《一种聚合酶抑制剂的制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种聚合酶抑制剂的制备方法.pdf（5页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611235545.6 (22)申请日 2016.12.28 (71)申请人 苏州旷世骏弛生物科技有限公司 地址 215500 江苏省苏州市常熟经济技术 开发区四海路11号 (72)发明人 刘喜朋 (51)Int.Cl. C07D 401/04(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种聚合酶抑制剂的制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种聚合酶抑制剂的制备方 法， 包括1） 制备4-(3-甲氧基羰基-2-硝基-苯亚 甲基)-氨基-哌啶。
2、-1-甲酸叔丁酯； 2） 制备2-(1- 叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲 酯； 3） 制备2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H- 吲唑-7-甲酸甲酯； 4） 制备4-(7-甲酰胺基-3-甲 基-吲唑-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯； 5） 制备3-甲 基-2(哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺。 本发明一 种聚合酶抑制剂的制备方法制备出的聚合酶抑 制剂对于多数的DNA和RNA聚合酶的聚合都有着 良好的抑制作用。 权利要求书1页 说明书3页 CN 107353280 A 2017.11.17 CN 107353280 A 1.一种聚合酶抑制剂的制备方法， 其特征在。
3、于， 包括如下步骤： 1） 3- 醛基-2-硝基苯甲酸甲酯和4-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的混合物溶解到乙醇中， 在氮气保护下回流搅拌2小时， 直至TLC显示反应完成 （己烷/EtOAc=75:25） ； 蒸发除去溶剂， 得到白色固体， 即4-(3- 甲氧基羰基-2-硝基-苯亚甲基)-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯； 2） 4-(3-甲氧基羰基-2-硝基-苯亚甲基)-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和NaN3溶于无水 DMF， 在氮气保护和90温度下搅拌过夜； 所得粗产品真空浓缩， 残留物经硅胶 （silica） 快 速制备色谱纯化， 用10:9040:60 的EtOAc/ 石油醚梯度洗脱， 获得棕色油。
4、状物， 即2-(1-叔 丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯； 3） 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯溶于四氢呋喃 （THF） 中， 在 温度-78下， 向所得溶液中加入的二异丙基氨基锂THF/ 正庚烷/ 乙苯溶液； 所得暗橙色 溶液在0 5温度下搅拌15分钟后， 在-78温度下再次淬冷15分钟； 加入碘甲烷， 上述 橙色溶液缓慢升温至室温， 然后搅拌17个小时以上； 加入水， 用乙醚萃取； 有机层用饱和食 盐水溶液洗， MgSO4干燥， 浓缩， 得到橙色固体； 过柱提纯 （0-50%EtOAc/正己烷） 制得沾有黄 色的白色固体， 即2-(1。
5、-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯； 4） 在封管中中， 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-3-甲基-2H-吲唑-7甲酸甲酯在THF 和32%aq.NH3溶液的混合物中加热过夜， 加热温度为70； 所得溶液真空浓缩， 残留物经硅 胶 （silica） 快速制备色谱纯化， 用30:7050:50 的EtOAc/石油醚梯度洗脱， 获得白色固体， 即： 4-(7-甲酰胺基-3-甲基-吲唑-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯； 5） 4-(7-甲酰胺基-3-甲基-吲唑-2-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸 （TFA） /二氯甲 烷 （DCM） 1:1 （0.1M） 溶液， 。
6、室温下搅拌20分钟； 真空条件下蒸干溶剂后， 乙醚 （Et2O） 处理， 分 离得到淡黄色固体， 即： 3-甲基-2(哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107353280 A 2 一种聚合酶抑制剂的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种聚合酶抑制剂的制备方法。 背景技术 0002 多聚 （ADP- 核糖） 聚合酶 （poly(ADP-ribose)polymerase， PARP） 是存在于真核细 胞中催化聚ADP 核糖化的细胞核酶， 它参与的聚ADP 核糖化是真核细胞中蛋白质翻译后的 重要修饰方式之一。 PARP 发现40 多年来， 其在DNA。
