作为 C-Met 酪氨酸激酶调节剂的 3- 杂芳基甲基 - 咪唑并 [1， 2-B] 哒嗪 -6- 基衍生物 本发明涉及以下给出的式 (I) 的 3- 杂芳基甲基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基衍 生物及其盐 ； 式 (I) 化合物在治疗人或动物体， 尤其是有关增生性疾病的方法中的应用 ； 式 (I) 化合物在制备用于治疗此类疾病的药物中的用途 ； 含有式 (I) 化合物并任选含有联合 药物的药物组合物以及制备式 (I) 化合物的方法。
本文中所述 c-Met 肝细胞生长因子受体为酪氨酸激酶受体， 该受体在多种恶性肿 瘤中显示过度表达和 / 或在多种恶性肿瘤中发生遗传改变， 尤其是， 在各种实体瘤中发现 基因扩增和多个 c-Met 突变， 参见例如 WO2007/126799。 另外， 受体酪氨酸激酶 c-Met 还参与 迁移、 侵袭和伴随胚胎发育、 组织再生的形态发生过程。 C-met 还参与转移过程。 若干证据链 表明， c-Met 在肿瘤发病机制中起作用。c-Met 中功能胚芽基系 (functiongerm line) 突变 增加与遗传型乳头状肾细胞癌 (hereditary papillary renalcell carcinoma)(PRCC) 形 成有关。另据报道， 在阵发型 PRCC、 头和颈鳞状细胞癌、 胃癌、 胰腺癌和肺癌中发现在 c-Met 中发生扩增或突变。在选择的情况下， 显示此类改变可以赋予肿瘤对 c-Met 的依赖和 / 或 对其它靶向疗法的耐药性。在多种临床相关肿瘤中， 观察到 c-Met 水平与其唯一配体 HGF/ SF 水平一起升高的频率很高。据报道， 在包括膀胱癌、 乳腺癌、 鳞状细胞癌和胃癌以及平滑 肌肉瘤和成胶质细胞瘤在内的若干癌症中， 表达增加与疾病恶化、 转移和患者死亡率具有 相关性。
WO 2008/008539 公开了一些可用于治疗 HGF 介导的疾病的稠合杂环衍生物。WO 2007/013673 公开了可用作免疫抑制剂的作为 Lck 抑制剂的稠合杂环衍生物。EP0490587 公开了一些可用作血管紧张素 II 拮抗剂的吡唑并嘧啶化合物。
因此， 本发明的目的是提供另一类调节 ( 尤其是抑制 )c-Met 的化合物。
申请人发现， 以下给出的式 (I) 化合物具有有利的药理学性质并抑制例如 c-Met。 以下给出的式 (I) 化合物优选显示改善的溶解度和 / 或减少的细胞色素 P450 抑制， 从而具 有减少导致药物 - 药物相互作用的潜力。 因此， 式 (I) 化合物适合例如用于治疗依赖 c-Met 活性的疾病， 尤其是实体瘤或由此衍生的转移。通过抑制 c-Met， 本发明化合物还可用作抗 炎药， 例如用于治疗炎症， 例如由于感染引起的炎症。
本发明提供式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐或 N- 氧化物，
其中R1 和 R2 与它们连接的氮一起形成 6 元或 7 元饱和单环基团， 该单环基团含有 1 个 1 2 与 R 和 R 连接的环 N 原子， 任选含有另 1 个环 N 原子， 其中所述单环基团未被取代或被独 立选自下列的取代基取代一次或多次 ： C1-C7- 烷基、 C3-C12- 环烷基、 卤代 -C1-C7- 烷基、 氨 基 -C1-C7- 烷基、 C1-C7- 烷基羰基、 C1-C7- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 氨基 -C1-C7- 烷 基 - 羰基、 卤代 -C1-C7- 烷基羰基、 卤代 -C1-C7- 烷氧基羰基、 苯基、 吡啶基、 氧代 ； 3
R 为氢、 羟基、 卤素或 C1-C7- 烷基 ； 4
R 为氢、 卤素或 C1-C7- 烷基 ； 5
R 为吲唑基或喹啉基， 各自被至少一个卤素原子取代。
除另有说明外， 以下通用定义用于本说明书 ：
“本发明化合物” 表示本文中所述式 (I) 化合物。
本文中使用的术语 “包括” 、 “含有” 和 “包含” 在本文中按其开放的非限制性含义 使用。
当使用复数形式 ( 例如化合物、 盐 ) 时， 该复数形式包括单数形式 ( 例如单个化合 物、 单个盐 )。 “化合物” 不排除 ( 例如在药物制剂中 ) 存在多于一个式 (I) 化合物 ( 或其 盐 )。 “治疗” 包括预防性 ( 防止性 ) 和治疗性治疗以及延缓疾病、 障碍或病症的恶化。
卤素 ( 或卤代 ) 表示氟、 溴、 氯或碘， 尤其是氟或氯， 特别是氟。卤素取代的基团和 部分例如被卤素取代的烷基 ( 卤烷基或卤代烷基 ) 可以为单、 多或全卤代。
任何含非环碳的具有多于 1 个碳原子的基团或部分为直链或支链。
“烷基” 是指直链或支链烷基。例如， C1-C7 烷基为具有 1 个 ( 包括 1 个 ) 至多达 7 个 ( 包括 7 个 ) 碳原子的烷基， 包括甲基、 乙基、 正或异丙基 ； 正、 异、 仲或叔丁基 ； 正戊基、 新 戊基、 正己基和正庚基， 尤其优选甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基和异丁基。优选 C1-C4 烷基。烷基可未被取代或被取代。示例性取代基包括但不限于羟基、 烷氧基、 卤素和氨基。 取代的烷基的示例为三氟甲基。
其它基团如 “卤 代 -C1-C7- 烷 基” 、 “氨 基 -C1-C7- 烷 基” 、 “C1-C7- 烷 基 羰 基” 、 “C1-C7- 烷氧基羰基” 、 “氨基 - 羰基” 、 “氨基 -C1-C7- 烷基 - 羰基” 、 “卤代 -C1-C7- 烷基羰基” 、 “卤代 -C1-C7- 烷氧基羰基” 的各个烷基部分的含义与上述 “烷基” 定义相同。
“C3-C12- 环烷基” 是指饱和或部分饱和的单环、 稠合多环或螺多环、 每个碳环具有 3-12 个环原子的碳环。环烷基的说明性示例包括以下部分 ： 环丙基、 环丁基、 环戊基和环己 基。环烷基可未被取代或被取代 ； 在烷基的定义中提供了示例性取代基。优选 C3-C5- 环烷 基， 例如环丙基。
可通过参考包括以下术语列表和实施例在内的以下内容更全面地理解本发明。 本 文中使用的术语 “包括” 、 “含有” 和 “包含” 在本文中按其开放的非限制性含义使用。 1 2
R 和 R 与它们连接的氮一起优选形成 6 元或 7 元饱和单环基团， 该基团含有 1 个 1 2 与 R 和 R 连接的环 N 原子以及另 1 个环 N 原子。
由 R1 和 R2 与它们连接的氮一起且包含有另 1 个环 N 形成的基团的示例包括 ( 但 不限于 ) 哌嗪 ( 尤其是哌嗪 -4- 基 ) 和二氮杂环庚烷 ( 尤其是 1， 4- 二氮杂环庚烷， 例如 1， 4- 二氮杂环庚 -4- 基 )。
当被取代时， 优选由 R1 和 R2 形成的单环基团被 1、 2 或 3 个独立选自下列的取代基
取代 ： C1-C7- 烷基、 C3-C12- 环烷基、 氨基 -C1-C7- 烷基、 C1-C7- 烷基羰基、 C1-C7- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 卤代 -C1-C7- 烷基羰基、 苯基、 吡啶基、 氧代。优选， 所述取代基独立选 自 C1-C4- 烷基、 C3-C5- 环烷基、 氨基 -C1-C4- 烷基、 C1-C4- 烷基羰基、 C1-C4- 烷氧基羰基、 甲酰 基、 氨基 - 羰基、 卤代 -C1-C4- 烷基羰基、 苯基、 吡啶基、 氧代。尤其优选的取代基选自甲基、 环丙基、 甲基羰基、 甲酰基、 甲氧基羰基、 氨基羰基、 三氟甲基羰基、 苯基、 吡啶基和氧代。 1 2
当由 R 和 R 形成的单环基团在环碳原子被取代时， 优选的取代基包括 C1-C7- 烷基 ( 更优选 C1-C4- 烷基， 最优选甲基 ) 和 / 或氧代 ( ＝ O)。在此， 优选， 1、 2 或 3 个环碳原子， 最优选 2 个环碳原子被取代。
优选， 当所述另 1 个环 N 被取代时， 优选的取代基选自 C1-C7- 烷基、 C3-C12- 环 烷 基、 氨 基 -C1-C7- 烷 基、 C1-C7- 烷 基 羰 基、 C1-C7- 烷 氧 基 羰 基、 甲 酰 基、 氨 基 - 羰 基、 卤 代 -C1-C7- 烷基羰基、 苯基、 吡啶基。优选， 所述取代基独立选自 C1-C4- 烷基、 C3-C5- 环烷基、 氨基 -C1-C4- 烷基、 C1-C4- 烷基羰基、 C1-C4- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 卤代 -C1-C4- 烷 基羰基、 苯基、 吡啶基。尤其优选的取代基选自甲基、 环丙基、 甲基羰基、 甲酰基、 甲氧基羰 基、 氨基羰基、 三氟甲基羰基、 苯基、 吡啶基。
在本发明的一个实施方案中， R1 和 R2 与它们连接的氮一起形成下式的基团 ：
其中，
虚线不存在 ( 即形成哌嗪环 ) 或为单键 ( 即形成二氮杂环庚烷环 ) ；
n 为 0 或 1( 即氧代基团存在或不存在 ) ；
R6 为 氢 或 选 自 下 列 的 基 团 ： C1-C7- 烷 基、 C3-C12- 环 烷 基、 卤 代 -C1-C7- 烷 基、 氨 基 -C1-C7- 烷基、 C1-C7- 烷基羰基、 C1-C7- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 氨基 -C1-C7- 烷 基 - 羰基、 卤代 -C1-C7- 烷基羰基、 卤代 -C1-C7- 烷氧基羰基、 苯基、 吡啶基 ； 和
