一种富集纯化费菜中熊果酸的方法.pdf

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法。其特点是：应用大孔吸附技术分离纯化熊果酸，对熊果酸的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的熊果酸半成品和含量98％以上的熊果酸终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附熊果酸，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

1.  一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)将干费菜粉碎后用95％乙醇加热回流提取；
(2)将经(1)处理的费菜提取液过滤，得流浸膏状初提物，回收乙醇；
(3)将所收获流浸膏状初提物用水充分洗涤后干燥得到干浸膏，用乙醇溶解后脱色，脱色液经回收乙醇后加水析出大量沉淀，调pH值至2-2.5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到熊果酸的粗提物。
(4)将所得熊果酸粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集熊果酸段洗脱液；
(6)将熊果酸洗脱液浓缩回收洗脱剂，得熊果酸半成品；
(7)将所得熊果酸半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(8)将所收集到得熊果酸洗脱液进行精制的熊果酸。

2.  根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法其特质是：所述的步骤(1)中，费菜粉后过10～80目筛再进行乙醇加热回流提取。

3.  根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯费菜中熊果酸的方法，其特征是：在所属的步骤(1)中，有机溶剂为丙酮，甲醇，10～100％乙醇中的一种或一种以上，提取时间为4～48小时。

4.  根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其特征是：所述的步骤(1)中，有机溶剂提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。

5.  根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中五熊果酸的方法，其特征是；所属的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为费菜粉体积的5～20倍。

6.  根据权利要求5所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中五熊果酸的方法，其特征是：在所述的步骤(3)中，加入乙醇的量按体积计为提取物水溶液的5～20倍，调节PH值所用的酸为盐酸

7.  根据权利要求6所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其特征是：步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附：步骤(5)中所述的洗脱为用10～95％的乙醇水溶液进行洗脱。

8.  根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其特征是：在步骤(5)和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。

9.  根据权利要求8所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其特征是：步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1～7∶1。

10.  根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其特征是：在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。

一种富集纯化费菜中熊果酸的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种熊果酸的纯化方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法。
背景技术：
费菜又叫景天三七(Aizoon Stonecrop Herb)，多年生肉质草本。茎直立，高20～80cm；根状茎粗壮，近木化。叶互生，广卵形至狭倒披针形，先端渐尖，基部楔形，边缘有不整齐锯齿或近全缘，光滑或略带乳头状突起；几无柄。聚伞花序顶生，分枝平展；花密生；萼片5，披针形，长短不等，长约为花瓣的1/2，先端钝；花瓣5，黄色，长圆状披针形；雄蕊10，较花瓣为短；心皮5，基部合生，腹面有囊状突起。蓇葖果排成五角星状；种子平滑，边缘有宽翅。花期6～8月，果期8～9月。生于山坡岩石上，草丛中，主产我国北部和长江流域各省。全草含没食子酸、齐墩果酸(oleanolic acid)、熊果酸(ursolic acid)、谷甾醇、生物碱、景天庚酮糖(D-sedoheptulose)等物质。
熊果酸是一种存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，已引起国际社会的普遍关注。经科学研究及临床应用证明，熊果酸具有保肝及抗肝炎作用、抗肿瘤作用、抗氧化作用、抗菌、抗炎及抗病毒作用、降血脂、抗动脉粥样硬化、降低血糖的作用、对艾滋病病毒的抑制作用、抗糖尿病、抗溃疡作用、镇静及安定作用、增强免疫功能作用。临床证明发现熊果酸具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用。研究发现：熊果酸能明显抑制HL-60细胞增殖，可诱导其凋亡；能使小鼠的巨噬细胞吞噬功能显著提高。体内试验证明，熊果酸可以明显增强机体免疫功能。说明熊果酸的抗肿瘤作用广泛，极有可能成为低毒有效的新型抗癌药物。近年来，人们发现天然植物费菜中含有大量的熊果酸，从中提取熊果酸并且取得了可喜进展，由于其原料费菜为中药，原料来源较广。名称为“费菜提取熊果酸的方法”的专利申请中便公开了将费菜经醇提水沉正交试验法优化提取熊果酸工艺流程。上述专利文献中的熊果酸提取工艺主要是经过用乙醇煎煮直接提纯后经水沉工艺等步骤提取而成，其分离效果远远不如大孔吸附树脂处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。
发明内容：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其步骤如下：
(1)将干费菜粉碎后用乙醇加热回流提取；
(2)将经步骤(1)处理的费菜提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入丙酮萃取，用酸调其PH值为2.0～2.5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得熊果酸粗提物；
(4)将所得熊果酸粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(6)将熊果酸各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得熊果酸半成品，其含量为35％以上；
(7)将所得熊果酸半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(8)将所收集的熊果酸洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得熊果酸，其含量在98％以上。
所述的步骤(1)中，费菜粉碎后过10～80目筛在进行有机溶剂提取。
所述的步骤(1)中，有机溶剂为丙酮、甲醇、10～100％乙醇中的一种或一种以上，提取时间为4～48小时。
所述的步骤(1)中，有机溶剂提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
所述的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为费菜粉碎体积的5～20倍。
所述的步骤(3)中，加入丙酮的量按体积计算为提取物水溶液的5～20倍，调节PH值所用的酸为盐酸。
所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(5)中所述的洗脱为用10～95％的乙醇进行洗脱。
所述的在步骤(5)和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1～7∶1。
本发明应用大孔吸附技术分离纯化熊果酸，对熊果酸的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的熊果酸半成品和含量98％以上的熊果酸终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附熊果酸，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施例1：一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其步骤如下：
(1)将干费菜粉碎后过60目筛，用费菜粉体积10倍的丙酮浸渍提取48小时；
(2)将经步骤(1)处理的费菜提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积20倍的纯化水进行萃取，然后用酸调其PH值为2.0，静置、抽滤、减压回收溶剂得熊果酸粗提物；
(4)将所得熊果酸提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；
(5)用10％、20|％、30％、40％、50％|、60％、70％、80％|、90％、95％的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(6)将熊果酸各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为35％以上熊果酸甲半成品；
(7)将所得熊果酸半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(8)将所收集的熊果酸洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量98％以上熊果酸。
实施案例2：一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其步骤如下：
(1)将干费菜粉碎后过10目筛，用费菜粉体积20倍的丙酮浸渍提取12小时，然后回流提取4小时；
(2)将经步骤(1)处理的费菜提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积10倍的纯化水进行萃取，然后用酸调其PH值为2.3，静置、抽滤、减压回收溶剂得熊果酸粗提物；
(4)将所得熊果酸粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂；
(5)用10％、30％、50％|、70％、90％的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(6)将熊果酸各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上熊果酸半成品；
(7)将所得熊果酸半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(8)将所收集的熊果酸洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量98％以上熊果酸。
实施案例3：一种利用大孔吸附树脂富集纯化费菜中熊果酸的方法，其步骤如下：
(1)将干费菜粉碎后过80目筛，用费菜粉体积15倍的75％乙醇回提取6小时；
(2)将经步骤(1)处理的费菜提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；
(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积15倍的纯化水进行萃取，然后用酸调其PH值为2.5，静置、抽滤、减压回收溶剂得熊果酸粗提物；
(4)将所得熊果酸粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；
(5)用20％、40％、60％|、80％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(6)将熊果酸段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35％以上熊果酸半成品；
(7)将所得熊果酸半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集熊果酸各阶段洗脱液；
(8)将所收集的熊果酸洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量98％以上熊果酸。