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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710547417.3 (22)申请日 2017.07.06 (71)申请人 南京东威万合新材料科技有限公司 地址 210029 江苏省南京市鼓楼区汉中大 街301号402室 (72)发明人 章云徐东章玮 (74)专利代理机构 北京元本知识产权代理事务 所 11308 代理人 范奇 (51)Int.Cl. C12N 15/01(2006.01) C12N 13/00(2006.01) C12P 19/44(2006.01) C08L 95/00(2006.01) C08K 。
2、5/1545(2006.01) C12R 1/385(2006.01) (54)发明名称 一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的 制备方法 (57)摘要 一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的 制备方法， 属于沥青制备技术领域， 包括铜绿假 单胞菌接种于斜面培养基、 接种于种子培养基、 紫外诱变、 接种于发酵培养基、 乙酸乙酯萃取、 制 备乳化沥青。 鼠李糖脂具有较强的表面活性和乳 化能力， 能被生物完全降解， 对环境友好。 采用本 发明制备的高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青， 乳化效果好、 稳定性好， 具有良好的降滤失性和 抑制性。 采用紫外线作为诱变剂， 对铜绿假单胞 菌菌株进行诱变处理， 获得。
3、鼠李糖脂的产量更 高。 权利要求书1页 说明书3页 CN 107384908 A 2017.11.24 CN 107384908 A 1.一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤一： 铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上， 37恒温培养24h； 步骤二： 挑取斜面培养基上的菌落接到种子培养基， 装液量为50mL/250mL、 温度为37 ， 摇床转速200rmin-1， 恒温培养24h， 得种子液， 将种子液置于功率为15W、 波长254nm的 紫外灯下方10cm处震荡照射， 诱变时间为60s； 步骤三： 将种子液以8(v/v)的接种量接到发酵培养基中， 装。
4、液量为50mL/250mL， 温度 为37， 摇床转速200rmin-1， 恒温培养7d， 得发酵液； 步骤四： 发酵液8000r/min离心15min， 取上清液， 调pH为2， 加入3倍体积的乙酸乙酯萃 取， 收集有机相， 80旋转蒸发仪旋转蒸发去除乙酸乙酯， 得到鼠李糖脂粗提液； 步骤五： 向鼠李糖脂粗提液中加入3倍体积的去离子水， 充分混匀振荡、 纱布过滤三次， 收集滤液， 得鼠李糖脂； 步骤六： 称取2g沥青、 2ml鼠李糖脂加入容器中， 并用滴管将100ml水缓慢滴加置容器 中， 并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌， 混合均匀。 2.根据权利要求1所述的一种高性能紫外诱变鼠。
5、李糖脂乳化沥青的制备方法， 其特征 在于： 步骤六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。 3.根据权利要求1所述的一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法， 其特征 在于： 步骤一中所述的斜面培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基， 包含： 牛肉膏3g/L、 蛋白胨 10g/L、 氯化钠5g/L、 琼脂20g/L。 4.根据权利要求1所述的一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法， 其特征 在于： 步骤二中所述的种子培养基包含： NaClg/L， 胰蛋白胨10g/L， 酵母粉5g/L。 5.根据权利要求1所述的一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法， 其特征 在于： 步骤三中所述的。
6、发酵培养基包含： K2HPO4 4g/L、 KH2PO4 4g/L、 KCL1g/L、 NaNO3 2.5g/L、 NaCL1g/L、 CaCl22H2O 0.1g/L， MgSO4 0.2g/L， 酵母粉1g/L， 甘油30v/v。 权利要求书 1/1 页 2 CN 107384908 A 2 一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法 技术领域 0001 本发明属于沥青制备技术领域， 具体涉及一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青 的制备方法。 背景技术 0002 乳化沥青， 就是将黏稠的沥青加热至流动态， 再经机械力的作用形成微滴分散在 有乳化剂一稳定剂的水中而形成的均匀、 稳定的乳状液。。
7、 乳化沥青是一种热力学不稳定体 系。 其稳定性是由外界所添加的乳化剂、 乳液稳定剂等所产生的各种作用而引起的， 目前的 乳化沥青存在着稳定性不足的问题。 0003 鼠李糖脂是一种糖脂类生物表面活性剂， 具有较强的表面活性和乳化能力， 能被 生物完全降解， 对环境友好， 在石油开采、 生物修复、 农业生产、 食品医药等领域具有潜在的 应用价值。 但不前关于鼠李糖脂作为乳化剂应用于乳化沥青的研究却很少。 发明内容 0004 为了解决现有技术中存在的问题， 本发明提供了一种乳化效果好、 稳定性好的高 性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法。 0005 本发明采用以下技术方案： 0006 一种高性能紫。
