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5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的制备方法.pdf

上传人：梁腾 文档编号：8583319 上传时间：2020-09-06 格式：PDF 页数：15 大小：749.64KB
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摘要
申请专利号：

CN201610167997.9

 申请日：

20160323
公开号：

CN105777661A

 公开日：

20160720
当前法律状态：

有效性：

有效
法律详情：

IPC分类号：

C07D261/18,A61K31/42,A61P31/04,A61P31/06

 主分类号：

C07D261/18,A61K31/42,A61P31/04,A61P31/06
申请人：

沈阳药科大学
发明人：

徐威,陈羽,仉蕊
地址：

110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路103号
优先权：

CN201610167997A
专利代理机构：

沈阳杰克知识产权代理有限公司

 代理人：

靳玲
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内容摘要

本发明公开了一种具有抗菌活性的5‑（取代亚苄基氨基）‑4‑取代苯基异恶唑‑3‑羧酸乙酯衍生物的制备方法。本发明的化合物具有如下结构通式的化合物及其该类化合物的立体异构体和药学上适用的盐。本发明还公开了5‑（取代亚苄基氨基）‑4‑取代苯基异恶唑‑3‑羧酸乙酯衍生物以及该类化合物药学上适用的酸加成的盐可以与现有药物合并或单独使用，体外试验表明具有较强的抗菌、抗结核活性，在制备抗菌、抗结核药物方面具有良好的前景。

权利要求书

1.通式（I）所示的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐，其中，R为H，C-C烷基，C-C烷氧基，卤素，氰基；R为H，C-C烷基，C-C烷氧基，羟基，卤素，氰基。 2.如权利要求1所述的通式（I）所示的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐，其中，R为H，C-C烷基，C-C烷氧基，卤素，氰基。 3.如权利要求1或2所述的通式（I）所示的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐，其中，R为H，甲基，甲氧基，Cl，F，Br。 4.如权利要求1-3任何一项所述的通式（I）所示的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐，其中，R为H，C-C烷基，C-C烷氧基，羟基，卤素，氰基。 5.如权利要求1-4任何一项所述的通式（I）所示的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐，R为H，甲基，F，Cl，Br，甲氧基，羟基。 6.如权利要求1所述的的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐，选自：。 7.权利要求1所述的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：将金属钠(4.9g，213mmol)加到70mL无水乙醇中，钠反应完成后，依次加入草酸二乙酯(30.4mL，224mmol)和取代苯乙腈(213mmol)，反应混合物在室温搅拌12h后，反应结束后将反应液慢慢倒入50mL浓盐酸中，立即有大量黄色固体生成，抽滤，水洗，固体在60%乙醇中重结晶，干燥后得浅黄色固体；步骤二：将步骤一中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、盐酸羟胺(1.66g，24mmol)和70mL无水乙醇，加热回流12h，减压蒸流去乙醇，然后加入50mL乙酸乙酯和10mL10%碳酸钠溶液，分出有机相，再经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸流去乙酸乙酯，得到白色或浅黄色粉末状固体；步骤三：将步骤二中所得异恶唑羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛和无水乙醇混合，加入几滴浓硫酸作为催化剂，加热回流，TLC监测反应，反应结束后，降至室温，抽滤，水洗，柱层析纯化得到白色或浅黄色粉末状固体。 8.如权利要求7所述的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的制备方法，其特征在于：在所述步骤三中,异恶唑羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛摩尔分数比为1：1～2，反应时间为4～12h，取代苯甲醛中苯环上若有羟基基团，则合环反应时间应缩短为4h，否则副反应增多。 9.一种药物组合物，包括作为活性成分的权利要求1-6中任何一项所述的的衍生物及其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。 10.权利要求1-6任何一项所述的5-（取代亚苄基氨基）-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其药学上可接受的盐或权利要求9所述的组合物在制备抗菌、抗结核药物中的应用。

说明书

技术领域:

本发明属于医药技术领域，涉及5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸 乙酯衍生物及其制备方法和在制备抗菌、抗结核药物中的应用。

背景技术

由于抗生素的广泛使用,特别是不合理的临床误用,造成耐药性致病菌种类的不 断增加,如耐甲氧西林的金葡球菌(MRSA)、耐青霉素的肺炎链球菌(PRSP)、耐万古霉素的肠 球菌(VRE)和多耐药性结核杆菌(MDRMT)等。即使新近上市的抗菌药物如“奎奴普丁/达福普 丁”也已发现有部分临床分离菌耐药；而临床应用时间并不太长的喹诺酮类药物，因国内广 泛使用,使其耐药程度严重加剧。因此,开发化学结构独特、作用机制新颖、对耐药菌有效的 抗感染药物是各国政府、科研机构和临床医师所共同面临的紧迫任务。

化合物结构中含有席夫碱或腙结构片段具有广泛的抗菌生物活性，在医药中应用 广泛。Peng-ChengLv等人[LvPC,WangKR,YangY,etal.Bioorg.Med.Chem.Lett., 2009,19(23):6750-6754]发现噻唑衍生物作为潜在fabH抑制剂具有良好的抗菌活性，结构 式如下所示：

Jee-YoungLee等人[LeeJY,JeongKW,LeeJU,etal.Bioorg.Med.Chem., 2009,17(4):1506-1513；LeeJY,JeongKW,ShinS,etal.E.J.Med.Chem.,2012,47: 261-269]报道了含席夫碱(YKAs3003)或腙结构片段(4-[(5-trifluoromethyl-pyridin-2- yl)-hydrazonomethyl]–benzene-1,3-diol)类衍生物，具有良好的抗菌活性，结构式如下 所示：

FeiZhang等人[ZhangF,WenQ,WangSF,etal.Bioorg.Med.Chem.Lett., 2014,24(1):90-95]报道了含席夫碱结构片段的5-(吡啶-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-硫醇衍 生物，具有良好的抗菌活性，结构式如下所示：

