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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710881332.9 (22)申请日 2017.09.26 (71)申请人 金宇保灵生物药品有限公司 地址 010030 内蒙古自治区呼和浩特市鄂 尔多斯西街58号 (72)发明人 陈永利 齐彪 赵丽霞 郭建军 亢和平 王喜龙 (74)专利代理机构 北京尚诚知识产权代理有限 公司 11322 代理人 鲁兵 郭凡 (51)Int.Cl. A61L 2/07(2006.01) A61L 2/02(2006.01) G01N 15/08(2006.01) (54)发明名称 一种。
2、口蹄疫疫苗用佐剂的除菌方法 (57)摘要 本发明公开了一种口蹄疫疫苗用佐剂的除 菌方法， 使用用于佐剂除菌过滤器蒸汽灭菌和完 整性检测的在线系统， 依次包括： 过滤前佐剂除 菌过滤器完整性检测、 佐剂除菌过滤器在线高压 蒸汽灭菌、 佐剂过滤、 过滤后佐剂除菌过滤器完 整性检测。 该除菌方法采用过滤的方式对佐剂进 行除菌， 能更完整地保留佐剂的有效成分， 从而 更有效地提高疫苗产品质量， 使口蹄疫疫苗更加 安全、 稳定、 有效。 权利要求书2页 说明书7页 附图1页 CN 107441522 A 2017.12.08 CN 107441522 A 1.一种口蹄疫疫苗用佐剂的除菌方法， 其特征在于。
3、， 使用用于佐剂除菌过滤器蒸汽灭 菌和完整性检测的在线系统， 依次包括： 过滤前佐剂除菌过滤器完整性检测、 佐剂除菌过滤 器在线高压蒸汽灭菌、 佐剂过滤、 过滤后佐剂除菌过滤器完整性检测。 2.根据权利要求1所述除菌方法， 其特征在于， 所述在线系统包括第一空气滤器、 第二 空气滤器、 膨胀罐、 倒扣在盛水容器中并充满水的量筒、 为所述在线系统提供灭菌蒸汽的纯 蒸汽储罐和为所述在线系统提供完整性检测气体的压缩空气储罐； 其中， 纯蒸汽储罐与压 缩空气储罐并列与第一空气滤器的进口端连接， 第一空气滤器的出口端与待检测和灭菌的 佐剂除菌过滤器的入口端相连， 佐剂除菌过滤器的出口端与膨胀罐相连； 膨。
4、胀罐设有与第 二空气滤器的入口端相连的气体出口， 还设有与污水管路相连的液体出口； 第二空气滤器 的出口端分别与污水管路和量筒相连。 3.根据权利要求2所述除菌方法， 其特征在于， 所述佐剂除菌过滤器的入口端之前设有 第一压力传感器， 出口端之后设有第二压力传感器； 优选的， 所述佐剂除菌过滤器的顶端还 设有一排气小嘴。 4.根据权利要求2或3所述除菌方法， 其特征在于， 还包括与所述第一空气滤器并联设 置的纯化水储罐； 优选的， 还包括与所述第一空气滤器和纯化水储罐并联设置的待过滤料 液储罐； 优选的， 所述佐剂除菌过滤器的出口端还设有一与所述膨胀罐并联的过滤液罐体。 5.根据权利要求2-4。
5、任一所述除菌方法， 其特征在于， 所述佐剂除菌过滤器的滤芯材料 选自聚四氟乙烯(PTFE)或聚三氟氯乙烯(PCTFE)。 6.根据权利要求2-5任一所述除菌方法， 其特征在于， 所述过滤前佐剂除菌过滤器完整 性检测具体为： 将佐剂除菌过滤器安装在所述在线系统中， 向佐剂除菌过滤器中通入纯化 水， 使得纯化水充满整个佐剂除菌过滤器后静置， 至滤芯完全湿润； 量筒内加满水， 倒扣在 盛满水的容器内， 倒扣的量筒内仍然充满水， 打开压缩空气储罐， 压缩空气储罐排出的空气 依次通过第一空气滤器、 佐剂除菌过滤器、 膨胀罐和第二空气滤器后排至量筒； 若量筒中收 集的气体量高于滤芯的扩散流合格值， 说明完。
