《组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)授权公告号 CN 101690830 B (45)授权公告日 2012.12.05 CN 101690830 B *CN101690830B* (21)申请号 200910191034.2 (22)申请日 2009.09.29 A61L 27/48(2006.01) A61L 27/56(2006.01) A61L 27/58(2006.01) (73)专利权人 中国人民解放军第三军医大学第 一附属医院 地址 400038 重庆市沙坪坝区高滩岩正街 29 号 (72)发明人 张颖 王富友 崔运利 杨柳 (74)专利代理机构 北京同恒源知识产权代理有 限公司 11275 代理人 赵荣之 。
2、CN 1836740 A,2006.09.27, 实施例 1-3. EP 1312383 A2,2003.05.21, 实施例 1-5. CN 1319436 A,2001.10.31, 实施例 1-3. 阎继红等 . 胶原 - 透明质酸 - 硫酸软骨素 复合三维支架体外构建组织工程软骨的实验研 究. 中国修复重建外科杂志 .2006, 第 20 卷 (第 2 期 ),130-133. (54) 发明名称 组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种组织工程用仿生软骨细胞 外基质的制备方法， 选取与正常关节软骨细胞外 基质主要成分相同的原料作为制备组织工程用仿 生软。
3、骨细胞外基质的仿生原材料， 再将选取的仿 生原材料通过有机酸充分溶解后依次通过制孔处 理、 固化处理和强化处理， 使最终得到的组织工程 用仿生软骨细胞外基质的材料结构具备适合软骨 种子细胞接种、 存活及增殖等生物学行为要求的 物理结构特征， 同时具有良好生物相容性、 适宜的 降解速率和生物力学强度 ； 本制备方法材料来源 广泛， 成本低廉， 工艺简单易行， 重现性好， 制得的 产品可广泛应用于修复大面积的关节软骨缺损并 且临床并发症少。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王芳 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书。
4、 1 页 说明书 6 页 1/1 页 2 1. 一种组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法， 其特征在于 ： 包括如下步骤 ： 1) 选取制备组织工程用仿生软骨细胞外基质的仿生原材料， 按质量百分比 (wt ) 由 以下成分组成 ： 60-80 的 II 型胶原蛋白、 15-30 的硫酸软骨素、 5-10 的透明质酸 ； 2) 将步骤 1) 所述量的 II 型胶原蛋白、 硫酸软骨素和透明质酸溶于浓度均为 0.01mol/ L 0.1mol/L 的醋酸、 丙二酸溶剂或盐酸中并充分搅拌使其完全溶解得到酸性溶液 ； 3)在20-25条件下， 将粒径为100-150m的水溶性制孔剂按照孔隙率设计要求取。
5、量 并加入酸性溶液后， 充分搅拌使其混合均匀得到仿生原材料总质量浓度为 5 30的组 织工程用仿生软骨细胞外基质溶液， 其中， 制孔剂为 NaCl 或 KCl 晶体 ； 4) 将步骤 3) 所得的组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液注入预先制备好的用于制作 组织工程用仿生软骨细胞外基质的模具中并加压、 密封 ； 5) 将步骤 4) 中所述的注入酸性溶液的模具置于 -10 -30环境中放置 2-4h 后再 置于 -70 -90的环境中放置 6-12h， 最后再进行冻干 ； 6) 依据胶原蛋白交联技术要求， 将步骤 5) 中冻干的复合材料取出， 浸泡于浓度为 5-10的交联剂溶液中， 每 2-4h 对。
