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1、(10)申请公布号 CN 103656762 A (43)申请公布日 2014.03.26 CN 103656762 A (21)申请号 201210360333.6 (22)申请日 2012.09.25 A61L 31/04(2006.01) (71)申请人 耿兆波 地址 上海市闵行区中春路 8889 弄 （城花新 园） 50 号 201 室 (72)发明人 耿兆波 (74)专利代理机构 上海正旦专利代理有限公司 31200 代理人 陆飞 盛志范 (54) 发明名称 丝素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的 应用 (57) 摘要 本发明属于医疗器械技术领域， 具体为丝素 蛋白膜作为可吸收性组织。
2、再生引导膜的应用。丝 素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的应用， 其可吸收性组织再生膜可用于种植牙准备及治疗 牙周病。 丝素蛋白膜应用于牙科中， 作为可吸收性 再生引导膜， 其原材料来源单一， 生产成本低 ； 无 毒、 无环境污染。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103656762 A CN 103656762 A 1/1 页 2 1. 丝素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的应用。 2. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在。
3、于 ： 所述可吸收性组织再生引导膜用于种植 牙准备。 3. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述可吸收性组织再生引导膜用于治疗 牙周病。 权 利 要 求 书 CN 103656762 A 2 1/3 页 3 丝素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的应用 技术领域 0001 本发明属于医疗器械技术领域， 具体的说， 涉及丝素蛋白膜作为可吸收性组织再 生引导膜的应用。 背景技术 0002 膜引导性组织再生是一个新的生物学概念， 其基本原理是将膜置于软组织与骨 缺损之间建立生物屏障， 阻止干扰骨形成且迁移速率较快的龈结缔组织细胞和上皮细胞进 入而允许有潜在再生能力、 迁移速率较慢的骨细。
4、胞优先进入骨缺损区， 优势生长， 同时保护 血凝块， 减缓覆盖组织的压力， 实现缺损区骨组织的再生修复。 0003 膜引导性再生技术 （MGTR） 最初别应用于牙周病治疗中， MGTR 技术应用于牙周病 的治疗成功后， 20 世纪 80 年代末期 Dahlin 等将 MGTR 引入口腔种植学， MGTR 技术中起关键 作用的是引导膜， 其中以胶原蛋白膜为代表的可吸收性膜由于其自身的可吸收性， 无需二 次手术取出， 极大减轻了患者的痛苦而倍受国内外学者推崇。 0004 胶原蛋白膜是目前国内外应用最广泛的天然生物医用材料。 但是胶原蛋白膜有很 多不可弥补的缺陷 ： 胶原蛋白膜的材料来源混杂， 标准。
5、化生产难度较大 ； 胶原蛋白从牛和 羊骨提纯后制膜的过程中一定要加入交联剂使得胶原分子连接在一起， 工艺繁琐 ； 生产成 本大。 0005 国内外科学家一直在努力寻找一种理想的新型天然生物医用材料取代胶原蛋白 膜。 0006 丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白， 含量约占蚕丝的 70-80%， 有 18 种氨基酸。 由于丝素蛋白有很好的生物组织相容性、 生物学、 化学和物理学特性可以弥补胶 原蛋白的不足， 并完全符合临床要求， 是不可多得的生物医药工程材料。 目前丝素蛋白在生 物医学材料领域被广泛的研究。实验证明， 丝素蛋白膜作为一种新型的天然高分子生物医 用材料不仅可以完全取代胶原蛋。
6、白膜， 而且丝素蛋白的很多优点是胶原蛋白完全不可比拟 的。 发明内容 0007 为了克服胶原蛋白膜作为牙科可吸收性再生引导膜存在的制备工艺繁琐， 成本高 等弊端， 本发明提供一种成本低、 原料来源单一的可应用于牙科可吸收性组织再生引导膜。 0008 本发明提供丝素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的应用。 0009 本发明中， 丝素蛋白膜的制备方法参见中国专利申请 （申请号 ： 200910060497， 发 明名称 ： 一种生物活性组织再生膜及其制备方法） 。 0010 本发明提供丝素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的应用， 其中可吸收性再生 引导膜用于种植牙准备。 0011 种植牙准备 ： 。
7、用于种植牙术前三个月的牙槽骨洞修补。牙齿脱落以后， 在牙槽骨 上遗留一个深洞， 一定要经过处理， 将牙齿骨洞里生长出新骨， 才能够在牙槽骨上种植人工 说 明 书 CN 103656762 A 3 2/3 页 4 牙。 0012 这个处理过程包括三步 ： 首先在牙槽骨洞中放置骨粉或者骨替代物 ； 然后在填充 好骨粉的表面用可吸收骨组织再生引导膜完全覆盖 ； 最后将牙龈组织包裹。 0013 本发明提供丝素蛋白膜作为可吸收性组织再生引导膜的应用， 其中可吸收性再生 引导膜用于治疗牙周病。 0014 牙周病是一种全人类的多发病， 以前除了清除牙石以外没有任何有效的治疗方 法。九十年代初开始使用引导性牙。
