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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610237108.1 (22)申请日 2016.04.15 (71)申请人 华南农业大学 地址 513042 广东省广州市天河区五山 申请人 肇庆大华农生物药品有限公司 (72)发明人 刘郁夫陈瑞爱赖汉漳刘玉鹏 罗琴芳 (74)专利代理机构 广州市越秀区哲力专利商标 事务所(普通合伙) 44288 代理人 谭启斌 (51)Int.Cl. C12Q 1/68(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种禽流感病毒基因的PCR扩增引物组及应。
2、 用该引物组进行扩增和测序的方法 (57)摘要 本发明公开了一种禽流感病毒基因的PCR扩 增引物组及应用该引物组进行扩增和测序的方 法， 所述禽流感病毒基因的PCR扩增引物组包括 SEQIDNo.1-16所示的引物对； 所述PCR扩增引 物组能够扩增不同亚型禽流感病毒的基因， 通用 性强； 所述的禽流感病毒基因的PCR扩增引物组 用于禽流感病毒的基因测序， 步骤中部分引物对 的扩增条件相同， 同一反应程序可以同时扩增多 种基因片段； 可快速获得禽流感病毒的基因组全 长序列， 具有简便， 耗时少， 节约成本等优点。 权利要求书2页 说明书7页 序列表28页 附图1页 CN 105861665 A。
3、 2016.08.17 CN 105861665 A 1.一种禽流感病毒基因的PCR扩增引物组， 其特征在于： 所述禽流感病毒基因的PCR扩 增引物组包括SEQIDNo.1-2所示的引物对、 SEQIDNo.3-4所示的引物对、 SEQIDNo.5-6 所示的引物对、 SEQIDNo.7-8所示的引物对、 SEQIDNo.9-10所示的引物对、 SEQID No.11-12所示的引物对、 SEQIDNo.13-14所示的引物对和SEQIDNo.15-16所示的引物对 中的至少一对。 2.如权利要求1所述禽流感病毒基因的PCR扩增引物组， 其特征在于： 所述禽流感病毒 基因的PCR扩增引物组包括。
4、SEQIDNo.1-2所示的引物对、 SEQIDNo.3-4所示的引物对、 SEQIDNo.5-6所示的引物对、 SEQIDNo.7-8所示的引物对、 SEQIDNo.9-10所示的引物 对、 SEQIDNo.11-12所示的引物对、 SEQIDNo.13-14所示的引物对和SEQIDNo.15-16所 示的引物对， 共8对引物对。 3.如权利要求1或2所述的禽流感病毒基因的PCR扩增引物组， 其特征在于： 引物对SEQIDNo.1-2， 用于扩增禽流感病毒的HA基因片段； 引物对SEQIDNo.3-4， 用于扩增禽流感病毒的NA基因片段； 引物对SEQIDNo.5-6， 用于扩增禽流感病毒的。
5、PB2基因片段； 引物对SEQIDNo.7-8， 用于扩增禽流感病毒的PB1基因片段； 引物对SEQIDNo.9-10， 用于扩增禽流感病毒的PA基因片段； 引物对SEQIDNo.11-12， 用于扩增禽流感病毒的NP基因片段； 引物对SEQIDNo.13-14， 用于扩增禽流感病毒的M基因片段； 引物对SEQIDNo.15-16， 用于扩增禽流感病毒的NS基因片段。 4.一种应用引物组进行扩增和测序的方法， 其特征在于： 将如权利要求1所述的禽流感 病毒基因的PCR扩增引物组用于禽流感病毒的基因的扩增和测序。 5.如权利要求4所述的应用引物组进行扩增和测序的方法， 其特征在于： 所述禽流感病。
6、 毒的基因的扩增和测序包括如下步骤： 1)使用PrimeStepRT-PCRKitVer2.0一步法RT-PCR试剂盒， 利用禽流 感病毒基因的PCR扩增引物组中的引物对分别对病毒RNA进行目的基因片段的RT-PCR扩增； 然后将目的基因片段进行回收， 测序； 2)根据步骤1)中得到的目的基因片段的序列， 在序列结果的下游400-500bp设计中间 反向测序引物， 使用中间反向测序引物对目的基因片段5 端的测序信号模糊区域中的序列 进行测通； 3)将步骤1)和步骤2)中得到的基因片段的序列利用生物软件对各段序列重叠部分的 比对和拼接， 将全部片段首尾相接， 得到禽流感病毒的基因序列。 6.如权。
7、利要求5所述的应用引物组进行扩增和测序的方法， 其特征在于： 所述步骤1) 中： 当引物对为SEQIDNo.1-2时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94 变性30s， 62退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2min， 进行11个循环； 94变 性30s、 52退火30s、 72延伸2min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 当引物对为SEQIDNo.3-4时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94 变性30s、 58退火30s、 72延伸1.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置。
