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1、(10)授权公告号 CN 101649336 B (45)授权公告日 2012.05.02 CN 101649336 B *CN101649336B* (21)申请号 200810045880.9 (22)申请日 2008.08.25 C12P 19/04(2006.01) C08B 37/10(2006.01) (73)专利权人 四川天成生化科技有限公司 地址 629200 四川省射洪县美丰工业园 (72)发明人 蔡天贵 刘泰山 蔡静 蔡成良 胡小翠 蔡承儒 (74)专利代理机构 成都九鼎天元知识产权代理 有限公司 51214 代理人 吴彦峰 CN 1837244 A,2006.09.27,。
2、 全文 . CN 1876687 A,2006.12.13, 全文 . CN 1566162 A,2005.01.19, 全文 . 刘仲雯 . 酶解法生产肝素钠 .农家顾 问 .2001,( 第 8 期 ), 第 43 页 . (54) 发明名称 肝素钠生产新工艺 (57) 摘要 本发明为一种肝素钠生产新工艺， 其包括以 下步骤 ： 酶解、 树胶交换吸附、 树脂洗涤、 肝素洗 脱、 酒精沉淀、 复沉、 脱水干燥、 粉碎、 混合和包装。 本发明工艺流程成熟、 操作方便， 无废肠渣和超 标废水排出， 酶解反应完全彻底， 反应时间缩短为 30 小时， 生产能耗低， 反应温度低为 70-80， 肝 素。
3、提取率达 90以上， 肝素单位产量高， 每亿单 位肝素仅需猪小肠 1700 副， 生产成本低， 每亿单 位增加经济效益 30以上， 无污肠渣和超标废水 排放， 适合于大规模生产。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 高雅 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 3 页 CN 101649336 B1/1 页 2 1. 一种肝素钠生产新工艺， 其特征在于 ： 包括以下步骤 ： 酶解 ： 将新鲜猪肠粘膜吸入反应锅， 量取体积， 用NaOH调pH至8.59.5， 温度在4550， 按猪肠粘膜的体积加入 3 5的 NaCl、 0.03 0.03。
4、6的鲜胰浆、 0.03 0.036的蛋白 酶， 搅拌 1 2 小时， 保温 2 小时， 升温至 70 80， 停止加温， 用滤布过滤， 滤液吸入吸附 罐 ； 树脂交换吸附 ： 将滤液降温到 50以下， 量取体积， 调 pH 至 8.5 9.0， 按每 1000 升滤液加入 8 升强 碱性阴离子交换树脂， 搅拌吸附 8 小时以上， 收集强碱性阴离子交换树脂， 弃去废液 ； 测定 排放废液中肝素钠的含量， 要求在 1.2 以下 ； 树脂洗涤 ： 先用自来水及温水洗涤， 然后用 4 4.2 度的盐水溶液洗涤强碱性阴离子交换树脂 30 分钟， 去除树脂表面杂质 ； 肝素洗脱 ： 第一次洗脱， 用 Na。
5、Cl 溶液与强碱性阴离子交换树脂体积按 1 1 的比例混合， 再加入 0.1的生物专用缓冲剂， 搅拌均匀， 洗脱 3 小时， 洗脱液中 NaCI 的浓度为 18 20 度， 其中 所述生物专用缓冲液由焦亚硫酸食品改良剂和水组成， 其配比为 2 1 ； 第二次洗脱， 调 NaCl 溶液至 18 度以上， 然后按 1 1 的比例加入强碱性阴离子交换树 脂， 搅拌均匀， 洗脱液中 NaCl 的浓度为 16 18 度， 将二次洗脱液合并 ； 酒精沉淀 ： 保证洗脱液的 pH 值在 6.0 6.5 范围内， 缓慢加入酒精， 搅拌均匀， 酒精浓度为 35 40 度， 沉淀 8 小时以上， 弃去上清液， 收。