6、整性不合格； 若量筒中收集的气体量不高于 滤芯的扩散流合格值， 说明完整性合格。 7.根据权利要求2-6任一所述除菌方法， 其特征在于， 所述佐剂除菌过滤器在线高压蒸 汽灭菌为对完整性检测结果合格的佐剂除菌过滤器在原位进行高压蒸汽灭菌， 具体为： 打 开纯蒸汽储罐， 纯蒸汽储罐排出的高温纯蒸汽依次通过第一空气滤器、 佐剂除菌过滤器、 膨 胀罐和第二空气滤器后排至污水管路， 完成在线高压蒸汽灭菌； 优选的， 在线高压蒸汽灭菌 压力为0.1-0.15Mpa， 灭菌温度为121， 灭菌时间为50-60min。 8.根据权利要求1-7任一所述除菌方法， 其特征在于， 所述过滤后佐剂除菌过滤器完整 性检。
7、测具体为： 采用泡点检测法检测过滤佐剂后的佐剂除菌过滤器的泡点值； 在2500mbar 压力下， 若泡点值大于等于1400mbar， 说明佐剂除菌过滤器在整个过滤过程中完整性合格， 过滤除菌成功； 若泡点值小于1400mbar， 说明佐剂除菌过滤器在整个过滤过程中完整性不 合格， 过滤除菌不成功。 9.根据权利要求1-8任一所述除菌方法， 其特征在于， 所述佐剂过滤过程中， 佐剂的流 速在40-45kg/min， 压力在0.2-0.25Mpa之间。 10.一种口蹄疫疫苗的制备方法， 包括油相佐剂的除菌、 水相抗原的制备、 和油相佐剂 与水相抗原的乳化， 其特征在于， 所述油相佐剂的除菌根据权利。
8、要求1-9任一所述除菌方法 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 107441522 A 2 完成。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 107441522 A 3 一种口蹄疫疫苗用佐剂的除菌方法 技术领域 0001 本发明涉及生物制药技术领域中的除菌方法， 特别是涉及一种对口蹄疫疫苗用佐 剂进行除菌的方法。 背景技术 0002 口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的发生在偶蹄动物上的一种急性、 热性、 高度接触 性传染病， 主要侵害偶蹄兽。 该病传播途径多、 速度快， 曾多次在世界范围内暴发流行， 造成 巨大政治、 经济损失， 世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类传染病之首。 目前口蹄疫疫。
9、苗是 防治口蹄疫的发生、 流行最主要的武器之一。 0003 口蹄疫疫苗是一种由脂溶性的佐剂和水溶性的抗原物质乳化后形成的乳状液。 因 此佐剂是制作口蹄疫疫苗过程中必不可少的组成成分， 佐剂可改变抗原物理性状， 使抗原 物质在体内缓慢释放， 延长了抗原的作用时间， 提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度 并刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。 0004 由于口蹄疫疫苗是乳状液， 油相的佐剂和水相的抗原物质需要分别灭菌后再混 合， 否则会导致口蹄疫疫苗的污染报废， 从而不能使用。 高压灭菌是目前业内普遍采用的佐 剂灭菌方式， 但是高压灭菌会使佐剂中含有的表面活性剂氧化， 表面活性剂的作用本是促 。