7、 损伤修复和维持基因组稳定性方面的 重要作用引起广大学者的关注， 尤其是近年来对PARP 与肿瘤发生的关系及利用调节PARP 来提高肿瘤治疗效果的研究取得了令人鼓舞的成绩。 0003 目前研究发现， PARP 家族至少有： PARP-1， PARP-2， PARP-3， PARP-4/VPARP， 端锚聚 合酶 （Tankyrases， TANK-1， TANK-2 和TANK-3） 等亚型。 在人类基因组中共有16 个不同基因 编码PARP 超家族成员这些成员都具有高度保守的由50 个氨基酸残基组成的PARP 催化活 性区， 除此之外， 它们具有不同的一级结构、 细胞内定位和特异底物。 这说。
8、明聚ADP 核糖是 一类具有不同生物功能的转录后调节蛋白。 0004 PARP-1 是由1014 个氨基酸残基组成的一条多肽链， 分子量为113kDa， 等电点在 8.0 9.8 之间。 它是PARP 家族中最早被发现， 而且特性被了解得最清楚的成员。 PARP-1 肽链中有3 个功能性结构域。 DNA 结合结构域 （DNAbinding domain， DBD， 46kDa） ， 位于 N - 末 端 第 1 3 7 2 氨 基 酸 残 基 之 间 ， 包 含 一 个 核 定 位 序 列（n u c l e a r localizationsequence， NLS） 和两个锌指结构 （Zn。
9、 fnger） 。 这两个锌指结构参与识别DNA 缺口， 其中第1 个锌指结构识别DNA 单链和双链断裂， 它的突变会大大降低PARP 的激活； 第2 个锌指结构只参与DNA单链断裂的识别。 自我修饰结构域 （automodifeationdomain， 22kDa） ， 位于第374-525 氨基酸残基之间。 PARP-1 通过该结构域与ADP 糖基结合， 发生 PARP-1 自身糖基化， 并且该结构域还可以使PARP-1 形成二聚体。 C- 末端第524-1,014 氨基酸残基之间为催化结构域 （catalytic domain， 54kDa） 。 该结构域是把NAD 转化为ADP 核糖的。
10、基础， 此序列高度保守。 尤其第859-908 氨基酸残基区段在脊椎动物中的保守性达 100。 催化结构域由两部分组成， 其中靠近N- 末端部分的氨基酸残基第662-784 位形成 A、 B、 C、 D、 E、 F 六个- 螺旋， 此结构是PARP 特有的， 螺旋区通过F- 螺旋与活性区， 即NAD 结 合位点结合， 可能与激活信号的转递有关。 另外， 有研究发现PARP 还具有亮氨酸拉链结构， 推测可能在PARP 与其它蛋白质或PARP 自身形成二聚体时发挥作用。 0005 PARP-1 参与DNA 缺口的识别， 识别DNA 缺口后活化的PARP-1 形成同型二聚体并 催化NAD+ 分解成尼。
11、克酰胺和ADP 核糖， 利用后者为原料使核受体蛋白聚ADP 核糖化， PARP-1的激活与DNA 的损伤程度呈正相关， 并且在DNA 损伤诱发的聚ADP 糖基化反应中， PARP-1 可通过自身修复作用对PARP-1 活性进行负反馈调节， 形成DNA 损伤激发的PARP-1 活性循环。 PARP-1 的抑制研究或基因缺陷小鼠的研究可以肯定PARP-1 在维持基因组稳定 性方面起着关键的作用。 说明书 1/3 页 3 CN 107353280 A 3 发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种聚合酶抑制剂的制备方法， 该方法制备的聚合酶抑制 剂， 其结构式为， 能够解决上述问题中的一种或几种。。
12、 0007 为了实现上述目的， 本发明的技术方案是设计一种聚合酶抑制剂的制备方法， 包 括如下步骤： 1） 3- 醛基-2- 硝基苯甲酸甲酯和4- 氨基- 哌啶-1- 甲酸叔丁酯的混合物溶解到乙 醇中， 在氮气保护下回流搅拌2小时， 直至TLC显示反应完成 （己烷/EtOAc=75:25） 。 蒸发除去 溶剂， 得到白色固体， 即4-(3- 甲氧基羰基-2- 硝基- 苯亚甲基)- 氨基- 哌啶-1- 甲酸 叔丁酯； 2） 4-(3-甲氧基羰基-2-硝基-苯亚甲基)-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和NaN3溶于无水 DMF， 在氮气保护和90温度下搅拌过夜。 所得粗产品真空浓缩， 残留物经硅胶 （s。
13、ilica） 快 速制备色谱纯化， 用10:9040:60 的EtOAc/ 石油醚梯度洗脱， 获得棕色油状物， 即2-(1-叔 丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯； 3） 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯溶于四氢呋喃 （THF） 中， 在 温度-78下， 向所得溶液中加入的二异丙基氨基锂THF/ 正庚烷/ 乙苯溶液。 所得暗橙色 溶液在0 5温度下搅拌15分钟后， 在-78温度下再次淬冷15分钟。 加入碘甲烷， 上述 橙色溶液缓慢升温至室温， 然后搅拌17个小时以上。 加入水， 用乙醚萃取。 有机层用饱和食 盐水溶液洗， MgSO4干燥， 浓。