6、交联剂溶液进行更换， 交联 24h 后对复合材料进行低温 冻干得到复合基质材料， 其中交联剂戊二醛、 京尼平或 1， 4- 二 (3， 4- 羟基苯 )-2， 3- 二甲基 丁烷 ； 7) 将步骤 6) 中冻干的复合基质材料用去离子水反复漂洗至复合基质材料为中性， 得 到多孔的复合基质材料 ； 8) 将所述多孔的复合基质材料进行低温冻干， 再经 X- 射线消毒后即可得到组织工程 用仿生软骨细胞外基质产品， 所述组织工程用仿生软骨细胞外基质产品具备如下物理结构 参数 ： 孔径 ： 100 150m， 孔隙率 60 90， 孔通率 100。 权 利 要 求 书 CN 101690830 B 2 1。
7、/6 页 3 组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及软骨仿生细胞外基质， 特别涉及一种组织工程用仿生软骨细胞外基质 的制备方法。 背景技术 0002 由创伤或骨病所致关节部位软骨缺损临床常见， 严重影响患者生活质量， 已成为 目前肢体残障的主要原因之一。美国发病率为 1.5 3， 我国约为美国的 5 6 倍， 且 呈逐年上升趋势。关节软骨属于透明软骨， 缺乏神经血管营养， 损伤后自身难以修复。临床 现有治疗措施均存在明显缺陷， 其保守治疗和关节清理术只能暂时缓解疼痛， 不能阻止病 程的发展 ； 自体骨软骨移植术可造成供区损伤， 且来源有限， 难以修复较大面积的缺。
8、损 ； 异 体骨软骨移植术存在免疫排斥反应及传播疾病的可能 ； 人工关节置换术则费用昂贵、 并发 症较多、 翻修率较高， 特别是对年轻患者的身心影响大、 经济负担重。 0003 组织工程学的诞生及其快速发展为关节软骨的再生修复提供了新技术。20 世纪 80 年代随着细胞生物学与工程材料学等基础学科的深入发展， 组织工程学的研究经历了 两个阶段 ： 前 10 年主要是证实利用细胞和生物材料构建组织的可行性 ； 后 10 多年则在研 究内容、 手段、 技术改进和临床试用等方面不断深入， 为提高疗效和拓展组织工程产品作准 备。1987 年瑞典学者报道移植体外扩增软骨细胞来临床治疗自体关节软骨缺损。1。
9、997 年 美国食品药品管理局 FDA 批准 Genzyme 公司的组织工程产品 Carticel进入临床， 到目前 已超过 4000 名患者受益于该产品。2004 年中国武警总医院将德国 Verigen 公司构建的组 织工程软骨应用于临床， 但我国目前还缺乏具有自主知识产权的组织工程软骨基质材料应 用于临床。 0004 组织工程支架材料为构建组织的细胞提供的三维支架， 有利于细胞的黏附、 增殖 乃至分化， 为细胞生长提供合适的外环境。在组织工程中， 支架材料起到细胞外基质的作 用， 是对细胞外基质的结构和功能的仿生。它不仅起支撑作用， 保持原有组织的形状， 而且 还起到模板作用， 为细胞提供。
10、赖以寄宿、 生长、 分化和增殖的场所， 从而引导受损组织的再 生和控制再生组织的结构。 0005 研究表明， 正常关节软骨由软骨细胞和细胞外基质组成， 两者协调配合， 保证了关 节软骨的正常生理功能。软骨细胞占整个组织体积的 5， 主要功能为分泌胞外基质， 保持 基质的更新。细胞外基质 70由水构成， 其余由胶原和蛋白多糖组成， 主要负责承载软骨 细胞， 调节细胞的增殖和分化， 缓冲关节应力。胶原占软骨干重的 60 -80， 其中 95为 II 型胶原。蛋白多糖聚合物占透明软骨干重的 20 -40， 主要包括硫酸软骨素和透明质 酸， 两者结合形成蛋白多糖聚合物。 聚合物中的氨基葡聚糖残基带有负。
11、电荷， 分子间相互排 斥， 具有强烈的亲水性， 这是软骨基质保持大量水分的重要原因。 硫酸软骨素和胶原纤维之 间的键连接， 避免了基质过度水化， 进而防止软骨软化。 现有技术制备的组织工程软骨支架 材料与正常的软骨基质无论在成分上还是结构上， 都存在显著的差异。 说 明 书 CN 101690830 B 3 2/6 页 4 发明内容 0006 有鉴于此， 本发明提供一种组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法， 能够制 得与正常软骨结构和成分类似的， 仿生度高的组织工程用仿生软骨细胞外基质， 并且该组 织工程用仿生软骨细胞外基质具有良好的生物相容性、 可降解吸收性以及机械特性， 同时 成本低廉，。