6、集沉淀物， 在 70 80的温度下干燥 10 小时以上 ； 复沉 ： 将干燥物用纯水溶解， 水量为干燥物的10倍， 用NaOH调pH至9.09.5， 吸入反应罐， 用框式压滤机过滤除去杂质， 再用 NaOH 溶液调 pH 至 6.0 6.5， 再缓慢加入酒精， 搅拌均 匀， 使酒精浓度在 42 46范围内， 沉淀 8 小时以上 ； 脱水干燥 ： 收集复沉物， 离心脱水， 装入搪瓷盘中， 在7080温度下干燥20小时以上， 即得成品 肝素钠 ； 粉碎、 混合和包装 ： 收集成品肝素钠进行粉碎， 混合 4 小时， 送样检测合格后， 包装即可出厂。 2. 根据权利要求 1 所述的肝素钠生产新工艺， 。
7、其特征在于 ： 所述的蛋白酶是胰蛋白酶。 权 利 要 求 书 CN 101649336 B1/3 页 3 肝素钠生产新工艺 技术领域 0001 本发明涉及一种肝素钠的生产工艺， 尤其是一种利用生物酶解低温方法从猪小肠 粘膜中提取肝素钠的生产新工艺。 背景技术 0002 肝素钠是由生物材料中提取出来的天然多糖物质， 在临床使用中受到广大患者和 医生的青睐， 广泛用于防治各种心脑血管疾病， 一直是最有效的抗凝血药物， 特别是对动静 脉血栓、 血塞具有独特疗效。 肝素钠广泛分布于哺乳动物的肠粘膜、 肺、 肝中， 特别是猪小肠 粘膜中含量最高。 目前国内生产肝素钠的方法， 主要是盐解法和酸解法， 这二。
8、种方法都是采 用猪小肠粘膜为原料， 在碱性条件下通过盐解酶解， 除去部分蛋白质后， 通过三甲胺委铵性 强碱性阳离子交换树脂吸附及洗脱， 在洗脱液中加以乙醇沉淀即得肝素钠初级原料出售， 其缺点是生产周期长为 48h， 反应温度高为 95 100， 能源消耗大， 水解不完全， 纯度低， 收率低， 效价低， 产生大量的废肠渣和废水， 污染环境。 发明内容 0003 本发明的目的在于为克服现有技术的不足而提供一种利用生物酶解低温提取肝 素钠的新工艺， 其生产周期短、 反应温度低、 纯度高、 收率高、 效价低、 无污染物排出。 0004 本发明的目的由以下技术方案来实现， 其生产工艺包括以下步骤 ： 0。
9、005 酶解 ： 0006 将新鲜猪肠粘膜吸入反应锅， 量取体积， 用 NaOH 调 PH 至 8.5 9.5， 温度在 45 50， 按猪肠粘膜的体积加入 3 5的 NaCL、 0.03 0.036的鲜胰浆、 0.03 0.036 的蛋白酶， 搅拌 1 2 小时， 保温 2 小时， 升温至 70 80， 停止加温， 用滤布过滤， 滤液吸 入吸附罐 ； 0007 树脂交换吸附 ： 0008 将滤液降温到 50以下， 量取体积， 调 PH 至 8.5 9.0， 按每 1000 升滤液加入 8 升肝素钠专用树脂， 搅拌吸附 8 小时以上， 收集肝素钠专用树脂， 弃去废液 ； 测定排放废液 中肝素钠。
10、的含量， 要求在 1.2 以下 ； 0009 树脂洗涤 ： 0010 先用自来水及温水洗涤， 然后用 4 4.2 度的盐水溶液洗涤肝素钠专用树脂 30 分 钟， 去除树脂表面杂质 ； 0011 肝素洗脱 0012 第一次洗脱， 用 NaCL 溶液与肝素钠专用树脂体积按 1 ： 1 的比例混合， 再加入 0.1的生物专用缓冲剂， 搅拌均匀， 洗脱 3 小时， 洗脱液中 NaCL 的浓度为 18 20 度 ； 第二 次洗脱， 调NaCL溶液至18度以上， 然后按1 ： 1的比例加入肝素钠专用树脂， 搅拌均匀， 洗脱 液中 NaCL 的浓度为 16 18 度， 将二次洗脱液合并 ； 0013 酒精沉。
11、淀 ； 说 明 书 CN 101649336 B2/3 页 4 0014 保证洗脱液的 PH 值在 6.0 6.5 范围内， 缓慢加入酒精， 搅拌均匀， 酒精浓度为 35 40 度， 沉淀 8 小时以上， 弃去上清液， 收集沉淀物， 在 70 80的温度下干燥 10 小时 以上 ； 0015 复沉 0016 将干燥物用纯水溶解， 水量为干燥物的 10 倍， 用 NaOH 调 PH 至 9.0 9.5， 吸入反 应罐， 用框式压滤机过滤除去杂质， 再用 NaOH 溶液调 PH 至 6.0 6.5， 再缓慢加入酒精， 搅 拌均匀， 使酒精浓度在 42 46范围内， 沉淀 8 小时以上 ； 0017。
