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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201480022838.9 (22)申请日 2014.04.23 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105188785 A (43)申请公布日 2015.12.23 (30)优先权数据 PD2013A000110 2013.04.24 IT (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2015.10.22 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/IB2014/060928 2014.04.23 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2014/174450 EN 201。
2、4.10.30 (73)专利权人 菲迪亚制药股份公司 地址 意大利阿巴诺泰尔梅 (72)发明人 N焦尔当 P柏拉托 (74)专利代理机构 北京市中咨律师事务所 11247 代理人 沈晓书 黄革生 (51)Int.Cl. A61L 27/20(2006.01) A61L 27/52(2006.01) (56)对比文件 CN 102548590 A,2012.07.04,说明书第2-5 页. CN 102548590 A,2012.07.04,说明书第2-5 页. CN 102470190 A,2012.05.23,说明书第3-4 页. 审查员 赵莉 (54)发明名称 包含透明质酸的药物组合物用于。
3、治疗黑椎 间盘疾病 (57)摘要 本发明描述和要求了凝胶形式的药物组合 物， 其用于治疗椎间盘变性， 特别是髓核的脱水 和空洞化形式， 称为 “黑椎间盘疾病” 。 这些组合 物包含透明质酸衍生物， 其形成精确流变学特性 的水凝胶， 所述的特性使其成为填充髓核的理想 物质。 权利要求书1页 说明书5页 CN 105188785 B 2017.11.17 CN 105188785 B 1.药物组合物在制备用于治疗 “黑椎间盘疾病” 的药物中的用途， 所述药物组合物包含 透明质酸十六烷基酰胺水凝胶， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为0.1至30mg/mL， 其中透明质酸的平均分子量(MW)范围为。
4、500,000至730,000Da并且透明质酸的摩尔酰胺化 程度范围为0.1至10。 2.权利要求1的用途， 其中透明质酸的摩尔酰胺化程度范围1至3。 3.权利要求1的用途， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为3至20mg/mL。 4.权利要求3的用途， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为5至15mg/mL。 5.权利要求1的用途， 其中所述药物组合物包含药物或生物学活性物质， 所述药物或生 物学活性物质选自甾体和非甾体抗炎药、 细胞因子抑制剂和局部麻醉剂。 6.药物组合物在制备用于治疗黑椎间盘疾病的疼痛的药物中的用途， 所述药物组合物 包含透明质酸十六烷基酰胺水凝胶， 其中透明质酸十六烷。
