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1、(10)申请公布号 CN 102747136 A (43)申请公布日 2012.10.24 CN 102747136 A *CN102747136A* (21)申请号 201210118926.1 (22)申请日 2012.04.20 13/091,446 2011.04.21 US C12Q 1/54(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12M 1/34(2006.01) (71)申请人 帕尔公司 地址 美国纽约 (72)发明人 CLC关 (74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专 利商标事务所 11038 代理人 李瑛 (54) 发明名称 生物流体中细菌的检测 (。
2、57) 摘要 提供了检测生物流体中的细菌的方法， 该方 法包括将可能包含细菌的生物流体置于容器中， 该容器包括用于减少血细胞呼吸的清洁剂和细菌 生长促进剂 ； 和在一定时间期限内， 测定和 / 或检 测容器内生物流体中的葡萄糖水平。还提供了实 施该方法的系统。 (30)优先权数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 10 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 10 页 附图 3 页 1/1 页 2 1. 用于检测生物流体中的细菌的方法， 该方法包括 ： (a) 将可能包含细菌的生物流体置于容器中， 其中该容器包。
3、括 (i) 用于减少血细胞呼 吸的清洁剂 ； 和 (ii) 细菌生长促进剂 ； 和 (b) 在一定时间期限内， 测定和 / 或检测容器内生物流体中的葡萄糖水平， 其中在该时 间期限内葡萄糖水平的下降表示存在细菌。 2. 权利要求 1 的方法， 其中生物流体包含含有血小板的流体。 3. 权利要求 1 的方法， 其中生物流体包含含有干细胞的流体。 4. 权利要求 1 的方法， 其中生物流体包含细胞培养物。 5.权利要求1-4任一项的方法， 包括测定和/或检测容器中的第一葡萄糖水平， 和在测 定和 / 或检测该第一水平的约 4- 约 15 小时内 ； 测定和 / 或检测容器中的第二葡萄糖水平。 6.。
4、 权利要求 1-5 任一项的方法， 包括从受试者得到生物流体 ； 和在从受试者得到生物 流体的约 24 小时或更短时间内使部分生物流体进入容器， 其中使该部分生物流体保持与 清洁剂和细菌生长促进剂接触。 7. 权利要求 1-6 任一项的方法， 其中生物流体包含白细胞耗尽的流体。 8. 用于检测生物流体中的细菌的系统， 包括 ： (a) 包含适合于包含生物流体的容器的生物流体采样装置， 所述容器包含葡萄糖入口， 其中该容器包含(i)有效量的用于减少血细胞呼吸的清洁剂 ； 和(ii)有效量的细菌生长促 进剂 ； 和 (b) 葡萄糖测定装置和 / 或葡萄糖读取装置， 其中所述装置适合于在一定时间期限。
5、内 测定或检测生物流体中的第一葡萄糖水平和生物流体中的第二葡萄糖水平， 其中在该时间 期限内葡萄糖水平的下降表示存在细菌。 权 利 要 求 书 CN 102747136 A 2 1/10 页 3 生物流体中细菌的检测 0001 发明背景 0002 通常将血液加工例如分离成成分， 得到各种有价值的产品， 例如输血产品。 可以在 加工过程中汇集血液成分或产品， 例如血沉棕黄层和血小板， 例如， 可以在作为输血产品给 予前汇集 4-6 个单位的血小板浓缩物。另外， 可以在给予前贮存在封闭系统中 ( 例如不使 成分暴露于外部环境 ) 加工的血液成分。例如， 可以将红细胞贮存几周， 并且可以将血小板 贮。
6、存几天 ( 例如根据目前的美国实践 5 天 )。 0003 贮存的和 / 或未贮存的成分可能包括不期望的材料例如细菌。细菌可以在血液采 集 ( 包括采血样 ) 和 / 或贮存过程中污染血液或血液成分。细菌污染的一个来源可以是 血液捐献者皮肤， 其可能包含一种或多种种类的细菌。由于在静脉穿刺前擦拭捐献者皮肤 ( 例如用酒精 ) 可能不足以确保无菌， 所以细菌可以进入采血容器并且细菌可以在贮存血 液或血液成分的同时再生。另外， 静脉采血针头在该静脉采血针头插入捐献者时可能切下 一圆片皮肤， 使得包含细菌的皮片与血液一起进入采血容器。 0004 污染的其他来源包括捐献者血液、 环境 ( 包括空气和环。