8、外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法， 包括以下步骤： 0007 步骤一： 铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上， 37恒温培养24h； 0008 步骤二： 挑取斜面培养基上的菌落接到种子培养基， 装液量为50mL/250mL、 温度为 37， 摇床转速200rmin-1， 恒温培养24h， 得种子液， 将种子液置于功率为15W、 波长254nm 的紫外灯下方10cm处震荡照射， 诱变时间为60s； 0009 步骤三： 将种子液以8(v/v)的接种量接到发酵培养基中， 装液量为50mL/250mL， 温度为37， 摇床转速200rmin-1， 恒温培养7d， 得发酵液； 0010 步骤四： 发酵液800。
9、0r/min离心15min， 取上清液， 调pH为2， 加入3倍体积的乙酸乙 酯萃取， 收集有机相， 80旋转蒸发仪旋转蒸发去除乙酸乙酯， 得到鼠李糖脂粗提液； 0011 步骤五： 向鼠李糖脂粗提液中加入3倍体积的去离子水， 充分混匀振荡、 纱布过滤 三次， 收集滤液， 得鼠李糖脂； 0012 步骤六： 称取2g沥青、 2ml鼠李糖脂加入容器中， 并用滴管将100ml水缓慢滴加置容 器中， 并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌， 混合均匀。 0013 优选的， 步骤六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。 0014 优选的， 步骤一中所述的斜面培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基， 包含。
10、： 牛肉膏 3g/L、 蛋白胨10g/L、 氯化钠5g/L、 琼脂20g/L。 0015 优选的， 步骤二中所述的种子培养基包含： NaClg/L， 胰蛋白胨10g/L， 酵母粉5g/L。 0016 优选的， 步骤三中所述的发酵培养基包含： K2HPO44g/L、 KH2PO44g/L、 KCL1g/L、 NaNO32.5g/L、 NaCL1g/L、 CaCl22H2O 0.1g/L， MgSO40.2g/L， 酵母粉1g/L， 甘油30v/v。 说明书 1/3 页 3 CN 107384908 A 3 0017 本发明的有益效果在于： 0018 1)鼠李糖脂具有较强的表面活性和乳化能力， 能。
11、被生物完全降解， 对环境友好。 0019 2)采用本发明制备的高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青， 乳化效果好、 稳定性好， 具有良好的降滤失性和抑制性。 0020 3)采用紫外线作为诱变剂， 对铜绿假单胞菌菌株进行诱变处理， 获得鼠李糖脂的 产量更高。 具体实施方式 0021 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。 0022 实施例1 0023 一种高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法， 包括以下步骤： 0024 步骤一： 铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上， 37恒温培养24h； 0025 步骤二： 挑取斜面培养基上的菌落接到种子培养基， 装液量为50mL/250mL、 温度为 37， 摇床。
12、转速200rmin-1， 恒温培养24h， 得种子液， 将种子液置于功率为15W、 波长254nm 的紫外灯下方10cm处震荡照射， 诱变时间为60s； 0026 步骤三： 将种子液以8(v/v)的接种量接到发酵培养基中， 装液量为50mL/250mL， 温度为37， 摇床转速200rmin-1， 恒温培养7d， 得发酵液； 0027 步骤四： 发酵液8000r/min离心15min， 取上清液， 调pH为2， 加入3倍体积的乙酸乙 酯萃取， 收集有机相， 80旋转蒸发仪旋转蒸发去除乙酸乙酯， 得到鼠李糖脂粗提液； 0028 步骤五： 向鼠李糖脂粗提液中加入3倍体积的去离子水， 充分混匀振荡、。
13、 纱布过滤 三次， 收集滤液， 得鼠李糖脂； 0029 步骤六： 称取2g沥青、 2ml鼠李糖脂加入容器中， 并用滴管将100ml水缓慢滴加置容 器中， 并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌， 混合均匀。 0030 步骤六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。 0031 步骤一中所述的斜面培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基， 包含： 牛肉膏3g/L、 蛋白 胨10g/L、 氯化钠5g/L、 琼脂20g/L。 0032 步骤二中所述的种子培养基包含： NaClg/L， 胰蛋白胨10g/L， 酵母粉5g/L。 0033 步骤三中所述的发酵培养基包含： K2HPO44g/L、 KH2PO44g/L、 KCL1g/L、 NaNO32.5g/L、 NaCL1g/L、 CaCl22H2O 0.1g/L， MgSO40.2g/L， 酵母粉1g/L， 甘油30v/v。 0034 将本发明实施例1制得的高性能紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青和市面上的其他阴离 子乳化沥青的储存稳定性对比结果见下表1， 存储时间为5天。 0035 表1 说明书 2/3 页 4 CN 107384908 A 4 0036 说明书 3/3 页 5 CN 107384908 A 5 。