12、 成为修复软骨缺损的理想生物材料并满足临床大量应用的需要。 0007 本发明的组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法 ： 包括以下步骤 ： 0008 a. 选取制备组织工程用仿生软骨细胞外基质的仿生原材料， 所述仿生原材料按质 量百分比 (wt ) 包含如下成分 ： 60 80 的 II 型胶原蛋白、 15 30 的硫酸软骨素和 5 10 的透明质酸 ； 0009 b. 将步骤 a 中选用的仿生原材料用浓度为 0.01mol/L 0.1mol/L 的有机酸或浓 度为 0.01mol/L 0.1mol/L 的盐酸充分溶解后得到酸性溶液 ； 0010 c. 将步骤 b 中得到的酸性溶液依次通过制孔。
13、处理、 固化处理和强化处理并得到所 需的适合软骨种子细胞生物学行为要求的组织工程用仿生软骨细胞外基质。 0011 进一步， 步骤 c 中得到的组织工程用仿生软骨细胞外基质具备如下物理结构参 数 ： 孔径 100-150m， 孔隙率 60-90， 孔通率 100 ； 0012 进一步， 步骤 b 中所述的有机酸为醋酸或丙二酸 ； 0013 进一步， 步骤 c 所述的制孔处理为 ： 在 20-25的条件下， 将制孔剂添加到步骤 b 得到的酸性溶液中， 充分搅拌使其混合均匀后得到仿生原材料总质量浓度为 5 30的 组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液， 再将所述的组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液注 入预。
14、先制备好的用于制作组织工程用仿生软骨细胞外基质的模具中， 对模具加压、 密封并 在 -10 -30的环境中放置 2-4h 即可， 其中， 制孔剂为粒径在 100-150m 的水溶性制 孔剂 ； 0014 进一步， 步骤 c 所述的固化处理为冷冻冻干， 步骤 c 中所述的强化处理为化学交 联 ； 0015 进一步， 所述固化处理为 ： 将步骤 c 中经制孔处理的酸性溶液置于 -70 -90 的环境中放置 6-12h 后， 进行冻干并得到冻干的复合材料 ； 0016 进一步， 所述强化处理包括如下步骤 ： 将所述冻干的复合材料取出并浸泡于浓 度为 5-10的交联剂溶液中， 每 2-4h 更换交联剂。
15、溶液， 24h 后对含有复合材料的交联剂溶 液进行低温冻干并得到复合基质材料， 将复合基质材料经去离子水反复漂洗至复合基质 材料为中性， 得到多孔的复合基质材料， 将多孔的复合基质材料进行冻干， 再通过 X- 射 线消毒， 即可得到所需的组织工程用仿生软骨细胞外基质产品， 其中交联剂为醛类交联剂、 碳化二亚氨类交联剂、 京尼平或 1， 4- 二 (3， 4- 羟基苯 )-2， 3- 二甲基丁烷 (NDGA)。 0017 本发明还提供以下制备组织工程用仿生软骨细胞外基质的优选实施方法， 包括如 下步骤 ： 0018 1) 选取制备组织工程用仿生软骨细胞外基质的仿生原材料， 按质量百分比 (wt 。
16、) 包括如下成分 ： 0019 60-80 的 II 型胶原蛋白、 15-30 的硫酸软骨素、 5-10 的透明质酸 ； 0020 2) 将步骤 1) 所述量的 II 型胶原蛋白、 硫酸软骨素和透明质酸溶于浓度均为 0.01mol/L 0.1mol/L 的醋酸、 丙二酸溶剂或盐酸中并充分搅拌使其完全溶解得到酸性溶 说 明 书 CN 101690830 B 4 3/6 页 5 液 ； 0021 3)在20-25条件下， 将粒径为100-150m的水溶性制孔剂按照孔隙率设计要求 取量并加入酸性溶液后， 充分搅拌使其混合均匀得到仿生原材料总质量浓度为 5 30 的组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液， 。