发明内容：

本发明的目的在于提供了一种具有良好的抗菌、抗结核活性的新型结构-(取代亚 苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物以及他们的制备方法与用途。

本发明的技术方案为：具有抗菌、抗结核活性的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基 异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其药学上可接受的盐，其结构通式如下：

其中，

R为H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤素，氰基。

R1为H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，羟基，卤素，氰基。

本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐，

R为H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤素，氰基。

R1为H，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，羟基，卤素，氰基。

本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐，

R为H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，卤素，氰基。

R1为H，甲基，甲氧基，羟基，卤素，氰基。

本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐，

R为H，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，F，Cl，Br，氰基。

R1为H，甲基，甲氧基，羟基，F，Cl，Br，氰基。

本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐，

R为H，甲基，甲氧基，F，Cl，Br，氰基。

R1为H，甲基，甲氧基，羟基，F，Cl，Br，氰基。

本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐，

R选自H，p-CH3，p-Cl，p-CH3O。

R1可以选自H，p-CH3，p-Cl，p-Br，p-CH3O，p-OH，2,4-二羟基，3,5-二溴。

本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐，

本发明所述及的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的 制备方法,其特征在于包括以下步骤：

步骤一：将金属钠(4.9g，213mmol)加到70mL无水乙醇中，钠反应完成后，依次加入 草酸二乙酯(30.4mL，224mmol)和取代苯乙腈(213mmol)，反应混合物在室温搅拌12h后，反 应结束后将反应液慢慢倒入50mL浓盐酸中，立即有大量黄色固体生成，抽滤，水洗，固体在 60％乙醇中重结晶，干燥后得浅黄色固体；

步骤二：将步骤一中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、盐酸羟胺(1.66g，24mmol) 和70mL无水乙醇，加热回流12h，减压蒸流去乙醇。然后加入50mL乙酸乙酯和10mL10％碳酸 钠溶液，分出有机相，再经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸流去乙酸乙酯，得到白 色或浅黄色粉末状固体。

步骤三：将步骤二中所得异恶唑羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛和无水乙醇混合， 加入几滴浓硫酸作为催化剂，加热回流，TLC监测反应，反应结束后，降至室温，抽滤，水洗， 柱层析纯化得到白色或浅黄色粉末状固体。在所述步骤三中,所述的5-(取代亚苄基氨基)- 4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的制备方法，其特征在于：在所述步骤三中,异恶唑 羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛摩尔分数比为1：1～2，反应时间为4～12h，取代苯甲醛中苯 环上若有羟基基团，则合环反应时间应缩短为4h，否则副反应增多。

通过体外抑菌、抗结核试验表明，本发明所述的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基 异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物对革兰阳性和革兰阴性菌具有明显的广谱的抑制作用，而对非 致病细菌，如大肠埃希菌抑制作用很小。部分化合物具有明显抗结核活性。因此，本发明提 供了一种用于治疗细菌感染的药物。

具体实施方式：

下面通过实施例的方式对本发明做进一步的说明,并不因此将本发明限制在所述 的实施例范围之中。

实施例1:苯丙酸乙酯衍生物的制备

将金属钠(4.9g，213mmol)加到70mL无水乙醇中，钠反应完成后，依次加入草酸二 乙酯(30.4mL，224mmol)和取代苯乙腈(213mmol)，反应混合物在室温搅拌12h后，反应结束 后将反应液慢慢倒入50mL浓盐酸中，立即有大量黄色固体生成，抽滤，水洗，固体在60％乙 醇中重结晶，干燥后得浅黄色固体，直接用于下一步反应。

实施例2:5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯的制备A1

将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、盐酸羟胺(1.66g，24mmol)和70mL 无水乙醇，加热回流12h，减压蒸流去乙醇。然后加入50mL乙酸乙酯和10mL10％碳酸钠溶液， 分出有机相，再经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸流去乙酸乙酯，得到白色粉末 状固体2.48g。收率89.11％。mp:188.4-189.1℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ7.30-7.53(m, 5H),4.70(brs,2H),4.32(q,J＝7.2Hz,2H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H)；HRMS(m/z):calcd.for C12H13N2O3(neutralM+H+)233.09262,found233.093108.

按照实施例2方法，制备5-氨基-4-(对甲苯基)异恶唑-3-羧酸乙酯A2

将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、盐酸羟胺(1.66g，24mmol)为原料， 得到白色粉末状固体2.73g。收率92.30％。mp:180.3-180.6℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ 7.31-7.52(m,4H),4.69(brs,2H),4.30(q,J＝7.2Hz,2H),2.32(s,3H),1.34(t,J＝7.0Hz, 3H)；HRMS(m/z):calcd.forC13H15N2O3(neutralM+H+)247.10827,found247.108283.

按照实施例2方法，制备5-氨基-4-(对氯苯基)异恶唑-3-羧酸乙酯A3

将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、盐酸羟胺(1.66g，24mmol)为原料， 得到黄色粉末状固体3.01g。收率94.09％。mp:196.4-197.9℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ 7.23-7.18(m,4H),4.70(brs,2H),4.31(q,J＝7.2Hz,2H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H)；HRMS(m/ z):calcd.forC12H12ClN2O3(neutralM+H+)267.05364,found267.053318.

按照实施例2方法，制备5-氨基-4-(对甲氧基苯基)异恶唑-3-羧酸乙酯A4

将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、盐酸羟胺(1.66g，24mmol)为原料， 得到黄色粉末状固体3.06g。收率91.69％。mp:187.4-187.9℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ 7.45-6.94(m,4H),4.68(brs,2H),4.28(q,J＝7.2Hz,2H),3.81(s,3H),1.35(t,J＝7.0Hz, 3H)；HRMS(m/z):calcd.forC13H15N2O4(neutralM+H+)263.10318,found263.104111.