8、4保存； 权利要求书 1/2 页 2 CN 105861665 A 2 当引物对为SEQIDNo.5-6时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94 变性30s、 62退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2.5min， 进行11个循环； 94 变性30s、 52退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 当引物对为SEQIDNo.7-8时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94 变性30s、 68退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2.5min， 进行15个循环； 。
9、94 变性30s、 54退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 当引物对为SEQIDNo.9-10时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94变性30s、 48退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 当引物对为SEQIDNo.11-12时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 当引物对为SEQIDNo.13-14时， PCR扩增条。
10、件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 当引物对为SEQIDNo.15-16时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存。 权利要求书 2/2 页 3 CN 105861665 A 3 一种禽流感病毒基因的PCR扩增引物组及应用该引物组进行 扩增和测序的方法 技术领域 0001 本发明涉及分子生物学技术领域， 具体涉及一种禽流感病毒基因的PCR扩增。
11、引物 组及应用该引物组进行扩增和测序的方法。 背景技术 0002 禽流感是由A型流感病毒所引起， 而且几乎所有的野生及家养的禽类均可感染的 一种急性、 败血性传染病。 禽流感的几次大规模流行， 都对养禽业造成毁灭性的打击和巨大 的经济损失。 同时禽流感病毒还可以感染多种包括人在内的哺乳动物， 甚至有造成人死亡 的病例。 禽流感病毒分为18种HA亚型、 11种NA亚型， 不同亚型间的基因片段经常发生重组。 目前禽流感病毒基因的扩增引物的设计通常只针对个别亚型， 难以对所有亚型及流感病毒 变异株做到通用， 并且引物扩增的效率低， 杂带多， 大大降低阳性克隆的转化率。 传统的实 验室进行基因克隆测序。
12、， 是将DNA片段连接到载体中， 再转化至感受态细菌， 然后筛选出阳 性克隆菌进行扩繁， 扩繁后提取细菌质粒DNA， 再送往专业测序公司进行测序。 此方法耗时、 成本高、 效率低， 不适合大批量的测序， 并且这种方法难以发现混合病毒感染， 容易得出错 误的全基因组序列。 发明内容 0003 针对现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种禽流感病毒基因的PCR扩增引 物组， 该PCR扩增引物组能够扩增不同亚型的禽流感病毒基因， 通用性强。 0004 为实现上述目的， 本发明采用如下技术方案： 一种禽流感病毒基因的PCR扩增引物 组， 所述禽流感病毒基因的PCR扩增引物组包括SEQIDNo.1-2。
13、所示的引物对、 SEQID No.3-4所示的引物对、 SEQIDNo.5-6所示的引物对、 SEQIDNo.7-8所示的引物对、 SEQID No.9-10所示的引物对、 SEQIDNo.11-12所示的引物对、 SEQIDNo.13-14所示的引物对和 SEQIDNo.15-16所示的引物对中的至少一对。 0005 作为本发明的一种优选的方案： 所述禽流感病毒基因的PCR扩增引物组包括SEQ IDNo.1-2所示的引物对、 SEQIDNo.3-4所示的引物对、 SEQIDNo.5-6所示的引物对、 SEQ IDNo.7-8所示的引物对、 SEQIDNo.9-10所示的引物对、 SEQIDN。
