实施例一 A.称取15 g桑蚕丝以1:50的浴比加入去离子水中， 加入2.25 g碳酸钠， 于95水浴下 恒温60min进行脱胶， 水浴结束后加入醋酸调节pH至中性， 反复操作2次。 脱胶后的桑蚕丝加 入至200 mL去离子水中浸泡2h， 然后在60下烘。
14、干。 0023 B. 将500 mL异辛烷和1000 mL正辛醇混合， 搅拌混匀备用， 称取0.3 mol的双 （2 乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠， 0.3 mol的聚乙烯基吡啶季铵盐溶于500 mL前述混合溶液中。 0024 C 称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠， 加入到800 mL去离子水中， 搅拌溶解后定 容至1000 mL， 调节pH至9.6， 取步骤A中烘干后的蚕丝5 g溶于50 mL碳酸盐缓冲溶液中， 搅 拌至完全溶解后加入50 mL步骤B中所配得的溶液， 混合均匀。 混匀后的溶液用磁力搅拌器 搅拌5 min， 然后在离心机上以12000 r/min的速度离心10 min， 。
15、离心后取上层溶液备用。 0025 D 称取29.2 g氯化钠， 加入到500 mL去离子水中， 搅拌溶解后定容至1000 mL， 调 节PH至9.5， 取C中所得离心后的上层溶液， 按体积比1:1与氯化钠溶液混合， 混匀后的溶液 用磁力搅拌器搅拌5 min， 然后在离心机上以12000 r/min的速度离心10 min， 离心后取下 说明书 2/4 页 4 CN 107383180 A 4 层水相。 0026 E 取步骤D中获得的水相， 倒入分子截留量为8000的透析袋中， 每六小时换一次 水， 透析两天， 对剩余溶液进行冷冻干燥， 对干燥后获得的样品进行研磨， 得到桑蚕丝素蛋 白粉末。 00。
16、27 实施例二 A.称取15 g桑蚕丝以1:50的浴比加入去离子水中， 加入3 g碳酸钠， 于95水浴下恒温 60min进行脱胶， 水浴结束后加入醋酸调节pH至中性， 反复操作2次。 脱胶后的桑蚕丝加入至 200 mL去离子水中浸泡2h， 然后在60下烘干。 0028 B. 将500 mL异辛烷和1000 mL正辛醇混合， 搅拌混匀备用， 称取0.4 mol的双 （2 乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠， 0.4 mol的聚乙烯基吡啶季铵盐溶于500 mL前述混合溶液中。 0029 C 称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠， 加入到800 mL去离子水中， 搅拌溶解后定 容至1000 mL， 调节。
17、pH至9.6， 取步骤A中烘干后的蚕丝5 g溶于50 mL碳酸盐缓冲溶液中， 搅 拌至完全溶解后加入50 mL步骤B中所配得的溶液， 混合均匀。 混匀后的溶液用磁力搅拌器 搅拌5 min， 然后在离心机上以12000 r/min的速度离心10 min， 离心后取上层溶液备用。 0030 D 称取29.2 g氯化钠， 加入到500 mL去离子水中， 搅拌溶解后定容至1000 mL， 调 节PH至9.5， 取C中所得离心后的上层溶液， 按体积比1:1与氯化钠溶液混合， 混匀后的溶液 用磁力搅拌器搅拌5 min， 然后在离心机上以12000 r/min的速度离心10 min， 离心后取下 层水相。 。
18、0031 E 取步骤D中获得的水相， 倒入分子截留量为8000的透析袋中， 每六小时换一次 水， 透析两天， 对剩余溶液进行冷冻干燥， 对干燥后获得的样品进行研磨， 得到桑蚕丝素蛋 白粉末。 0032 实施例三 A.称取15 g桑蚕丝以1:50的浴比加入去离子水中， 加入3.75 g碳酸钠， 于95水浴下 恒温60min进行脱胶， 水浴结束后加入醋酸调节pH至中性， 反复操作2次。 脱胶后的桑蚕丝加 入至200 mL去离子水中浸泡2h， 然后在60下烘干。 0033 B. 将500 mL异辛烷和1000 mL正辛醇混合， 搅拌混匀备用， 称取0.5 mol的双 （2 乙基己基） 琥珀酸酯磺酸钠。
19、， 0.5 mol的聚乙烯基吡啶季铵盐溶于500 mL前述混合溶液中。 0034 C 称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠， 加入到800 mL去离子水中， 搅拌溶解后定 容至1000 mL， 调节PH至9.6， 取步骤A中烘干后的蚕丝5 g溶于50 mL碳酸盐缓冲溶液中， 搅 拌至完全溶解后加入50 mL步骤B中所配得的溶液， 混合均匀。 混匀后的溶液用磁力搅拌器 搅拌5 min， 然后在离心机上以12000 r/min的速度离心10 min， 离心后取上层溶液备用。 0035 D 称取29.2 g氯化钠， 加入到500 mL去离子水中， 搅拌溶解后定容至1000 mL， 调 节pH至9。
20、.5， 取C中所得离心后的上层溶液， 按体积比1:1与氯化钠溶液混合， 混匀后的溶液 用磁力搅拌器搅拌5 min， 然后在离心机上以12000 r/min的速度离心10 min， 离心后取下 层水相。 0036 E 取步骤D中获得的水相， 倒入分子截留量为8000的透析袋中， 每六小时换一次 水， 透析两天， 对剩余溶液进行冷冻干燥， 对干燥后获得的样品进行研磨， 得到桑蚕丝素蛋 说明书 3/4 页 5 CN 107383180 A 5 白粉末。 0037 本发明方法提取的桑蚕丝素蛋白提取率在82%以上。 0038 本发明中所用原料、 设备， 若无特别说明， 均为本领域的常用原料、 设备； 本发明中 所用方法， 若无特别说明， 均为本领域的常规方法。 0039 以上所述， 仅是本发明的较佳实施例， 并非对本发明作任何限制， 凡是根据本发明 技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、 变更以及等效变换， 均仍属于本发明技术方 案的保护范围。 说明书 4/4 页 6 CN 107383180 A 6 。