实施例3:(E)-5-(亚苄基氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯的制备B1

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、苯甲醛 (0.212g,2mol)和10mL无水乙醇混合，加入1滴浓硫酸作为催化剂，加热回流，TLC监测反应， 反应结束后，降至室温，抽滤，水洗，柱层析纯化得到白色粉末状固体0.45g。收率71.77％。 mp:231.5-232.0℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ8.93(d,J＝1.46,1H),7.31-7.76(m,10H), 4.32(q,J＝7.2Hz,2H),1.33(t,J＝7.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ161.78,158.88, 156.63,153.84,135.94,132.52,130.53,129.94,129.16,128.87,128.63,127.68,96.93, 62.90,14.12；HRMS(m/z):calcd.forC19H17N2O3(neutralM+H+)321.12392,found 321.123897.

按照实施例3方法，(E)-制备5-((4-甲基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙 酯B2将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、对甲基苯甲醛 (0.240g,2mol)为原料，得到白色粉末状固体0.52g。收率77.42％。mp：237.5-238.8℃；1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.97(d,J＝1.47,1H),7.21-7.56(m,9H),4.37(q,J＝8.0Hz,2H),2.30 (s,3H)，1.36(t,J＝7.0Hz,3H)；13CNMR:δ161.80,159.78,156.59,153.80,143.12,133.20, 132.47,130.37,130.10,130.04,128.60,127.87,96.10,62.74,21.67,14.35；HRMS(m/z): calcd.forC20H19N2O3(neutralM+H+)335.13957,found335.139588.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((4-氯亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯 B3

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、对氯苯甲 醛(0.280g,2mol)为原料，得到浅黄色粉末状固体0.55g。收率77.50％。mp:193.7-195.3℃ ；1HNMR(400MHz,DMSO):δ8.95(d,J＝1.45,1H),7.63–7.28(m,9H),5.38(d,J＝4.6Hz1H), 4.37(q,J＝8.0Hz,2H),1.36(t,J＝8.0Hz,3H).；13CNMR(101MHz,DMSO):δ161.46,157.56, 155.45,151.74,134.71,133.83,131.12,130.12,129.54,129.11,128.60,125.77,95.91, 60.90,14.20；HRMS(m/z):calcd.forC19H16ClN2O3(neutralM+H+)355.08495,found 355.085201.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((4-溴亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯 B4

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、对溴苯甲 醛(0.370g,2mol)为原料，得到浅黄色粉末状固体0.61g。收率76.16％。mp:256.7-258.8℃ ；1HNMR(400MHz,DMSO):δ8.91(d,J＝1.48,1H),7.75–7.28(m,9H),4.38(q,J＝8.0Hz,2H), 1.39(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ160.54,157.97,156.13,152.45132.62, 131.52,130.28,129.24,129.10,128.10,127.08,122.11,94.18,61.98,14.33；HRMS(m/z): calcd.forC19H16BrN2O3(neutralM+H+)399.03443,found399.035011.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((4-甲氧基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸 乙酯B5

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、对甲氧基 苯甲醛(0.272g,2mol)为原料，得到浅黄色粉末状固体0.53g。收率75.47％。mp268.9- 269.9℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ8.94(d,J＝1.46,1H),7.89(m,9H),4.27(q,J＝8.0Hz, 2H),3.79(s,3H),1.30(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ161.98,160.15,158.17, 156.35,150.74,132.52,131.50,130.44,129.15,128.05,127.55,114.69,94.97,62.10, 37.06,14.32；HRMS(m/z):calcd.forC20H19N2O4(neutralM+H+)351.13448,found 351.134503.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((4-羟基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙 酯B6

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、对羟基苯 甲醛(0.244g,2mol)为原料，得到白色粉末状固体0.49g。收率73.22％。mp:289.6-290.9℃ ；1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.86(s,1H),8.95(d,J＝1.47,1H),7.66–6.81(m,9H),4.27(q,J ＝8.0Hz,2H),1.30(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ160.62,158.47,156.52, 153.74,150.59,132.02,131.15,130.29,129.32,128.86,127.66,115.40,93.68,61.90, 14.25；HRMS(m/z):calcd.forC19H17N2O4(neutralM+H+)337.11883,found337.118798.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((2,4-二羟基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧 酸乙酯B7

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、2，4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料，得到白色粉末状固体0.49g。收率70.20％。mp:268.1- 270.0℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.15(s,1H),11.80(s,1H),8.94(d,J＝1.46,1H), 7.60–6.33(m,9H),4.27(q,J＝8.0Hz,2H),1.30(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ 164.77,162.81,160.28,158.61,157.73,154.15,133.00,131.46,129.50,128.10,126.84, 112.49,108.77,101.42,95.48,61.96,14.22；HRMS(m/z):calcd.forC19H17N2O5(neutralM +H+)353.11375,found353.113778.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((3,5-二溴亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸 乙酯B8

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、3，5-二溴 苯甲醛(0.526g,2mol)为原料，得到浅黄色粉末状固体0.71g。收率74.50％。mp271.2- 273.2℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ8.91(d,J＝1.48,1H),7.89–7.42(m,8H),4.27(q,J＝ 8.0Hz,2H),1.31(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ160.47,158.40,154.65, 150.93,134.12,133.28,131.34,130.44,129.15,128.53,127.36,121.68,96.45,62.80, 14.18；HRMS(m/z):calcd.forC19H15Br2N2O3(neutralM+H+)476.94494,found476.945021.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-4-(4-甲苯基)异恶 唑-3-羧酸乙酯B9

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A2(0.492g,2mol)、2，4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料，得到白色粉末状固体0.52g。收率71.24％。mp:293.1- 293.8℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ11.98(s,1H),11.77(s,1H),8.95(d,J＝1.45,1H),7.52 (m,7H),4.27(q,J＝8.0Hz,2H),2.33(d,J＝5.7Hz,3H),1.30(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR (101MHz,DMSO):δ164.28,162.50,161.78,158.88,157.13,156.63,137.60,133.36, 132.99,132.31,128.51,112.49,110.74,103.45,96.93,62.90,21.42,14.15；HRMS(m/z): calcd.forC20H19N2O5(neutralM+H+)367.12940,found367.130040.