各 R7 独立选自氢、 未取代的 C1-C7- 烷基或取代的 C1-C7- 烷基 ( 例如卤代 -C1-C7- 烷 基、 氨基 -C1-C7- 烷基、 羟基 -C1-C7- 烷基 ) ； 1 2
R 和 R 与 它 们 连 接 的 氮 一 起 非 常 优 选 为 1- 甲 基 - 哌 嗪 -4- 基 -2- 酮、 哌 嗪 -4- 基 -2- 酮、 哌 嗪 -1- 基、 4- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基、 1-(4- 哌 嗪 -1- 基 )- 乙 酮、 哌 嗪 -4- 基 -1- 甲醛 (carbaldehyde)、 哌嗪 -4- 基 -1- 甲酸甲酯、 哌嗪 -4- 基 -1- 甲酰胺、 1-(4- 哌 嗪 -1- 基 )-2， 2， 2- 三 氟 - 乙 酮、 3- 甲 基 - 哌 嗪 -4- 基 -2- 酮、 [1， 4] 二 氮 杂 环 庚 -1- 基 -5- 酮、 1- 环戊基哌嗪 -4- 基 -2- 酮、 1， 3- 二甲基哌嗪 -4- 基 -2- 酮、 1- 苯基哌 嗪 -4- 基 -2- 酮、 5- 甲基哌嗪 -4- 基 -2- 酮、 6- 甲基哌嗪 -4- 基 -2- 酮或 1-( 吡啶 -2- 基 ) 哌嗪 -4- 基 -2- 酮。
R3 优选为氢或 C1-C7- 烷基， 更优选氢或 C1-C4- 烷基， 最优选氢或甲基。 4
R 优选为氢或 C1-C7- 烷基， 更优选氢或 C1-C4- 烷基， 最优选氢或甲基。 3 4
优选， R 和 R 中至少一个为氢。
最优选， R3 和 R4 中的一个为氢， 另一个为 C1-C4- 烷基， 尤其是甲基， 优选的与它们 连接的碳原子的立体化学为 S-， 因此， 优选式 (I) 化合物的 S- 对映体。 5
优选 R 为被至少一个卤代取代基， 优选被至少一个氟取代基取代的吲唑基或喹啉 基。
优选 R5 为被一或两个氟取代基， 最优选两个氟取代基取代的吲唑基或喹啉基。
在本发明的一个特定实施方案中， R5 为被一个氟取代基在 6 位， 任选氟取代基在 4 位取代的 1- 甲基 - 吲唑 -5- 基， 即 1- 甲基 -6- 氟 - 吲唑 -5- 基或 1- 甲基 -4- 氟 -6- 氟 - 吲 唑 -5- 基 ； 或 5
R 为在 7 位任选被一个氟取代基取代的喹啉 -6- 基， 和在 5 位任选被氟取代基取 代的喹啉 -6- 基， 即 7- 氟 - 喹啉 -6- 基或 7- 氟 -5- 氟 - 喹啉 -6- 基。
在本发明的另一个实施方案中， R5 由基团 A 或基团 B 代表 ：
其中 R8 为氢或卤素， R9 为卤素， 优选， R8 为氢或氟， R9 为氟。 在本发明的又一个实施方案中， 提供 (I) 式化合物或其药学上可接受的盐或 N- 氧化物，
其中
R1 和 R2 与它们连接的氮一起形成 6 元或 7 元饱和单环基团， 该基团含有与 R1 和 R2 连接的 1 个环 N 原子并任选含有另 1 个环 N 原子， 其中所述单环基团未被取代或被独 立选自以下的取代基取代一次或多次 ： C1-C7- 烷基、 C3-C12- 环烷基、 卤代 -C1-C7- 烷基、 氨 基 -C1-C7- 烷基、 C1-C7- 烷基羰基、 C1-C7- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 氨基 -C1-C7- 烷
基 - 羰基、 卤代 -C1-C7- 烷基羰基、 卤代 -C1-C7- 烷氧基羰基、 苯基、 吡啶基、 氧代 ； 3 4
R 和 R 均为氢 ； 或 3 4
R 为氢， R 为甲基 ； 5
R 为 1- 甲基 -6- 氟 - 吲唑 -5- 基、 1- 甲基 -4- 氟 -6- 氟 - 吲唑 -5- 基、 7- 氟 - 喹 啉 -6- 基或 7- 氟 -5- 氟 - 喹啉 -6- 基。
在该实施方案中， 优选 R5 为 7- 氟 - 喹啉 -6- 基或 7- 氟 -5- 氟 - 喹啉 -6- 基。
在该实施方案中， 当 R3 为氢， R4 为甲基时， 优选的与它们连接的碳原子的立体化学 为 S-， 因此优选式 (I) 化合物的 S- 对映体。
在本发明的又一个实施方案中， 提供式 (II) 化合物或其药学上可接受的盐或 N- 氧化物 ：
其中，
虚线不存在或为单键 ；
n为0或1；
R3 为氢、 羟基、 卤素或 C1-C7- 烷基 ； 4
R 为氢、 卤素或 C1-C7- 烷基 ； 5
R 为被至少一个卤素原子取代的吲唑基或喹啉基 ；
R6 为 氢 或 选 自 下 列 的 基 团 ： C1-C7- 烷 基、 C3-C12- 环 烷 基、 卤 代 -C1-C7- 烷 基、 氨 基 -C1-C7- 烷基、 C1-C7- 烷基羰基、 C1-C7- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 氨基 -C1-C7- 烷 基 - 羰基、 卤代 -C1-C7- 烷基羰基、 卤代 -C1-C7- 烷氧基羰基、 苯基、 吡啶基 ； 7
每 次 出 现 时， 各 R 独 立 选 自 氢、 C1-C7- 烷 基 或 取 代 的 C1-C7- 烷 基 ( 例 如 卤 代 -C1-C7- 烷基、 氨基 -C1-C7- 烷基、 羟基 -C1-C7- 烷基 ) ；
在该实施方案中， 优选在式 (II) 化合物中， 虚线不存在， 因此提供哌嗪部分， 即
优选， 在该实施方案中， n ＝ 1， 即存在氧代基团。
另外， 在该实施方案中， 在本文中关于式 (I) 的其它实施方案中定义的优选的取 代基也适用于式 (II)， 具体地说， 优选， 3 4
R 和 R 均为氢 ； 或 3 4
R 为氢， R 为甲基 ； 5
R 为 1- 甲基 -6- 氟 - 吲唑 -5- 基、 1- 甲基 -4- 氟 -6- 氟 - 吲唑 -5- 基、 7- 氟 - 喹 啉 -6- 基或 7- 氟 -5- 氟 - 喹啉 -6- 基。
本发明的又一个实施方案包括下式 (I’ ) 化合物或其药学上可接受的盐或 N- 氧化 物：
其中 R1 和 R2 与它们连接的氮一起形成 6 元或 7 元饱和单环基团， 该单环基团含有 1 2 与 R 和 R 连接的 1 个环 N 原子并任选含有另 1 个环 N 原子， 其中所述单环基团未被取代或 被独立选自以下的取代基取代一次或多次 ： C1-C7- 烷基、 C3-C12- 环烷基、 卤代 -C1-C7- 烷基、 氨基 -C1-C7- 烷基、 C1-C7- 烷基羰基、 C1-C7- 烷氧基羰基、 甲酰基、 氨基 - 羰基、 氨基 -C1-C7- 烷 基 - 羰基、 卤代 -C1-C7- 烷基羰基、 卤代 -C1-C7- 烷氧基羰基、 苯基、 吡啶基、 氧代 ； 8
R 为氢或卤素 ；
R9 为卤素。
优选， 在该实施方案中， R8 为氢或氟， R9 为氟。
更优选， 在该实施方案中， R8 为氟， R9 为氟。
另外， 在该实施方案中， 基团 R1 和 R2 与它们连接的氮一起也可为本文中其它实施 方案给出的含义。
在本文中描述本发明的各种实施方案。可以意识到， 在各实施方案中具体给出的 特征可与其它给出的特征结合以提供另外的实施方案。
本文中所述式 (I) 化合物也包括式 (I’ ) 和 (II) 化合物。
在一个特定实施方案中， 本发明提供一个或多个化合物， 所述化合物选自本文中 公开的实施例化合物或其药学上可接受的盐或 N- 氧化物。
本文中给出的任何式代表具有由结构式和某些变形或形式描绘的结构的化合物。 具体地说， 本文中给出的任何式化合物可具有不对称中心， 因此， 存在不同对映体。如果至 少一个不对称碳原子存在于式 (I) 化合物， 那么这种化合物可存在旋光体或旋光异构体混 合物的形式例如外消旋体混合物的形式。所有旋光异构体及其混合物 ( 包括外消旋体混合 物 ) 均为本发明的一部分。因此， 本文中给出的任何特定式代表外消旋体形式、 一种或多种 对映体形式、 一种或多种非对映体形式、 一种或多种阻转异构体形式和它们的混合物。另
外， 某些结构可存在几何异构体 ( 即顺式和反式异构体 )、 互变异构体或阻转异构体。