7、境中的设备 ) 和静脉采血 者。污染可以在捐献血液单位和 / 或得到血样的同时发生。 0005 由于将一些血样成分 ( 例如血小板 ) 典型地贮存在环境温度， 所以污染问题可能 被放大， 因为许多种类的细菌在环境温度更快速地再生。 0006 污染的血液产品、 尤其是细菌污染的血液产品对接触或接受这些产品的那些人形 成了潜在的健康风险。 例如， 给予存在细菌污染的输血产品可以对接受者产生不良反应， 并 且在美国， 给予具有高水平细菌污染的血小板每年牵连许多严重的疾病或死亡病例。 0007 用于检测细菌的一些现存的技术是耗费劳动且耗时的并且可能需要昂贵的设备。 一些技术可能使得采样受限、 得到不精。
8、确的结果和 / 或难以检测一些种类的细菌。另外， 这 些技术可能将污染从环境中导入样品。 0008 本发明提供了用于对至少一些现有技术缺陷的改善。 本发明的这些和其他优点从 如下举出的描述中显而易见。 0009 发明概述 0010 在一个实施方案中， 提供了用于检测生物流体例如血液和血液产品中细菌的方 法， 该方法包括使可能包含细菌的生物流体接触减少血细胞呼吸的清洁剂和细菌生长促进 剂 ； 和在一定时间期限内， 测定和 / 或检测容器中的葡萄糖水平， 所述容器包含所述的生物 流体、 清洁剂和细菌生长促进剂。 0011 本发明的另一个实施方案提供了检测生物流体例如血液和血液产品中的细菌的 系统，。
9、 该系统包含读取和 / 或测定装置， 和包含适合于装载生物流体的容器的生物流体采 样装置， 该容器包含入口并且包含用于减少血细胞呼吸的清洁剂和细菌生长促进剂。 0012 由于血细胞呼吸 ( 使用葡萄糖作为其代谢的底物 ) 在清洁剂的存在下减少， 且由 于细菌在其代谢周期过程中利用葡萄糖 ( 需氧菌在糖酵解过程中利用葡萄糖、 厌氧菌在发 酵过程中利用葡萄糖 )， 所以如果生物流体中存在细菌， 则细菌生长将在生长促进剂的存在 下得到促进， 且葡萄糖的水平将随时间减少。 因此， 葡萄糖的水平改变用作细菌检测的替代 说 明 书 CN 102747136 A 3 2/10 页 4 标记。 附图说明 00。
10、13 图 1 显示根据本发明的细菌检测系统的实施方案， 包含生物流体采样装置， 其包 含适合于装载生物流体的容器， 该容器包含葡萄糖采样入口并且包含用于减少血细胞呼吸 的清洁剂和细菌生长促进剂和葡萄糖读取和 / 或葡萄糖测定装置。 0014 图 2 显示根据本发明的细菌检测系统的另一个实施方案， 包含葡萄糖读取和 / 或 葡萄糖测定装置和生物流体加工系统， 其包含多个生物流体容器和如图 1 中所示的生物采 样装置。 0015 图 3 显示根据本发明的细菌检测系统的另一个实施方案， 包含葡萄糖读取和 / 或 葡萄糖测定装置和生物流体加工系统， 其包含多个生物流体容器、 排气口、 白细胞耗尽滤器 。
11、和如图 1 中所示的生物采样装置。 0016 发明详述 0017 有利的是， 本发明不仅能够检测需氧菌， 而且能够检测专门的厌氧菌并且能够检 测对于其代谢不使用氧的兼性厌氧菌。 0018 在一个实施方案中， 提供了用于检测生物流体中的细菌的方法， 该方法包括 ： (a) 将生物流体 ( 该生物流体可能包含细菌 ) 置于容器中， 该容器包括 (i) 用于减少血细胞呼 吸的清洁剂 ； 和(ii)细菌生长促进剂 ； 和(b)在一定时间期限内， 测定和/或检测容器内生 物流体中的葡萄糖水平， 其中在该时间期限内葡萄糖水平的下降表示存在细菌。 0019 该方法的实施方案包括测定和 / 或检测容器内的第一。
12、葡萄糖水平， 并且在测定和 /或检测容器内第一葡萄糖水平的约4-约15小时内， 测定和/或检测容器内的第二葡萄糖 水平 ； 或包括在一定时间期限内， 连续测定和 / 或检测容器内 PC 中的葡萄糖水平。 0020 在一个实施方案中， 在最初从受试者得到生物流体的约 24 小时或更短时间内将 加工的生物流体置于容器中。 0021 或者或另外， 该方法的实施方案包括从受试者采集生物流体， 并且在采集生物流 体的约 24 小时或更短时间内， 使部分生物流体进入容器， 其中使该部分生物流体保持与清 洁剂和细菌生长促进剂接触， 并且在适合的时间期限后， 在一定时间期限内， 测定和 / 或检 测容器中的葡。