按照实施例3方法，制备(E)-5-((2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)异恶 唑-3-羧酸乙酯B10

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A3(0.532g,2mol)、2，4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料，得到白色粉末状固体0.60g。收率77.56％。mp:273.1- 274.9℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.02(s,1H),11.80(s,1H),8.98(d,J＝1.47,1H), 7.67–7.35(m,6H),6.33(m,1H),4.26(q,J＝8.0Hz,2H),1.29(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR (101MHz,DMSO):δ166.31162.14,160.65,158.38,157.49,152.06,134.34,132.87, 132.90,130.22,127.62,112.29,109.68,101.45,95.71,60.98,14.17；HRMS(m/z): calcd.forC19H16ClN2O5(neutralM+H+)387.07477,found387.075808.

按照实施例3方法，(E)-制备5-((2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-4-(4-甲氧基苯基) 异恶唑-3-羧酸乙酯B11

将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A4(0.526g,2mol)、2，4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料，得到白色粉末状固体0.54g。收率70.25％。mp:288.7- 289.9℃；1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.08(s,1H),11.74(s,1H),8.97(d,J＝1.47,1H), 7.68–7.22(m,4H),7.06–6.98(m,2H),6.33(m,1H),4.29(q,J＝8.0Hz,2H),3.95(s,3H), 1.32(t,J＝8.0Hz,3H)；13CNMR(101MHz,DMSO):δ165.78,163.51,160.25,159.33,158.10, 157.76,153.86,133.72,131.52,126.90,113.53,112.40,110.56,102.15,95.79,62.87, 35.34,14.17；HRMS(m/z):calcd.forC20H19N2O6(neutralM+H+)383.12431,found 383.125401.

实施例3:5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物衍生物的 抗菌、抗结核抑制剂活性测定

本发明化合物作为抗菌和抗结核抑制剂的活性可以按许多标准的生物学试验或 药理学试验测定。

应用琼脂稀释法测定实验化合物的最小抑菌浓度MIC(μg/ml)值。

抗菌药物原液的配制：甲醇溶解后配制成2mg/mL溶液，用薄膜滤过法除菌。

含药琼脂原液的配制：用稀释法将原液稀释成多个梯度浓度。分别取1ml加入到已 作好标记的内径90mm的平板孔内。再取已灭菌的50℃的M-H琼脂19ml到平板孔内，混菌后 冷却。

接种：用接种器在平板孔内逐个接种，每次接种量为1～2μL(含菌量约为5× 105CFU/ml)。最后接种不含药物的生长对照板，以检查整个实验过程中测试菌种的存活状 态。

孵育：平板置于37℃孵育24h。

结果判断：菌落完全生长被完全抑制的最低药物浓度为该化合物对检测菌种的 MIC值。单一菌落生长可忽略不计。

本发明化合物作为抗菌和抗结核抑制剂测定结果

结果表明，5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物对大肠埃 希菌Escherichiacoli[CMCC(B)44102]、铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosac[CMCC (B)10104]、金黄色葡萄球菌Staphyloccocusaureus[CMCC(B)26003]和枯草芽孢杆菌 Bacillussubtilis[CMCC(B)63501]都有不同程度的抑制作用，且部分化合物对耻垢分枝 杆菌MycobacteriumsmegmatisCGMCC1.2621也有较好的抑制作用。

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610167997.9 (22)申请日 2016.03.23 (71)申请人 沈阳药科大学 地址 110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路 103号 (72)发明人 徐威陈羽仉蕊 (74)专利代理机构 沈阳杰克知识产权代理有限 公司 21207 代理人 靳玲 (51)Int.Cl. C07D 261/18(2006.01) A61K 31/42(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/06(2006.01) (54)发明名称 5- （取代亚苄。

2、基氨基） -4-取代苯基异恶唑- 3-羧酸乙酯衍生物的制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种具有抗菌活性的5- （取代 亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍 生物的制备方法。 本发明的化合物具有如下结构 通式的化合物及其该类化合物的立体异构体和 药学上适用的盐。 本发明还公开了5- （取代亚苄 基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 以及该类化合物药学上适用的酸加成的盐可以 与现有药物合并或单独使用， 体外试验表明具有 较强的抗菌、 抗结核活性， 在制备抗菌、 抗结核药 物方面具有良好的前景。 权利要求书3页 说明书11页 CN 105777661 A 2016.0。

3、7.20 CN 105777661 A 1.通式 （I） 所示的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其 盐， 其中， R为H， C1-C6烷基， C1-C6烷氧基， 卤素， 氰基； R1为H， C1-C6烷基， C1-C6烷氧基， 羟基， 卤素， 氰基。 2.如权利要求1所述的通式 （I） 所示的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧 酸乙酯衍生物及其盐， 其中， R为H， C1-C4烷基， C1-C4烷氧基， 卤素， 氰基。 3.如权利要求1或2所述的通式 （I） 所示的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3- 羧酸乙酯衍生物及其盐。

4、， 其中， R为H， 甲基， 甲氧基， Cl， F， Br。 4.如权利要求1-3任何一项所述的通式 （I） 所示的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异 恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐， 其中， R1为H， C1-C4烷基， C1-C4烷氧基， 羟基， 卤素， 氰基。 5.如权利要求1-4任何一项所述的通式 （I） 所示的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异 恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其盐， R1为H， 甲基， F， Cl， Br， 甲氧基， 羟基。 6.如权利要求1所述的的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其盐， 选自： 权利要求书 1/3 页。