本文中使用的术语 “异构体” 是指具有相同分子式但原子的排列和构型不同的不 同化合物。同样， 本文中使用的术语 “旋光异构体” 或 “立体异构体” 是指本发明特定化合 物可能存在的各种立体异构构型中的任何一种， 且包括几何异构体。 可以理解， 取代基可与 手性碳原子中心连接。因此， 本发明包括化合物的对映体、 非对映体或外消旋体。 “对映体” 是一对立体异构体， 它们互为非叠加镜象。一对对映体的 1 ∶ 1 的混合物为 “外消旋” 混合 物。在适宜的情况下， 该术语用于指外消旋混合物。 “非对映立体异构体” 是具有至少两个 不对称原子但彼此不为镜象的立体异构体。按 Cahn-lngold-Prelog R-S 系统表达绝对立 体化学。当化合物为纯对映体时， 在各手性碳上的立体化学可通过 R 或 S 表达。可根据它 们在钠 D 线波长下使平面偏振光旋转的方向 ( 右旋 - 或左旋 )， 将绝对构型未知的拆分的化 合物指定为 (+) 或 (-)。 一些本文中所述化合物含一个或多个不对称中心或轴， 从而产生可 按绝对立体化学定义为 (R)- 或 (S)- 的对映体、 非对映体和其它立体异构体型。本发明包 括所有此类可能的异构体， 所述异构体包括外消旋混合物、 旋光纯形式和中间体混合物。 可 用手性合成子或手性试剂或用常规技术拆分， 制备旋光 (R)- 和 (S)- 异构体。如果化合物 中含有双键， 那么取代基可为 E 或 Z 构型。如果化合物含二取代的环烷基， 那么环烷基取代 基可具有顺式或反式构型。本发明还包括所有互变异构形式。 本发明化合物的任何不对称原子 ( 例如碳等 ) 可按外消旋体或对映体富集型存 在， 例如 (R)-、 (S)- 或 (R， S)- 构型， 例如在本文中当与 R2、 R3 和 R4 取代基连接的碳原子为不 对称碳原子时。在一些实施方案中， 在 (R)- 或 (S)- 构型中的各不对称原子具有至少 50％ 对映体过量、 至少 60％对映体过量、 至少 70％对映体过量、 至少 80％对映体过量、 至少 90％ 2 3 对映体过量、 至少 95％对映体过量或至少 99％对映体过量。优选， 当与 R 、 R 和 R4 取代基 连接的碳原子为不对称碳原子时， 如上所述， (S) 对映体的量过量。
因此， 本文中使用的本发明化合物可按可能的异构体、 旋转异构体、 阻转异构体、 互变异构体或其混合物中的一种形式存在， 例如为基本上纯几何 ( 顺或反式 ) 异构体、 非对 映体、 旋光异构体 ( 对映体 )、 外消旋体或其混合物。
可以根据取代基的物理化学性质的差异， 例如通过色谱和 / 或分级结晶， 将任何 得到的异构体混合物分离为纯或基本上纯几何或旋光异构体、 非对映体、 外消旋体。
可通过已知方法例如通过将用旋光酸或碱得到的其非对称盐分离， 然后使旋光酸 性或碱性化合物游离， 将任何得到的终产物或中间体的外消旋体拆分为旋光对映体。具体 地说， 因此可用碱性部分将本发明化合物拆分为旋光对映体， 例如通过将与旋光酸例如酒 石酸、 二苯甲酰酒石酸、 二乙酰基酒石酸、 二 -O， O′ - 对 - 甲苯酰酒石酸、 扁桃酸、 苹果酸或 樟脑 -10- 磺酸形成的盐分级结晶。也可通过手性色谱， 例如使用手性吸附剂的高效液相色 谱 (HPLC) 拆分外消旋产物。
另外， 本文中给出的任何式也代表此类化合物的水合物、 溶剂合物和多晶型物及 其混合物。
本文中给出的任何式还代表化合物的未标记形式和同位素标记形式。除一个或 多个原子被具有选择的原子质量或质量数的原子置换外， 同位素标记化合物具有由本文中 给出的式描绘的结构。可掺入本发明化合物的同位素的实例包括氢、 碳、 氮、 氧、 磷、 氟和氯 2 3 11 13 14 15 18 31 32 35 36 125 同位素， 例如分别为 H、 H、 C、 C、 C、 N、 F、 p、 p、 S、 Cl、 I。各种同位素标记的本发
13 明化合物， 例如掺入放射性同位素例如 3H、 C 和 14C 的那些。此类同位素标记化合物可用于 代谢研究 ( 优选用 14C)、 反应动力学研究 ( 用例如 2H 或 3H)， 包括药物或底物组织分布测定 在内的检测或显影技术 [ 例如正电子发射断层扫描 (PET) 或单光子发射计算机化断层扫描 18 (SPECT)， 或用于患者放疗。尤其是， F 或标记化合物可尤其优选用于 PET 或 SPECT 研究。 2 另外， 用较重同位素例如氘 ( 即 H) 取代可提供一些由更强的代谢稳定性产生的治疗优点， 例如体内半衰期增加或减少的剂量需求量。 通常可通过实施下述流程或实施例和制备中公 开的方法， 通过用容易获得的同位素标记试剂代替非同位素标记试剂制备同位素标记的本 发明化合物及其前药。
另外， 用较重的同位素， 尤其是氘 ( 即 2H 或 D) 取代可提供一些由更强的代谢稳定 性产生的治疗优点， 例如体内半衰期增加或减少的剂量需求量或治疗指数改善。 可以理解， 在本文中， 氘被视为式 (I) 化合物的取代基。这种较重同位素， 尤其是氘的浓度可由同位 素富集因子定义。本文中使用的术语 “同位素富集因子” 表示所述同位素的同位素丰度与 天然丰度的比率。如果本发明化合物中的取代基表示为氘， 则此类化合物中各标示氘原子 的同位素富集因子为至少 3500( 在各标示氘原子中 52.5％氘掺入 )、 至少 4000( 掺入 60％ 氘 )、 至少 4500( 掺入 67.5％氘 )、 至少 5000( 掺入 75％氘 )、 至少 5500( 掺入 82.5％氘 )、 至少 6000( 掺入 90％氘 )、 至少 6333.3( 掺入 95％氘 )、 至少 6466.7( 掺入 97％氘 )、 至少 6600( 掺入 99％氘 ) 或至少 6633.3( 掺入 99.5％氘 )。在本发明化合物中， 未特别标明为 特定同位素的任何原子代表该原子的任何稳定的同位素。除另有说明外， 当某个位置特别 标示为 “H” 或 “氢” 时， 应理解为该位置具有由天然丰度同位素组成的氢。因此， 在本发明 化合物中， 特别标示为氘 (D) 的任何原子代表氘， 例如在以上给出的范围内的氘。
通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或类似于实施例和制备中所述那些 方法， 用合适的同位素标记试剂代替之前使用的非标记试剂制备同位素标记的式 (I) 化合 物。
在使用复数形式 ( 例如复数形式的化合物、 复数形式的盐 ) 的场合， 该复数包括单 数 ( 例如单个化合物、 单个盐 )。 “单数形式的化合物” 不排除 ( 例如在药物制剂中 ) 存在 多于一个式 (I) 化合物 ( 或其盐 )。
“复数形式的盐” ( 其由 “或其复数盐” 或 “或其单数盐” 表示， 可单独存在或与游离 式 (I) 化合物混合在一起 ) 优选为药学上可接受的盐。优选用有机或无机酸， 由具有碱性 氮原子的式 (I) 化合物形成此类盐， 例如酸加成盐， 尤其是药学上可接受的盐。合适的无机 酸为例如氢卤酸， 例如盐酸、 硫酸或磷酸。合适的有机酸为例如羧酸或磺酸， 例如富马酸或 甲磺酸。为了分离或纯化， 可以使用药学上不能接受的盐， 例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于 治疗用途， 仅使用药学上可接受的盐或游离化合物 ( 在可按药物制剂的形式施用的场合 )， 因此优选这些盐。由于游离形式的新化合物与它们的盐形式的那些化合物 ( 包括可用作中 间体的那些盐 ) 之间的紧密关系， 例如在纯化或鉴定新化合物中， 当适合和有利时， 上下文 中所述任何游离化合物也可理解为相应的盐。
本文中使用的术语 “药学上可接受的盐” 是指保留本发明化合物的生物活性的生 物有效性和性质的盐， 并且通常不是生物方面或其他方面不需要的。所述盐可单独存在或 与游离式 (I) 化合物相混合。在多种情况下， 本发明化合物可依靠存在的氨基或类似基团 形成酸盐。可用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐， 例如乙酸盐、 天冬氨酸 盐、 苯 甲 酸 盐、 苯磺 酸 盐、 溴化物 / 氢溴酸盐、 碳酸 氢盐 / 碳 酸盐、 硫酸 氢盐 / 碳酸 盐、 樟脑磺酸盐、 氯化物 / 盐酸盐、 氯茶碱盐、 柠檬酸盐、 乙二磺酸盐、 富马酸盐、 葡庚酸盐 (gluceptate)、 葡糖酸盐、 葡糖醛酸盐、 马尿酸盐、 氢碘酸盐 / 碘化物、 羟乙酸盐、 乳酸盐、 乳 糖酸盐、 十二烷基硫酸盐、 苹果酸盐、 马来酸盐、 丙二酸盐、 扁桃酸盐、 甲磺酸盐、 甲基硫酸盐 (methylsulphate)、 萘甲酸盐、 萘磺酸盐、 烟酸盐、 硝酸盐、 十八烷酸盐、 油酸盐、 草酸盐、 棕 榈酸盐、 扑酸盐、 磷酸盐 / 磷酸氢盐 / 磷酸二氢盐、 聚半乳糖醛酸盐、 丙酸盐、 硬脂酸盐、 琥 珀酸盐、 磺基水杨酸盐、 酒石酸盐、 甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。可由其衍生盐的无机酸包括 例如盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸等。可衍生盐的有机酸包括例如乙酸、 丙酸、 羟基乙酸 (glycolic acid)、 草酸、 马来酸、 丙二酸、 琥珀酸、 富马酸、 酒石酸、 柠檬酸、 苯甲酸、 扁桃酸、 甲磺酸、 乙磺酸、 甲苯磺酸、 磺基水杨酸等。
可通过常规化学方法， 由母体化合物、 碱性或酸性部分合成本发明药学上可 接受的盐。通常， 可通过使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的合适酸反应， 制 备 此 类 盐。 此 类 反 应 通 常 在 水 或 有 机 溶 剂， 或 此 两 种 的 混 合 物 中 进 行。 通 常， 当可 行时， 需要使用非水介质如乙醚、 乙酸乙酯、 乙醇、 异丙醇或乙腈。其它合适的盐的目 录可在 “Remington ′ sPharmaceutical Sciences” ( 雷 明 顿 药 用 科 学 )， 第 20 版， Mack PublishingCompany， Easton， Pa.， (1985) ； 和 Stahl and Wermuth 的 “Handbook ofPharmaceutical Salts ： Properties， Selection， and Use” ( 药用盐手册 ： 性质、 选择和 使用 )(Wiley-VCH， Weinheim， 德国， 2002) 中找到。 “盐” 或 “其盐” 可单独存在或与游离式 (I) 化合物混合在一起。