13、萄糖水平。示例地， 可以采集 1 单位的血液并且加工以便将血液分离成一种 或多种成分， 包括， 例如， PC。在采血的约 24 小时内， 可以使部分分离的 PC 进入容器， 其中 使该部分 PC 保持与清洁剂和细菌生长促进剂接触， 并且在适合的时间期限后， 在一定时间 期限内， 测定和 / 或检测容器中的葡萄糖水平。 0022 该方法的实施方案可以包括将清洁剂和细菌生长促进剂置于容器中， 然后将生物 流体置于容器中， 例如， 该方法可以包括将生物流体置于采样装置容器中， 该容器包含葡萄 糖采样入口并且包含用于减少血细胞呼吸的清洁剂和细菌生长促进剂。 0023 在优选的实施方案中， 生物流体包含。
14、含有血小板的流体、 例如富含血小板的血浆 或血小板浓缩物 ； 包含红细胞的流体例如白细胞或浓集红细胞 ； 包含脐带血、 干细胞的流 体或细胞培养物。在一些实施方案中， 生物流体包含白细胞耗尽的流体。 0024 在另一个实施方案中， 提供了用于检测生物流体中细菌的系统， 包括 ： (a) 生物 流体采样装置， 其包含适合于包含生物流体的容器， 该容器包含入口 ( 优选葡萄糖采样入 说 明 书 CN 102747136 A 4 3/10 页 5 口 )， 该容器包含 (i) 有效量的用于减少血细胞呼吸的清洁剂 ； 和 (ii) 有效量的细菌生长 促进剂， 该系统还包含 ： (b) 葡萄糖读取装置和。
15、 / 或葡萄糖测定装置， 该装置还包含葡萄糖 采样装置(例如试剂垫和/或测试条)， 其中读取和/或测定装置适合于在一定时间期限内 测定和 / 或检测生物流体内的第一葡萄糖水平和生物流体内的第二葡萄糖水平， 其中该时 间期限内葡萄糖水平的下降表示存在细菌。 0025 典型地， 适合于包含生物流体的生物流体采样装置容器是软包装容器。 0026 在细菌检测系统的一个优选的实施方案中， 该系统包含生物流体加工系统， 该系 统包含多个容器， 例如用于接收和 / 或采集生物流体的第一个容器 ( 例如 “源容器” ) 和至 少第二个用于接收部分生物流体的容器 ( 例如作为生物流体采样装置的组成部分， 其也是。
16、 所述系统的组成部分 )， 其中第二个容器包含清洁剂和细菌生长促进剂 ； 和葡萄糖读取和 / 或测定装置， 其检测该时间期限内生物流体中的葡萄糖水平。生物流体加工系统典型地包 括多个用于提供容器之间流体沟通的导管并且可以包括另外的部件， 例如一个或多个另外 的容器 ( 例如用于另外的溶液和 / 或用于包含加工的生物流体成分 ) 和 / 或过滤装置 ( 例 如白细胞耗尽过滤装置)和/或一个或多个排气口例如气体入口和/或气体出口。 典型地， 该生物流体加工系统还包括一个或多个流量控制装置， 例如夹子、 转移路径截止器、 止回阀 和 / 或可旋转阀。 0027 该细菌检测系统和/或生物流体加工系统的。
17、实施方案优选包括可拆卸的(或可连 接和可拆卸的 ) 生物流体采样装置。例如， 可以生产生物流体加工系统， 包括生物流体采样 装置， 或者可以将生物流体采样装置(例如， 通过保持无菌的无菌对接)与存在的生物流体 加工系统 ( 包括任何商购的生物流体加工系统， 例如血袋组 ) 连接。可以在流体通过后切 断能够使第一个 ( 源 ) 容器与第二个容器 ( 生物流体采样装置容器 ) 之间流体沟通的导管 ( 优选通过热封以维持采样装置和源容器的内容物无菌性 )， 且随后可以检测细菌。 0028 或者或另外， 细菌检测系统和 / 或细菌流体加工系统可以包括通过系索、 优选能 弯曲的系索例如塑料索或缆连接的生。
18、物流体采样装置(例如连接第一个容器)。 示例地， 上 述导管可以被切断和密封并且单独的系索保持分析室与源容器连接， 例如直到细菌分析完 成为止。 0029 由于可以根据本发明检测细菌， 所以本发明的实施方案可以适合于提供可以长于 目前各国规程允许的期限贮存血液成分。 例如至少部分是由于恐惧可能被细菌污染的血细 胞浓缩物(PC)， 所以目前的美国实践要求当在密闭系统中加工时， 各PC和汇集PC的单元需 在5天内使用。 然而， 由于本发明的实施方案能够检测污染的PC， 所以可以监测汇集的和未 汇集的 PC， 且如果经测定未污染， 则可以在目前要求的 5 天限制后使用。示例地， 例如在 7 天贮存后。