5、基酰胺的浓度范围为0.1至30mg/ mL， 其中透明质酸的平均分子量(MW)范围为500,000至730,000Da并且透明质酸的摩尔酰胺 化程度范围为0.1至10。 7.权利要求6的用途， 其中透明质酸的摩尔酰胺化程度范围1至3。 8.权利要求6的用途， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为3至20mg/mL。 9.权利要求8的用途， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为5至15mg/mL。 10.权利要求6的用途， 其中所述药物组合物包含药物或生物学活性物质， 所述药物或 生物学活性物质选自甾体和非甾体抗炎药、 细胞因子抑制剂和局部麻醉剂。 11.药物组合物在制备用于矫正治疗与黑椎间盘疾。
6、病相关的骨盆投射角和姿势变化的 药物中的用途， 所述药物组合物包含透明质酸十六烷基酰胺水凝胶， 其中透明质酸十六烷 基酰胺的浓度范围为0.1至30mg/mL， 其中透明质酸的平均分子量(MW)范围为500,000至 730,000Da并且透明质酸的摩尔酰胺化程度范围为0.1至10。 12.权利要求11的用途， 其中透明质酸的摩尔酰胺化程度范围1至3。 13.权利要求11的用途， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为3至20mg/mL。 14.权利要求13的用途， 其中透明质酸十六烷基酰胺的浓度范围为5至15mg/mL。 15.权利要求11的用途， 其中所述药物组合物包含药物或生物学活性物质， 。
7、所述药物或 生物学活性物质选自甾体和非甾体抗炎药、 细胞因子抑制剂和局部麻醉剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105188785 B 2 包含透明质酸的药物组合物用于治疗黑椎间盘疾病 发明领域 0001 本发明涉及水凝胶形式的药物组合物， 其用于治疗椎间盘变性， 特别是髓核的脱 水和空洞化形式， 称为 “黑椎间盘疾病(black disc disease)” 。 技术背景 0002 通用术语 “背痛” 包括广泛的障碍， 其定义通常是不确定的， 并且其病因学难以分 类， 特征在于共有的症状：“背痛” 。 脊柱的腰骶部是至关重要的结构； 在所有的过渡枢纽中， 它是确定承受最大压力的部。
8、分， 但是也是最活动的， 这使得它暴露于连续的超负荷和失衡。 脊柱的关键点是椎间盘。 它包含在所有类型的椎骨之中， 并且包括两个同轴亚结构： 外部的 纤维环， 它围绕着内部的髓核。 纤维环是分层的弹性组织， 由以之字形模式(即没有垂直方 向)排列的富含一系列蛋白纤维(主要是II型胶原)的细胞外基质组成。 具体地， 所述的环外 部由I型胶原纤维(称为Sharpey s纤维)组成， 而中心部分由II型胶原和软骨细胞组成。 髓 核是凝胶状组织， 主要由水(健康年轻人中约为85体积)组成， 被蛋白聚糖基质(主要由透 明质酸盐、 软骨素和硫酸角质素组成)吸收， 由位于纤维环最内层部分的软骨细胞产生。 髓。
9、 核充当支承部分， 其支持和分散脊柱连续承受的压力； 纤维环支持拉力并且提供机械支持 以及脊柱的稳定性。 椎间盘是无血管结构， 其从供应相邻骨结构的血管中获取营养。 0003 由于轻伤或更简单的老化， 特别是腰骶部， 椎间盘经受结构修饰， 从而出现障碍， 称为 “椎间盘变性” (Yong-Soo,Asian Spine Journal,2009,3,39-44)。 它涉及一套复杂的 现象， 其病因学不总是同样的， 并且具有不同的临床特征。 它包括年轻人中发现的无症状变 性和特别疼痛形式， 并发明显的姿势变化。 后者通常(但不总是)发生在老年人中， 并且可以 由创伤、 磨损、 营养不良或简单地由。
10、(如所述的)组成椎间盘的结构老化引起。 多种形式的椎 间盘变性包括一个特征： 水含量减少， 导致组成髓核的蛋白质和蛋白聚糖的减少以及结构 修饰； 它变得脱水、 空洞化并且失去它的凝胶状结构和与纤维环的清晰界限。 椎间盘的变性 改变在NMR扫描中清晰可见； 它出现比健康椎间盘整体变薄， 并且表现出颜色变化， 变成不 同深浅的黑色， 这是由于髓核水含量的减少。 这种病理学情况称为黑椎间盘疾病。 吸收震动 并且提供脊柱稳定性的椎间盘的变薄以及能力降低几乎常常伴随炎性因子的释放， 其产生 剧烈疼痛(Rengachary等人,Neurosurg Focus,2002,13,E14)。 0004 在椎间盘。