含有可为氢键提供供体和 / 或受体的基团的本发明化合物即式 (I) 化合物可与合 适的共结晶形成剂形成共结晶。可通过已知的共结晶形成方法由式 (I) 化合物制备这些共 结晶。此类方法包括研磨、 加热、 共结晶、 共熔或在结晶条件下使式 (I) 化合物溶液与共结 晶形成剂接触， 再将由此形成的共结晶分离。合适的共结晶形成剂包括在 WO 2004/078163 中所述的那些。因此， 本发明还提供含有式 (I) 化合物的共结晶。
因此， 本发明化合物包括本文中定义的式 I 化合物、 其多晶型及其异构体 ( 包括旋 光、 几何和互变异构体 ) 和同位素标记的式 I 化合物。在优选 ( 优选独立、 全体或按任何组 合或亚组合 ) 的实施方案中， 本发明涉及游离碱形式或酸加成盐形式的式 (I) 化合物， 其中 各取代基定义同本文。
本发明化合物可作为前药给药。因此， 当给药后进入或处于身体中时， 本身可能 具有很少或没有药理学活性的式 (I) 化合物的一些衍生物可例如通过水解解离转化为 具有需要的活性的式 (I) 化合物。此类衍生物称为 ‘前药’ 。[ 有关前药的使用的进一步 知识可在 ‘Pro-drugs as Novel DeliverySystems( 作为新的递药系统的前药 )， 第 14 卷， ACS Symposium Series(THiguchi and W Stella) 和 ‘Bioreversible Carriers in Drug Design’ ( 药物设计中的生物可逆载体 )， Pergamon Press， 1987(ed.E B Roche， AmericanPharmaceutical Association) 中找到 ]。
例如可通过用本领域技术人员已知的一些部分例如在 H Bundgaard 的 “Design of Prodrugs” ( 前药设计 )(Elsevier， 1985) 中所述 ‘pro-moieties’ ( 前部分 ) 替换存在于式 (I) 化合物的合适官能团制备前药。此类前药的一些示例包括 ： (i) 当式 (I) 化合物含有羧酸官能团 (-COOH) 时， 其酯， 例如用 (C1-C8) 烷基替换氢； (ii) 当式 (I) 化合物含有醇官能团 (-OH) 时， 其醚， 例如用 (C1-C6) 烷酰基氧基甲 基替换氢 ； 和
(iii) 当式 (I) 化合物含有伯或仲氨基官能团 (-NH2 或 -NHR， 其中 R ≠ H) 时， 其 酰胺， 例如用 (C1-C10) 烷酰基替换一个或两个氢。
一些式 (I) 化合物本身也可用作其它式 (I) 化合物的前药。
本发明还涉及式 (I) 化合物的药学上可接受的前药。本发明还涉及式 (I) 化合物 的药学上可接受的代谢物 ( 尤其是药物活性代谢物 )。
“C-Met 酪氨酸激酶介导的疾病” 尤其是按有益方式 ( 例如缓解一种或多种症状、 延迟疾病发作至疾病暂时或完全治愈 ) 响应蛋白酪氨酸激酶抑制， 尤其是 c-Met 激酶抑制 的此类病症。这些病症包括增生性疾病， 例如肿瘤病， 尤其是实体瘤和从其衍生的转移， 例 如遗传型乳头状肾细胞癌、 (PRCC)、 阵发型 PRCC、 头颈癌、 鳞状细胞癌、 胃癌、 胰腺癌、 肺癌、 膀胱癌、 乳腺癌、 平滑肌肉瘤、 成胶质细胞瘤、 黑素瘤、 腺泡状软组织肉瘤。这些病症还包括 炎性病症， 例如由感染引起的炎性病症。
“治疗” 包括预防性 ( 防止 ) 和治疗性治疗和延缓疾病、 障碍或病症的恶化。
“组合产品” 是指在一个剂量单位形式中的固定组合产品， 或用于联合给药的药盒 部分 (kit of parts)， 其中式 (I) 化合物和联合药物 ( 例如以下说明的其它药物， 又称为 “治疗药物” 或 “辅助药物” ) 可同时独立给药或在时间间隔内分别给药， 尤其是这些时间间 隔使得联合药物显示合作例如协同效应。本文中使用的术语 “共同给药” 或 “联合给药” 等 表示包括给予有需要的单个研究对象 ( 例如患者 ) 选择的联合药物， 包括其中无需通过相 同给药途径或同时给药的药物的治疗方案。本文中使用的术语 “药物组合产品” 表示由多 于一个活性成分混合或结合产生的产物， 包括固定和不固定的活性成分联合。 术语 “固定组 合产品” 表示活性成分例如式 (I) 化合物和联合药物， 两者以单一实体或剂量形式同时给予 患者。术语 “不固定组合产品” 表示活性成分例如式 (I) 化合物和联合药物， 两者以独立的 实体形式同时、 一起或在无特定时间限制下分别给予患者， 其中这种给药在患者身体中提 供两种化合物的治疗有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法， 例如给予三种或更多种活性成 分。
在优选的 ( 优选独立、 总体或按任何组合或亚组合 ) 实施方案中， 本发明涉及游离 碱形式或酸加成盐形式的式 (I) 化合物， 其中各取代基定义同本文。
本发明还涉及式 (I) 化合物的药学上可接受的前药。本发明还涉及 (I) 化合物的 药学上可接受的代谢物。
本发明尤其涉及实施例中提供的式 (I) 化合物和其中所述制备方法。
如上下文中所述， 式 (I) 化合物具有有价值的药理学性质。
在另一个本发明实施方案中， 提供治疗 c-Met 相关疾病或病症的方法。治疗的疾 病或病症优选为增生性疾病， 例如癌症或炎性病症。式 (I) 化合物还可用于治疗与 c-Met 相关病症有关的疾病。
A： 增生性疾病 ： 式 (I) 化合物尤其可用于治疗一种或多种以下增生性疾病 ：
式 (I) 化合物可用于治疗癌症， 其中所述癌症选自脑癌、 胃癌、 生殖器癌、 泌尿器 癌、 前列腺癌、 膀胱癌 ( 表面和肌肉侵袭 )、 乳腺癌、 子宫颈癌、 结肠癌、 结肠直肠癌、 神经胶 质瘤 ( 包括成胶质细胞瘤、 多形性成胶质细胞瘤、 少星形细胞瘤、 少突神经胶质细胞瘤 )、 食 道癌、 胃癌、 胃肠道癌、 肝癌、 包括儿童 HCC 在内的肝细胞癌 (HCC)、 头颈癌 ( 包括头和颈鳞状 细胞癌、 鼻咽癌 )、 许特尔细胞癌 (Hurthle cell carcinoma)、 上皮癌、 皮肤癌、 黑素瘤 ( 包 括恶性黑素瘤 )、 间皮瘤、 淋巴瘤、 骨髓瘤 ( 包括多发性骨髓瘤 )、 白血病、 肺癌 ( 包括非小叶 细胞肺癌 ( 包括所有组织亚型 ： 腺癌、 鳞状细胞癌、 支气管肺泡癌、 大叶细胞癌和腺鳞状混 合型 )、 小叶细胞肺癌 )、 卵巢癌、 胰腺癌、 前列腺癌、 肾癌 ( 包括但不限于乳头状肾细胞癌 )、 肠癌、 肾细胞癌 ( 包括遗传型和阵发性乳头状肾细胞癌、 I 型和 II 型， 和透明细胞肾细胞 癌) ； 肉瘤， 尤其是骨肉瘤、 透明细胞肉瘤和软组织肉瘤 ( 包括小泡和胚胎横纹肌肉瘤、 腺泡 状软组织肉瘤 ) ； 甲状腺癌 ( 乳头状和其它亚型 )。
式 (I) 化合物可用于治疗癌症， 其中所述癌症为胃、 结肠、 肝、 生殖器、 泌尿器、 黑 素瘤或前列腺癌。在特定实施方案中， 癌症为肝或食道癌。
式 (I) 化合物可用于治疗包括在肝脏转移在内的结肠癌以及小叶细胞肺癌。
式 (I) 化合物也可用于治疗遗传型乳头状肾癌 (Schmidt， L. 等 Nat.Genet.16， 68-73， 1997) 和其中 c-MET 过度表达或被突变组成性激活 (Jeffers andVande Woude. Oncogene 18， 5120-5125， 1999 ； 和其中引用的参考文献 ) 或染色体重排的其它增生性疾病 ( 例如 TPR-MET ； Cooper 等 Nature 311， 29-33， 1984 ； Park. 等 Cell 45， 895-904， 1986)。 式 (I) 化合物还可用于治疗本文中提供或本领域已知的其它癌症和病症。
B： 炎性病症 ： 式 (I) 化合物尤其适合治疗一种或多种炎性病症。
在又一个实施方案中， 炎性病症因感染所致。 在一个实施方案中， 治疗方法为阻滞 病原感染。 在一个特定实施方案中， 感染为细菌感染， 例如李斯特菌属 (Listeria) 感染。 参 见例如 Shen 等， Cell 103 ： 501-10， (2000)， 其中细菌表面蛋白通过结合受体的细胞外域激 活 c-Met 激酶， 从而模拟同源配体 HGF/SF 的作用。
式 (I) 化合物还可用于治疗本文中提供或本领域已知的其它炎性疾病和病症。
C： 联合疗法 ： 在一些实施方案中， 任何以上方法涉及另外给予化疗药物。
在相关实施方案中， 化疗药物为抗癌药物。在本申请全文中提供特定组合产品。
在又一个相关实施方案中， 任何以上方法涉及还给予通路特异性抑制剂。通路特 异性抑制剂可为化疗药物， 或可为生物制剂例如抗体。通路特异性抑制剂包括但不限于 EGFR、 Her-2、 Her-3、 VEGFR、 Ron、 IGF-IR、 PI-3K、 mTOR、 Raf 的抑制剂。
在以上几个方法的又一个实施方案中， 给予患者药物或与细胞接触后， 这些方法 还可涉及观察癌症进展或转移缓解或阻滞。
因此， 在一个实施方案中， 本发明涉及治疗 c-Met 相关病症的方法， 该方法涉及给 予有需要的患者有效量的任何式 (I) 化合物。