19、， 可以输注在密闭系统中加工的各 PC 或汇集的 PC 单位。 0030 各种细菌包括革兰氏阳性菌、 革兰氏阴性菌、 需氧菌和厌氧菌利用葡萄糖且由此 根据本发明的实施方案， 一定时间期限内生物流体中葡萄糖水平或浓度的下降反映出存在 细菌。 0031 示例地， 实施方案提供了检测细菌的存在， 其中存在的细菌可以是如下的一种或 多种 ： 表皮葡萄球菌、 金黄色葡萄球菌、 路邓葡萄球菌、 粘质沙雷氏菌、 解凝沙雷氏菌、 小肠 结肠炎耶尔森菌、 肺炎克雷白氏菌、 奥克西托克雷白杆菌、 大肠埃希氏杆菌、 阴沟肠杆菌、 产 气荚膜梭状芽孢杆菌、 铜绿假单胞菌、 淤泥真杆菌、 沙门菌属的种类例如肠道沙门氏菌。
20、 ( 在 说 明 书 CN 102747136 A 5 4/10 页 6 先的猪霍乱沙门氏菌 )、 芽孢杆菌属的种类例如蜡状芽孢杆菌、 产气荚膜梭状芽孢菌、 痤疮 丙酸杆菌、 无乳链球菌(也称作B组链球菌或GBS)、 牛链球菌(至少一些菌株目前称作马肠 链球菌 )、 婴儿链球菌和草绿色链球菌。 0032 本发明的系统和方法特别适用于输血装置、 血站和 / 或血库人员。 0033 如果期望， 则一旦根据本发明测定存在细菌， 则可以通过已知技术进一步进行分 析以鉴定存在的特定种类的细菌。 0034 现在在下文中更具体地描述本发明的组成部分， 其中类似的组成部分具有类似的 参比序号。 0035 优选。
21、采样装置的实施方案包括具有至少两个入口的容器和至少一个与至少入口 之一流体沟通的导管。 0036 图 1 示例用于本发明实施方案的生物流体采样装置 100。所示例的采样装置包含 用于接收部分生物流体的采样装置容器 50( 例如 “采样容器” )， 该容器包括入口 10( 例如 “葡萄糖采样入口” ) 和密封该入口一端的可穿刺的部件 11( 例如弹性隔膜 )， 其中可穿刺的 部件包括可穿刺的部分12(优选位于或接近该部件的中心)以便例如能够插入液体抽取装 置 ( 例如注射器， 典型地， 其中抽取装置还包含连接注射器的针头或喷嘴 ) 或葡萄糖探头， 同时维持密封 ； 生物流体入口 20 和与口流体。
22、沟通的导管 30。在一些实施方案中， 多孔膜 13、 优选疏水性微孔膜位于或接近口的另一端。 例如， 在连接注射器的针头或喷嘴刺入隔膜 ( 不穿透膜 13) 后， 注射器活塞可以在注射器桶内部分被抽离， 生成真空并且从容器中且通 过膜进入桶拉出生物流体。典型地， 入口 10 由不同于容器 50 的材料制成。 0037 优选导管30是无菌对接的， 使得该装置可以与例如另一个导管和/或容器通过无 菌对接连接， 从而可以得到封闭系统。在一些实施方案中， 例如如图 1 中所示， 该系统包含 流量控制装置 35 例如与导管流体沟通的单向止回阀和至少另一个与止回阀流体沟通的导 管36(优选可无菌对接导管)。
23、。 采样装置包括清洁剂和细菌生长促进剂， 且所示例的采样装 置在容器内包括 2 个片剂 5、 5a， 它们各自包含清洁剂和细菌生长促进剂。优选如图 1 中所 示， 该装置还包括适合于附加例如打印或侵蚀刻于其上标记的区域， 或用于接收其上具有 标记的标签的区域。 0038 如果期望， 则采样装置可以包括例如还包含鲁尔连接器(未显示)的入口， 使得液 体抽取装置例如注射器与采样装置连接以便随后从容器中抽取液体。 0039 图 1 还显示图解的葡萄糖读取装置和 / 或葡萄糖测定装置 500。 0040 典型地， 并且如图 2 中所示例的， 细菌检测系统 1000 包含生物流体加工系统 300， 其包。
24、含多个容器， 例如用于接收和/或采集生物流体的第一个容器51和至少第二个用于接 收部分从第一个容器通过的生物流体的容器 50( 作为图 1 中所示的生物流体采样装置 100 的组成部分， 其也为该系统的组成部分 )， 其中第二个容器包含清洁剂和细菌生长促进剂， 且其中葡萄糖读取装置和 / 或葡萄糖测定装置 500 检测和 / 或测定该时间期限内生物流体 中的葡萄糖水平。所示例的生物流体加工系统包括多个用于提供容器之间流体沟通的导 管。 0041 在一些实施方案中， 细菌检测系统包含含有多个容器的生物流体加工系统和白细 胞耗尽过滤器。例如， 在图 3 中示例的实施方案中， 细菌检测系统 1000。
25、 包含含有多个容器 的生物流体加工系统 300 和白细胞耗尽过滤器 250。所示例的生物流体加工系统 300 包含 说 明 书 CN 102747136 A 6 5/10 页 7 第一个容器 51， 例如用于接收汇集的生物流体 ( 汇集歧管和未显示的 PC 各单位的容器 )， 和至少第二个容器 50( 作为图 1 中所示的生物流体采样装置 100 的组成部分， 其也为所述 系统的组成部分 )， 用于接收部分通过第一个容器的生物流体， 其中第二个容器包含清洁剂 和细菌生长促进剂， 且其中葡萄糖读取装置和 / 或葡萄糖测定装置 500 检测和 / 或测定在 该时间期限内生物流体中的葡萄糖水平。根据。