10、使水相和油相均匀混合形成乳状液， 表面活性剂的氧化， 使得水相不能均匀地分散在油相 中， 因此高压灭菌佐剂会通过破坏佐剂的稳定性， 从而影响口蹄疫疫苗的质量。 0005 因此， 本领域亟需一种不破坏口蹄疫疫苗用佐剂稳定性的除菌方法。 发明内容 0006 本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷， 第一方面， 提供一种不影响稳 定性的口蹄疫疫苗用佐剂的除菌方法， 使用用于佐剂除菌过滤器蒸汽灭菌和完整性检测的 在线系统， 依次包括： 过滤前佐剂除菌过滤器完整性检测、 佐剂除菌过滤器在线高压蒸汽灭 菌、 佐剂过滤、 过滤后佐剂除菌过滤器完整性检测。 0007 所述在线系统包括第一空气滤器、 第二空。
11、气滤器、 膨胀罐、 倒扣在盛水容器中并充 满水的量筒、 为所述在线系统提供灭菌蒸汽的纯蒸汽储罐和为所述在线系统提供完整性检 测气体的压缩空气储罐； 其中， 纯蒸汽储罐与压缩空气储罐并列与第一空气滤器的进口端 连接， 第一空气滤器的出口端与待检测和灭菌的佐剂除菌过滤器的入口端相连， 佐剂除菌 过滤器的出口端与膨胀罐相连； 膨胀罐设有与第二空气滤器的入口端相连的气体出口， 还 设有与污水管路相连的液体出口； 第二空气滤器的出口端分别与污水管路和量筒相连。 0008 所述佐剂除菌过滤器的入口端之前设有第一压力传感器， 出口端之后设有第二压 力传感器； 优选的， 所述佐剂除菌过滤器的顶端还设有一排气小。
12、嘴。 0009 还包括与所述第一空气滤器并联设置的纯化水储罐； 优选的， 还包括与所述第一 空气滤器和纯化水储罐并联设置的待过滤料液储罐； 优选的， 所述佐剂除菌过滤器的出口 端还设有一与所述膨胀罐并联的过滤液罐体。 说 明 书 1/7 页 4 CN 107441522 A 4 0010 所述佐剂除菌过滤器的滤芯材料选自聚四氟乙烯(PTFE)或聚三氟氯乙烯 (PCTFE)。 0011 所述过滤前佐剂除菌过滤器完整性检测具体为： 将佐剂除菌过滤器安装在所述在 线系统中， 向佐剂除菌过滤器中通入纯化水， 使得纯化水充满整个佐剂除菌过滤器后静置， 至滤芯完全湿润； 量筒内加满水， 倒扣在盛满水的容器。
13、内， 倒扣的量筒内仍然充满水， 打开 压缩空气储罐， 压缩空气储罐排出的空气依次通过第一空气滤器、 佐剂除菌过滤器、 膨胀罐 和第二空气滤器后排至量筒； 若量筒中收集的气体量高于滤芯的扩散流合格值， 说明完整 性不合格； 若量筒中收集的气体量不高于滤芯的扩散流合格值， 说明完整性合格。 0012 所述佐剂除菌过滤器在线高压蒸汽灭菌为对完整性检测结果合格的佐剂除菌过 滤器在原位进行高压蒸汽灭菌， 具体为： 打开纯蒸汽储罐， 纯蒸汽储罐排出的高温纯蒸汽依 次通过第一空气滤器、 佐剂除菌过滤器、 膨胀罐和第二空气滤器后排至污水管路， 完成在线 高压蒸汽灭菌； 优选的， 在线高压蒸汽灭菌压力为0.1-。
14、0.15Mpa， 灭菌温度为121， 灭菌时 间为50-60min。 0013 所述过滤后佐剂除菌过滤器完整性检测具体为： 采用泡点检测法检测过滤佐剂后 的佐剂除菌过滤器的泡点值； 在2500mbar压力下， 若泡点值大于等于1400mbar， 说明佐剂除 菌过滤器在整个过滤过程中完整性合格， 过滤除菌成功； 若泡点值小于1400mbar， 说明佐剂 除菌过滤器在整个过滤过程中完整性不合格， 过滤除菌不成功。 0014 所述佐剂过滤过程中， 佐剂的流速在40-45kg/min， 压力在0.2-0.25Mpa之间。 0015 第二方面， 本发明提供一种口蹄疫疫苗的制备方法， 包括油相佐剂的除菌、。