在又一个实施方案中， 本发明涉及式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐作为药物 / 用作药物， 尤其是用于治疗一种或多种 C-Met 酪氨酸激酶介导的疾病。
在又一个实施方案中， 本发明涉及式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐作为药物 中活性成分的用途， 尤其是用于治疗一种或多种 C-Met 酪氨酸激酶介导的疾病的用途。
在又一个实施方案中， 本发明涉及式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐作为药物
的用途， 尤其是用于治疗一种或多种 C-Met 酪氨酸激酶介导的疾病。
在又一个实施方案中， 本发明涉及式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐在制备治 疗一种或多种 C-Met 酪氨酸激酶介导的疾病的药物中的用途。
在又一个实施方案中， 本发明涉及式 (I) 化合物或这种化合物的药学上可接受的 盐在用于治疗有需要的患者的方法中的用途， 尤其是用于治疗 C-Met 酪氨酸激酶介导的疾 病， 最尤其是在治疗需要这种治疗的患者中的用途。
在又一个实施方案中， 本发明涉及治疗响应 C-Met 酪氨酸激酶抑制的疾病或病症 的方法， 该方法包括给予， 尤其以有效抗所述疾病的量给予需要这种治疗的温血动物式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐， 其中各基团和符合具有以上定义的含义。
在又一个实施方案中， 本发明涉及药物组合物， 该组合物含有作为活性成分的式 (I) 化合物和联合在一起的至少一种药物载体或稀释剂。此类组合物可按常规方式制备。
在又一个实施方案中， 本发明涉及在需要这种治疗的患者中治疗一种或多种 C-Met 酪氨酸激酶介导的疾病的方法， 该方法包括给予这种患者治疗有效量的式 (I) 化合 物。
在又一个实施方案中， 本发明涉及药物组合物， 该组合物含有 ： (a) 有效量的式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐、 药学上可接受的前药和药物活性代谢物， 和 (b) 一种或 多种药学上可接受的赋性剂和 / 或稀释剂。
在又一个实施方案中， 本发明涉及药物组合物， 该组合物用于在包括人类在内的 温血动物中治疗疾病例如实体或液体肿瘤， 该组合物包含有效治疗所述疾病的剂量的上述 式 (I) 化合物或这种化合物的药学上可接受的盐和联合在一起的药学上可接受的载体 ( ＝ 载体材料 )。
本发明还提供药物制剂 ( 组合物 )， 该制剂含有本文中定义的式 (I) 化合物或这 种化合物的药学上可接受的盐， 或其水合物或溶剂合物和至少一种药学上可接受的载体和 / 或稀释剂， 和任选一种或多种其它治疗药物。
可通过任何常规途径， 尤其是肠胃外例如以注射液或混悬液形式 ； 肠内例如口服 例如以片剂、 胶囊剂形式 ； 局部例如以洗剂、 凝胶剂、 软膏剂或霜剂， 或以鼻或栓剂形式给予 本发明化合物。局部给予为例如给予皮肤。另一种形式的局部给予为给予眼睛。可按常规 方式， 通过与药学上可接受的载体或稀释剂混合， 制备含有本发明化合物和联合在一起的 至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
本发明还涉及药物组合物， 该组合物含有效量， 尤其是有效治疗上述疾病 ( ＝病 症 ) 之一的量的式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐和联合在一起的一种或多种药学上可 接受的载体， 此类载体适用于局部、 肠内例如口服或直肠或肠胃外给予， 它们可以为无机或 有机固体或液体。尤其是含活性成分和联合在一起的稀释剂例如乳糖、 葡萄糖、 甘露醇和 / 或甘油， 和 / 或润滑剂和 / 或聚乙二醇的片剂或明胶胶囊剂可用于口服给药。片剂也可含 粘合剂， 例如硅酸镁铝、 淀粉例如玉米、 小麦或稻谷淀粉、 明胶、 甲基纤维素、 羧甲基纤维素 钠和 / 或聚乙烯吡咯烷酮， 并酌情加入崩解剂例如淀粉、 琼脂、 藻酸或其盐例如藻酸钠， 和/ 或泡腾混合物， 或吸附剂、 色素、 娇味剂和甜味剂。也可按肠胃外给药组合物形式或输注液 形式使用本发明药理学活性化合物。药物组合物可灭菌和 / 或可含赋形剂例如防腐剂、 稳 定剂、 润湿化合物和 / 或乳化剂、 增溶剂、 用于调节渗透压的盐和 / 或缓冲剂。按本身已知方式例如通过常规混合、 制粒、 配制、 溶解或冻干方法， 制备可酌情含其它药理学活性物质 和含约 1％ -99％， 尤其是约 1％ - 约 20％活性成分的本发明药物组合物。
施用于温血动物的活性成分的剂量取决于多种因素， 这些因素包括患者的类型、 种属、 年龄、 体重、 性别和医学状态 ； 待治疗病症的严重性 ； 给药途径 ； 患者的肾和肝功能 ； 和使用的具体化合物。 普通医师、 临床技师或兽医可容易地确定和签署防止、 抵消或抑制病 症进程所需要的药物的有效量的处方。 达到在产生效力但无毒性的范围内的药物浓度的最 佳精度需要基于靶点位药物利用度的动力学的方案。该方案涉及对药物分布、 平衡和消除 方面的考虑。 预定给予温血动物例如约 70kg 体重的人的式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐的剂量优选为每人每天约 3mg- 约 5g， 更优选约 10mg- 约 1.5g， 优选分为 1-3 个单剂量， 这种剂量可例如为相同量。通常， 儿童接受一半的成人剂量。
本发明还涉及式 (I) 化合物和一种或多种其它治疗活性药物的组合产品。因此， 式 (I) 化合物可单独或与一种或多种其它治疗药物联合给予， 可为采取固定组合形式的联 合疗法， 或给予本发明化合物和一种或多种交替或彼此独立给予的其它治疗药物， 或合并 给予固定组合和一种或多种其它治疗药物。
另外， 还可特地给予式 (I) 化合物用于与化疗、 放疗、 免疫疗法、 外科手术干预或 这些的组合联合的肿瘤治疗。在其它治疗策略中， 长期治疗与上述辅助治疗同样可行。其 它可行的治疗为维持肿瘤消退后的患者状态的疗法， 或甚至化学预防疗法， 例如在有风险 的患者中实施化学预防。
因此， 式 (I) 化合物可与其它抗增生化合物联用。此类抗增生化合物包括但不 限于芳香酶抑制剂 ； 抗雌激素 ； 拓扑异构酶 I 抑制剂 ； 拓扑异构酶 II 抑制剂 ； 微管活性化 合物 ； 烷基化化合物 ； 组蛋白脱乙酰酶抑制剂 ； 诱导细胞分化过程的化合物 ； 环氧合酶抑制 剂； MMP 抑制剂 ； mTOR 抑制剂 ； 抗肿瘤抗代谢药物 ； 铂化合物 ； 靶向 / 减少蛋白或脂质激酶活 性的化合物 ； 抗血管生成化合物 ； 靶向、 减少或抑制蛋白或脂质磷酸酯酶活性的化合物 ； 戈 那瑞林激动剂 ； 抗雄激素药物 ； 蛋氨酸氨基肽酶抑制剂 ； 二膦酸盐 ； 生物反应修饰因子 ； 抗 增生抗体 ； 肝素酶 (heparanase) 抑制剂 ； Ras 致癌同工型的抑制剂 ； 端粒酶抑制剂 ； 蛋白酶 抑制剂 ； 用于治疗血癌的化合物 ； 靶向、 减少或抑制 Flt-3 活性的化合物 ； Hsp90 抑制剂 ； 驱 动蛋白、 纺锤体蛋白抑制剂 ； MEK 抑制剂 ； 亚叶酸 ； EDG 结合剂 ； 抗白血病化合物 ； 核苷酸还 原酶抑制剂 ； S- 腺苷蛋氨酸脱羧酶抑制剂 ； 血管抑制性 (angiostatic) 类固醇 ； 皮质类固 醇； 其它化疗化合物 ( 定义如下 ) ； 光敏化合物。
另外， 或者它们可与其它肿瘤治疗方法联用， 这些方法包括外科手术、 离子化辐 射、 光动力疗法、 植入物， 例如与皮质类固醇、 激素联用， 或它们可用作放射增敏剂。
本文中使用的术语 “芳香酶抑制剂” 指抑制雌激素生成的化合物， 即使底物雄烷二 酮和睾酮分别转化为雌酮和雌二醇。 该术语包括但不限于类固醇， 尤其是阿他美坦、 依西美 坦和福美坦， 尤其是非类固醇， 尤其是氨鲁米特、 罗谷亚胺、 吡哆格鲁米特、 曲洛司坦、 睾内 酯、 酮康唑、 伏氯唑、 法倔唑、 阿那曲唑和来曲唑。依西美坦可按例如以商标名 AROMASIN 上 市的形式给药。福美坦可按例如以商标名 LENTARON 上市的形式给药。法倔唑可按例如以 商标名 AFEMA 上市的形式给药。阿那曲唑可按例如以商标名 ARIMIDEX 上市的形式给药。 来曲唑可按例如以商标名 FEMARA 或 FEMAR 上市的形式给药。氨鲁米特可按例如以商标名 ORIMETEN 上市的形式给药。 含芳香酶抑制剂类化疗药物的本发明组合尤其可用于治疗激素受体阳性肿瘤， 例如乳腺肿瘤。
本文中使用的术语 “抗雌激素” 指拮抗在雌激素受体水平上的雌激素作用的化合 物。该术语包括但不限于他莫昔芬、 氟维司群、 雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。他莫昔芬可按例 如以商标名 NOLVADEX 上市的形式给药。盐酸雷洛昔芬可按例如以商标名 EVISTA 上市的形 式给药。氟维司群可按 US 4,659,516 中公开的方法配制或可按例如以商标名 FASLODEX 上 市的形式给药。含抗雌激素化疗药物的本发明组合尤其可用于治疗雌激素受体阳性肿瘤， 例如乳腺肿瘤。