11、疾病的后续阶段， 髓核还可能压迫纤维环( “肿胀” )， 其可能破裂， 产生疝 气。 0005 在不严重的病例中， 采取保守方法， 基于物理治疗和疼痛控制， 因为疼痛是非常急 性的且让人失去能力。 由于经典的止痛药具有很小或无作用， 通过注射施用臭氧治疗被成 功使用一段时间； 这种疗法利用臭氧有效的抗氧化、 抗炎， 从而止痛作用。 0006 在最严重的病例中， 除了疼痛控制之外， 寻找从功能观点看是有效的并且治疗黑 椎间盘疾病的策略， 即至少部分减少病因并且恢复髓核结构和功能的策略。 在大多数病例 中， 黑椎间盘疾病伴随姿势缺陷， 其反过来产生进一步的僵硬和疼痛。 0007 一种方法是向髓核中。
12、施用能产生蛋白聚糖基质的细胞， 例如来自骨髓的间质干细 说 明 书 1/5 页 3 CN 105188785 B 3 胞， 可能的话组合通过残留细胞促进基质形成的分子(例如生长因子)和炎性细胞因子抑制 剂。 这种方法试图恢复蛋白聚糖基质并且控制疼痛。 0008 然而， 这些治疗仍是试验性的， 需要彻底验证， 因为它们特别是有疑问的(例如关 于所用细胞的数量、 活性物质和它们的浓度以及载体的类型)。 然而， 向髓核施用细胞的有 效性仍有争议； 如先前所述， 这种结构最初不包含细胞， 并且是无血管， 其意味着引入的细 胞的增殖取决于周围结构的血液供给， 确信的是其在病理学情况下是受损的。 0009。
13、 这样一种技术更有前途： 所述的技术涉及向髓核引入 “支承部分” ， 其能吸收并且 分散压力， 从而恢复类似于生理条件的条件。 0010 申请人发现并且证实由具有下列特征的水凝胶组成的 “支承部分” 特别适合于这 种类型的应用： 0011它可以通过最小的侵入植入， 优选注射技术， 从而易于挤出； 0012它留在原位， 没有从植入部位滑出， 因为它具有精确的流变学特征； 0013它具有机械特性(弹性、 可压缩性)， 适合于支持和重新分散压力； 0014它是高度可水合的； 0015它是绝对安全的， 包括它的未修饰形式和降解产物， 所述的降解产物不可避免 地来源于生理学酶活性。 0016 水凝胶(它。
14、的功效由申请人在下面证明)由透明质酸衍生物组成。 透明质酸(HA)是 线性链状杂多糖， 由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡萄胺的交替残基组成。 它天然存在于细胞 外周凝胶中、 脊椎动物的结缔组织的基质中(其中它是主要组分)、 关节的滑液中以及玻璃 体液和脐带中。 因此HA在生物有机体中发挥重要作用， 既作为很多组织细胞的机械支持， 例 如皮肤、 腱、 肌肉和软骨， 又作为粘性液体， 吸收震动并且确保关节表面可以滑越另一个。 0017 天然的透明质酸具有极可变的平均分子量(MW)， 取决于获得的来源和所用的制备 方法， 范围在50至13106Da。 0018 应当注意的是， 本文的 “平均分子量。
15、” 意指重量平均分子量， 通过 “内在粘度” 法计 算(Terbojevich等人,Carbohydr Res,1986,363-377)。 0019 HA的一个基本特征是从化学观点看它可以进行多种修饰， 改变它的流变学和机械 特征， 同时保持它的生物学特征不变。 0020 申请人惊讶地发现现有技术已知的很多HA衍生物(酯、 N-和O-硫酸化衍生物， 内酯 等)中， 最适合于本文描述的应用的是通过在葡糖醛酸残基的羧基和十六烷胺之间形成酰 胺键获得的那些。 申请人还证明通过与黑椎间盘疾病通常所用的臭氧治疗相比， 这些衍生 物不仅引起疼痛症状的显著减少， 而且产生完全未预见的功能改善。 0021 。