26、所示例的系统， 生物流体从第一个容器 51 通 过白细胞耗尽过滤器 250 进入第三个容器 53， 其可以包含贮存容器。所示例的生物流体加 工系统包括多个用于提供容器之间流体沟通的导管。 0042 图3中所示例的生物流体加工系统300还包含排气口225(可以包含气体入口和/ 或气体出口 ) 和作为本领域公知应用的排气袋 275。例如， 汇集的 PC 可以通过进入第一个 容器 51， 且排气口 225 可以允许空气通过排气口并且使排气口与第一个容器之间的导管中 的 PC 流入容器。然后容器 51 中的空气可以通过导管和排气口， 并且导管被密封。在其中 系统包括排气袋 275 的那些实施方案中， 。
27、在白细胞耗尽的生物流体进入第三个容器 53 后， 容器 53 中的空气可以进入排气袋， 并且可以导向容器 53 的导管被密封。 0043 尽管图 3 示例了与第一个容器 51( 能够在白细胞耗尽前采样 ) 之间流体沟通的第 二个容器 50( 作为生物流体采样装置 100 的组成部分 )， 但是在另一个实施方案中 ( 未显 示)， 第二个容器50(作为生物流体采样装置100的组成部分)与第三个容器53(例如能够 在白细胞耗尽后采样 ) 流体沟通。 0044 清洁剂和 / 或细菌生长促进剂可以是干燥形式 ( 例如粉末或片剂 ) 或液体形式。 在任一形式中， 可以包括其它成分、 组分和 / 或添加剂。
28、。如果期望， 例如， 其中清洁剂和 / 或 细菌生长促进剂是干燥形式， 例如片剂形式， 则可以包括其它成分、 组分和 / 或添加剂， 例 如， 惰性材料， 例如一种或多种如下成分 ： 麦芽糖、 甘露糖醇和盐， 例如氯化钙， 例如用于提 供整体和 / 或易于结合。 0045 本发明的清洁剂显著地减少了血细胞(血小板、 血细胞和白细胞)呼吸， 但对细菌 呼吸几乎没有或无影响。优选的清洁剂是磺酸多聚对苯烯基茴香醚钠 (SPS)。 0046 各种细菌生长促进剂适用于本发明。 一种优选的促进剂是胰蛋白酶解酪蛋白大豆 肉汤 (TPB)。其他适合的促进剂包括、 但不限于肉汤例如溶源性肉汤 (LB 肉汤 )、。
29、 甘露糖醇 肉汤、 M9 最小培养基 ( 可以补充例如一种或多种如下成分 ： 葡萄糖、 钙和镁 ) 或其他肉汤， 包括补充的肉汤。 0047 检测液体中的葡萄糖水平。例如， 可以从采样装置容器中取出小体积的生物流体 ( 通过入 ( 葡萄糖采样 ) 口， 使用液体抽吸装置， 典型地包含注射器 )， 并且典型地置于插入 葡萄糖读取装置和 / 或葡萄糖测定装置的试剂垫或测试条上， 且在适合的时间期限后将该 过程重复至少一次。或者， 例如， 可以将探头放入采样装置容器， 其中该容器至少部分填充 了生物流体， 将探头放入液体， 并且可以取得探头读数， 取出探头并且在适合的时间期限后 插入探头(相同或不同。
30、探头)， 且取得另一个探头读数。 或者， 探头可以保留在容器内， 从而 能够多次和 / 或连续读取。一定时间期限内葡萄糖水平的下降表示存在细菌。 0048 各种设备、 装置和 / 或方案适合于检测生物流体中的葡萄糖水平或浓度。本领域 中已知示例的适合的装置 500( 包括葡萄糖读取装置和葡萄糖测定装置 ) 并且包括商购装 置， 例如购自 LifeScan， Inc.(Milpitas， CA， 例如 Glucometer SureStep Flexx Meters， Blood Glucose Meters)、 Roche Diagnostics Corp.(Indianapolis， IN，。
31、 说 明 书 CN 102747136 A 7 6/10 页 8 例 如计 量 器 )、 Abbott Laboratories(Abbott Park， IL， 例 如 Optimum OmegaTM)、 Nipro Diagnostics， Inc.(Fort Lauderdale， FL， 例如产品 ) 和 Bayer(Terrytown， NY， 例如 1265Blood Gas Analyzer)。 0049 可以设定葡萄糖读取装置和葡萄糖测定装置以提供例如 “通过” 和 “失败” 结果， 例如， 其中设定葡萄糖阈值， 且一旦检测到低于该阈值的值， 则生物流体单位 “失败” ， 而如。