17、其中， 制孔剂优选为 NaCl 或 KCl 晶体 ； 0022 4) 将步骤 3) 所得的组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液注入预先制备好的用于 制作组织工程用仿生软骨细胞外基质的模具中并加压、 密封 ； 0023 5) 将步骤 4) 中所述的注入酸性溶液的模具置于 -10 -30环境中放置 2-4h 后再置于 -70 -90的环境中放置 6-12h， 最后再进行冻干 ； 0024 6) 依据胶原蛋白交联技术要求， 将步骤 5) 中冻干的复合材料取出， 浸泡于浓度为 5-10的交联剂溶液中， 每 2-4h 对交联剂溶液进行更换， 交联 24h 后对复合材料进行低温 冻干得到复合基质材料， 其中交。
18、联剂优选为戊二醛、 京尼平 (Genipin) 或 1， 4- 二 (3， 4- 羟 基苯 )-2， 3- 二甲基丁烷 (NDGA) ； 0025 7) 将步骤 6) 中冻干的复合基质材料用去离子水反复漂洗至复合基质材料为中 性， 得到多孔的复合基质材料 ； 0026 8) 将所述多孔的复合基质材料进行低温冻干， 再经 X- 射线消毒后即可得到组织 工程用仿生软骨细胞外基质产品， 所述组织工程用仿生软骨细胞外基质产品具备如下物理 结构参数 ： 孔径 ： 100 150m， 孔隙率 60 90， 孔通率 100。 0027 本发明的有益效果在于 ： 本发明的组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法。
19、， 选取与人体正常关节软骨细胞外基质主要成分相同的材料作为制备组织工程用仿生软骨 细胞外基质的仿生原材料， 在制备过程中， 将选取的仿生原材料通过有机酸充分溶解后依 次通过制孔处理、 固化处理和强化处理， 使最终得到的组织工程用仿生软骨细胞外基质具 备适合软骨种子细胞接种、 存活及增殖等生物学行为要求的物理结构特征， 同时具备良好 生物相容性、 适宜的降解速率和良好的生物力学强度， 并且， 所用仿生原材料来源广泛， 成 本低廉， 工艺简单易行， 重现性好， 制得的组织工程用仿生软骨细胞外基质可广泛应用于修 复大面积的关节软骨缺损并且临床并发症少。 0028 本发明的其他优点、 目标和特征在某种。
20、程度上将在随后的说明书中进行阐述， 并 且在某种程度上， 基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的， 或者可 以从本发明的实践中得到教导。 具体实施方式 0029 以下将对本发明的优选实施例进行详细的描述。应当理解， 优选实施例仅为了说 明本发明， 而不是为了限制本发明的保护范围。 0030 实施例 1 0031 本实施例的组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法， 包括以下步骤 ： 0032 将 II 型胶原蛋白、 硫酸软骨素和透明质酸按照质量百分比 6 3 1 溶于 0.05mol/L 丙二酸溶液中， 充分搅拌使其完全分散， 配制成仿生原材料总质量浓度为 15 的酸性胶原蛋白混。
21、合液 ； 依据组织工程学原理， 选用粒度为125-150m的NaCl晶体作为制 孔剂 ； 取 100ml 酸性胶原蛋白混合液， 在 20的条件下， 加入粒径为 125-150m 的 NaCl 晶 体 100g， 充分搅拌使其混合均匀 ； 取 10ml 含有 NaCl 的酸性胶原蛋白混合液注入用于制作 说 明 书 CN 101690830 B 5 4/6 页 6 组织工程用仿生软骨细胞外基质的直径为 3cm 圆柱形模具中， 对模具进行加压、 密封并置 于 -10冰箱中放置 4h ； 然后再将模具置于 -70冰箱中放置 6h。最后置于低温冷冻干燥 机中冻干 ； 再将冻干的胶原蛋白、 硫酸软骨素、 。
22、透明质酸复合材料从模具中取出， 浸泡在浓 度为 5的京尼平溶液中， 每 4h 更换一次交联剂溶液， 交联 24h 后低温冻干 ； 最后将冻干的 复合基质材料用去离子水漂洗 5 次 ( 每次 20mins) 后， 将所得的中性多孔复合基质材料再 次低温冻干， 最后经 X- 射线消毒得到所需的组织工程软骨仿生细胞外基质产品， 将产品密 封低温储存即可。 0033 本实施例中， 制孔工艺为现有技术， 制孔剂为具备特定粒度和一定水溶性的晶体， 优选为NaCl晶体， 当然， 也可优选为KCl晶体， 使产品的孔隙率高， 分布均匀度好 ； 固化处理 采用在 -70的条件下冷冻冻干， 保障材料不会变性或失活，。