14、o.11-12所示的引物对、 SEQIDNo.13-14所示的引物对和SEQIDNo.15-16所示的引物对， 共8对引物对。 0006 作为本发明的一种优选的方案： 0007 引物对SEQIDNo.1-2， 用于扩增禽流感病毒的HA基因片段； 0008 引物对SEQIDNo.3-4， 用于扩增禽流感病毒的NA基因片段； 0009 引物对SEQIDNo.5-6， 用于扩增禽流感病毒的PB2基因片段； 0010 引物对SEQIDNo.7-8， 用于扩增禽流感病毒的PB1基因片段； 0011 引物对SEQIDNo.9-10， 用于扩增禽流感病毒的PA基因片段； 0012 引物对SEQIDNo.11。
15、-12， 用于扩增禽流感病毒的NP基因片段； 说明书 1/7 页 4 CN 105861665 A 4 0013 引物对SEQIDNo.13-14， 用于扩增禽流感病毒的M基因片段； 0014 引物对SEQIDNo.15-16， 用于扩增禽流感病毒的NS基因片段。 0015 本发明的另一个目的在于提供一种应用该引物组进行扩增和测序的方法， 将禽流 感病毒基因的PCR扩增引物组用于禽流感病毒的基因的扩增和测序， 步骤中部分引物对的 扩增条件相同， 同一反应程序可以同时扩增多种基因片段。 0016 为实现上述目的， 本发明采用如下技术方案： 将上述的禽流感病毒基因的PCR扩增 引物组用于禽流感病毒。
16、的基因扩增和测序。 0017 作为本发明的一种优选的方案， 所述禽流感病毒的基因的扩增和测序包括如下步 骤： 00181)使用PrimeOneStepRT-PCRKitVer2.0一步法RT-PCR试剂盒， 利用 禽流感病毒基因的PCR扩增引物组中的引物对分别对病毒RNA进行目的基因片段的RT-PCR 扩增； 然后将目的基因片段进行回收， 测序； 0019 2)根据步骤1)中得到的目的基因片段的序列， 在序列结果的下游400-500bp设计 中间反向测序引物， 使用中间反向测序引物对目的基因片段5 端的测序信号模糊区域中的 序列进行测通； 0020 3)将步骤1)和步骤2)中得到的基因片段的序。
17、列利用生物软件对各段序列重叠部 分的比对和拼接， 将全部片段首尾相接， 得到禽流感病毒的基因序列。 0021 作为本发明的一种优选的方案， 所述步骤1)中： 0022 当引物对为SEQIDNo.1-2时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 62退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2min， 进行11个循环； 94变性30s、 52退火30s、 72延伸2min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 0023 当引物对为SEQIDNo.3-4时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变。
18、性30s、 58退火30s、 72延伸1.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4 保存； 0024 当引物对为SEQIDNo.5-6时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 62退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2.5min， 进行11个循 环； 94变性30s、 52退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 存； 0025 当引物对为SEQIDNo.7-8时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 68退火30s， 退火过程每。
19、个循环降1、 72延伸2.5min， 进行15个循 环； 94变性30s、 54退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 存； 0026 当引物对为SEQIDNo.9-10时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 48退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4 保存； 0027 当引物对为SEQIDNo.11-12时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1.5min， 进行35个循环； 7。
20、2延伸10min后置4 保存； 0028 当引物对为SEQIDNo.13-14时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 说明书 2/7 页 5 CN 105861665 A 5 3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 存； 0029 当引物对为SEQIDNo.15-16时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 存。 0030 本发明的有益效果在于： 0031 1、 本发。