本文中使用的术语 “抗雄激素” 指可抑制雄腺激素的生物作用的任何物质， 包括 但不限于可按例如 US 4,636,505 中公开的方法配制的比卡鲁胺 (CASODEX)。本文中使 用的术语 “戈那瑞林激动剂” 包括但不限于阿巴瑞克、 戈舍林和乙酸戈舍林。戈舍林在 US 4,100,274 中公开， 可按例如以商标名 ZOLADEX 上市形式给药。 阿巴瑞克可按 US 5,843,901 中公开的方法配制。
本文中使用的术语 “拓扑异构酶 I 抑制剂” 包括但不限于托泊替康、 gimatecan、 伊 立替康、 喜树碱及其类似物、 9- 硝基喜树碱和大分子喜树碱轭合物 PNU-166148(WO99/17804 中的化合物 A1)。伊立替康可按例如以商标名 CAMPTOSAR 上市形式给药。托泊替康可按例 如以商标名 HYCAMTIN 上市形式给药。
本文中使用的术语 “拓扑异构酶 II 抑制剂” 包括但不限于蒽环霉素例如多柔比星 ( 包括脂质体制剂例如 CAELYX)、 柔红霉素、 表柔比星、 伊达比星和奈莫柔比星、 蒽醌米托蒽 醌和洛索蒽醌， 以及鬼臼毒素依托泊苷和替尼泊苷。 依托泊苷可按例如以商标名 ETOPOPHOS 上市形式给药。替尼泊苷可按例如以商标名 VM 26-BRISTOL 上市形式给药。多柔比星可 按例如以商标名 ADRIBLASTIN 或 ADRIAMYCIN 上市形式给药。表柔比星可按例如以商标名 FARMORUBICIN 上市形式给药。伊达比星可按例如以商标名 ZAVEDOS 上市形式给药。米托蒽 醌可按例如以商标名 NOVANTRON 上市形式给药。
术语 “微管活性化合物”指微管稳定、 微管去稳定化合物和微管蛋白聚合抑制 剂， 它们包括但不限于紫杉烷类例如紫杉醇和多西他赛 ； 长春生物碱例如长春碱尤其是 硫酸长春碱、 长春新碱， 尤其是硫酸长春新碱和长春瑞宾 ； discodermolides、 秋水仙碱 (cochicine) 和 epothilones 及其衍生物， 例如 epothilone B 或 D 或其衍生物。紫杉醇 可按例如以商标名 TAXOL 上市形式给药。多西他赛可按例如以商标名 TAXOTERE 上市形 式给药。硫酸长春碱可按例如以商标名 VINBLASTIN R.P. 上市形式给药。硫酸长春新碱 可按例如以商标名 FARMISTIN 上市形式给药。可按例如 US 5,010,099 中公开的方法得 到 Discodermolide。还包括 WO 98/10121、 US 6,194,181、 WO 98/25929、 WO 98/08849、 WO 99/43653、 WO 98/22461 和 WO 00/31247 中公开的 Epothilone 衍生物。 尤其优选 Epothilone A 和 / 或 B。
本文中使用的术语 “烷基化化合物” 包括但不限于环磷酰胺、 异环磷酰胺、 美法仑 或亚硝基脲 (BCNU 或卡氮芥糯米纸胶囊剂 )。环磷酰胺可按例如以商标名 CYCLOSTIN 上市 形式给药。异环磷酰胺可按例如以商标名 HOLOXAN 上市形式给药。
术语 “组 蛋 白 脱 乙 酰 酶 抑 制 剂”或 “HDAC 抑 制 剂”指 抑 制 组 蛋 白 脱 乙 酰 酶 且 具有抗增生活性的化合物。该抑制剂包括 WO 02/22577 中公开的化合物， 尤其是 N- 羟 基 -3-[4-[[(2- 羟基乙基 )[2-(1H- 吲哚 -3- 基 ) 乙基 ]- 氨基 ] 甲基 ] 苯基 ]-2E-2- 丙酰胺、N- 羟基 -3-[4-[[[2-(2- 甲基 -1H- 吲哚 -3- 基 )- 乙基 ]- 氨基 ] 甲基 ] 苯基 ]-2E-2- 丙酰胺 及其药学上可接受的盐。还尤其包括辛二酰 N- 丁酰苯胺异羟肟酸 (SAHA)。靶向、 减少或抑 制组蛋白脱乙酰酶 (HDAC) 的抑制剂化合物例如丁酸钠和辛二酰 N- 丁酰苯胺异羟肟酸抑制 称为脱乙酰酶酶的活性。 具体的 HDAC 抑制剂包括 MS275、 SAHA、 FK228( 以前为 FR901228)、 曲 古抑菌素 A 和 US 6,552,065 中公开的化合物， 尤其是 N- 羟基 -3-[4-[[[2-(2- 甲基 -1H- 吲 哚 -3- 基 )- 乙基 ]- 氨基 ] 甲基 ] 苯基 ]-2E-2- 丙酰胺或其药学上可接受的盐， 和 N- 羟 基 -3-[4-[(2- 羟基乙基 ){2-(1H- 吲哚 -3- 基 ) 乙基 ]- 氨基 ] 甲基 ] 苯基 ]-2E-2- 丙酰 胺或其药学上可接受的盐， 尤其是乳酸盐。
术语 “抗肿瘤抗代谢物” 包括但不限于 5- 氟尿嘧啶或 5-FU、 卡培他滨、 吉西他滨、 DNA 脱甲基化化合物例如 5- 氮杂胞苷和地西他滨、 甲氨蝶呤和依达曲沙 ； 和叶酸拮抗剂例 如培美曲塞。卡培他滨可按例如以商标名 XELODA 上市形式给药。吉西他滨可按例如以商 标名 GEMZAR 上市形式给药。
本文中使用的术语 “铂化合物” 包括但不限于卡铂、 顺铂、 顺铂和奥沙利铂。卡铂 可按例如以商标名 CARBOPLAT 上市形式给药。奥沙利铂可按例如以商标名 ELOXATIN 上市 形式给药。
本文中使用的术语 “靶向 / 减少蛋白或脂质激酶活性的化合物” ； 或 “蛋白或脂质 磷酸酯酶活性” 或 “其它抗血管生成化合物” 包括但不限于 c-Met 酪氨酸激酶和 / 或丝氨酸 和 / 或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂， 例如
a) 靶向、 减少或抑制血小板衍生生长因子 - 受体 (PDGFR) 的活性的化合物， 例如 靶向、 减少或抑制 PDGFR 活性的化合物， 尤其是抑制 PDGF 受体的化合物例如 N- 苯基 -2- 嘧 啶 - 胺衍生物， 例如伊马替尼、 SU101、 SU6668 和 GFB-111 ；
b) 靶向、 减少或抑制成成纤维细胞生长因子 - 受体 (FGFR) 活性的化合物 ；
c) 靶向、 减少或抑制胰岛素样生长因子受体 I(IGF-IR) 的化合物， 例如靶向、 减 少或抑制 IGF-IR 活性的化合物， 尤其是抑制 IGF-I 受体的激酶活性的化合物， 例如在 WO 02/092599 中公开的那些化合物， 或靶向 IGF-I 受体或其生长因子的细胞外域的抗体 ；
d) 靶向、 减少或抑制 Trk 受体酪氨酸激酶家族活性的化合物， 或 ephrin 激酶家族 抑制剂 ；
e) 靶向、 减少或抑制 Axl 受体酪氨酸激酶家族活性的化合物 ；
f) 靶向、 减少或抑制 Ret 受体酪氨酸激酶活性化合物 ；
g) 靶向、 减少或抑制 Kit/SCFR 受体酪氨酸激酶活性的化合物， 例如伊马替尼 ；
h) 靶向、 减少或抑制 C-kit 受体酪氨酸激酶 -(PDGFR 家族的一部分 ) 的化合物， 例 如靶向、 减少或抑制 c-Kit 受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物， 尤其是抑制 c-Kit 受体的 化合物， 例如伊马替尼 ；
i) 靶向、 减少或抑制 c-Abl 家族成员、 它们的基因融合产物 ( 例如 BCR-Abl 激酶 ) 和突变体的活性的化合物， 例如靶向、 减少或抑制 c-AbI 家族成员和它们的基因融合产物 的活性的化合物， 例如 N- 苯基 -2- 嘧啶 - 胺衍生物， 例如伊马替尼或 nilotinib(AMN107) ； ParkeDavis 的 PD180970 ； AG957 ； NSC680410 ； PD173955 ； 或 dasatinib(BMS-354825) ；
j) 靶向、 减少或抑制蛋白激酶 C(PKC) 成员和丝氨酸 / 苏氨酸激酶的 Raf 家族成 员的活性化合物、 MEK、 SRC、 JAK、 FAK、 PDK1、 PKB/Akt 成员和 Ras/MAPK 家族成员， 和 / 或依赖细胞周期蛋白的激酶家族 (CDK) 成员和在 US 5,093,330 中公开的那些星孢素衍生物， 例如米哚妥林 ； 其它化合物的示例包括例如 UCN-01、 沙芬戈、 BAY 43-9006、 苔藓抑素 1、 哌 立福辛 ； 伊莫福新 ； RO 318220 和 RO 320432 ； GO 6976 ； Isis 3521 ； LY333531/LY379196 ； isochinoline 化 合 物 例 如 在 WO 00/09495 中 公 开 的 那 些 化 合 物 ； FTIs ； PD184352 或 QAN697(P13K 抑制剂 ) 或 AT7519(CDK 抑制剂 ) ；
k) 靶向、 减少或抑制蛋白 - 酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物， 例如靶向、 减少或抑 制蛋白 - 酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物包括甲磺酸伊马替尼 (GLEEVEC) 或酪氨酸磷酸化 抑制剂。 酪氨酸磷酸化抑制剂优选为低分子量 (Mr ＜ 1500) 化合物或其药学上可接受的盐， 尤其是选自亚苄基丙二腈类或 S- 芳基亚苯基丙二腈或 bisubstrate 喹啉类化合物的化合 物， 更尤其是任何化合物选自酪氨酸磷酸化抑制剂 A23/RG-50810 ； AG 99 ； 酪氨酸磷酸化抑 制剂 AG 213 ； 酪氨酸磷酸化抑制剂 AG 1748 ； 酪氨酸磷酸化抑制剂 AG490 ； 酪氨酸磷酸化抑 制剂 B44 ； 酪氨酸磷酸化抑制剂 B44(+) 对映体 ； 酪氨酸磷酸化抑制剂 AG 555 ； AG 494 ； 酪氨 酸磷酸化抑制剂 AG 556、 AG957 和 adaphostin(4-{[(2， 5- 二羟基苯基 ) 甲基 ] 氨基 }- 苯 甲酸金刚烷酯 ； NSC680410、 adaphostin) ；