5、 2 CN 105777661 A 2 。 7.权利要求1所述的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物制备 方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 步骤一： 将金属钠(4.9g， 213mmol)加到70mL无水乙醇中， 钠反应完成后， 依次加入 草酸二乙酯(30.4mL， 224mmol)和取代苯乙腈(213mmol)， 反应混合物在室温搅拌12h 后， 反应结束后将反应液慢慢倒入50mL浓盐酸中， 立即有大量黄色固体生成， 抽滤， 水洗， 固体在60%乙醇中重结晶， 干燥后得浅黄色固体； 步骤二： 将步骤一中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、 盐酸羟胺(1.6。

6、6g， 24mmol) 和70mL无水乙醇， 加热回流12h， 减压蒸流去乙醇， 然后加入50mL乙酸乙酯和10mL10% 碳酸钠溶液， 分出有机相， 再经饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 减压蒸流去乙酸乙酯， 得 到白色或浅黄色粉末状固体； 步骤三： 将步骤二中所得异恶唑羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛和无水乙醇混合， 加入 几滴浓硫酸作为催化剂， 加热回流， TLC监测反应， 反应结束后， 降至室温， 抽滤， 水洗， 柱层 析纯化得到白色或浅黄色粉末状固体。 8.如权利要求7所述的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的 权利要求书 2/3 页 3 CN 10577。

7、7661 A 3 制备方法， 其特征在于： 在所述步骤三中,异恶唑羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛摩尔分数 比为1： 12， 反应时间为412h， 取代苯甲醛中苯环上若有羟基基团， 则合环反应时间应缩 短为4h， 否则副反应增多。 9.一种药物组合物， 包括作为活性成分的权利要求1-6中任何一项所述的的衍生物及 其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。 10.权利要求1-6任何一项所述的5- （取代亚苄基氨基） -4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙 酯衍生物及其药学上可接受的盐或权利要求9所述的组合物在制备抗菌、 抗结核药物中的 应用。 权利要求书 3/3 页 4 CN 105777661 A 4 5-。

8、(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 的制备方法 技术领域: 0001 本发明属于医药技术领域， 涉及5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸 乙酯衍生物及其制备方法和在制备抗菌、 抗结核药物中的应用。 背景技术 0002 由于抗生素的广泛使用,特别是不合理的临床误用,造成耐药性致病菌种类的不 断增加,如耐甲氧西林的金葡球菌(MRSA)、 耐青霉素的肺炎链球菌(PRSP)、 耐万古霉素的肠 球菌(VRE)和多耐药性结核杆菌(MDRMT)等。 即使新近上市的抗菌药物如 “奎奴普丁/达福普 丁” 也已发现有部分临床分离菌耐药； 而临床应用时间并不太长的喹诺酮类药物。

9、， 因国内广 泛使用,使其耐药程度严重加剧。 因此,开发化学结构独特、 作用机制新颖、 对耐药菌有效的 抗感染药物是各国政府、 科研机构和临床医师所共同面临的紧迫任务。 0003 化合物结构中含有席夫碱或腙结构片段具有广泛的抗菌生物活性， 在医药中应用 广泛。 Peng-ChengLv等人LvPC,WangKR,YangY,etal.Bioorg.Med.Chem.Lett., 2009,19(23):6750-6754发现噻唑衍生物作为潜在fabH抑制剂具有良好的抗菌活性， 结构 式如下所示： 0004 0005 Jee-YoungLee等人LeeJY,JeongKW,LeeJU,etal.。

10、Bioorg.Med.Chem., 2009,17(4):1506-1513； LeeJY,JeongKW,ShinS,etal.E.J.Med.Chem.,2012,47: 261-269报道了含席夫碱(YKAs3003)或腙结构片段(4-(5-trifluoromethyl-pyridin-2- yl)-hydrazonomethylbenzene-1,3-diol)类衍生物， 具有良好的抗菌活性， 结构式如下 所示： 0006 0007 FeiZhang等人ZhangF,WenQ,WangSF,etal.Bioorg.Med.Chem.Lett., 2014,24(1):90-95报道了。

11、含席夫碱结构片段的5-(吡啶-2-基)-4H-1,2,4-三唑-3-硫醇衍 生物， 具有良好的抗菌活性， 结构式如下所示： 说明书 1/11 页 5 CN 105777661 A 5 0008 发明内容： 0009 本发明的目的在于提供了一种具有良好的抗菌、 抗结核活性的新型结构-(取代亚 苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物以及他们的制备方法与用途。 0010 本发明的技术方案为： 具有抗菌、 抗结核活性的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基 异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物及其药学上可接受的盐， 其结构通式如下： 0011 0012 其中， 0013 R为H， C1-C6烷基， C。

12、1-C6烷氧基， 卤素， 氰基。 0014 R1为H， C1-C6烷基， C1-C6烷氧基， 羟基， 卤素， 氰基。 0015 本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐， 0016 R为H， C1-C6烷基， C1-C6烷氧基， 卤素， 氰基。 0017 R1为H， C1-C4烷基， C1-C4烷氧基， 羟基， 卤素， 氰基。 0018 本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐， 0019 R为H， C1-C6烷基， C1-C6烷氧基， 卤素， 氰基。 0020 R1为H， 。

13、甲基， 甲氧基， 羟基， 卤素， 氰基。 0021 本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐， 0022 R为H， C1-C4烷基， C1-C4烷氧基， F， Cl， Br， 氰基。 0023 R1为H， 甲基， 甲氧基， 羟基， F， Cl， Br， 氰基。 0024 本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐， 0025 R为H， 甲基， 甲氧基， F， Cl， Br， 氰基。 0026 R1为H， 甲基， 甲氧基， 羟基， F， Cl， Br， 氰基。 0027 本发明优。