21、明所述的禽流感病毒基因的PCR扩增引物组能够扩增不同亚型禽流感病毒 的基因， 通用性强。 0032 2、 本发明将禽流感病毒基因的PCR扩增引物组用于禽流感病毒的基因扩增和测 序， 步骤中部分引物对的扩增条件相同， 可以采用同一反应程序同时扩增多种基因片段。 0033 3、 本发明的禽流感病毒的基因测序过程采用PCR产物直接测序的方法代替传统的 克隆测序， 并在已知基因片段序列结果的下游400-500bp设计中间反向测序引物， 对基因片 段5 端的测序信号模糊区域中的序列进行测通， 该方法无需PCR产物连接、 克隆、 转化以及 阳性克隆菌的筛选， 省时、 成本低、 效率高， 适合大批量的测序；。
22、 并且这种方法可以通过观察 信号峰是否出现套峰等异常情况判定扩增模版是否存在混合， 从而排除混合病毒感染， 得 出正确的基因序列。 0034 4、 本发明将测得的基因序列相应拼接， 可快速获得禽流感病毒的基因全长序列， 具有简便， 耗时少， 节约成本等优点。 0035 5、 本发明针对HA、 PB2、 PB1基因设计的TouchdownPCR反应程序提高了扩增效率， 克服了流感病毒基因片段上下游保守区的长度不一， 导致上下游引物长度差异较大， 引物 对Tm值差异大， 常规一步法RT-PCR难以有效扩增的技术缺陷。 附图说明 0036 图1为实施例1HA基因的测序峰图； 0037 图2为实施例2。
23、HA基因的测序峰图； 0038 图3为实施例3的测序峰图。 具体实施方式 0039 下面， 结合具体实施方式， 对本发明做进一步描述： 0040 1)以接种禽流感病毒培养72小时后的SPF鸡胚中收获的鸡胚尿囊液中提取的禽流 感病毒的RNA为模板， 使用PrimeOneStepRT-PCRKitVer2.0一步法RT-PCR试剂 盒， 利用禽流感病毒基因的PCR扩增引物组中的引物对分别对病毒RNA进行目的基因片段的 RT-PCR扩增； 扩增引物组的序列如表1所示； 然后将目的基因片段进行回收， 测序； 0041 表1禽流感病毒基因的PCR扩增引物组序列 说明书 3/7 页 6 CN 105861。
24、665 A 6 0042 0043 0044 禽流感病毒基因的PCR扩增引物组在大量流感病毒全基因序列比对的基础上总结 了两端高度保守区及相对保守区的碱基序列， 该引物能够扩增不同亚型的禽流感病毒的全 基因组， 通用性强； 0045 当引物对为SEQIDNo.1-2时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s， 62退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2min， 进行11个循环； 94变性30s、 52退火30s、 72延伸2min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 0046 当引物对为SEQIDNo.3-4时， PCR扩。
25、增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 58退火30s、 72延伸1.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4 保存； 0047 引物对为SEQIDNo.5-6时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性3min、 94变性30s、 62退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2.5min， 进行11个循环； 94 变性30s、 52退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保存； 0048 当引物对为SEQIDNo.7-8时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性。
26、 3min、 94变性30s、 68退火30s， 退火过程每个循环降1、 72延伸2.5min， 进行15个循 环； 94变性30s、 54退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 存； 0049 当引物对为SEQIDNo.9-10时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 48退火30s、 72延伸2.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4 保存； 0050 当引物对为SEQIDNo.11-12时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 5。