15、 水相抗 原的制备、 和油相佐剂与水相抗原的乳化， 所述油相佐剂的除菌根据上述除菌方法完成。 0016 本发明提供的除菌方法采用过滤的方式对佐剂进行除菌， 能更完整地保留佐剂的 有效成分， 从而更有效地提高疫苗产品质量， 使口蹄疫疫苗更加安全、 稳定、 有效。 本发明的 除菌方法所使用的佐剂除菌过滤器采用在线高压蒸汽方式灭菌， 有效地避免了高压灭菌柜 灭菌后佐剂除菌过滤器的取出、 传送及佐剂除菌过滤器与反应器连接过程中被污染的风 险。 使用前后均采用在线系统对佐剂除菌过滤器的完整性进行检测， 保证过滤后佐剂的无 菌性进而保障口蹄疫疫苗的安全性、 稳定性、 有效性。 附图说明 0017 图1所示。
16、为佐剂除菌过滤器蒸汽灭菌和完整性检测的在线系统的结构示意图。 具体实施方式 0018 虽然目前已有采用过滤除菌技术制备油相的工艺， 但由于存在以下两个缺陷， 使 得过滤除菌还不能用于口蹄疫疫苗的油相佐剂： 0019 缺陷一： 0020 佐剂除菌过滤器由滤芯和滤壳组成， 滤芯按操作规程安装在指定滤壳内， 最后套 上滤壳套筒， 用卡箍或螺栓固定。 佐剂除菌过滤器在使用前需要对其完整性进行检测， 检测 合格后再进行灭菌。 即： 完整性检测完毕后， 将检测结果合格的佐剂除菌过滤器包扎后搬运 到蒸汽灭菌柜内进行高压蒸汽灭菌。 然而在搬运佐剂除菌过滤器的过程中会因种种因素破 坏佐剂除菌过滤器的完整性， 严。
17、重影响佐剂除菌过滤器在实际使用过程中的过滤效果。 但 说 明 书 2/7 页 5 CN 107441522 A 5 如果待灭菌完毕后再进行一次完整性检测不仅增加工艺成本， 还会向佐剂除菌过滤器中引 入杂质， 使佐剂除菌过滤器被污染， 导致之前的灭菌无效。 因此， 灭菌后无法再进行完整性 检测， 无法保证灭菌后的佐剂除菌过滤器完整性100合格。 0021 缺陷二： 0022 目前过滤佐剂使用的滤芯材质为聚丙烯， 该材质的滤芯并不能保证佐剂的无菌， 而生产口蹄疫疫苗要求过滤后的佐剂为无菌。 0023 本发明提供了一种口蹄疫疫苗配制所用佐剂的除菌方法， 通过过滤的方式除菌以 避免佐剂在高压灭菌时有效。
18、成分氧化， 其稳定性被破坏， 从而影响生产得到的口蹄疫疫苗 的质量。 该除菌方法包括： 过滤前佐剂除菌过滤器完整性检测佐剂除菌过滤器在线高压 蒸汽灭菌佐剂过滤过滤后佐剂除菌过滤器完整性检测。 同时， 发明人在众多滤芯材料 中筛选出聚四氟乙烯(PTFE)用作滤芯， 能够保证过滤后的佐剂为无菌。 0024 整个除菌方法使用用于佐剂除菌过滤器蒸汽灭菌和完整性检测的在线系统实现， 如图1所示， 包括第一空气滤器1、 第二空气滤器2、 膨胀罐3、 量筒4、 第一压力传感器5、 第二 压力传感器6、 纯蒸汽储罐7(购自长春富士特流体设备有限公司， 容量为5000L)、 压缩空气 储罐8、 纯化水储罐9、 。
19、待过滤料液储罐10、 排气小嘴11、 温度传感器12、 污水管路13、 及若干 个阀门。 0025 其中， 0026 纯蒸汽储罐7为整个在线系统提供121的水蒸气， 用来对佐剂除菌过滤器的滤芯 进行灭菌。 压缩空气储罐8为整个系统提供空气， 使整个系统内保持正压。 纯蒸汽储罐7与压 缩空气储罐8并列与第一空气滤器1的进口端连接。 第一空气滤器1用来过滤水蒸气和空气， 确保水蒸气和空气的无菌， 同时也为佐剂除菌过滤器的完整性检测提供无菌气源。 第一空 气滤器1的出口端与待检测和灭菌的佐剂除菌过滤器 的入口端相连。 佐剂除菌过滤器 的 出口端分别连接有膨胀罐3、 过滤液罐体或下一级在线系统14。 。