14、选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 说明书 2/11 页 6 CN 105777661 A 6 及其药学上可接受的盐， 0028 R选自H， p-CH3， p-Cl， p-CH3O。 0029 R1可以选自H， p-CH3， p-Cl， p-Br， p-CH3O， p-OH， 2,4-二羟基， 3,5-二溴。 0030 本发明优选如下的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物 及其药学上可接受的盐， 0031 0032 0033 本发明所述及的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的 制备方法,其特征在于包括以下。

15、步骤： 0034 步骤一： 将金属钠(4.9g， 213mmol)加到70mL无水乙醇中， 钠反应完成后， 依次加入 说明书 3/11 页 7 CN 105777661 A 7 草酸二乙酯(30.4mL， 224mmol)和取代苯乙腈(213mmol)， 反应混合物在室温搅拌12h后， 反 应结束后将反应液慢慢倒入50mL浓盐酸中， 立即有大量黄色固体生成， 抽滤， 水洗， 固体在 60乙醇中重结晶， 干燥后得浅黄色固体； 0035 步骤二： 将步骤一中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、 盐酸羟胺(1.66g， 24mmol) 和70mL无水乙醇， 加热回流12h， 减压蒸流去乙醇。 然后。

16、加入50mL乙酸乙酯和10mL10碳酸 钠溶液， 分出有机相， 再经饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 减压蒸流去乙酸乙酯， 得到白 色或浅黄色粉末状固体。 0036 步骤三： 将步骤二中所得异恶唑羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛和无水乙醇混合， 加入几滴浓硫酸作为催化剂， 加热回流， TLC监测反应， 反应结束后， 降至室温， 抽滤， 水洗， 柱层析纯化得到白色或浅黄色粉末状固体。 在所述步骤三中,所述的5-(取代亚苄基氨基)- 4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物的制备方法， 其特征在于： 在所述步骤三中,异恶唑 羧酸乙酯衍生物和取代苯甲醛摩尔分数比为1： 12， 反应时间为412h， 取代苯。

17、甲醛中苯 环上若有羟基基团， 则合环反应时间应缩短为4h， 否则副反应增多。 0037 通过体外抑菌、 抗结核试验表明， 本发明所述的5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基 异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物对革兰阳性和革兰阴性菌具有明显的广谱的抑制作用， 而对非 致病细菌， 如大肠埃希菌抑制作用很小。 部分化合物具有明显抗结核活性。 因此， 本发明提 供了一种用于治疗细菌感染的药物。 具体实施方式： 0038 下面通过实施例的方式对本发明做进一步的说明,并不因此将本发明限制在所述 的实施例范围之中。 0039 实施例1:苯丙酸乙酯衍生物的制备 0040 将金属钠(4.9g， 213mmol)加到70m。

18、L无水乙醇中， 钠反应完成后， 依次加入草酸二 乙酯(30.4mL， 224mmol)和取代苯乙腈(213mmol)， 反应混合物在室温搅拌12h后， 反应结束 后将反应液慢慢倒入50mL浓盐酸中， 立即有大量黄色固体生成， 抽滤， 水洗， 固体在60乙 醇中重结晶， 干燥后得浅黄色固体， 直接用于下一步反应。 0041 实施例2:5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯的制备A1 0042 将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、 盐酸羟胺(1.66g， 24mmol)和70mL 无水乙醇， 加热回流12h， 减压蒸流去乙醇。 然后加入50mL乙酸乙酯和10mL10碳酸钠溶液， 分出。

19、有机相， 再经饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 减压蒸流去乙酸乙酯， 得到白色粉末 状固体2.48g。 收率89.11。 mp:188.4-189.1； 1HNMR(400MHz,DMSO): 7.30-7.53(m, 5H),4.70(brs,2H),4.32(q,J7.2Hz,2H),1.32(t,J7.0Hz,3H)； HRMS(m/z):calcd.for C12H13N2O3(neutralM+H+)233.09262,found233.093108. 0043 0044 按照实施例2方法， 制备5-氨基-4-(对甲苯基)异恶唑-3-羧酸乙酯A2 说明书 4/11 页 8 CN 1。

20、05777661 A 8 0045 将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、 盐酸羟胺(1.66g， 24mmol)为原料， 得到白色粉末状固体2.73g。 收率92.30。 mp:180.3-180.6； 1HNMR(400MHz,DMSO): 7.31-7.52(m,4H),4.69(brs,2H),4.30(q,J7.2Hz,2H),2.32(s,3H),1.34(t,J7.0Hz, 3H)； HRMS(m/z):calcd.forC13H15N2O3(neutralM+H+)247.10827,found247.108283. 0046 0047 按照实施例2方法， 制备5-。

21、氨基-4-(对氯苯基)异恶唑-3-羧酸乙酯A3 0048 将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、 盐酸羟胺(1.66g， 24mmol)为原料， 得到黄色粉末状固体3.01g。 收率94.09。 mp:196.4-197.9； 1HNMR(400MHz,DMSO): 7.23-7.18(m,4H),4.70(brs,2H),4.31(q,J7.2Hz,2H),1.36(t,J7.0Hz,3H)； HRMS(m/ z):calcd.forC12H12ClN2O3(neutralM+H+)267.05364,found267.053318. 0049 0050 按照实施例2方法， 制备。

22、5-氨基-4-(对甲氧基苯基)异恶唑-3-羧酸乙酯A4 0051 将实施例1中所得苯丙酸乙酯衍生物(12mmol)、 盐酸羟胺(1.66g， 24mmol)为原料， 得到黄色粉末状固体3.06g。 收率91.69。 mp:187.4-187.9； 1HNMR(400MHz,DMSO): 7.45-6.94(m,4H),4.68(brs,2H),4.28(q,J7.2Hz,2H),3.81(s,3H),1.35(t,J7.0Hz, 3H)； HRMS(m/z):calcd.forC13H15N2O4(neutralM+H+)263.10318,found263.104111. 0052 0053。

