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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710779135.6 (22)申请日 2017.09.01 (71)申请人 荆州市民康生物科技有限公司 地址 434300 湖北省荆州市公安县青吉工 业园滨江路以南、 孱陵大道以北 (72)发明人 龚元 (74)专利代理机构 荆州市亚德专利事务所(普 通合伙) 42216 代理人 李杰 (51)Int.Cl. C07K 14/815(2006.01) C07K 1/14(2006.01) (54)发明名称 一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率 的方法 (57)摘要 本发明。
2、涉及一种超生波辅助提高日本医蛭 素提取收率的方法， 属水蛭素提取技术领域。 通 过本发明五个步骤， 超声波机短时间多次工作， 使日本医蛭虫体细胞组织破壁或变形， 让生理盐 水快速渗透到日本医蛭虫体细胞中， 使日本医蛭 虫体的活性有效成分提取更充分， 提高了溶出 率， 经检测， 通过超声波处理后的日本医蛭虫体 浸提液的抗凝活性显著提高。 同时， 为更好、 更进 一步地开发利用水蛭素， 提高水蛭素的提取率提 供了参考数据。 提取方法简单， 操作方便， 省时省 力， 有效节省水蛭虫体资源， 水蛭素提取率高， 提 取纯度和质量好。 解决了现有盐浸+化学药剂提 取方法， 不仅提取率低， 费时费力， 浪费。
3、大量水蛭 虫体资源， 而且难以保证提取纯度和质量的问 题。 权利要求书1页 说明书3页 CN 107365381 A 2017.11.21 CN 107365381 A 1.一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法， 其特征在于： 它是通过如下的步 骤完成的： 1） 、 制备日本医蛭虫体浸提液： 取日本医蛭虫体， 放入高速匀浆机匀浆2050s； 2） 、 将匀浆后的日本医蛭虫体放入磁力搅拌器中， 加入日本医蛭虫体总重量410倍的 生理盐水， 在磁力搅拌器中搅拌提取30 60min， 即制得日本医蛭虫体浸提液； 3） 、 取上述日本医蛭虫体浸提液200500ml放入加有冰块的容器中， 控制日本。
4、医蛭虫 体浸提液温度在430， 再将容器放入超声波机中， 设定： 超声功率200950W， 超声频率 2025KHz， 超声时间14秒， 超声间隙28s， 超声提取1030min； 以上条件设定好后， 将 变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,启动超声波机运转； 4） 、 超声处理完成后， 从超声波机中取出容器， 对超声前的日本医蛭虫体浸提液与超声 后的日本医蛭虫体浸提液分别取样20ml， 离心机温度设定为4， 转速设定为6000rpm， 将前 述两份样品分别放入离心机离心10min后， 分别取两份上清样品采用凝血酶滴定法测定活 性； 5） 、 测定结果表明超声后的浸提液的抗凝活性比超声前的浸提液的。
5、抗凝活性提高15%- 20%即可。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107365381 A 2 一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法， 属水蛭素提取技术 领域。 背景技术 0002 现代药理学研究表明， 从医用水蛭虫体提取的水蛭素的活性物质肽类化合物， 具 有很好的抗凝血， 抗血栓形成的作用， 如今水蛭素已在临床医学治疗心脑血管疾病上取得 不错的疗效。 从医用水蛭虫体中提取水蛭素， 以往一般是通过盐浸+化学药剂方法来提取 的， 不仅水蛭素提取率低， 费时费力， 浪费大量水蛭虫体资源， 而且难以保证提取纯度和质 量。