20、膨胀罐3的作用为在佐剂除 菌过滤器做完整性检测时收集气体， 然后将收集到的气体用于检测扩散流是否合格。 膨胀 罐3中的液体出口与污水管路13相连； 膨胀罐3中的气体出口与第二空气滤器2的进口端相 连， 用来过滤空气， 防止佐剂除菌过滤器在完整性检测过程中外界的空气进入， 污染整个在 线系统。 第二空气滤器2的出口端分别与污水管路13、 量筒4相连。 量筒里加满水倒置在储水 容器(储水容器的横截面大于量筒， 一般采用水桶)内， 接收通过佐剂除菌过滤器的气体， 量 筒内水排出的体积即为收集到的气体量， 以此判定佐剂除菌过滤器的完整性是否合格。 纯 化水储罐9、 待过滤料液储罐10并列与佐剂除菌过滤。
21、器 的入口端连接， 且与第一空气滤器1 并联。 0027 为了防止在灭菌过程中纯蒸汽的压力过大， 将佐剂除菌过滤器的滤膜吹破， 在佐 剂除菌过滤器进行灭菌时， 要严格控制佐剂除菌过滤器前后的压力差， 于是在佐剂除菌过 滤器的入口端之前设有第一压力传感器5， 在出口端之后设有第二压力传感器6， 通过控制 第一压力传感器5和第二压力传感器6之间的压力差， 可确保滤芯不被破坏。 0028 利用以上在线系统对佐剂除菌过滤器进行在线蒸汽灭菌和完整性检测的过程如 图1中箭头所示， 黑色粗线条箭头表示气体的走向， 黑色三角箭头表示水蒸气冷凝成液体后 的走向， 灰色三角箭头表示其它液体的走向， 具体为： 00。
22、29 (1)、 充分湿润滤芯 说 明 书 3/7 页 6 CN 107441522 A 6 0030 佐剂除菌过滤器安装在上述在线系统中， 打开纯化水储罐9的阀门向佐剂除菌过 滤器中通入纯化水， 使得纯化水注满整个佐剂除菌过滤器后静置， 使滤芯完全浸泡在水中 40-50min， 确保滤芯完全湿润， 如图1中灰色三角箭头所示。 0031 (2)、 完整性检测 0032 如图1中黑色粗线条箭头所示， 按照滤芯扩散流测试的压力要求设定压力后， 打开 压缩空气储罐8的阀门， 待压力达到规定要求时关闭阀门； 此时量筒内加满水， 倒扣在盛满 水的容器内， 确保倒扣的量筒内仍然充满水； 压缩空气储罐8排出的。
23、空气依次通过第一空气 滤器1、 佐剂除菌过滤器 和膨胀罐3。 空气到达膨胀罐3时， 膨胀罐内的压力增加， 气体通过 第二空气滤器2排至量筒4， 观察1分钟内量筒中收集的气体量， 对照滤芯说明书中的扩散流 合格值， 确定佐剂除菌过滤器的完整性是否合格， 若量筒中收集的气体量高于滤芯说明书 提供的扩散流合格值说明完整性不合格， 反之说明完整性合格。 0033 (3)、 在线蒸汽灭菌 0034 检测结果为合格的佐剂除菌过滤器将继续自动进行灭菌， 设定好第一压力传感器 5与第二压力传感器6的压力差， 打开纯蒸汽储罐7的阀门， 待各管路上的温度传感器12的温 度均达到规定温度时灭菌开始， 纯蒸汽储罐7排。
24、出的纯蒸汽依次通过第一空气滤器1、 佐剂 除菌过滤器 和膨胀罐3。 纯蒸汽到达膨胀罐3时， 膨胀罐内的压力增加， 气体通过第二空气 滤器2排至污水管路13。 纯蒸汽在膨胀管3内会冷凝成液态的水， 水由膨胀罐3的液体出口排 至污水管路13。 0035 (4)、 在线无菌完整性检测 0036 灭菌结束后， 待佐剂除菌过滤器的温度降到室温时， 重复步骤(2)的操作， 对佐剂 除菌过滤器再次进行完整性检测， 确保在灭菌过程中佐剂除菌过滤器没被破坏， 检测合格 的产品从在线系统中取下， 进行后续的包装工艺即可。 0037 该用于佐剂除菌过滤器蒸汽灭菌和完整性检测的在线系统操作简单， 全程可自动 化控制，。