l) 靶向、 减少或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族因子 (EGFR、 ErbB2、 ErbB3、 ErbB4 作为同型二聚体或异二聚体 ) 和它们的突变体的活性的化合物， 例如靶向、 减 少或抑制表皮生长因子受体家族的活性的化合物， 尤其是抑制 EGF 受体酪氨酸激酶家族成 员， 例如 EGF 受体、 ErbB2、 ErbB3 和 ErbB4 或结合 EGF 或 EGF 相关配体的化合物、 蛋白或抗 体， 尤其是通过基因工程制备的那些化合物、 蛋白或单克隆抗体， 尤其在 WO97/02266 中公 开的那些化合物， 例如实施例 39 化合物 ； 或在 EP 0 564 409、 WO 99/03854、 EP 0520722、 EP 0 566 226、 EP 0 787 722、 EP 0 837 063、 US 5,747,498、 WO 98/10767、 WO 97/30034、 WO 97/49688、 WO 97/38983， 和尤其是在 WO 96/30347( 例如称为 CP 358774 的化合物 )、 WO 96/33980( 例如化合物 ZD 1839) 和 WO 95/03283( 例如化合物 ZM105180) 中公开的抗体 ； 例 TM TM 如曲妥单抗 (Herceptin )、 西妥昔单抗 (Erbitux )、 易瑞沙 (Iressa)、 塔西法 (Tarceva)、 OSI-774、 CI-1033、 EKB-569、 GW-2016、 E1.1、 E2.4、 E2.5、 E6.2、 E6.4、 E2.11、 E6.3 或 E7.6.3， 和在 WO 03/013541 中公开的 7H- 吡咯并 [2， 3-d] 嘧啶衍生物 ； 和
m) 靶向、 减少或抑制 c-Met 受体的化合物， 例如靶向、 减少或抑制 c-Met 活性的化 合物， 尤其是抑制 c-Met 受体的激酶活性的化合物， 或靶向 c-Met 细胞外域或结合 HGF 的抗 体；
n) 靶向、 减少或抑制 Ron 受体酪氨酸激酶的活性的化合物。
其它抗血管生成化合物包括具有另一种活性机制的化合物， 例如与蛋白或脂质激 酶抑制无关， 例如沙利度胺 (THALOMID) 和 TNP-470。
术语 “靶向、 减少或抑制蛋白或脂质磷酸酯酶活性的化合物” 包括但不限于磷酸酯 酶 1、 磷酸酯酶 2A 或 CDC25 的抑制剂， 例如冈田酸或其衍生物。
术语 “诱导细胞分化过程的化合物” 包括但不限于例如维甲酸、 α-γ- 或 δ- 维生 素 E 或 α-γ- 或 δ- 生育三烯酸。
本文中使用的术语 “环氧合酶抑制剂” 包括但不限于例如 Cox-2 抑制剂、 5- 烷基取 代的 2- 芳基氨基苯基乙酸和衍生物， 例如塞来考昔 (CELEBREX)、 罗非考昔 (VIOXX)、 艾托考 昔、 伐地考昔或 5- 烷基 -2- 芳基氨基苯乙酸， 例如 5- 甲基 -2-(2’ - 氯 -6’ - 氟苯胺基 ) 苯乙酸、 鲁米考昔 (lumiracoxib)。
本文中使用的术语 “二膦酸盐” 包括但不限于 etridonic、 氯膦酸、 替鲁膦酸、 帕 米膦酸、 阿仑膦酸、 伊班膦酸、 利塞膦酸和唑来膦酸。 “Etridonicacid” 可按例如以商标名 DIDRONEL 上市形式给药。 “氯膦酸” 可按例如以商标名 BONEFOS 上市形式给药。 “替鲁膦酸” 可按例如以商标名 SKELID 上市形式给药。 “帕米膦酸” 可按例如以商标名 AREDIATM 上市形 式给药。 “阿仑膦酸” 可按例如以商标名 FOSAMAX 上市形式给药。 “伊班膦酸” 可按例如以 商标名 BONDRANAT 上市形式给药。 “利塞膦酸” 可按例如以商标名 ACTONEL 上市形式给药。 “唑来膦酸” 可按例如以商标名 ZOMETA 上市形式给药。术语 “mTOR 抑制剂” 指抑制雷帕霉 素的哺乳动物靶标 (mTOR) 和具有抗增生活性的化合物， 例如西罗莫司 依维莫司 (CerticanTM)、 CCI-779 和 ABT578。
本文中使用的术语 “肝素酶抑制剂” 是指靶向、 减少或抑制肝素硫酸酯降解的化合 物。该术语包括但不限于 PI-88。本文中使用的术语 “生物反应修饰因子” 是指淋巴因子或 干扰素， 例如干扰素 γ。
本文中使用的术语 “Ras 致癌同工型例如 H-Ras、 K-Ras 或 N-Ras 的抑制剂” 是指 靶向、 减少或抑制 Ras 的致癌活性的化合物， 例如 “法呢基转移酶抑制剂” 例如 L-744832、 DK8G557 或 R115777(Zarnestra)。本文中使用的术语 “端粒酶抑制剂” 是指靶向、 减少或抑 制端粒酶活性的化合物。靶向、 减少或抑制端粒酶活性的化合物尤其为抑制端粒酶受体的 化合物， 例如替美司坦。 本文中使用的术语 “蛋氨酸氨基肽酶抑制剂” 是指靶向、 减少或抑制蛋氨酸氨基肽 酶活性的化合物。靶向、 减少或抑制蛋氨酸氨基肽酶活性的化合物为例如 bengamide 或其 衍生物。
本文中使用的术语 “蛋白酶抑制剂” 是指靶向、 减少或抑制蛋白酶活性的化合物。 靶向、 减少或抑制蛋白酶活性的化合物包括例如 Bortezomid(VelcadeTM) 和 MLN 341。
本文中使用的术语 “基质金属蛋白酶抑制剂” 或 (“MMP” 抑制剂 ) 包括但不限于 胶原肽类似和非肽类似 (peptidomimetic 和 nonpeptidomimetic) 抑制剂 ； 四环素衍生物， 例如异羟肟酸肽类似抑制剂巴马司他及其口服可生物利用类似物马立马司他 (BB-2516)、 普啉司他 (AG3340)、 metastat(NSC683551)、 BMS-279251、 BAY 12-9566、 TAA211、 MMI270B 或 AAJ996。
本文中使用的术语 “用于治疗血癌的化合物” 包括但不限于 FMS- 样酪氨酸激酶 抑制剂， 例如靶向、 减少或抑制 FMS 样酪氨酸激酶受体 (Flt-3R) 活性的化合物 ； 干扰素、 1-b-D- 阿糖胞苷 (ara-c) 和 bisulfan ； 和 ALK 抑制剂例如靶向、 减少或抑制退行发育淋巴 瘤激酶的化合物。
术语 “靶向、 减少或抑制 FMS 样酪氨酸激酶受体 (Flt-3R) 活性的化合物” 尤其为 抑制 Flt-3R 受体激酶家族成员的化合物、 蛋白或抗体， 例如 PKC412、 米哚妥啉、 星孢素衍生 物、 SU11248 和 MLN518。
本文中使用的术语 “HSP90 抑制剂”包括但不限于靶向、 减少或抑制 HSP90 的 内在 ATP 酶活性的化合物 ； 降解、 靶向、 减少或抑制通过遍在蛋白蛋白体通路的 HSP90 客 户蛋白。靶向、 减少或抑制 HSP90 的内在 ATP 酶活性的化合物尤其为抑制 HSP90 的 ATP 酶活性的化合物、 蛋白或抗体， 例如 17- 烯丙基氨基、 17- 去甲氧基格尔德霉素 (17AAG、
17-DMAG)、 格尔德霉素衍生物 ； 其它格尔德霉素相关化合物 ； 根赤壳素和 HDAC 抑制剂 ； Conforma Therapeutics 的 IPI-504、 CNF1010、 CNF2024、 CNF1010 ； Novartis 的替莫唑胺 AUY922。
本文中使用的术语 “抗增生抗体” 包括但不限于曲妥单抗 (HerceptinTM)、 曲妥单 PRO64553( 抗抗 -DM1、 爱必妥 (erbitux)、 贝伐单抗 (AvastinTM)、 利妥昔单抗CD40) 和 2C4 抗体。抗体表示例如完整单克隆抗体、 多克隆抗体、 由至少 2 个完整抗体形成 的多特异性抗体， 和显示需要的生物活性的抗体片段。
术语 “抗白血病化合物” 包括例如嘧啶类似物 Ara-C， 其为脱氧胞苷的 2′ -α- 羟 基核糖 ( 阿拉伯糖苷 ) 衍生物。还包括次黄嘌呤的嘌呤类似物， 6- 巯基嘌呤 (6-MP) 和磷酸 氟达拉滨。对于急性髓细胞白血病 (AML) 治疗， 式 (I) 化合物可与标准白血病疗法联用， 尤 其与用于 AML 治疗的疗法联合。尤其是， 式 (I) 化合物可与法呢基转移酶抑制剂和 / 或可 用于 AML 治疗的其它药物联合给药， 例如柔红霉素、 阿霉素、 Ara-C、 VP-16、 替呢泊苷、 米托 蒽醌、 伊达比星、 卡铂和 PKC412。
本文中使用的 “促生长素抑制素受体拮抗剂” 是指靶向、 治疗或抑制促生长素抑制 素受体的化合物， 例如奥曲肽和 SOM230。 “肿瘤细胞破坏方法” 是指方法例如离子化辐射。上下文中所述术语 “离子化辐射” 表示以电磁射线 ( 例如 X 射线和 γ 射线 ) 或粒子 ( 例如 α 和 β 粒子 ) 发生的离子化辐射。 按但不限于放疗提供离子化辐射， 离子化辐射在本领域中已知。参见 Hellman， Principles of Radiation Therapy， Cancer， inPrinciples and Practice of Oncology( 肿瘤学原理 和实践 ) 中 ( 放疗、 癌症的原理 )， Devita 等编辑， 第 4 版， 第 1 卷， 第 248-275 页 (1993)。