32、 果未检测到低于该阈值的值， 则生物流体单位 “通过” 。 或者或另外， 可以设定葡萄糖读取装 置和葡萄糖测定装置以测定葡萄糖水平， 其中该水平与细菌污染或未污染相关。 0050 可以使用一个或多个探头、 传感器或液体抽取装置， 例如将其置于生物流体容器 内或其上。在一些实施方案中， 部件例如液体抽取装置、 探头和 / 或传感器是自我包含的并 且适合于一次性使用。本发明系统的实施方案可以包括这些预装配和 / 或预连接的部件， 例如在生物流体进入容器之前。 或者或另外， 可以在生物流体进入容器过程中或之后装配、 连接和 / 或使用一种或多种这些部件。 0051 本发明的实施方案适合于各种应用， 。
33、且所述的生物流体可以来自许多来源， 优选 哺乳动物。生物流体可以来自受试者例如人 ( 例如提供血液单位或血液成分提取产品的捐 献者 ) 或动物。在一些实施方案中， 例如在其中将生物流体作为输注产品给予或生物流体 是脐带血或包含干细胞的一些实施方案中， 该方法优选在维持封闭系统的同时进行。 0052 该方法的实施方案可以在任何适合的时间期限内和在任何适合的温度下进行。 例 如， 可以从受试者中采集生物流体 ( 且如果期望， 则加工以便将生物流体分离成一种或多 种成分 ) 并且示例地维持在室温， 距采集至多约 24 小时期限， 然后将生物流体保持与清洁 剂和细菌生长促进剂， 并且测定和 / 或检测。
34、第一葡萄糖水平。典型地， 采集生物流体 ( 例如 血液 ) 并且加工以得到分离的成分， 例如其中一种分离的成分是 PC 单位， 并且将 PC 单位 (或汇集的PC)维持在第一个容器中， 且使部分PC通过第一个容器到达第二个容器， 其中它 被保持与清洁剂和细菌生长促进剂接触， 优选其中第二个容器包含清洁剂和细菌生长促进 剂， 然后使生物流体进入第二个容器。在适合的时间期限后， 例如在至少约 4 小时后 ( 例如 在约采集血液24小时内生物流体、 例如PC保持与清洁剂和细菌生长促进剂接触， 且适合的 时间期限是再经过4小时)， 测定和/或检测第二葡萄糖水平。 优选在那些其中生物流体是 包含血小板的。
35、流体 ( 例如汇集或单一单位的 PC) 的实施方案中， 将与清洁剂和细菌生长促 进剂接触的包含血小板的流体维持在高于室温的温度下， 持续该适合的时间期限， 例如将 其维持在约 35的温度。 0053 可以在任何适合的时间期限内测定和 / 或检测生物流体中的葡萄糖水平或浓度。 典型地， 在测定和 / 或检测第一水平与测定和 / 或检测第二水平之间的时间期限是约 4- 约 15 小时的范围， 更优选约 5- 约 13 小时。 0054 优选在一些其中采样装置与源容器分离的那些实施方案中， 例如源容器不再与采 样容器彼此进行流体沟通， 源容器可以以不同于采样容器的方式加工。 例如， 在源容器与采 样。
36、容器之间插入的导管被密封和切断后， 采样容器在更有益于使微生物快速生长的条件下 ( 例如贮存在高于环境温度， 例如约 35- 约 37的温度 ) 加工， 且源容器可以以更常规的方 式加工 ( 例如贮存在约 22的环境温度 )。 0055 下列定义用于本发明。 0056 生物流体。生物流体包括任何处理或未处理的与活生物体相关的流体， 特别是血 说 明 书 CN 102747136 A 8 7/10 页 9 液， 包括全血、 温血或冷血、 脐带血和贮存或新鲜的血液、 处理的血液例如用至少一种生理 溶液包括、 但不限于盐水、 营养物、 添加剂和 / 或抗凝剂溶液稀释的血液 ； 血液成分例如血 小板浓。
37、缩物 (PC)、 富含血小板的血浆 (PRP)、 贫血小板血浆 (PPP)、 不合血小板的血浆、 血 浆、 鲜冻血浆 (FFP)、 获自血浆的成分、 红细胞压积 (PRC)、 过渡区材料或血沉棕黄层 (BC) ； 来源于血液或血液成分的或来源于骨髓的血液产品 ； 干细胞 ； 分离自血浆和再混悬于生理 溶液或冷冻防护的红细胞流体的 ； 和分离自血浆和再混悬于生理溶液或冷冻防护的流体的 血小板。生物流体还包括细胞培养物和包含骨髓抽吸物的生理溶液。生物流体可以已经被 处理以除去一些白细胞， 然后根据本发明加工。本文所用的血液产品或生物流体指上述成 分和通过其他方式得到并且具有类似特性的类似血液产品或。