23、 实施例3:(E)-5-(亚苄基氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯的制备B1 0054 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 苯甲醛 (0.212g,2mol)和10mL无水乙醇混合， 加入1滴浓硫酸作为催化剂， 加热回流， TLC监测反应， 反应结束后， 降至室温， 抽滤， 水洗， 柱层析纯化得到白色粉末状固体0.45g。 收率71.77。 mp:231.5-232.0； 1HNMR(400MHz,DMSO): 8.93(d,J1.46,1H),7.31-7.76(m,10H), 4.32(q,J7.2Hz,2H),1.33(t,J7.0H。

24、z,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 161.78,158.88, 156.63,153.84,135.94,132.52,130.53,129.94,129.16,128.87,128.63,127.68,96.93, 62.90,14.12； HRMS(m/z):calcd .forC19H17N2O3(neutralM+H+)321.12392,found 321.123897. 说明书 5/11 页 9 CN 105777661 A 9 0055 0056 按照实施例3方法， (E)-制备5-(4-甲基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙 酯B2将实施例2中所得。

25、5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 对甲基苯甲醛 (0.240g,2mol)为原料， 得到白色粉末状固体0.52g。 收率77.42。 mp： 237.5-238.8； 1H NMR(400MHz,DMSO): 8.97(d,J1.47,1H),7.21-7.56(m,9H),4.37(q,J8.0Hz,2H),2.30 (s,3H)， 1.36(t,J7.0Hz,3H)； 13CNMR: 161.80,159.78,156.59,153.80,143.12,133.20, 132.47,130.37,130.10,130.04,128.60,127.87,。

26、96.10,62.74,21.67,14.35； HRMS(m/z): calcd.forC20H19N2O3(neutralM+H+)335.13957,found335.139588. 0057 0058 按照实施例3方法， 制备(E)-5-(4-氯亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯 B3 0059 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 对氯苯甲 醛(0.280g,2mol)为原料， 得到浅黄色粉末状固体0.55g。 收率77.50。 mp:193.7-195.3 ； 1HNMR(400MHz,DMSO): 8.95(d,J1.4。

27、5,1H),7.637.28(m,9H),5.38(d,J4.6Hz1H), 4.37(q,J8.0Hz,2H),1.36(t,J8.0Hz,3H).； 13CNMR(101MHz,DMSO): 161.46,157.56, 155.45,151.74,134.71,133.83,131.12,130.12,129.54,129.11,128.60,125.77,95.91, 60.90,14.20； HRMS(m/z):calcd.forC19H16ClN2O3(neutralM+H+)355.08495,found 355.085201. 0060 0061 按照实施例3方法， 制备(E)。

28、-5-(4-溴亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯 B4 0062 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 对溴苯甲 醛(0.370g,2mol)为原料， 得到浅黄色粉末状固体0.61g。 收率76.16。 mp:256.7-258.8 说明书 6/11 页 10 CN 105777661 A 10 ； 1HNMR(400MHz,DMSO): 8.91(d,J1.48,1H),7.757.28(m,9H),4.38(q,J8.0Hz,2H), 1.39(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 160.54,1。

29、57.97,156.13,152.45132.62, 131.52,130.28,129.24,129.10,128.10,127.08,122.11,94.18,61.98,14.33； HRMS(m/z): calcd.forC19H16BrN2O3(neutralM+H+)399.03443,found399.035011. 0063 0064 按照实施例3方法， 制备(E)-5-(4-甲氧基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸 乙酯B5 0065 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 对甲氧基 苯甲醛(0.272g,2mol)为原料。

30、， 得到浅黄色粉末状固体0.53g。 收率75.47。 mp268.9- 269.9； 1HNMR(400MHz,DMSO): 8.94(d,J1.46,1H),7.89(m,9H),4.27(q,J8.0Hz, 2H),3.79(s,3H),1.30(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 161.98,160.15,158.17, 156.35,150.74,132.52,131.50,130.44,129.15,128.05,127.55,114.69,94.97,62.10, 37.06,14.32； HRMS(m/z):calcd .forC20H19N。

31、2O4(neutralM+H+)351.13448,found 351.134503. 0066 0067 按照实施例3方法， 制备(E)-5-(4-羟基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙 酯B6 0068 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 对羟基苯 甲醛(0.244g,2mol)为原料， 得到白色粉末状固体0.49g。 收率73.22。 mp:289.6-290.9 ； 1HNMR(400MHz,DMSO): 9.86(s,1H),8.95(d,J1.47,1H),7.666.81(m,9H),4.27(q,J 8.0Hz,2H)。

32、,1.30(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 160.62,158.47,156.52, 153.74,150.59,132.02,131.15,130.29,129.32,128.86,127.66,115.40,93.68,61.90, 14.25； HRMS(m/z):calcd.forC19H17N2O4(neutralM+H+)337.11883,found337.118798. 说明书 7/11 页 11 CN 105777661 A 11 0069 0070 按照实施例3方法， 制备(E)-5-(2,4-二羟基亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3。

33、-羧 酸乙酯B7 0071 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 2， 4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料， 得到白色粉末状固体0.49g。 收率70.20。 mp:268.1- 270.0； 1HNMR(400MHz,DMSO): 12.15(s,1H),11.80(s,1H),8.94(d,J1.46,1H), 7.606.33(m,9H),4.27(q,J8.0Hz,2H),1.30(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 164.77,162.81,160.28,158.61,157.73,。

34、154.15,133.00,131.46,129.50,128.10,126.84, 112.49,108.77,101.42,95.48,61.96,14.22； HRMS(m/z):calcd.forC19H17N2O5(neutralM +H+)353.11375,found353.113778. 0072 0073 按照实施例3方法， 制备(E)-5-(3,5-二溴亚苄基)氨基)-4-苯基异恶唑-3-羧酸 乙酯B8 0074 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A1(0.464g,2mol)、 3， 5-二溴 苯甲醛(0.526g,2mol)为原料， 得到浅黄色粉末状。

