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1、10申请公布号CN102464680A43申请公布日20120523CN102464680ACN102464680A21申请号201010536125822申请日20101109C07H15/04200601C07H23/00200601C07H1/00200601A61P31/16200601A61P35/0020060171申请人中国科学院生态环境研究中心地址100085北京市海淀区双清路18号72发明人杜宇国张磊魏国华54发明名称羟亚甲基桥连的NEU5AC（26）GAL碳苷及其纳米金粒子的合成方法57摘要本发明涉及一种稳定高效的唾液酸酶抑制剂的制备方法，属于有机化学技术范畴。我们利用二碘。
2、化钐催化的BARBIER反应为基础设计合成了羟亚甲基桥连的NEU5AC26GAL碳苷化合物1，并合成了其纳米金粒子2。经初步的酶抑制活性实验表明化合物1具有一般强度的酶抑制活性，但把它做成纳米金粒子后酶抑制活性极了很大的提高，其抑制活性提高了13000多倍。且这两个化合物的稳定性都得到了大大的提高，为我们今后合成稳定高效的唾液酸酶抑制剂提供了借鉴。51INTCL权利要求书1页说明书5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页1/1页21本发明涉及一种稳定高效的唾液酸酶抑制剂的制备方法，属于有机化学范畴。我们利用二碘化钐催化的BARBIER反应为基础设计合成了羟亚。
3、甲基桥连的NEU5AC26碳苷化合物1，并合成了其纳米金粒子2。经初步的酶抑制活性实验表明化合物1具有一般强度的酶抑制活性，但把它做成纳米金粒子后酶抑制活性极了很大的提高，其抑制活性提高了13000多倍。且这两个化合物的稳定性都得到了大大的提高。2根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，N19。3根据权利要求1所述的方法，其特征在于，碳苷的合成方法具有高产率、高立体选择性。4根据权利要求1所述的方法，其特征在于，偶联反应所用的催化剂为BF3ET2O，TMSOTF，HCLO4SIO2，AGOTF等LEWIS酸。5根据权利要求1所述的方法，其特征在于，桥连手性碳为单一的S构型。6根据权利要求1所述。
4、的方法，其特征在于，产物能抵御唾液酸苷酶对其的水解作用，大大提高了其体内的利用率。7根据权利要求1所述的方法，其特征在于，做成纳米金粒子后酶抑制活性有了极大的提高。8根据权利要求1所述的方法，其特征在于，纳米金粒子的合成方法操作简单，且具有良好的可重复性。9根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该寡糖纳米金粒子的大小具有相对的均一性且具有良好的稳定性及水溶性。权利要求书CN102464680A1/5页3羟亚甲基桥连的NEU5AC（26）GAL碳苷及其纳米金粒子的合成方法技术领域0001本发明涉及一种稳定高效的唾液酸酶抑制剂的制备方法，属于有机化学及药物化学范畴。背景技术0002唾液酸酶NEUR。
5、AMINIDASE是一类水解酶，能将唾液酸从糖聚物的非还原端切下来，这是许多糖聚物参与生理代谢的第一步，这些酶对于细胞的感染、粘附和分子的识别过程都具有极其重要的意义。如何从分子水平上控制这些生物过程是糖生物学的重要课题。而设计一些含有糖酮酸的糖类模拟物来抑制或阻断这类生物过程以达到控制的目的，是一个非常有人的途径，由此产生的稳定唾液酸衍生物有望作为治疗剂或免疫疫苗。对天然“氧连接”的唾液酸化合物，如GM1，GM3和GM4的合成与临床应用研究已有不少报道，但药物进入体内后的不稳定性使之无法准确到达靶点，因而大大限制了这类化合物的药用前景。无论从化学角度还是从生物学角度来说，唾液酸碳苷肯定是最能。
6、适应多种生物环境及抵御唾液酸苷酶水解的良好模型，唾液酸碳苷衍生物做成的各种酶抑制剂更能准确到达靶点而起作用。到目前为止，国际上有关合成酶稳定的唾液酸碳苷寡糖分子的报道很少，虽然在合成方法上有一些探索。这主要归因于1唾液酸C2上的羧基使得糖基化中间体鎓离子难以形成或不稳定，因此2，3位不饱和的衍生物为主要产物；2唾液酸异头碳上的羧基在立体化学上不利于糖苷键的形成；3唾液酸的C3为脱氧状态，在标准的糖基化过程中缺乏邻基参与或导向作用，不利于反应的立体控制。另外由于大多数功能寡糖是附着在细胞表面起作用，而糖纳米粒子如糖纳米金通过自组装过程能很好的模拟细胞，从而成为研究细胞间识别、粘附等相互作用的良好。
7、模型。况且此类唾液酸碳苷已报道的大都是单体形式，以簇合物形式报道的极少，以纳米簇形式存在的更是至今还未见报道。所以我们想把唾液酸碳苷做成纳米金粒子的形式来比较其单体与纳米簇合物的生物活性，以探究纳米簇效应。基于此，我们设计合成了唾液酸碳苷衍生物及其糖纳米金粒子，并且对其酶抑制活性进行了初步的测试。发明内容0003本发明的目的在于利用唾液酸碳苷及纳米簇技术合成出一种真正稳定高效的唾液酸酶抑制剂，为治疗流感及肿瘤等疾病作出贡献。0004发明内容0005本发明涉及一种稳定高效的唾液酸酶抑制剂的制备方法，属于有机化学及免疫学技术范畴。我们利用二碘化钐催化的BARBIER反应为基础设计合成了羟亚甲基桥连。