27、5退火30s、 72延伸1.5min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4 保存； 说明书 4/7 页 7 CN 105861665 A 7 0051 当引物对为SEQIDNo.13-14时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 存； 0052 当引物对为SEQIDNo.15-16时， PCR扩增条件为： 50反转录30min、 94预变性 3min、 94变性30s、 55退火30s、 72延伸1min， 进行35个循环； 72延伸10min后置4保 。
28、存。 0053 由于部分流感病毒基因片段上下游保守区的长度不一， 导致个别上下游引物长度 差异较大， 引物对Tm值差异大， 常规一步法RT-PCR难以有效扩增； 本发明针对HA、 PB2、 PB1基 因设计的TouchdownPCR反应程序提高了扩增效率。 其中， 基因片段M和NS可在同一反应程 序中同时扩增； 0054 2)根据步骤1)中得到的基因片段的序列， 在序列结果的下游400-500bp设计中间 反向测序引物， 使用中间反向测序引物对目的基因片段5 端的测序信号模糊区域中的序列 进行测通； 0055 3)将步骤1)和步骤2)中得到的基因片段的序列利用生物软件对各段序列重叠部 分的比对。
29、和拼接， 将全部片段首尾相接， 得到禽流感病毒的基因序列。 0056 先使用扩增引物组进行目的基因的序列的扩增， 然后在已经测出的具有清晰信号 峰的序列下游400-500bp设计反向互补序列的中间反向测序引物， 可以完成PCR产物直接测 序特有的60bp左右的5 端测序信号模糊区域中序列的测通， 中间反向测序引物的设计原则 与正向设计相同； 该方法无需PCR产物连接、 克隆、 转化以及阳性克隆菌的筛选， 省时、 成本 低、 效率高， 适合大批量的测序， 直接测通基因片段两端的末端序列， 有利于快速获得禽流 感病毒的基因全长序列， 具有简便， 耗时少， 节约成本等优点。 0057 这种方法还可以。
30、通过观察信号峰是否出现套峰等异常情况判定扩增模版是否存 在混合， 从而排除混合病毒感染， 得出正确的全基因序列。 0058 具体实施例： 0059 实施例1 0060 本实施例公开了H9N2亚型禽流感病毒疫苗株(SS株)的全基因扩增和测序过程， 包 括： 0061 1)以接种H9N2亚型禽流感病毒疫苗株(SS株)培养72小时后的SPF鸡胚中收获的禽 流感病毒的RNA为模板， 使用PrimeScriOneStepRT-PCRKitVer2.0一步法RT-PCR 试剂盒， 利用禽流感病毒基因的PCR扩增引物组SEQIDNo.1-16对病毒疫苗株(SS株)RNA进 行目的基因片段的RT-PCR扩增；。
31、 然后将目的基因片段利用超薄DNA产物纯化 试剂盒进行纯化后， 通过琼脂糖凝胶电泳回收； 将回收产物用自动序列测序仪进行测序； 其 中， HA基因的测序峰图如图1所示， 信号峰没有出现套峰杂峰， 背景干净， 测序结果准确； 0062 2)根据步骤1)中得到的基因片段的序列， 在序列结果的下游400-500bp设计中间 反向测序引物， 中间反向测序引物的序列如表2所示； 使用中间反向测序引物对基因片段5 端的测序信号模糊区域中的序列进行测通； 0063 表2H9N2亚型禽流感病毒全基因组中间反向测序引物序列 说明书 5/7 页 8 CN 105861665 A 8 0064 0065 3)将步骤。
32、1)和步骤2)中得到的基因片段的序列利用生物软件对各段序列重叠部 分的比对和拼接， 将全部片段首尾相接， 得到禽流感病毒的基因序列。 0066 H9N2亚型禽流感病毒的全基因测序结果如SEQIDNo.17-24所示： 0067 目的片段HA的基因序列为SEQIDNo.17； 0068 目的片段NA的基因序列为SEQIDNo.18； 0069 目的片段PB2的基因序列为SEQIDNo.19； 0070 目的片段PB1的基因序列为SEQIDNo.20； 0071 目的片段PA的基因序列为SEQIDNo.21； 0072 目的片段NP的基因序列为SEQIDNo.22； 0073 目的片段M的基因序列。
33、为SEQIDNo.23； 0074 目的片段NS的基因序列为SEQIDNo.24。 0075 实施例2 0076 本实施例公开了H5N1亚型禽流感病毒疫苗株(Re-6株)的全基因测序过程， 包括： 0077 1)以接种H5N1亚型禽流感病毒疫苗株(Re-6株)培养72小时后的SPF鸡胚中收获的 禽流感病毒的RNA为模板， 使用PrimeSOneStepRT-PCRKitVer2.0一步法RT- PCR试剂盒， 利用禽流感病毒基因的PCR扩增引物组SEQIDNo.1-16对病毒疫苗株(Re-6株) RNA进行目的基因片段的RT-PCR扩增； 然后将目的基因片段利用超薄DNA产物 纯化试剂盒进行纯。