23、 强化处理采用化学交联， 在本 实施例中， 交联剂为浓度为 5的京尼平， 经强化处理得到的复合基质材料， 其生物力学强 度高， 临床耐用性好。 0034 经本发明的研究人员大量实验证实， 交联剂浓度为 5-10、 种类为醛类交联剂、 碳 化二亚氨类交联剂或 1， 4- 二 (3， 4- 羟基苯 )-2， 3- 二甲基丁烷 (NDGA) 均可以实现本发明 的目的， 并且， 经本发明研究人员的大量实验证实， 本方法中， 用于仿生原材料溶解的溶剂 为其他种类的浓度为0.01mol/L0.1mol/L的有机酸同样可以实现本发明的目的， 而有机 酸采用浓度为 0.01mol/L 0.1mol/L 的醋酸。
24、或丙二酸， 可使制备过程中， 带入溶液的杂质 离子种类少， 便于后续工艺中杂质离子的分离和去除， 当然， 本实施例中， 用于仿生原材料 溶解的溶剂为浓度为 0.01mol/L 0.1mol/L 的盐酸同样可以实现本发明的目的。 0035 用本发明方法制备的组织工程软骨仿生细胞外基质产品， 可广泛用于软骨的体外 构建或体内再生， 用于修复大面积的关节软骨缺损临床效果好， 并发症少， 同时成本低廉， 制作容易。 0036 依据 ISO10993 系列标准， 采用扫描电镜观察、 力学实验、 降解性试验、 细胞毒性试 验、 遗传毒性试验等方法对组织工程软骨仿生细胞外基质产品的形态结构、 力学性能、 生。
25、物 安全性和降解吸收性等理化性能进行检测。经扫描电镜观察， 可见孔径为 125-150m ； 孔 隙率为 90 ； 孔通率为 100。检测结果证明本发明的组织工程软骨仿生细胞外基质产品 具有设计要求的内部空间结构和组成比例， 具有良好的组织相容性和生物安全性， 利于细 胞粘附、 增生， 具有良好的机械强度， 能够满足植入部位的力学要求， 具有可控降解吸收性， 通过人工调控可以使其降解吸收速度与体内新生组织生长速度相匹配。 0037 采用该组织工程软骨仿生细胞外基质产品结合种子细胞制备技术、 双相凝胶接种 技术及组织块体外培养技术构建工程化软骨组织 ； 大动物 ( 猪 ) 体内植入修复实验结果表。
26、 明采用本发明的组织工程软骨仿生细胞外基质产品构建的工程化软骨组织植入体内后与 周围正常组织完全整合， 降解时间与周围新生组织生长速度匹配 ； 软骨修复组织具有类似 天然关节软骨的生物学特性。 0038 实施例 2 0039 本实施例的组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法， 包括以下步骤 ： 0040 将 II 型胶原蛋白、 硫酸软骨素和透明质酸按照质量百分比 7 2.5 0.5 的质量 百分比溶于 0.05mol/L 丙二酸溶液中， 充分搅拌使其完全分散， 配制成仿生原材料总质量 浓度为5的酸性胶原蛋白混合液 ； 再依据组织工程学原理， 选用粒度为100-125m的KCl 说 明 书 CN。
27、 101690830 B 6 5/6 页 7 晶体作为制孔剂 ； 再100ml酸性胶原蛋白混合液， 在25的条件下， 加入粒径为100-125m 的 KCl 晶体颗粒 120g， 充分搅拌使其混合均匀 ； 取 10ml 含有 KCl 的酸性胶原蛋白混合液注 入直径为 3cm 圆柱形模具中， 对模具进行加压、 密封并置于 -20的冰箱中放置 2h ； 然后再 将模具置于 -80的冰箱中放置 9h， 最后置于低温冷冻干燥机中冻干 ； 再将冻干的胶原蛋 白、 硫酸软骨素、 透明质酸复合材料从模具中取出， 浸泡在浓度为10的NDGA溶液中， 每2h 更换一次交联剂溶液， 交联 24h 后低温冻干 ； 。
28、最后将冻干的复合基质材料用去离子水漂洗 5 次(每次20mins)， 再将所得的中性多孔复合基质材料再次低温冻干， 最后经X-射线消毒得 到所需的组织工程软骨仿生细胞外基质产品， 将产品密封低温储存即可。 0041 依据 ISO10993 系列标准， 采用扫描电镜观察、 力学实验、 降解性试验、 细胞毒性试 验、 遗传毒性试验等方法对组织工程软骨仿生细胞外基质产品的形态结构、 力学性能、 生物 安全性和降解吸收性等理化性能进行检测。经扫描电镜观察， 可见孔径为 100-125m ； 孔 隙率为 80 ； 孔通率为 100。检测结果证明本发明的组织工程软骨仿生细胞外基质产 品具有设计要求的内部空。