16、发明详述 0022 本发明涉及水凝胶形式的药物组合物， 其用于治疗椎间盘变性， 特别是髓核脱水 和空洞化形式， 称为 “黑椎间盘疾病” 。 特别是本发明的药物组合物在治疗黑椎间盘疾病的 疼痛治疗中以及在矫正与黑椎间盘疾病相关的骨盆投射角(incidence angle)和姿势变化 所需的治疗中是有效的。 0023 所述的组合物包含透明质酸衍生物， 其形成具有精确流变特征的水凝胶， 这使得 其成为填充髓核的理想物质。 特别是， 所用的HA衍生物是十六烷基酰胺。 0024 如先前所述， HA的MW范围可以为50至13106Da。 本发明所用的HA可以是任何来源 说 明 书 2/5 页 4 CN 1。
17、05188785 B 4 的， 例如从鸡冠(EP138572)提取、 发酵(来自马链球菌(Streptococcus equi)或兽疫链球菌 (zooepidemicus)， EP716688)或生物合成(来自芽孢杆菌属(Bacillus)， WO2012032153、 WO 2012032154)， 并且重量平均分子量范围400至3106Da， 特别是105Da至106Da， 并且甚至更 特别是500,000至730,000Da。 0025 本发明所用的酰胺衍生物是由后者级分制备的。 0026 透明质酸酰胺是技术人员已知的； 例如， EP1095064中公开的大量透明质酸酰胺 (苄基、 辛基。
18、、 十二烷基等)的制备。 0027 仅仅如下面描述制备的十六烷基酰胺是根据本发明使用的。 简而言之， 将预先衍 生化成四丁基铵盐(TBA)的透明质酸溶于二甲亚砜(DMSO)中， 并且向产生的溶液中加入甲 磺酸。 然后加入羰基二咪唑， 并且将混合物在搅拌下在室温反应1小时。 然后加入十六烷基 胺， 并且将混合物在40 -42反应约16-24小时。 然后加入NaCl饱和溶液终止反应， 并且加 入无水乙醇， 通过沉淀分离衍生物。 沉淀物先用水和乙醇混合物洗涤， 然后单独用乙醇洗 涤， 并且最后高真空干燥。 0028 衍生化程度通过改变所用试剂的量和变化反应时间来调节； 衍生化程度可以通过 现有技术已。
19、知的方法测量， 例如HPLC。 在本发明范围内， 所用的酰胺化程度范围为0.1至 10摩尔， 优选1至3摩尔， 在水解酰胺并且将释放的十六烷基胺与荧光物质连接后通 过HPLC测量。 0029 从由此获得的衍生物开始， 水凝胶可以配制的浓度范围为0.1至30mg/mL， 优选3至 20mg/mL， 并且甚至更优选5至15mg/mL。 所用的载体优选是盐水溶液或磷酸盐缓冲液。 0030 在优选的本发明的药物组合物中， 透明质酸平均MW范围为500,000至730,000Da， 摩尔酰胺化程度范围为1至3， 并且透明质酸十六烷基酰胺浓度范围为5至15mg/mL。 0031 获得的水凝胶在引入预填充一。
20、次性注射器后进行已知技术的灭菌处理， 例如在高 压灭菌器中。 0032 不管浓度， 获得的水凝胶易于挤出， 具有确保它应用后留在原位的粘性， 具有确保 它吸收和再分散负荷的弹性， 并且具有高度可水合性； 它还保留起始聚合物透明质酸的生 物学特性， 因此是生物相容的、 生物可吸收的， 并且完全对机体无害， 无论是它的未修饰状 态还是酶降解后。 0033 鉴于它的独特性质， 水凝胶可以与认为能改善黑椎间盘的症状的生物学或药理学 活性物质(例如甾体或非甾体抗炎药、 细胞因子抑制剂和局部麻醉剂)组合。 这些物质可以 是在应用于患者前随即装入注射器中， 从而水凝胶既用作治疗黑椎间盘又用作活性物质的 载体。
