技术领域
本发明涉及紧密连接蛋白抑制剂多肽及其应用，具体涉及具有抑制紧密连接蛋白，预防和治疗乳腺癌术后癌症的复发和转移的多肽。
背景技术
女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。
乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。如何消灭某种癌症的远处转移或防止复发，是癌症治疗方法中不可缺少的组成部分，也是目前正在探讨的治疗乳腺癌热点问题。
紧密连接蛋白与恶性肿瘤的发生和发展有着密切关系，Claudin蛋白是细胞间的紧密连接蛋白的主要结构之一。早期研究确定蛋白紧密连接-2（claudin-2）是乳腺癌肝转移的重要功能性调解因子。近来的一项研究发现claudin-2在肝脏转移性乳腺癌细胞中特异表达。最后，研究表明，claudin-2的细胞外循环部位对介导肿瘤细胞/肝细胞相互作用以及乳腺癌细胞在体内形成肝转移的能力是必不可少的。
因此，在乳腺癌肝转移过程中，claudin-2在乳腺癌细胞和肝细胞之间相关作用过程中从紧密连接复合体状态转变成粘附分子来发挥作用。减少claudin-2的表达，无论是在肿瘤细胞或原代肝细胞中，都会抑制这些异型细胞与肝细胞之间的相互作用，从而，抑制肿瘤的转移，可以预防和治疗乳腺癌术后癌症的复发和转移。
目前，没有成熟开发的紧密连接蛋白抑制剂多肽问世，用于预防和治疗乳腺癌术后癌症的复发和转移。
发明内容
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列为紧密连接蛋白抑制剂，对乳腺癌具有很好的疗效。
技术方案
紧密连接蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为QAMYEGLGMKCMKCLLPQWPQWTSY。
紧密连接蛋白抑制剂多肽在预防和治疗乳腺癌术后癌症的复发和转移药物中的应用。
有益效果
利用固相合成法化学合成紧密连接蛋白抑制剂多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外抑制紧密连接蛋白，预防和治疗乳腺癌术后癌症的复发和转移。我们发现的紧密连接蛋白抑制剂多肽可以同时抑制乳腺癌细胞迁移和增殖的活力，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。
具体实施方式
实施例1
紧密连接蛋白抑制剂多肽乳腺癌细胞MCF-7迁移的作用。
采用划痕实验。先用marker笔在24孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔穿过3条线；将成对数生长的MCF-7细胞，以 1.0×105加入24孔培养板中，培养24h。第二天用10μl枪头比着直尺，垂直于背后的横线划痕，以划痕和背后横线的交叉点为固定观察位点；实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物紧密连接蛋白抑制剂多肽（上海生工合成）和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂，每孔设五个复孔；放入37℃、5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24，36小时，拍照；测量0，6，12，24，36h划痕宽度。以不同的时间点，记录每孔三个固定位置处划痕宽度的变化，即为细胞迁移距离。按照公式计算迁移率（migration rate，MR）：迁移率（MR）＝（实验第n小时的划痕宽度－实验第0小时的划痕宽度）×100%/实验第0小时的划痕宽度。结果，随紧密连接蛋白抑制剂多肽浓度增加，迁移抑制率逐渐下降，说明紧密连接蛋白抑制剂多肽能够抑制乳腺癌细胞MCF-7迁移，抑制率为61.3%。
实施例2
紧密连接蛋白抑制剂多肽对体外培养人乳腺癌细胞的生长和存活IC50。
采用 MTT 比色法。将对数生长的人乳腺癌细胞，以 1.0×105加入 96 孔培养板中，培养 24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物紧密连接蛋白抑制剂多肽（上海生工合成）和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养 48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h 每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值，按公式人乳腺癌细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。计算出实验药物的 IC50 为3.25μM。
实施例3
用肿瘤模型检测紧密连接蛋白抑制剂多肽的体内活力。
建立MCF-7肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂， 实验组多肽（上海生工合成）设3个剂量：1.0、2.0、4.0μM /Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，紧密连接蛋白抑制剂多肽可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率达到82.6%。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州普罗达生物科技有限公司
<120> 关于紧密连接蛋白抑制剂多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gln Ala Met Tyr Glu Gly Leu Gly Met Lys Cys Met Lys Cys Leu Leu
1 5 10 15
Pro Gln Trp Pro Gln Trp Thr Ser Tyr
20 25