6、。 因此， 非常有必要研发一种提取率高， 提取纯度和质量好， 省时省力， 节省水蛭虫体资 源， 提取方法简单， 操作方便的提高日本医蛭素提取收率的方法。 发明内容 0003 本发明的目的在于， 针对上述现有技术的不足， 提供一种提取方法简单， 操作方 便， 省时省力， 节省水蛭虫体资源， 水蛭素提取率高， 提取纯度和质量好的超生波辅助提高 日本医蛭素提取收率的方法。 0004 本发明是通过如下的技术方案来实现上述目的的： 一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法， 其特征在于： 它是通过如下的步骤 完成的： 1） 、 制备日本医蛭虫体浸提液： 取日本医蛭虫体， 放入高速匀浆机匀浆2050s；。
7、 2） 、 将匀浆后的日本医蛭虫体放入磁力搅拌器中， 加入日本医蛭虫体总重量410倍的 生理盐水， 在磁力搅拌器中搅拌提取30 60min， 即制得日本医蛭虫体浸提液； 3） 、 取上述日本医蛭虫体浸提液200500ml放入加有冰块的容器中， 控制日本医蛭虫 体浸提液温度在430， 再将容器放入超声波机中， 设定： 超声功率200950W， 超声频率 2025KHz， 超声时间14秒， 超声间隙28s， 超声提取1030min； 以上条件设定好后， 将 变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,启动超声波机运转； 4） 、 超声处理完成后， 从超声波机中取出容器， 对超声前的日本医蛭虫体浸提液与超声 后。
8、的日本医蛭虫体浸提液分别取样20ml， 离心机温度设定为4， 转速设定为6000rpm， 将前 述两份样品分别放入离心机离心10min后， 分别取两份上清样品采用凝血酶滴定法测定活 性； 5） 、 测定结果表明超声后的浸提液的抗凝活性比超声前的浸提液的抗凝活性提高15% 20%即可。 0005 本发明与现有技术相比的有益效果在于： 一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法， 运用超声波独有的物理特性使日本 医蛭虫体细胞组织破壁或变形， 破坏日本医蛭虫体的细胞， 让生理盐水快速渗透到日本医 蛭虫体细胞中， 使日本医蛭虫体的活性有效成分提取更充分， 提高了溶出率， 经检测， 通过 说明书 1/3。
9、 页 3 CN 107365381 A 3 超声波处理后的日本医蛭虫体浸提液的抗凝活性显著提高。 同时， 使尽可能多的日本医蛭 虫体内的水蛭素溶解到浸提生理盐水中， 为更好、 更进一步地开发利用水蛭素， 提高水蛭素 的提取率提供了参考数据。 提取方法简单， 操作方便， 省时省力， 节省水蛭虫体资源， 水蛭素 提取率高， 提取纯度和质量好。 解决了现有盐浸+化学药剂提取方法， 不仅提取率低， 费时费 力， 浪费大量水蛭虫体资源， 而且难以保证提取纯度和质量的问题。 具体实施方式 0006 一种超生波辅助提高日本医蛭素提取收率的方法， 其特征在于： 它是通过如下的 步骤完成的： 1） 、 制备日本。
10、医蛭虫体浸提液： 取日本医蛭虫体， 放入高速匀浆机匀浆2050s； 2） 、 将匀浆后的日本医蛭虫体放入磁力搅拌器中， 加入日本医蛭虫体总重量410倍的 生理盐水， 在磁力搅拌器中搅拌提取30 60min， 即制得日本医蛭虫体浸提液； 3） 、 取上述日本医蛭虫体浸提液200500ml放入加有冰块的容器中， 控制日本医蛭虫 体浸提液温度在430， 再将容器放入超声波机中， 设定： 超声功率200950W， 超声频率 2025KHz， 超声时间14秒， 超声间隙28s， 超声提取1030min；（实验结果表明， 短时 间、 多次超声比连续长时间持续超声的效果要好。 ） 以上条件设定好后， 将变幅。
