一种米蛋白抗氧化肽的制备方法.pdf

一种米蛋白抗氧化肽的制备方法，其包括以下步骤：（1）将米渣过50-200目筛，按照1:6-12的料水重量比加水浸泡10-15分钟；（2）将米渣料液倒入胶体磨中，研磨≥2min，将料液中的米渣颗粒磨碎；（3）将碾磨均质后的料液调pH8.0-9.5，加入磷酸缓冲液，加入碱性蛋白酶200U/g-600U/g米渣,在40℃-65℃下搅拌酶解1-3小时，控制水解度为10wt%至15wt%；（4）灭酶、离心分离；（5）真空浓缩、冷冻干燥。采用本发明制备米蛋白抗氧化肽，原料来源广，制造成本低；所得米蛋白抗氧化肽，抗氧化活性高，食用安全性高。?

1.  一种米蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）米渣原料预处理：将米渣过50-200目筛，按照1:6-12的料水重量比加水浸泡10-15分钟；
（2）胶体磨处理：将米渣料液倒入胶体磨中，研磨≥2min，将料液中的米渣颗粒磨碎；
（3）碱性蛋白酶水解：将碾磨均质后的料液调pH8.0-9.5，加入磷酸缓冲液10ml-20ml/100g米渣，以维持pH值稳定不变，加入碱性蛋白酶200U/g-600U/g米渣，在40℃-65℃下搅拌水解1-3小时，控制水解度为10wt%至15wt%；
（4）灭酶、离心分离：将水解液于84-86℃灭酶，以转速为3000r/min-4000r/min离心10-15min，取上清液；
（5）真空浓缩、冷冻干燥：将上清液在真空度0.07-0.09MPa，温度40℃-50℃进行真空浓缩至固形物浓度为45-55wt%，而后进行冷冻干燥，冻干温度为-30℃，冻干至粉末状，水分低于5%，产品即为米蛋白抗氧化肽。