35、固体0.71g。 收率74.50。 mp271.2- 273.2； 1HNMR(400MHz,DMSO): 8.91(d,J1.48,1H),7.897.42(m,8H),4.27(q,J 8.0Hz,2H),1.31(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 160.47,158.40,154.65, 150.93,134.12,133.28,131.34,130.44,129.15,128.53,127.36,121.68,96.45,62.80, 14.18； HRMS(m/z):calcd.forC19H15Br2N2O3(neutralM+H+)476.9。

36、4494,found476.945021. 0075 0076 按照实施例3方法， 制备(E)-5-(2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-4-(4-甲苯基)异恶 唑-3-羧酸乙酯B9 说明书 8/11 页 12 CN 105777661 A 12 0077 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A2(0.492g,2mol)、 2， 4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料， 得到白色粉末状固体0.52g。 收率71.24。 mp:293.1- 293.8； 1HNMR(400MHz,DMSO): 11.98(s,1H),11.77(s,1H),8.95(d,J1.45,。

37、1H),7.52 (m,7H),4.27(q,J8.0Hz,2H),2.33(d,J5.7Hz,3H),1.30(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR (101MHz,DMSO): 164.28,162.50,161.78,158.88,157.13,156.63,137.60,133.36, 132.99,132.31,128.51,112.49,110.74,103.45,96.93,62.90,21.42,14.15； HRMS(m/z): calcd.forC20H19N2O5(neutralM+H+)367.12940,found367.130040. 0078 0079 按照实。

38、施例3方法， 制备(E)-5-(2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)异恶 唑-3-羧酸乙酯B10 0080 将实施例2中所得5-氨基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A3(0.532g,2mol)、 2， 4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料， 得到白色粉末状固体0.60g。 收率77.56。 mp:273.1- 274.9； 1HNMR(400MHz,DMSO): 12.02(s,1H),11.80(s,1H),8.98(d,J1.47,1H), 7.677.35(m,6H),6.33(m,1H),4.26(q,J8.0Hz,2H),1.29(t,J8.0Hz,3H)。

39、； 13CNMR (101MHz,DMSO): 166.31162.14,160.65,158.38,157.49,152.06,134.34,132.87, 132.90,130.22,127.62,112.29,109.68,101.45,95.71,60.98,14.17； HRMS(m/z): calcd.forC19H16ClN2O5(neutralM+H+)387.07477,found387.075808. 0081 0082 按照实施例3方法， (E)-制备5-(2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-4-(4-甲氧基苯基) 异恶唑-3-羧酸乙酯B11 0083 将实施例2中所得5-氨。

40、基-4-苯基异恶唑-3-羧酸乙酯A4(0.526g,2mol)、 2， 4-二羟 基苯甲醛(0.276g,2mol)为原料， 得到白色粉末状固体0.54g。 收率70.25。 mp:288.7- 289.9； 1HNMR(400MHz,DMSO): 12.08(s,1H),11.74(s,1H),8.97(d,J1.47,1H), 7.687.22(m,4H),7.066.98(m,2H),6.33(m,1H),4.29(q,J8.0Hz,2H),3.95(s,3H), 1.32(t,J8.0Hz,3H)； 13CNMR(101MHz,DMSO): 165.78,163.51,160.25,1。

41、59.33,158.10, 157.76,153.86,133.72,131.52,126.90,113.53,112.40,110.56,102.15,95.79,62.87, 35.34,14.17； HRMS(m/z):calcd .forC20H19N2O6(neutralM+H+)383.12431,found 说明书 9/11 页 13 CN 105777661 A 13 383.125401. 0084 0085 实施例3:5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物衍生物的 抗菌、 抗结核抑制剂活性测定 0086 本发明化合物作为抗菌和抗结核抑制剂的活性可以按。

42、许多标准的生物学试验或 药理学试验测定。 0087 应用琼脂稀释法测定实验化合物的最小抑菌浓度MIC( g/ml)值。 0088 抗菌药物原液的配制： 甲醇溶解后配制成2mg/mL溶液， 用薄膜滤过法除菌。 0089 含药琼脂原液的配制： 用稀释法将原液稀释成多个梯度浓度。 分别取1ml加入到已 作好标记的内径90mm的平板孔内。 再取已灭菌的50的M-H琼脂19ml到平板孔内， 混菌后 冷却。 0090 接种： 用接种器在平板孔内逐个接种， 每次接种量为12L(含菌量约为5 105CFU/ml)。 最后接种不含药物的生长对照板， 以检查整个实验过程中测试菌种的存活状 态。 0091 孵育： 。

43、平板置于37孵育24h。 0092 结果判断： 菌落完全生长被完全抑制的最低药物浓度为该化合物对检测菌种的 MIC值。 单一菌落生长可忽略不计。 0093 本发明化合物作为抗菌和抗结核抑制剂测定结果 说明书 10/11 页 14 CN 105777661 A 14 0094 0095 结果表明， 5-(取代亚苄基氨基)-4-取代苯基异恶唑-3-羧酸乙酯衍生物对大肠埃 希菌EscherichiacoliCMCC(B)44102、 铜绿假单胞菌PseudomonasaeruginosacCMCC (B)10104、 金黄色葡萄球菌StaphyloccocusaureusCMCC(B)26003和枯草芽孢杆菌 BacillussubtilisCMCC(B)63501都有不同程度的抑制作用， 且部分化合物对耻垢分枝 杆菌MycobacteriumsmegmatisCGMCC1.2621也有较好的抑制作用。 说明书 11/11 页 15 CN 105777661 A 15 。

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