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1、(10)申请公布号 CN 102584823 A (43)申请公布日 2012.07.18 CN 102584823 A *CN102584823A* (21)申请号 201210016678.X (22)申请日 2012.01.16 C07D 471/18(2006.01) (71)申请人 江苏博益生物科技有限公司 地址 224500 江苏省盐城市滨海县现代农业 产业园 (72)发明人 陈洪生 程志鹏 (54) 发明名称 一种老刺木碱的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种老刺木碱的制备方法， 其 制备方法是 ： (1) 取海南狗牙花粗粉， 用乙醇提 取 ； (2)将提取液浓缩， 再经氧。
2、化铝柱层析 ； (3)制 备液相分离 ； (4) 氯仿 - 丙酮重结晶， 得到高纯度 的老刺木碱结晶产品。本发明方法简单、 得率高， 可一次性得到高纯度产品， 具有较高的经济价值 和学术价值。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 1/1 页 2 1. 一种老刺木碱的制备方法， 其特征在于它包括以下步骤 ： (1) 提取 ： 取海南狗牙花粉碎成粗粉， 加乙醇热回流提取 2-4 小时， 滤出， 提取液减压回 收得浸膏 ； (2) 氧化铝柱层析分离 ： 将上述浸膏加水分散， 与氧化。
3、铝树脂拌匀、 干燥后装柱， 用氯 仿 - 丙酮混合溶液洗脱， 薄层检测， 收集老刺木碱流分， 浓缩 ； (3) 制备液相分离 ： 取一定量的浓缩液， 用甲醇溶解上反相 C18 色谱柱， 用氯仿 - 甲醇 作为流动相， 梯度洗脱， 薄层监测， 收集老刺木碱组分， 将洗脱液旋转蒸发浓缩， 得老刺木碱 粗晶 ； (4) 重结晶 ： 将老刺木碱粗晶用氯仿 - 丙酮重结晶， 冷冻干燥得到高纯度老刺木碱晶 体。 2. 根据权利要求 1 所述的老刺木碱的制备方法， 其特征在于步骤 (2) 所述氧化铝树脂 为 80-120 目， 洗脱溶剂为氯仿 - 丙酮 (1 1)， 用量为柱体积的 4-10 倍。 3. 根。
4、据权利要求 1 所述的老刺木碱的制备方法， 其特征在于步骤 (3) 所述流动相氯 仿 - 甲醇中甲醇的体积百分比为 20-80。 4. 根据权利要求 1 所述的老刺木碱的制备方法， 其特征在于步骤 (4) 所述氯仿 - 丙酮 的体积比为 1-3 1。 权 利 要 求 书 CN 102584823 A 2 1/2 页 3 一种老刺木碱的制备方法 技术领域 ： 0001 本发明属于天然植物提取领域， 具体涉及一种老刺木碱的制备方法。 背景技术 ： 0002 夹竹桃科 (Apocynaceae) 狗牙花属 (Ervatamia Stapf) 植物在全世界共有约 120 种， 主要分布于印度、 中国西。
5、南部、 越南、 缅甸、 泰国、 马来西亚、 印度尼西亚、 菲律宾和澳大 利亚等地， 南美洲也有分布。我国产 15 种、 5 变种， 分布于西南、 华南及台湾省。在各地本属 植物均属于民间药物， 用于治疗腹痛、 喉痛及高血压等疾病。 我国科学家对国产狗牙花属植 物的化学成分和药理活性也进行了较多的研究， 并发现了一些新化合物及药理活性成分。 0003 海南狗牙花Ervatamia hainanensis Tsiang的根也称单根木、 独根木、 山辣椒树、 艾角青、 鸡爪花等， 有清热解毒、 降压、 消肿止痛之功效， 用于高血压病、 咽喉肿痛、 风湿痹痛 等疾病的治疗。 0004 老刺木碱(Vob。
6、asine) ： 分子式C21H24N2O3， 分子量352.43， mp.109110(丙酮)， Rf0.33( 环己烷 - 氯仿 - 二乙胺， 6 3 1) ； 0.58( 乙醚 - 乙醇 - 二乙胺， 18 1 1) ； 0.67( 氯仿 - 丙酮 - 二乙胺， 5 4 1)。老刺木碱在夹竹桃科狗牙花属植物中分布较广， 现代药理研究表明老刺木碱具有多重药理作用， 如 (1) 兴奋中枢神经作用， 成瘾性试验中， 其 SDD 125(Standard delying dose 125) 为 0.00351M/kg ； (2) 肌松作用， 20mg/kg 时， 有较弱的肌松活性 ； (3) 降。