21、。 0034 下面列出了一些制备实施例， 仅用于描述目的。 0035 实施例1 0036 重量平均分子量范围为500至730kDa并且摩尔酰胺化含量范围为1至3的HA的十 六烷基酰胺衍生物的制备 0037 将2g预先衍生化成TBA盐的HA溶于200mL DMSO中， 并且向产生的溶液中加入64 L 甲磺酸； 然后加入52mg 1,1 -羰基二咪唑， 并且在温和搅拌下室温反应1小时。 然后加入 544mg十六烷基胺， 并且酰胺化反应是在42进行16-24小时。 然后加入NaCl饱和溶液终止 反应， 并且15-30分钟后加入1.5倍体积的无水乙醇， 通过沉淀分离衍生物。 沉淀物用80:20 说 明。
22、 书 3/5 页 5 CN 105188785 B 5 乙醇/水洗涤数次， 然后单独用乙醇洗涤数次， 并且最后在高真空和40干燥。 0038 获得1.2g十六烷基酰胺衍生物， HPLC测得的酰胺化程度为约2-3摩尔。 0039 实施例2 0040 如实施例1中描述获得的浓度为8mg/mL的HA十六烷基酰胺衍生物的水凝胶的制备 0041 将2g如实施例1中描述获得的HA十六烷基酰胺衍生物放入合适的容器中， 并且加 入250mL磷酸盐缓冲液(PBS)， pH 6.9。 缓冲液包含8.5mg/mL NaCl、 0.45mg/mL Na2HPO4 12H2O和0.11mg/mL NaH2PO42H2O。
23、。 0042 将混合物在室温搅拌至少2小时， 并且在60约1小时。 之后， 将T恢复至20-25， 并且将混合物搅拌2-4小时。 将产生的包含8mg/mL透明质酸十六烷基酰胺的混合物分装到 玻璃注射器中， 然后在约121进行湿热灭菌循环(10分钟)。 0043 实施例3 0044 用HA十六烷基酰胺相对于臭氧治疗患有黑椎间盘疾病的患者： 初步研究 0045 NMR扫描用于其它诊断目的， 确定11名在腰部(L3)患有黑椎间盘疾病的患者并且 根据下列方案治疗。 0046 材料和方法： 0047麻醉剂溶液(1卡抱卡因)； 0048臭氧27； 0049如实施例2描述制备的HA十六烷基酰胺水凝胶(8mg。
24、/mL)； 0050技术： 在通过渗透皮肤麻醉后引导放射镜渗入； 通过观察腰部区域两个垂直突 出物确定穿刺部位； 0051 患者分为两个组： 0052 A)6名患者用0.5cc水凝胶治疗； 0053 B)5名患者用3cc臭氧27治疗(对照)。 0054 治疗后患者休息数小时， 并且如果需要除去基于对乙酰氨基酚的止痛治疗。 所有 患者进行残疾鉴定(RMDQ-Roland Morris Disability Questionnaire)和疼痛评估(VAS- Visual Analogue Scale)， 并且6个月后， 矢状面NMR扫描评价骨盆投射角的任何变化。 0055 结果： 0056 RMD。
25、Q： 两组所有患者报告降低了运动性方面的残疾并且改善了生活质量， 其具有 可比较的程度。 0057 VAS量表： 所有患者再次报告疼痛显著减轻， 并且对于臭氧治疗组， 这结果是预期 的， 而对于用衍生的HA水凝胶治疗的A组， 这结果当然是令人惊讶的； 0058 X-射线评估： 在A组的患者中， 观察到椎间盘的正常化； 在NMR扫描上其显示更白， 因此发生了水合， 并且与未治疗的健康椎间盘非常相似。 A组的患者在骨盆投射角方面也出 现显著的改善。 0059 然而， 在用臭氧治疗的B组的患者中没有观察到这些功能效果： 不仅椎间盘的外观 没有改善(正常化)， 实际上在3个病例中还出现恶化， 而且治疗对骨盆投射角没有效果。 0060 结论： 0061 尽管这仅是用少量患者进行的初步研究， 但是显而易见的是用透明质酸十六烷基 酰胺治疗不仅对患有黑椎间盘疾病的患者的症状而且对上述所有功能都具有令人惊讶的 说 明 书 4/5 页 6 CN 105188785 B 6 有利的效果。 0062 本文给出的数据明确地证明用透明质酸十六烷基酰胺治疗不仅具有与臭氧治疗 可比较的止痛效果， 而且上述所有具有预料不到的疗效， 其恢复了髓核的水合， 并且矫正了 所有患有黑椎间盘疾病的患者表现出的姿势缺陷。 说 明 书 5/5 页 7 CN 105188785 B 7 。