29、间结构和组成比例 ； 具有良好的组织相容性和生物安全性， 利于 细胞粘附、 增生 ； 具有良好的机械强度， 能够满足植入部位的力学要求 ； 具有可控降解吸收 性， 通过人工调控可以使其降解吸收速度与体内新生组织生长速度相匹配。 0042 采用该组织工程软骨仿生细胞外基质产品结合种子细胞制备技术、 双相凝胶接种 技术及组织块体外培养技术构建工程化软骨组织 ； 大动物 ( 猪 ) 体内植入修复实验结果表 明采用本发明的组织工程软骨仿生细胞外基质产品构建的工程化软骨组织植入体内后与 周围正常组织完全整合， 降解时间与周围新生组织生长速度匹配 ； 软骨修复组织具有类似 天然关节软骨的生物学特性。 00。
30、43 实施例 3 0044 本实施例的组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法， 包括以下步骤 ： 0045 将 II 型胶原蛋白、 硫酸软骨素和透明质酸按照质量百分比 8 1.5 0.5 的质量 百分比溶于 0.1mol/L 醋酸溶液中， 充分搅拌使其完全分散， 配制成仿生原材料总质量浓度 为 30的酸性胶原蛋白混合液 ； 再按照组织工程用仿生软骨细胞外基质的孔径设计要求， 选用粒度为 120-140m 的 NaCl 晶体作为制孔剂 ； 取 100ml 酸性胶原蛋白混合液， 在 22 的条件下， 加入粒径为 120-140m 的 NaCl 晶体颗粒 90g， 充分搅拌使其混合均匀 ； 取 10。
31、ml 含有 NaCl 的酸性胶原蛋白混合液注入直径为 3cm 圆柱形模具中， 对模具进行加压、 密封并 置于 -30冰箱中放置 3h ； 然后再将模具置于 -90冰箱中放置 12h， 最后置于低温冷冻干 燥机中冻干 ； 再将冻干的胶原蛋白、 硫酸软骨素、 透明质酸复合材料从模具中取出， 浸泡在 浓度为 8的戊二醛溶液中， 每 3h 更换一次交联剂溶液， 交联 24h 后低温冻干 ； 最后将冻干 的复合基质材料用去离子水漂洗5次(每次20mins)， 再将所得的中性多孔复合基质材料再 次低温冻干， 最后经 X- 射线消毒得到所需的组织工程软骨仿生细胞外基质产品， 将产品密 封低温储存即可。 00。
32、46 依据 ISO10993 系列标准， 采用扫描电镜观察、 力学实验、 降解性试验、 细胞毒性试 验、 遗传毒性试验等方法对组织工程软骨仿生细胞外基质产品的形态结构、 力学性能、 生物 安全性和降解吸收性等理化性能进行检测。经扫描电镜观察， 可见孔径为 120-140m ； 孔 隙率为 60 ； 孔通率为 100。检测结果证明本发明的组织工程软骨仿生细胞外基质产 品具有设计要求的内部空间结构和组成比例 ； 具有良好的组织相容性和生物安全性， 利于 说 明 书 CN 101690830 B 7 6/6 页 8 细胞粘附、 增生 ； 具有良好的机械强度， 能够满足植入部位的力学要求 ； 具有可控。
33、降解吸收 性， 通过人工调控可以使其降解吸收速度与体内新生组织生长速度相匹配。 0047 采用该组织工程软骨仿生细胞外基质产品结合种子细胞制备技术、 双相凝胶接种 技术及组织块体外培养技术构建工程化软骨组织 ； 大动物 ( 猪 ) 体内植入修复实验结果表 明采用本发明的组织工程软骨仿生细胞外基质产品构建的工程化软骨组织植入体内后与 周围正常组织完全整合， 降解时间与周围新生组织生长速度匹配 ； 软骨修复组织具有类似 天然关节软骨的生物学特性。 0048 最后说明的是， 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制， 尽管参照较 佳实施例对本发明进行了详细说明， 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技 术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围， 其均应涵盖在本 发明的权利要求范围当中。 说 明 书 CN 101690830 B 8 。