25、 不受人为因素的干扰； 整个灭菌和完整性检测的过程中无需人员搬运， 节约劳动 力， 又避免了在搬运过程中存在的佐剂除菌过滤器完整性被破坏的风险。 该在线系统可以 随时对佐剂除菌过滤器进行完整性检测， 并可在灭菌后、 过滤过程中或过滤结束后对佐剂 除菌过滤器进行完整性检测， 既不会影响佐剂除菌过滤器的无菌性， 又能确保佐剂除菌过 滤器的安全。 例如， 待过滤料液储罐10与佐剂除菌过滤器相连， 过滤后的料液可直接排至过 滤液罐体， 过滤结束后， 可再利用在线系统对佐剂除菌过滤器进行完整性检测。 0038 本发明的除菌方法中所用的滤芯为能够用于在线高压蒸汽灭菌的专用材质滤芯， 型号为5182507T。
26、2-GA ,材质为聚四氟乙烯(PTFE) ， 购自德国赛多利斯斯泰帝公司 (Sartorius Stedim Biotech)。 将若干个耐高压蒸汽灭菌、 能够过滤佐剂的滤芯(以两个为 例)分别用两级在线系统(有多少个滤芯， 在线系统就有多少级， 每级在线系统串联连接)检 漏， 检测通过后将滤芯串联并进行在线高压灭菌， 灭菌结束后自然冷却降温， 降至室温后备 用。 过滤时佐剂储存罐用洁净压缩空气补压至0.2Mpa， 打开佐剂除菌过滤器与佐剂储存罐 之间隔膜阀， 打开佐剂除菌过滤器的排气小嘴待佐剂除菌过滤器灌满佐剂时关闭排气小嘴 11开始过滤， 过滤过程中两级在线系统的压差不可超过0.05Mpa。
27、。 佐剂过滤完成后再用在线 系统对第二级滤芯进行泡点值的检测， 检测通过后佐剂过滤完成。 0039 本发明口蹄疫疫苗用佐剂的除菌方法， 以两个滤芯为例， 具体包括以下步骤： 说 明 书 4/7 页 7 CN 107441522 A 7 0040 1)将2组20英寸3芯佐剂除菌过滤器分别装入串联的两级在线系统， 向佐剂除菌过 滤器中灌满纯化水， 打开在线系统待自检程序结束后进入水浸入测试程序， 用水浸入法检 测两组佐剂除菌过滤器的完整性， 完整性通过的佐剂除菌过滤器备用。 由于滤芯为只可过 滤油相佐剂不可过滤水的材质， 所以采用水侵入法检测其完整性， 在压力值为2500mbar下 水侵入值小于等。
28、于2.22ml/min， 说明滤芯的完整性通过； 该步骤的检测结果决定着所使用 的滤芯是否可用， 是开始筛选的最为关键的一步， 否则要更换新的滤芯重复检测直至完整 性通过为止。 0041 2)将通过步骤1)完整性检测的佐剂除菌过滤器与纯蒸汽储罐7通过耐压管相连， 给纯蒸汽储罐7升温， 当纯蒸汽储罐7温度达到121时打开与佐剂除菌过滤器耐压管相连 的阀门开始在线灭菌， 在线灭菌时长为50-60min， 灭菌之后给纯蒸汽储罐7通入冷却水降 温， 待纯蒸汽储罐7压力稳定在0.1-0.15Mpa后， 用洁净压缩空气吹扫佐剂除菌过滤器降温 50-70min至室温20-30， 备用。 0042 在线高压灭。
29、菌过程中纯蒸汽储罐7及佐剂除菌过滤器的两级压差不宜超出0.01- 0.05MPa， 同时保持排气小嘴的通畅， 以保证高压灭菌的彻底性。 0043 3)用步骤2)灭菌后的除菌过滤器对佐剂进行过滤， 过滤过程中先缓慢打开两组佐 剂除菌过滤器的进料阀， 然后先后打开两组佐剂除菌过滤器的排气小嘴， 使佐剂逐级充满 佐剂除菌过滤器， 待佐剂除菌过滤器充满后关闭排气小嘴开始过滤， 在过滤过程中要保持 佐剂除菌过滤器的进口压力和流速， 进口压力控制在0.2Mpa0.25Mpa之间， 流速在40kg/ min45kg/min左右， 压力与流速成正比关系。 若压力过高一方面会破坏过滤器的膜孔， 影 响过滤的无菌。