7、压作用， 在大鼠中有 two-stage 降压作用。 0005 目前提取老刺木碱的方法主要为采用溶剂萃取、 常压反复硅胶柱层析或氧化铝柱 层析进行分离， 存在产量小、 得率低、 生产周期长等问题， 不适用于工业生产。 发明内容 ： 0006 本发明的目的在于提供一种老刺木碱的制备方法， 该方法操作简单、 得率高、 安全 环保， 可快速大量分离高纯度老刺木碱。 0007 为实现上述目的， 本发明采用的技术方案如下 ： 0008 (1) 提取 ： 取海南狗牙花粉碎成粗粉， 加乙醇热回流提取 2-4 小时， 滤出， 提取液减 压回收得浸膏 ； 0009 (2) 氧化铝柱层析分离 ： 将上述浸膏加水分。
8、散， 与氧化铝树脂拌匀、 干燥后装柱， 用氯仿 - 丙酮混合溶液洗脱， 薄层检测， 收集老刺木碱流分， 浓缩 ； 0010 (3) 制备液相分离 ： 取一定量的浓缩液， 用甲醇溶解上反相 C18 色谱柱， 用氯 仿 - 甲醇作为流动相， 梯度洗脱， 薄层监测， 收集老刺木碱组分， 将洗脱液旋转蒸发浓缩， 得 老刺木碱粗晶 ； 0011 (4) 重结晶 ： 将老刺木碱粗晶用氯仿 - 丙酮重结晶， 冷冻干燥得到高纯度老刺木碱 晶体。 0012 步骤(2)所述氧化铝树脂为80-120目， 洗脱溶剂为氯仿-丙酮(11)， 用量为柱 体积的 4-10 倍。 说 明 书 CN 102584823 A 3 。
9、2/2 页 4 0013 步骤 (3) 所述流动相氯仿 - 甲醇梯度洗脱条件为 ： 氯仿 - 甲醇 (4 1， 3 2， 2 3， 1 4)， 色谱柱填料为 C18， 流速为 8-20ml/min， 柱温为室温。 0014 步骤 (4) 所述氯仿 - 丙酮的体积比为 1-3 1。 0015 本发明的优点在于 ： 1) 操作简单、 耗时短， 易于产业化放大 ； 2) 提取、 柱层析、 制备 液相分离等步骤中的溶剂用量少， 并可回收再利用 ； 3) 具有较高的经济效益和学术价值， 本发明所得产品纯度高， 可为老刺木碱的进一步开发提供药理原料和实践支持。 具体实施方式 ： 0016 下面结合具体实施。
10、例对本发明进一步说明 ： 0017 实施例 1 ： 0018 取海南狗牙花 1kg， 粉碎成粗粉， 加乙醇热回流提取 4 小时， 滤出， 提取液减压回收 得浸膏， 向浸膏加水分散， 与氧化铝树脂 (120 目 ) 拌匀、 干燥后装柱， 用 10 倍柱体积的氯 仿 - 丙酮 (1 1) 混合溶液洗脱， 薄层检测， 收集老刺木碱流分， 浓缩得浓缩液。将浓缩液 加入甲醇至刚好溶解， 溶解后的溶液用0.45m膜滤， 取滤液进样， 以氯仿-甲醇为流动相， 按(41， 32， 23， 14)进行梯度洗脱， 色谱柱填料为C18， 流速为20ml/min， 柱温为 室温， 进行老刺木碱的制备分离， 紫外检测器。
11、在线监测， 针对性收集老刺木碱的流分溶液， 减压回收试剂得老刺木碱粗晶， 用氯仿 - 丙酮 (1 1) 重结晶， 冷冻干燥得到高纯度老刺木 碱晶体 1.2mg。 0019 实施例 2 ： 0020 取海南狗牙花 1kg， 粉碎成粗粉， 加乙醇热回流提取 2 小时， 滤出， 提取液减压回 收得浸膏， 向浸膏加水分散， 与氧化铝树脂 (80 目 ) 拌匀、 干燥后装柱， 用 4 倍柱体积的氯 仿 - 丙酮 (1 1) 混合溶液洗脱， 薄层检测， 收集老刺木碱流分， 浓缩得浓缩液。将浓缩液 加入甲醇至刚好溶解， 溶解后的溶液用0.45m膜滤， 取滤液进样， 以氯仿-甲醇为流动相， 按 (4 1， 3。
12、 2， 2 3， 1 4) 进行梯度洗脱， 色谱柱填料为 C18， 流速为 8ml/min， 柱温为 室温， 进行老刺木碱的制备分离， 紫外检测器在线监测， 针对性收集老刺木碱的流分溶液， 减压回收试剂得老刺木碱粗晶， 用氯仿 - 丙酮 (3 1) 重结晶， 冷冻干燥得到高纯度老刺木 碱晶体 1.1mg。 0021 实施例 3 ： 0022 取海南狗牙花 10kg， 粉碎成粗粉， 加乙醇热回流提取 3 小时， 滤出， 提取液减压回 收得浸膏， 向浸膏加水分散， 与氧化铝树脂 (100 目 ) 拌匀、 干燥后装柱， 用 8 倍柱体积的氯 仿 - 丙酮 (1 1) 混合溶液洗脱， 薄层检测， 收集老刺木碱流分， 浓缩得浓缩液。将浓缩液 加入甲醇至刚好溶解， 溶解后的溶液用0.45m膜滤， 取滤液进样， 以氯仿-甲醇为流动相， 按(41， 32， 23， 14)进行梯度洗脱， 色谱柱填料为C18， 流速为12ml/min， 柱温为 室温， 进行老刺木碱的制备分离， 紫外检测器在线监测， 针对性收集老刺木碱的流分溶液， 减压回收试剂得老刺木碱粗晶， 用氯仿 - 丙酮 (2 1) 重结晶， 冷冻干燥得到高纯度老刺木 碱晶体 9.2mg。 说 明 书 CN 102584823 A 4 。