38、生物流体。 0057 “单位” 是来自捐献者或来源于一个全血单位的生物流体的量。还可以指单一捐献 过程中抽取的量。 典型地， 单位的体积是变化的， 在患者与患者之间以及捐献与捐献之间是 有区别的。典型地， 可以通过合并 4 个或 4 个以上单位汇集或合并多个单位的一些血液成 分， 特别是血小板和血沉棕黄层。 0058 本文所用的术语 “封闭的” 指能够采集和加工 ( 且如果期望是操作， 例如分离部 分、 分离成成分、 过滤、 贮存和防腐)生物流体， 例如捐献者血液、 血样和/或血液成分， 而不 危害系统的无菌完整性的系统。最初可以制备封闭系统， 或是使用所谓的 “无菌对接” 装置 连接系统部件。
39、得到。示例的无菌对接装置公开在例如美国专利 US 4,507,119、 4,737,214 和 4,913,756 中。 0059 如果期望， 则本发明的实施方案可以包括自动化追踪和 / 或自动化检测方案和设 备。例如， 一个或多个容器和采样装置可以包括具有例如一种或多种如下的信息的标记 ( 例如条形码标签 ) ： 生物流体的来源、 血型、 所用添加剂、 是否达到规定的葡萄糖水平的指 示、 温育温度 ； 且可以追踪信息、 合并测定或检测的结果并且以无论何种适合的方式提供， 例如在至少一种采样装置、 源容器和贮存容器上指示的 ( 如果期望， 以机器可读形式 ) 和 / 或作为打印输出提供。可以将。
40、该信息添加到使用者或使用者机构的电子记录 / 数据库中， 例如通过当地或通过基于网络的形式。 0060 生物流体采样装置优选包含软包装容器， 典型地由例如常用于生产血袋 ( 例如采 集袋和 / 或随体袋 ) 的材料制成。本发明的生物流体加工系统的实施方案典型地包含多个 导管和容器， 优选软包装容器， 例如血袋(例如采集袋、 随体袋和/或贮存袋)和排气(空气 或气体 ) 小袋或袋。在一个实施方案中， 本发明的系统包含封闭系统。各种适合的容器和 导管是本领域公知的。例如， 血液采集和随体袋以及导管可以由增塑的聚氯乙稀制成。袋 和/或导管还可以由例如乙烯丁基丙烯酸酯共聚物(EBAC)树脂、 乙烯甲基。
41、丙烯酸酯共聚物 (EMAC) 树脂、 增塑的超高分子量 PVC 树脂和乙烯乙烯基乙酸酯 (EVA) 制成。袋和 / 或导管 还可以由例如聚烯烃、 聚氨基甲酸酯、 聚酯和聚碳酸酯制成。 0061 本领域中还已知适合的入口、 可穿刺隔膜、 流量控制装置 ( 包括夹子、 转移路径截 止器、 止回阀和可旋转阀 ) 和采样歧管并且可以是商购的。 0062 在那些包括白细胞耗尽过滤器的实施方案中， 各种白细胞耗尽过滤器适用于本发 明， 例如， 如美国专利 US4,880,548、 4,925,572， 5、 152,905 和 6,074,869 中所述。在那些 包括排气口例如气体入口和 / 或气体出口 。
42、( 例如包含居留室和至少一个包含排列在居留 室内的多孔膜的排气口部件 ) 的实施方案中， 各种材料适合于用作排气口部件。适合的 说 明 书 CN 102747136 A 9 8/10 页 10 部件包括亲水性微孔膜和疏水性多孔膜， 且排气口公开在例如美国专利 US 5,126,054 和 5,451,321中。 优选当根据封闭的系统使用时， 气体入口和/或气体出口防止了细菌通过其 中， 例如气体入口和气体出口包括具有细菌封闭孔等级的排气口部件。 0063 下列实施例进一步示例本发明， 当然， 其不以任何方式限定本发明的范围。 0064 实施例 1 0065 本实施例显示葡萄糖测量值可以用于检测。
43、存在的需氧菌和厌氧菌。 0066 得到一般如图 1 中所示的采样装置 100。具有约 10mL 体积的采样装置容器 50 包 含 2 个片剂， 每个片剂包括 1.75mg SPS、 TSB、 氯化钙和制备加工试剂。可弯曲的管道 30 和 36 各自约 2 英寸长。 0067 将全血采集入包括抗凝剂的采集装置组并且加工 ( 包括过滤 ) 以得到各容器 中的白细胞耗尽的血细胞浓缩物 (PC) 单位。24 小时后， 使用如下细菌以 1-10CFU/mL 或 100-250CFU/ML 的靶接种物接种 PC 单位。 0068 需氧菌 / 兼性厌氧菌 ATCC# 厌氧菌 ATCC# 蜡状芽孢杆菌 706。
44、4 产气荚膜梭状芽孢杆菌 13124 阴沟肠杆菌 29005 粘液真杆菌 8486 大肠埃希氏杆菌 25922 痤疮丙酸杆菌 11827 肺炎克雷白氏菌 8045 路邓葡萄球菌 49576 铜绿假单胞菌 27853 牛链球菌 33317 猪霍乱沙门氏菌 8326 温和链球菌 903 粘质沙雷氏菌 43862 无乳链球菌 12927 金黄色葡萄球菌 27217 表皮葡萄球菌 49134 0069 在 PC 容器与采样装置无菌对接后， 将约 5-6mL 的各接种单位置于一般如图 1 中所示的采样装置内， 该过程使用用于厌氧菌的气体不可渗透容器和用于需氧菌的气体 渗透容器进行， 并且取样以测定氧百分。