30、性； 另一方面， 压力过高也会损坏滤壳的连接部件危害操作人员的安全。 若压 力过低则滤芯润湿不够， 影响滤后滤器的完整性检测， 同时压力过低也会导致流速过低， 延 长过滤时间增加生产不确定因素， 进而对安全生产带来隐患。 过滤过程中两组佐剂除菌过 滤器压差不宜超过0.1-0.15Mpa， 否则视为滤芯损坏停止过滤， 需重新进行步骤1)、 步骤2)。 0044 4)过滤结束后用在线系统对过滤佐剂的第二组佐剂除菌过滤器采用泡点检测方 式进行完整性检测； 由于佐剂除菌过滤器过滤佐剂后滤壳内全部为佐剂， 无法再用水侵入 法检测其完整性， 所以选用泡点检测方式检测其完整性。 之所以检测第二级佐剂除菌过滤。
31、 器的泡点值， 因为第二级佐剂除菌过滤器直接与待过滤料液储罐10相连， 若第二级佐剂除 菌过滤器泡点检测通过证明两组佐剂除菌过滤器在使用过程中均未遭到破坏， 过滤后的佐 剂是无菌的。 在2500mbar压力下， 若泡点值大于等于1400mbar证明过滤除菌过程至结束佐 剂除菌过滤器完整性检测合格， 过滤除菌成功。 此步骤决定最终过滤产品的无菌性， 是检验 前面所有操作的最终结果， 若未通过则需重新进行步骤1)、 步骤2)、 步骤3)。 0045 在以上除菌方法的基础上， 本发明还提供了一种口蹄疫疫苗的制备方法， 具体包 括以下步骤： 0046 1、 油相的除菌 0047 (1)佐剂抽取进入待过。
32、滤料液储罐10 0048 清洗待过滤料液储罐10后打开真空泵， 用真空将佐剂抽取进入待过滤料液储罐 10。 0049 (2)完整性检测及在线高压灭菌佐剂除菌过滤器 0050 将所需滤芯装入滤壳， 在线系统与佐剂除菌过滤器连接， 纯化水储罐9向佐剂除菌 说 明 书 5/7 页 8 CN 107441522 A 8 过滤器灌满纯化水， 两组佐剂除菌过滤器的进口分别连接(即两组佐剂除菌过滤器并联后 连接)压缩空气储罐8， 用水侵入法检测完整性。 完整性检测通过后将两组佐剂除菌过滤器 通过耐压管串联。 第一组佐剂除菌过滤器的进口连接纯蒸汽储罐7， 第二组佐剂除菌过滤器 的出口连接过滤后佐剂进入的过滤液。
33、罐体。 用洁净蒸汽吹扫佐剂除菌过滤器1-2h后， 将佐 剂除菌过滤器降至室温， 灭菌结束。 0051 (3)佐剂过滤 0052 将佐剂除菌过滤器进口与待过滤料液储罐10相连， 佐剂除菌过滤器出口与已灭菌 好存放过滤后佐剂的过滤液罐体相连。 用压缩空气储罐8中的洁净压缩空气给待过滤料液 储罐10补压至0.2Mpa， 打开第一组佐剂除菌过滤器排气小嘴， 缓缓打开第一组佐剂除菌过 滤器进口隔膜阀， 待排气小嘴排出佐剂时关闭排气小嘴并打开第二组佐剂除菌过滤器与第 一组佐剂除菌过滤器之间的隔膜阀， 打开第二组佐剂除菌过滤器排气小嘴， 待排气小嘴排 出佐剂时关闭排气小嘴， 打开佐剂除菌过滤器出口耐压管与过。