12、 脱水干燥 ： 0018 收集复沉物， 离心脱水， 装入搪瓷盘中， 在7080温度下干燥20小时以上， 即得 成品肝素钠 ； 0019 粉碎、 混合和包装 ： 0020 收集成品肝素钠进行粉碎， 混合 4 小时， 送样检测合格后， 包装即可出厂。 0021 所述的蛋白酶是胰蛋白酶， 使肠粘膜中肝素充分完全裂解释放在提取溶液中 ； 所 述的肝素钠专用树脂为强碱性阴离子交换树脂， 强化了其承载能力， 微孔数目及活性， 提高 了肝素钠的收率、 纯度、 光吸收能力， 降低了反应时间 ； 所述生物专用缓冲液， 由胶亚硫酸食 品改良剂和水组成， 其配比为 2 ： 1， 保证在反应中， 小分子蛋白质尽量不与。
13、有效的粘多糖反 应、 结合， 而单一的大分子量蛋白质与从粘膜中分离出来的有效粘多糖分子相结合， 从而形 成纯度高、 效价合理的肝素 ； 0022 由于本发明采用生物酶粉替代盐解法和酶解法中的鲜胰浆， 对酶解的反应时间、 温度和 PH 值等工艺参数进行了优化， 解决了现有技术加工时间长为 48 小时， 温度高为 95 100， 提取肝素收率低、 工艺操作复杂、 废渣、 废水排放超标等问题， 工艺流程科学合 理， 酶解反应完全彻底， 反应时间缩短为30h， 生产能耗低， 反应温度低为7080， 肝素提 取收率达 90以上， 肝素单位产量高， 每亿单位肝素仅需猪小肠 1500 1700 副， 生产成。
14、本 低， 操作简单方便， 自动化控制程度高， 增加经济效益 30以上， 工艺成熟稳定， 无废肠渣和 超标废水排放， 符合国家 “节能降耗减排增收” 的发展方向。 具体实施方式 0023 实施例 1 0024 酶解 ： 0025 将新鲜猪肠粘膜吸入反应锅， 量取体积， 用 NaOH 调 PH 至 8.5 9.5， 温度在 45 50， 按猪肠粘膜的体积加入 3 5的 NaCL、 0.03 0.036的鲜胰浆、 0.03 0.036 的胰蛋白酶， 搅拌 1 2 小时， 保温 2 小时， 开温至 70 80， 停止加温， 用滤布过滤， 滤液 吸入吸附罐 ； 0026 树脂交换吸附 ： 0027 将滤。
15、液降温到 50以下， 量取体积， 调 PH 至 8.5 9.0， 按每 1000 升滤液加入 8 升强碱性阴离子交换树脂， 搅拌吸附 8 小时以上， 收集肝素钠专用树脂， 弃去废液 ； 测定排 放废液中肝素钠的含量， 要求在 1.2 以下 ； 0028 树脂洗涤 ： 0029 先用自来水及温水洗涤， 然后用 4 4.2 度的盐水溶液洗涤肝素钠专用树脂 30 分 说 明 书 CN 101649336 B3/3 页 5 钟， 去除树脂表面杂质 ； 0030 肝素洗脱 0031 生物专用缓冲剂第一次洗脱用 NaCL 溶液与肝素钠专用树脂体积按 1 ： 1 的比例混 合， 再加入 0.1的生物专用缓冲。
16、剂， 生物专用缓冲剂由胶亚硫酸食品改良剂和水组成， 配 比为 2 ： 1， 然后搅拌均匀， 洗脱 3 小时， 洗脱液中 NaCL 的浓度为 18 20 度 ； 第二次洗脱调 NaCL 溶液至 18 度以上， 然后按 1 ： 1 的比例加入肝素钠专用树脂， 搅拌均匀， 洗脱液中 NaCL 的浓度为 16 18 度， 将二次洗脱液合并 ； 0032 酒精沉淀 ； 0033 保证洗脱液的 PH 值在 6.0 6.5 范围内， 缓慢加入酒精， 搅拌均匀， 酒精浓度为 35 40 度， 沉淀 8 小时以上， 弃去上清液， 收集沉淀物， 在 70 80的温度下干燥 10 小时 以上 ； 0034 复沉 0035 将干燥物用纯水溶解， 水量为干燥物的 10 倍， 用 NaOH 调 PH 至 9.0 9.5， 吸入反 应罐， 用框式压滤机过滤除去杂质， 再用 NaOH 溶液调 PH 至 6.0 6.5， 再缓慢加入酒精， 搅 拌均匀， 使酒精浓度在 42 46范围内， 沉淀 8 小时以上 ； 0036 收集复沉物， 离心脱水， 装入搪瓷盘中， 在7080温度下干燥20小时以上， 即 得成品肝素钠 ； 0037 粉碎、 混合和包装 ： 0038 收集成品肝素钠进行粉碎， 混合 4 小时， 送样检测合格后， 包装即可出厂。 说 明 书 。