34、化后， 通过琼脂糖凝胶电泳回收； 将回收产物用自动序列测序仪进行测 序； 其中， HA基因的测序峰图如图2所示， 信号峰没有出现套峰杂峰， 背景干净， 测序结果准 确； 0078 2)根据步骤1)中得到的基因片段的序列， 在序列结果的下游400-500bp设计中间 反向测序引物， 中间反向测序引物的序列如表3所示； 使用中间反向测序引物对基因片段5 说明书 6/7 页 9 CN 105861665 A 9 端的测序信号模糊区域中的序列进行测通； 0079 表3H5N1亚型禽流感病毒全基因组中间反向测序引物序列 0080 0081 3)将步骤1)和步骤2)中得到的基因片段的序列利用生物软件对各段。
35、序列重叠部 分的比对和拼接， 将全部片段首尾相接， 得到禽流感病毒的基因序列。 0082 H5N1亚型禽流感病毒的全基因测序结果如SEQIDNo.25-32所示： 0083 目的片段HA的基因序列为SEQIDNo.25； 0084 目的片段NA的基因序列为SEQIDNo.26； 0085 目的片段PB2的基因序列为SEQIDNo.27； 0086 目的片段PB1的基因序列为SEQIDNo.28； 0087 目的片段PA的基因序列为SEQIDNo.29； 0088 目的片段NP的基因序列为SEQIDNo.30； 0089 目的片段M的基因序列为SEQIDNo.31； 0090 目的片段NS的基因。
36、序列为SEQIDNo.32。 0091 实施例3 0092 本实施例用于说明通过观察测序峰图信号峰是否出现套峰等异常情况快速判断 扩增模板是否存在混合病毒感染的情况， 测序峰图如图3所示： 当测序峰图出现套峰情况 时， 可判断扩增模板出现有混合病毒感染， 认为检测的基因序列有误， 则不会采用其数据。 与现有技术相比， 大大缩短了对测序数据的准确性进行验证的时间， 提高检测效率和精确 度。 0093 对于本领域的技术人员来说， 可根据以上描述的技术方案以及构思， 做出其它各 种相应的改变以及变形， 而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范 围之内。 说明书 7/7 页 10 CN。
37、 105861665 A 10 0001 序列表 1/28 页 11 CN 105861665 A 11 0002 序列表 2/28 页 12 CN 105861665 A 12 0003 序列表 3/28 页 13 CN 105861665 A 13 0004 序列表 4/28 页 14 CN 105861665 A 14 0005 序列表 5/28 页 15 CN 105861665 A 15 0006 序列表 6/28 页 16 CN 105861665 A 16 0007 序列表 7/28 页 17 CN 105861665 A 17 0008 序列表 8/28 页 18 CN 105。
38、861665 A 18 0009 序列表 9/28 页 19 CN 105861665 A 19 0010 序列表 10/28 页 20 CN 105861665 A 20 0011 序列表 11/28 页 21 CN 105861665 A 21 0012 序列表 12/28 页 22 CN 105861665 A 22 0013 序列表 13/28 页 23 CN 105861665 A 23 0014 序列表 14/28 页 24 CN 105861665 A 24 0015 序列表 15/28 页 25 CN 105861665 A 25 0016 序列表 16/28 页 26 CN 。
39、105861665 A 26 0017 序列表 17/28 页 27 CN 105861665 A 27 0018 序列表 18/28 页 28 CN 105861665 A 28 0019 序列表 19/28 页 29 CN 105861665 A 29 0020 序列表 20/28 页 30 CN 105861665 A 30 0021 序列表 21/28 页 31 CN 105861665 A 31 0022 序列表 22/28 页 32 CN 105861665 A 32 0023 序列表 23/28 页 33 CN 105861665 A 33 0024 序列表 24/28 页 34 CN 105861665 A 34 0025 序列表 25/28 页 35 CN 105861665 A 35 0026 序列表 26/28 页 36 CN 105861665 A 36 0027 序列表 27/28 页 37 CN 105861665 A 37 0028 序列表 28/28 页 38 CN 105861665 A 38 图1 图2 图3 说明书附图 1/1 页 39 CN 105861665 A 39 。