8、周组织再生术治疗牙周病。由于治疗效果显著， 很多病 人可以治愈， 所以引导性牙周组织再生术治疗牙周病越来越广泛被国内外医生和病人所临 床接受、 推广。引导性牙周组织再生术是利用膜性材料作为屏障 , 阻挡牙龈上皮在愈合过 程中沿根面生长 , 阻挡牙龈结缔组织与根面的接触 , 并提供一定的空间 , 引导具有形成新 附着能力的牙周膜细胞优先占领根面 , 从而在原已暴露于牙周袋内的根面上形成新的牙 骨质 , 并有牙周膜纤维埋入， 形成新附着性愈合。 0015 本发明的有益效果在于 ： 丝素蛋白膜为纯天然生物材料， 具有良好的柔韧性和抗拉伸强度， 具有极低抗原性， 亲 水性好， 在体内外具有可控的降解速。
9、度， 将其应用于牙科中， 作为可吸收性再生引导膜， 其 原材料来源单一， 生产成本低 ； 无毒、 无环境污染。 附图说明 0016 图 1， 图 1a 为细胞增值分析图 ； 图 1b 为细胞在丝素蛋白膜上培养 3 天后的电镜 图。 0017 图 2， 体外降解分析图。 0018 图 3， 体内生物相容性分析结果。 具体实施方式 0019 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的详细说明。 0020 实施例 1 膜引导性再生技术中， 理想的牙科应用的生物膜需要具备很好的生物组织相容性、 可降解性、 可靠的机械性能、 亲水性等特点。为了从理论和实践验证丝素蛋白膜的生 物、 化学和物理学特性， 本发明。
10、做了如下实验， 其中丝素蛋白膜的制备方法同申请号为 200910060497 的发明专利实施例 1。 0021 1) 体外试验 A 体外细胞吸附试验 ： 实验方法采用直接接触法细胞毒性实验参见 （ “胶原-明胶支架 材料改性的制备及细胞毒性实验研究” ， 生物医学工程与临床 2007, V11,6） 。 0022 细胞吸附实验具体步骤如下 ： (1) 细胞悬浮液及培养皿的制备。悬浮液制备 : 在 150 ml 细胞培养瓶中用含 10 % 胎牛血清的 DMEM/F12 培养液培养细胞 L929, 制成 1 105 /ml 的细胞悬浮液。培养 皿制备 : 在培养皿中加入 2 mlDMEM/F12 。
11、培养液和细胞悬浮液 5 7 滴 , 孵育 3 5 d, 直至其融合成近似细胞单层。 0023 (2) 接触法毒性实验方法及评级标准。 倒置相差显微镜下观察细胞生长情况, 使 说 明 书 CN 103656762 A 4 3/3 页 5 丝素蛋白膜与细胞单层直接接触 , 继续培养 24 h 后观察细胞形态变化并照相。 0024 本实验中采用了成骨细胞、 间充质干细胞、 牙周细胞和牙龈细胞培养。 然后观察各 种细胞在丝素蛋白膜上的吸附数目。 0025 试验结果如图 1 所示， 结果显示 ： 随着细胞培养的时间的延长， 各种细胞在丝素蛋 白膜上的吸附的细胞数目逐渐增加。 这表明丝素蛋白膜与人体的各种。
12、细胞都有很好生物相 容性， 无任何排斥反应。 0026 B 体外丝素蛋白膜缓慢降解实验 ： 降解方法参考 （ “天然蚕丝与丝素蛋白多孔膜的 生物降解性研究” ， 化学学报， 2007,V65,22） 。 0027 降解试验具体如下 ： 实验中胰蛋白酶， 将蛋白酶溶解于pH7, 浓度为0.05mol/ L 的磷酸盐缓冲溶液中得到降解用胰蛋白酶酶溶液， 在规定的时间点取出置于其中的丝 素蛋白膜样品， 同时更换酶溶液， 以保证酶溶液的活力。 实验中准备一份样品置于不加酶的 缓冲溶液中作对比， 并根据下式计算样品的失重百分率。 0028 其中W 为降解后样品重量 , W0 为降解前样品重量 . 降解实。
13、验结果如图 2 所示， 在蛋白酶存在的条件下， 体外实验 42 天时， 40% 以上的丝素 蛋白在酶的存在下完全降解， 分解成氨基酸， 大约在 100 天时完全降解。 0029 C机械强度试验 ： 试验方法参见 （Standard Test for Plane Strain Fracture Toughness of Metallic Materials, ASTME-399， American society for testing and materials, Philadelphia, PA, 1987） 结果显示丝素蛋白膜有良好的抗拉特性和韧性， 其在无缓冲液的测试条件下， 模量为 (。
14、3.241.98) 兆帕， 屈服抗拉强度为 （0.640.12） 兆帕， 最大抗拉强度为 (1.590.87) 兆帕 ； 在 37缓冲液的条件下测试， 其模量为 (4.981.98) 兆帕， 屈服抗拉强度为 （1.010.12） 兆帕， 最大抗拉强度为 (1.660.87) 兆帕。 0030 D亲水性试验 ： 试验测试方法参考 “常见硬度的测试原理及表示方法， 金属加工 （测量与控制） ， 2008，（15） ： 69-71” ， 结果显示丝素蛋白膜在甲酰胺中的接触角为 62 度， 在甘 油中的接触角为 73 度， 这表明丝素蛋白膜有很好的亲水性。 0031 2) 体内试验 将丝素蛋白膜植入小鼠的下肢肌肉中， 然后两周、 四周和八周各取样， 在显微镜下观察 植入部位的组织形态学变化。如图 3 所示为体内生物相容性分析结果， 丝素蛋白膜有很好 的生物组织相容性， 缓慢的降解。无免疫反应和炎性反应。 0032 无论从文献报道还是我们自己的试验结果都能证明丝素蛋白膜是一种理想的天 然生物医用材料， 完全可以取代胶原蛋白， 作为可吸收性再生引导膜应用于牙周病治疗及 其种植牙准备。 说 明 书 CN 103656762 A 5 1/2 页 6 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103656762 A 6 2/2 页 7 图 3 说 明 书 附 图 CN 103656762 A 7 。