一种米蛋白抗氧化肽的制备方法
技术领域
本发明涉及一种抗氧化肽的制备方法，尤其是涉及一种以米渣为原料制取高抗氧化活性的米蛋白抗氧化肽的制备方法。
背景技术
许多研究表明，脂质氧化与人体的衰老和诸多疾病，如癌症、动脉硬化有关。人体通过摄入适量的抗氧化物质能够明显降低体内自由基的水平，防止脂质过氧化，预防疾病的发生。
随着现代食品工业的发展，加工中的油脂氧化问题亟待解决。通过添加抗氧化物的方法可以抑制油脂氧化，增加食品体系的稳定性。
生物活性肽作为一种天然的抗氧化物质，除了具有高的抗氧化活性之外，还具有很高的食用安全性。这些肽类在天然原料中的含量较低，寻找更广泛来源的抗氧化肽引起了国内外许多食品研究学者的普遍关注。近年来，以酶水解蛋白质获得抗氧化肽的方法得到了很大的发展，各种不同来源的蛋白质在专一酶的作用下，得到了许多具有高抗氧化活性的肽段。
现有制备抗氧化肽方法的主要缺陷是：一是原料比较贵，一般是用大豆蛋白制造；二是工艺路线较复杂，生产成本相对较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种原料来源广，制造成本低，抗氧化活性高，食用安全性高的米蛋白抗氧化肽的制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的，其包括以下步骤：
（1）米渣原料预处理：将米渣过50-200目筛，按照1:6-12的料水重量比加水浸泡10-15分钟；
（2）胶体磨处理：将米渣料液倒入胶体磨中，研磨≥2min，将料液中的米渣颗粒磨碎，以利于碱性蛋白酶水解；
（3）碱性蛋白酶水解：将碾磨均质后的料液调pH8.0-9.5，加入磷酸缓冲液10ml-20ml/100g米渣，以维持pH值稳定不变，加入碱性蛋白酶200U/g-600U/g米渣，在40℃-65℃下搅拌水解1-3小时，控制水解度为10wt%至15wt%；
（4）灭酶、离心分离：将水解液于84-86℃灭酶，以转速为3000r/min-4000r/min离心10-15min，取上清液；
（5）真空浓缩、冷冻干燥：将上清液在真空度0.07-0.09MPa，温度40℃-50℃进行真空浓缩至固形物浓度为45-55wt%，而后进行冷冻干燥，冻干温度为-30℃，冻干至粉末状，水分低于5%，产品即为米蛋白抗氧化肽。
本发明方法使用的原料米渣是大米制作淀粉糖或生产味精后的下脚料，其蛋白质含量高达60%以上（干基），有良好的氨基酸组成配比，且来源广泛，价格低廉；以米渣为原料制备抗氧化肽，使米渣得到了综合利用，为利用米渣开发功能食品、生物制品等具有高附加值的生物制品奠定了基础。
利用本发明方法制备的米蛋白抗氧化肽，品质好，颜色微黄；水溶性较好，抗氧化活性高，能够有效清除自由基，对超氧阴离子自由基清除率为≥60%，对羟基自由基的清除率为≥65%，表现了其在抗氧化活性保健方面的优越性；食用安全性高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
（1）将米渣原料过60目筛，称取100g过筛后的米渣，加1kg饮用自来水，搅匀，浸泡12分钟；（2）将米渣料液倒入胶体磨中，碾磨2min；（3）将碾磨均质后的料液调pH至9.0，加入磷酸缓冲液15ml，保持pH值不变，加入碱性蛋白酶水解，加酶量300U/g，水解时间为2小时，温度50℃,控制水解度为12wt%；（4）将水解液在85℃下灭酶，待水解液冷却至室温，以转速3000r/min进行离心分离，取上清液；（5）将上清液置于真空浓缩装置中，在真空度0.09Mpa，温度45℃下进行真空浓缩，待固形物浓度为50wt%时，对其进行预冻；冻干温度-30℃，冻干至粉末状，水分含量低于5%，产品即为米蛋白抗氧化多肽。
经超氧阴离子自由基清除率测定、羟基自由基清除率测定，本实施例制得之米蛋白抗氧化肽对超氧阴离子自由基清除率为65.35%，对羟基自由基的清除率为68.43%。
相关测定方法（下同）介绍如下：
“水解度”测定方法：DH=AN/TN×100%[式中：DH为氨基酸态氮生成率(%)；AN为氨基酸态氮含量(g/g),用甲醛电位滴定法测定；TN为总氮含量(g/g),用微量凯氏定氮法测定]。
“超氧阴离子自由基清除率”的测定方法：取3ml50mmol/LTris-Hc1缓冲溶液(pH=8.2)于试管中，25℃水浴中预热20min，取出后立即加入2ml不同浓度的待测样品和0.4ml5mmol/L邻苯三酚，混匀后25℃水浴保温4min,立即加入8mol/LHcl0.1mol终止反应,在420nm处测定吸光度A样品值,对照组用蒸馏水2ml代替样品。A_空白用0.4ml蒸馏水代替邻苯三酚,另用3mlTris-Hcl缓冲溶液加2.5ml水调零。
根据所测吸光度值，计算各种不同浓度的米蛋白抗氧化肽及对照抗氧化剂的抑制率。
超氧阴离子自由基清除率=(A_对照-A_样品)/(A_对照-A_空白)×100%
“羟基自由基清除率”的测定方法:取1m10.75mmol/L邻二氮菲无水乙醇溶液于试管中,依次加入2ml0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH=7.40)和1ml蒸馏水,充分混匀,加入lml新配制的O.75mmoL/L硫酸亚铁溶液(FeSO₄),混匀后,再加入lml新配制的0.0l%H₂O₂ ,于37℃水浴加热60min后510nm处测吸光值，所测得数据为损伤管的吸光值A₂。未损伤管以1ml蒸馏水代替损伤管中lml0.0l%H₂O₂,操作方法同损伤管，可测得510nm未损伤管的吸光值A₁。样品管以lml样品代替损伤管中的lml蒸馏水，操作方法同损伤管，可测得5l0nm样品管的吸光值A₃。
羟基自由基清除率=(A₃-A₂)/(A₁-A₂)×100%。
实施例2
（1）将米渣原料过80目筛，称取100g过筛后的米渣，加800g饮用自来水，搅匀，浸泡8分钟；（2）将米渣料液倒入胶体磨中，碾磨3min；（3）将碾磨均质后的料液调pH至8.5，加入磷酸缓冲液10ml，保持pH值不变，加入碱性蛋白酶水解，加酶量300U/g，水解时间为2小时，温度50℃,控制水解度为15wt%；（4）将水解液在85℃下灭酶，待水解液冷却至室温，以转速3000r/min进行离心分离，取上清液；（5）将上清液置于真空浓缩装置中，在真空度0.09Mpa，温度45℃下进行真空浓缩，待固形物浓度为50wt%时，对其进行预冻；而后在真空度为0.15MPa，冻干温度-30℃下，冻干至粉末状，水分含量低于5%，产品即为米蛋白抗氧化多肽。
经超氧阴离子自由基清除率测定、羟基自由基清除率测定，本实施例制得之米蛋白抗氧化肽对超氧阴离子自由基清除率为65.10%，对羟基自由基的清除率为67.18%。