11、杆插入日本 医蛭虫体浸提液中,启动超声波机运转； 4） 、 超声处理完成后， 从超声波机中取出容器， 对超声前的日本医蛭虫体浸提液与超声 后的日本医蛭虫体浸提液分别取样20ml， 离心机温度设定为4， 转速设定为6000rpm， 将前 述两份样品分别放入离心机离心10min后， 分别取两份上清样品采用凝血酶滴定法测定活 性； 5） 、 测定结果表明超声后的浸提液的抗凝活性比超声前的浸提液的抗凝活性提高15% 20%即可。 0007 超生波辅助提高菲牛蛭素提取收率的方法的具体实施例如下： 准备实验材料： 日本医蛭虫体、 生理盐水； 实验仪器： 匀浆机、 超声波细胞粉碎机； 实例1： 取日本医蛭虫。
12、体， 经匀浆机匀浆30秒， 加入4倍生理盐水， 放入磁力搅拌器搅拌提取60 分钟， 制得日本医蛭虫体浸提液； 取日本医蛭虫体浸提液500ml， 放入加有冰块的容器中， 控制日本医蛭虫体浸提液温度 在430， 再将容器放入超声波机中， 将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,设定： 超声功 率250 W， 超声频率25Hz， 超声时间2秒， 超声间隙3秒， 超声提取30分钟； 对超声前的浸提液与超声后的浸提液分别取样20ml， 在离心机46000rpm离心10分 钟， 取上清样分别测定活性； 活性测定方法采用凝血酶滴定法； 测定结果： 超声前的浸提液的活性为12U/ml， 超声后的浸提液的活性为14 。
13、U/ml， 表明 抗凝活性显著提高， 即制得成品。 0008 实例2： 取日本医蛭虫体， 经匀浆机匀浆40秒， 加入4倍生理盐水， 在磁力搅拌器中搅拌提取40 分钟， 得医蛭虫体浸提液； 说明书 2/3 页 4 CN 107365381 A 4 取日本医蛭虫体浸提液500ml， 放入加有冰块的容器中， 控制日本医蛭虫体浸提液温度 在430， 再将容器放入超声波机中， 将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,设定超声功 率900 W， 超声频率25Hz， 超声时间2秒， 超声间隙4秒， 超声提取30分钟。 浸提液与超声后的 浸提液分别取样20ml， 在离心机46000rpm离心10分钟， 取上清样分别。
14、测定活性， 活性测定 方法采用凝血酶滴定法； 测定结果： 超声前的浸提液的活性为13U/ml， 超声后的浸提液的活性为16U/ml， 表明抗 凝活性显著提高， 即制得成品。 0009 实例3 取日本医蛭虫体， 经匀浆机匀浆40秒， 加入5倍生理盐水， 在磁力搅拌器中搅拌提取40 分钟， 得医蛭虫体浸提液； 取日本医蛭虫体浸提液500ml， 放入加有冰块的容器中， 控制日本医蛭虫体浸提液温度 在430， 再将容器放入超声波机中， 将变幅杆插入日本医蛭虫体浸提液中,设定超声功 率600 W， 超声频率20Hz， 超声时间3秒， 超声间隙5秒， 超声提取30分钟。 浸提液与超声后的 浸提液分别取样2。
15、0ml， 在离心机46000rpm离心10分钟， 取上清样分别测定活性， 活性测定 方法采用凝血酶滴定法； 测定结果： 超声前的浸提液的活性为12U/ml， 超声后的浸提液的活性为14U/ml， 表明抗 凝活性显著提高， 即制得成品。 0010 实验结果表明， 超声波机短时间、 多次工作比连续长时间工作的处理效果要好。 0011 以上所述只是本发明的较佳实施例而已， 上述举例说明不对本发明的实质内容作 任何形式上的限制， 所属技术领域的普通技术人员在阅读了本说明书后依据本发明的技术 实质对以上具体实施方式所作的任何简单修改或变形， 以及可能利用上述揭示的技术内容 加以变更或修饰为等同变化的等效实施例， 均仍属于本发明技术方案的范围内， 而不背离 本发明的实质和范围。 说明书 3/3 页 5 CN 107365381 A 5 。