34、滤液罐体相连的隔膜阀， 开 始过滤。 过滤过程中两级佐剂除菌过滤器压差不可超过0.05Mpa， 过滤结束后， 用在线系统 对第二组佐剂除菌过滤器进行泡点检测， 待泡点检测结束通过后进行清场， 佐剂过滤完成。 0053 (4)无菌检测 0054 依据2015版兽药典对过滤后的佐剂进行无菌检测： 用高压灭菌后的250ml玻璃取 样瓶取样100ml进行无菌检测， 开启层流罩半小时后进入无菌间在酒精灯下用一次性注射 器抽取样品1ml接种50ml硫乙醇酸盐流体培养基(TG)大管置37恒温培养箱培养3日后吸 取培养物， 接种硫乙醇酸盐流体培养基(TG)小管两支， 每支0.2ml， 一支置37恒温培养箱 中。
35、培养， 一支置25恒温培养箱培养， 另取0.2ml， 接种一支胰酪大豆胨液体培养基(TSB)小 管， 置25恒温培养箱， 均培养7日， 每天观察一次， 无菌生长说明佐剂无菌。 0055 2、 水相的制备 0056 1)按照如下配方将各物质溶解于水后， 配制得到磷酸盐缓冲液,配方如下： 0057 0058 0059 2)将抗原、 磷酸盐缓冲液过滤除菌后加入到已灭菌好的水相罐中备用； 0060 3、 乳化 0061 将油相、 水相温度控制在301， 将水相缓慢加入到油相中， 加入速度控制在 2.2-3.0ml/min之间， 水相和油相的比例可按照(54-60)： (46-40)的体积比添加， 乳化。
36、搅拌 频率设置为35-40Hz进行乳化， 待水相全部进入油相后继续搅拌25-30min， 将搅拌频率调整 为3-5Hz， 用乙二醇降温至15以下， 即得到口蹄疫疫苗， 进行分装。 0062 以下结合具体实施例， 更具体地说明本发明的内容， 并对本发明作进一步阐述， 但 这些实施例绝非对本发明进行限制。 0063 实施例中使用的手段， 如无特别说明， 均使用本领域常规的手段。 说 明 书 6/7 页 9 CN 107441522 A 9 0064 试验例一 过滤佐剂滤芯材质的筛选 0065 试验中佐剂过滤均采用双级过滤， 将两个20英寸滤芯串联使用。 所用滤壳均为美 国颇尔公司生产20英寸3芯滤。
37、壳， 共两个串联。 在灭菌之前使用在线系统用水侵入法对滤芯 进行完整性检测， 佐剂除菌过滤器采用在线系统进行高压蒸汽灭菌， 灭菌结束后用洁净压 缩空气吹扫降至室温后即可准备进行过滤。 每组试验中过滤时间均包括过滤期间的三次对 第二级佐剂除菌过滤器的完整性检测(30min第一次， 过滤佐剂总数量50时第二次， 佐剂 过滤结束时第三次， 每次完整性检测耗时均在30min左右。 0066 表1用于口蹄疫疫苗佐剂的佐剂除菌过滤器滤芯材质筛选结果表 0067 0068 通过表1的试验结果可以看出在相同压力、 相同规格、 相同温度条件下尼龙、 聚醚 砜、 聚偏二氟乙烯三种材质滤芯水侵入测试均未通过， 且该。
38、三种材质滤芯在过滤30min时泡 点检测也均未通过， 而该三种材质均为过滤抗原所使用的滤芯， 所以判定可过滤抗原的滤 芯材质并不能过滤佐剂。 聚四氟乙烯(PTFE)、 聚三氟氯乙烯(PCTFE)材质滤芯水侵入、 泡点 检测均未发生泄漏。 聚四氟乙烯(PTFE)材质滤芯过滤佐剂用时最短。 0069 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出的是， 对于本技术领域的普通技 术人员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰 也应视为本发明的保护。 说 明 书 7/7 页 10 CN 107441522 A 10 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 11 CN 107441522 A 11 。