8、的NEU5AC26GAL碳苷化合物1，并合成了其纳米金粒子2。经初步的酶抑制活性实验表明化合物1具有一般强度的酶抑制活性，但把它做成纳米金粒子后酶抑制活性极了很大的提高，2的IC50值达到0042M，其抑制活性提高了13000多倍。且这两个化合物的稳定说明书CN102464680A2/5页4性都得到了大大的提高，为我们今后合成稳定高效的唾液酸酶抑制剂提供了借鉴。00060007下面，结合实例对本发明进行详细的说明。0008旋光度在25时用PERKINELMER241MC自动旋光仪测得。1HNMR由BRUKERARX400在CDCL3中测得，以四甲基硅为内标。质谱采用VGPLATFORM质谱仪，。
9、用ESI技术进样。薄层色谱TLC由HF254硅胶板上用30V/V的硫酸甲醇溶液或紫外UV检测器检测。柱色谱采用100200目的硅胶，用乙酸乙酯石油醚6090或乙酸乙酯甲醇作为淋洗液，溶液在小于60时减压蒸馏，以下未特别说明的化合物都是可商购或可参照文献制备的物质。0009实施例100100011将施密特试剂3457G，9276MMOL、6苄氧基1己醇1611G，773MMOL和分子筛300MG溶于40毫升干燥二氯甲烷中，在0，氮气保护下加入三甲基硅基三氟甲磺酸酯TMSOTF，13909L，0773MMOL，在此条件下搅拌反应15H后，用三乙胺中和并过滤浓缩。剩余物用硅胶色谱柱纯化，以31石油醚。
10、乙酸乙酯淋洗，得到无色油状化合物4333G，80。0012实施例20013说明书CN102464680A3/5页50014将化合物4333G，6184MMOL溶于无水甲醇50ML中，滴加1N的NAOME甲醇溶液，调节PH值。反应混合物在室温下搅拌反应，用酸性树脂中和，过滤，浓缩蒸干不用进一步纯化直接进行下一步反应。将化合物52G，56115MMOL溶于干燥吡啶15ML中，在0下加入叔丁基二甲基氯硅烷093G，617MMOL及催化量的DMAP。20分钟后升至室温，继续搅拌反应过夜，TLC显示反应完全。加入几滴甲醇来淬灭反应，然后加甲苯215ML减压蒸干，剩余物用硅胶色谱柱分离纯化，以12石油醚乙。
11、酸乙酯淋洗，得到糖浆状化合物62312G，85。0015实施例300160017在78，氮气保护下，向搅拌的草酰氯1906L，2219MMOL的干燥二氯甲烷3ML溶液中滴加DMSO3584L，444MMOL。反应混合物在此条件下继续搅拌反应30分钟后，将化合物80949G，14809MMOL溶于干燥CH2CL245ML的溶液，在相同条件下慢慢滴加到反应液中，立刻有白色悬浮物生成。在78下，搅拌反应1H后，加入三乙胺143ML，1036MMOL，撤去冷却浴后，继续在室温条件下搅拌反应30分钟，然后向其加入饱和的NH4CL水溶液10ML并用CH2CL230ML萃取。萃取的有机层合并，再分别用水20。
12、ML和饱和食盐水30ML洗涤，完毕，用无水NA2SO4干燥后过滤，浓缩。剩余物用硅胶色谱柱分离纯化，以21石油醚乙酸乙酯淋洗，得到糖浆化合物91134G，80。0018实施例400190020氮气保护下，将新制的01MSMI2的四氢呋喃溶液753ML滴入到含化合物9962MG，15059MMOL和唾液酸砜10927MG，15069MMOL的反应瓶中，室温搅拌45分钟，说明书CN102464680A4/5页6加入CH2CL2100ML，然后依次用1N的盐酸，饱和硫代硫酸钠，饱和食盐水处理，最后用无水NA2SO4干燥后过滤，浓缩。剩余物用硅胶色谱柱分离纯化，以12石油醚乙酸乙酯淋洗，得到白色泡沫状。
13、固体化合物111342G，80。0021实施例500220023将化合物12291MG，0386MMOL溶于5毫升干燥的THF，在0条件下向其中依次加入咪唑789MG，1159MMOL，三苯基膦1516MG，0772MMOL，碘11758MG，04633MMOL。将反应升至室温继续反应，期间补加三苯基膦1516MG，00772MMOL和碘11758MG，004633MMOL两次。20小时后，过滤，减压浓缩，剩余物用硅胶色谱柱分离纯化，以14甲醇乙酸乙酯淋洗，得到淡黄色泡沫状固体化合物13243MG，73。0024实施例600250026将化合物13185MG，02142MMOL溶于干燥的DMF。
14、5ML中，加入硫乙酸钾367MG，032MMOL。反应3H后，将反应混合物在减压条件下浓缩后，剩余物用硅胶色谱柱分离，以14甲醇乙酸乙酯淋洗，得到无色油状化合物141391MG，80。0027实施例700280029将二硫化合物150MG，00438MMOL溶于二次去离子水10ML中，加入HAUCL44H2O64MG后，在室温下搅拌10分钟，然后降至0继续搅拌15分钟。在剧烈搅拌下，分批次加入硼氢化钠溶液14MG，03305MOL，IN1ML水反应混合物立即变为深棕说明书CN102464680A5/5页7色。在此条件下继续反应15分钟，升至室温反应3H后，离心除去溶剂，然后把剩余物重新溶于水12ML，用14,000RPM的离心机离心40分钟，然后除去溶剂，此过程重复三次。最后溶于水，冷冻干燥得到黑棕粉末状糖纳米金粒子212MG。说明书CN102464680A。