45、比和葡萄糖水平。在 35在厌氧和需氧条件下 将相应的采样装置在搅拌下接种 18 和 24 小时， 并且取样以测定 18 和 24 小时时的氧百 分比和葡萄糖水平。使用根据制造商说明运行的 Bayer 1265Blood Gas Analyzer(Terrytown， NY) 测定葡萄糖水平。 0070 另外， 接种后 2 小时取样， 并且测定氧百分比和葡萄糖水平。 0071 未接种的 PC 的单位用作对照组。 说 明 书 CN 102747136 A 10 9/10 页 11 0072 对接种单位而言在 0 小时和 2 小时采样时间时的葡萄糖水平在约 12-28mmol/L 的 范围， 而在 。
46、18 小时和 24 小时采样时间时的葡萄糖水平在约 0- 约 3mmol/L。 0073 对对照组而言在 0 小时和 2 小时采样时间时的葡萄糖水平在约 12-28mmo l/L 的 范围， 而在 18 小时和 24 小时采样时间时的葡萄糖水平在保持在近似的那些范围。 0074 本实施例显示在接种的单位中， 葡萄糖水平随时间下降， 反映出需氧菌和厌氧菌 生长。 0075 实施例 2 0076 本实施例显示葡萄糖测量值可以用于检测在 6-24 小时的不同样品装置接种时间 内需氧菌和厌氧菌的存在。 0077 将全血采集入包括抗凝剂的采集装置组并且加工(包括过滤)以得到各容器中的 白细胞耗尽的血小板。
47、浓缩物 (PC) 单位。24 小时后， 使用如下细菌以 1-10CFU/mL 的靶接种 物接种 PC 单位。 0078 0079 再经过 24 小时后， 使 PC 的容器与采样装置无菌对接。 0080 在无菌对接后， 将约 5-6mL 的各接种单位置于一般如图 1 中所示的采样装置内 ( 包括 2 个片剂， 每个片剂包括 SPS、 TSB、 氯化钙和制备加工试剂 )， 该过程使用用于厌氧菌 的气体不可渗透容器和用于需氧菌的气体渗透容器进行， 且取样测定氧百分比和葡萄糖水 平。在 35在厌氧和需氧条件下将相应的采样装置在搅拌下接种 6、 9、 12 和 24 小时， 并且 取样以测定 6、 9、。
48、 12 和 24 小时时的 pH、 氧百分比和葡萄糖水平。使用根据制造商说明运行 的 Bayer 1265Blood Gas Analyzer(Terrytown， NY) 测定葡萄糖水平。 0081 将未接种的 PC 单位用作对照组。 0082 当置于采样装置中时 PC( 接种的和对照组 ) 的葡萄糖水平为约 26mmol/L。在 6 小 时、 9 小时和 12 小时采样时间时采样装置中的接种单位的葡萄糖水平分别为约 13mmol/L、 4.5mmol/L 和 4.2mmol/L 且在这些采样时间时对照组的葡萄糖水平保持为约 26mmol/L。 0083 本施例显示了在采样装置中温育6、 9。
49、和12小时内葡萄糖水平可测定地下降， 反映 出需氧菌和厌氧菌生长。 0084 将本文引述的全部参文献包括公开出版物、 专利申请和专利引入本文作为参考， 其引述程度与将它们各自和特别引入作为参考并且以完整的形式举出的程度相同。 0085 除非本文另有指示或上下文中有清楚的相反表述， 否则描述本发明的上下文中 ( 尤其是如下权利要求的上下文中 ) 使用的术语 “一种 (a)” 和 “一种 (an)” 和 “该 (the)” 说 明 书 CN 102747136 A 11 10/10 页 12 和类似的指示物预以覆盖单数和复数形式。除非另有标注， 否则术语 “包含” 、“具有” 、“包 括” 和 “含有” 为开放式术语 ( 即指 “包括、 但不限于” )。除非本文另有指示， 否则本文所述 值的范围仅预以用作分别指落入该范围的各值的速记法， 并且将各单独的值引入说明书， 就如同将它们各自在本文中描述一样。除非本文另有指示或上下文中有清楚的相反表述， 否则本文所用的所有方法均可以以任何适合的次序进行。除非另有要求， 否则本文提供的 任何和全部实施例或典型语言 ( 例如 “例如” ) 的应用仅旨在更好地阐明本发明， 而不构成 对本发明范围的限制。 不应将在本说明书中的表述视为表示用于实施本发明所必需的任何 未要求的要素。 0086 本文描述了。