14、缩， 得到橙色固体。 过柱提纯 （0-50%EtOAc/正己烷） 制得沾有黄 色的白色固体， 即2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯； 4） 在封管中中， 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-3-甲基-2H-吲唑-7甲酸甲酯在THF 和32%aq.NH3溶液的混合物中加热过夜， 加热温度为70。 所得溶液真空浓缩， 残留物经硅 胶 （silica） 快速制备色谱纯化， 用30:7050:50 的EtOAc/石油醚梯度洗脱， 获得白色固体， 即： 4-(7-甲酰胺基-3-甲基-吲唑-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯； 5） 4-(7-甲酰胺基-3-甲基-吲唑-2-基。
15、)-哌啶-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸 （TFA） /二氯甲 烷 （DCM） 1:1 （0.1M） 溶液， 室温下搅拌20分钟。 真空条件下蒸干溶剂后， 乙醚 （Et2O） 处理， 分 离得到淡黄色固体， 即： 3-甲基-2(哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺。 0008 本发明的优点和有益效果在于： 本发明一种聚合酶抑制剂的制备方法制备出的聚 合酶抑制剂对于多数的DNA和RNA聚合酶的聚合都有着良好的抑制作用。 具体实施方式 0009 下面结合实施例， 对本发明的具体实施方式作进一步描述。 以下实施例仅用于更 加清楚地说明本发明的技术方案， 而不能以此来限制本发明的保护范围。 0010 实施。
16、例： 一种聚合酶抑制剂的制备方法， 包括如下步骤： 说明书 2/3 页 4 CN 107353280 A 4 1） 3- 醛基-2- 硝基苯甲酸甲酯和4- 氨基- 哌啶-1- 甲酸叔丁酯的混合物溶解到乙 醇中， 在氮气保护下回流搅拌2小时， 直至TLC显示反应完成 （己烷/EtOAc=75:25） 。 蒸发除去 溶剂， 得到白色固体， 即4-(3- 甲氧基羰基-2- 硝基- 苯亚甲基)- 氨基- 哌啶-1- 甲酸 叔丁酯； 2） 4-(3-甲氧基羰基-2-硝基-苯亚甲基)-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和NaN3溶于无水 DMF， 在氮气保护和90温度下搅拌过夜。 所得粗产品真空浓缩， 残留物经硅。
17、胶 （silica） 快 速制备色谱纯化， 用10:9040:60 的EtOAc/ 石油醚梯度洗脱， 获得棕色油状物， 即2-(1-叔 丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯； 3） 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯溶于四氢呋喃 （THF） 中， 在 温度-78下， 向所得溶液中加入的二异丙基氨基锂THF/ 正庚烷/ 乙苯溶液。 所得暗橙色 溶液在0 5温度下搅拌15分钟后， 在-78温度下再次淬冷15分钟。 加入碘甲烷， 上述 橙色溶液缓慢升温至室温， 然后搅拌17个小时以上。 加入水， 用乙醚萃取。 有机层用饱和食 盐水溶液洗， MgSO4干。
18、燥， 浓缩， 得到橙色固体。 过柱提纯 （0-50%EtOAc/正己烷） 制得沾有黄 色的白色固体， 即2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酸甲酯； 4） 在封管中中， 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-3-甲基-2H-吲唑-7甲酸甲酯在THF 和32%aq.NH3溶液的混合物中加热过夜， 加热温度为70。 所得溶液真空浓缩， 残留物经硅 胶 （silica） 快速制备色谱纯化， 用30:7050:50 的EtOAc/石油醚梯度洗脱， 获得白色固体， 即： 4-(7-甲酰胺基-3-甲基-吲唑-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯； 5） 4-(7-甲酰胺基-3-甲基-吲唑-2-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸 （TFA） /二氯甲 烷 （DCM） 1:1 （0.1M） 溶液， 室温下搅拌20分钟。 真空条件下蒸干溶剂后， 乙醚 （Et2O） 处理， 分 离得到淡黄色固体， 即： 3-甲基-2(哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺。 0011 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明技术原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。 说明书 3/3 页 5 CN 107353280 A 5 。