本文中使用的术语 “EDG 结合剂” 是指调节淋巴细胞再循环的一类免疫抑制剂， 例 如 FTY720。
术语 “驱动蛋白纺锤蛋白抑制剂”在本领域中已知， 包括 GlaxoSmithKline 的 SB715992 或 SB743921、 CombinatoRx 的喷他脒 / 氯丙嗪 ；
术语 “MEK 抑 制 剂”在 本 领 域 中 已 知， 包 括 Array PioPharma 的 ARRY142886、 AstraZeneca 的 AZD6244、 Pfizer 的 PD181461、 亚叶酸。
术语 “核苷酸还原酶抑制剂” 包括但不限于嘧啶或嘌呤核苷类似物， 它们包括但不 限于氟达拉滨和 / 或阿糖胞苷 (ara-C)、 6- 硫鸟嘌呤、 5- 氟尿嘧啶、 克拉曲宾、 6- 巯基嘌呤 ( 尤其与 ara-C 联合抗 ALL) 和 / 或喷司他丁。核苷酸还原酶抑制剂尤其为羟基脲或 2- 羟 基 -1H- 异吲哚 -1， 3- 二酮衍生物， 例如 Nandy 等在 Acta Oncologica， 第 33 卷， 第 8 期， 第 953-961 页 (1994) 中所述 PL-1、 PL-2、 PL-3、 PL-4、 PL-5、 PL-6、 PL-7 或 PL-8。
本文中使用的术语 “S- 腺苷蛋氨酸脱羧酶抑制剂” 包括但不限于 US5,461,076 中 公开的化合物。
还尤其包括在 WO 98/35958 中公开的 VEGF/VEGFR 的那些化合物、 蛋白或单克隆 抗体， 例如 1-(4- 氯苯胺基 )-4-(4- 吡啶基甲基 ) 二氮杂萘或其药学上可接受的盐， 例如 琥珀酸盐， 或在 WO 00/09495、 WO 00/27820、 WO00/59509、 WO 98/11223、 WO 00/27819 和 EP 0 769 947 中公开的那些 ； Prewett 等 Cance Res( 癌症研究 )， 第 59 卷， 第 5209-5218 页 (1999) 中所述那些 ； Yuan 等 Proc Natl Acad Sci USA， 第 93 卷， 第 14765-14770 页 (1996) ； Zhu 等 Cance Res( 癌 症 研 究 )， 第 58， 第 3209-3214 页 (1998) ； 和 Mordenti 等 Toxicol
Pathol， 第 27 卷， 第 1 期， 第 14-21 页 (1999) ； 在 WO 00/37502 和 WO 94/10202 中所述那些 ； O’ Reilly 等 Cell( 细胞 )， 第 79 卷， 第 315-328 页 (1994) 所述 ANGIOSTATIN ； O’ Reilly 等 Cell( 细胞 )， 第 88 卷， 第 277-285 页 (1997) 所述 ENDOSTATIN ； N- 邻氨基苯甲酰胺 ； ZD4190 ； ZD6474 ； SU5416 ； SU6668 ； 贝伐单抗 ； 或抗 VEGF 抗体或抗 VEGF 受体抗体， 例如 rhuMAb 和 RHUFab、 VEGF 阿普塔莫例如 Macugon ； FLT-4 抑制剂、 FLT-3 抑制剂、 VEGFR-2 IgG1 抗体、 TM Angiozyme(RPI 4610) 和贝伐单抗 (Avastin )。
本文中使用的 “光动力疗法” 是指使用称为光敏化合物的一些化学物的疗法治疗 或防止癌症。光动力疗法的示例包括用化合物例如 VISUDYNE 和卟吩姆钠治疗。
本文中使用的 “血管抑制性类固醇” 是指阻滞或抑制血管生成的化合物， 例如阿奈 可他、 曲安昔龙、 氢化可的松、 11-α- 表氢化可的松、 11- 脱氧皮醇、 17α- 羟基黄体酮、 皮质 酮、 脱氧皮质酮、 睾酮、 雌酮和地塞米松。
本文中使用的 “皮质类固醇” 包括但不限于化合物， 例如氟轻松、 地塞米松 ； 尤其是 植入物形式。
“其它化疗化合物” 包括但不限于植物生物碱、 激素化合物和拮抗剂 ； 生物反应修 饰因子， 优选淋巴因子或干扰素 ； 反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物 ； shRNA 或 siRNA ； 或化合 物的混合物或具有其它或未知作用机制的化合物。
式 (I) 化合物也可与一种或多种其它药物联用， 所述其它药物选自抗炎药物 ； 抗 组胺药物、 支气管扩张药物， NSAID ； 趋化因子受体拮抗剂。
本发明化合物还可用作辅助治疗化合物用于与此类其它药物联合， 尤其是治疗炎 性疾病例如前文中所述那些疾病， 例如作为此类药物治疗作用的增效剂或作为减少需要的 给药量或此类药物的潜在副作用的方法。本发明化合物可在固定药物组合物中与这种其 它物质混合， 或可分别给药 ( 即在其它药物之前、 同时或之后给药 )。因此， 本发明包括式 (I) 化合物与一种或多种其它药物的组合， 所述其它药物选自抗炎药物 ； 抗组胺药物 ； 支气 管扩张药物、 趋化因子受体的 NSAID 拮抗剂 ； 在相同或不同药物组合物中的所述式 (I) 化合 物和所述药物。
合适的抗炎药物包括类固醇， 尤其是糖皮质类固醇， 例如布地奈德、 二丙酸贝克 米松 (beclamethasone)、 丙酸氟替卡松、 环索奈德或莫米松糠酸酯， 或在 WO 02/88167、 WO 02/12266、 WO 02/100879、 WO 02/00679( 尤其是实施例 3、 11、 14、 17、 19、 26、 34、 37、 39、 51、 60、 67、 72、 73、 90、 99 和 101 中描述的那些 )、 WO 03/035668、 WO 03/048181、 WO03/062259、 WO 03/064445、 WO 03/072592 中所述类固醇， 非甾体糖皮质激素受体激动剂， 例如在 WO 00/00531、 WO 02/10143、 WO 03/082280、 WO 03/082787、 WO 03/104195、 WO 04/005229 中 所述那些 ； LTB4 拮 抗 剂， 例 如 LY293111、 CGS025019C、 CP-195543、 SC-53228、 BIIL 284、 ONO 4057、 SB 209247 和在 US 5451700 中所述那些 ； LTD4 拮抗剂， 例如孟鲁司特和扎鲁 司特； PDE4 抑 制 剂， 例如西洛司特 ( GlaxoSmithKline)、 Rofiumilast(BykGulden)、 V-11294A(Napp)、 BAY19-8004(Bayer)、 SCH-351591(Schering-Plough)、 阿罗茶碱 (AlmirallProdesfarma)、 PD189659/PD168787(Parke-Davis)、 AWD-12-281(AstaMedica)、 CDC-801(Celgene) 、SelCID(TM)CC-10004(Celgene) 、VM554/UM565(Vernalis) 、 T-440(Tanabe)、 KW-4490(Kyowa HakkoKogyo)， 和 在 WO 92/19594、 WO 93/19749、 WO93/19750、 WO 93/19751、 WO 98/18796、 WO 99/16766、 WO 01/13953、 WO 03/104204、 WO03/104205、 WO 03/39544、 WO 04/000814、 WO 04/000839、 WO 04/005258、 WO 04/018450、 WO 04/018451、 WO 04/018457、 WO 04/018465、 WO04/018431、 WO 04/018449、 WO 04/018450、 WO 04/018451、 WO 04/018457、 WO 04/018465、 WO 04/019944、 WO 04/019945、 WO 04/045607 和 WO04/037805 中公开的那些 ； A2a 激动剂， 例如在 EP 409595A2、 EP 1052264、 EP 1241176、 WO 94/17090、 WO 96/02543、 WO 96/02553、 WO 98/28319、 WO 99/24449、 WO 99/24450、 WO 99/24451、 WO 99/38877、 WO 99/41267、 WO 99/67263、 WO 99/67264、 WO 99/67265、 WO 99/67266、 WO 00/23457、 WO 00/77018、 WO 00/78774、 WO 01/23399、 WO 01/27130、 WO 01/27131、 WO 01/60835、 WO 01/94368、 WO 02/00676、 WO 02/22630、 WO 02/96462、 WO 03/086408、 WO 04/039762、 WO 04/039766、 WO 04/045618 和 WO04/046083 中公开的那些 ； A2b 拮抗剂， 例如在 WO 02/42298 中所述那些 ； 和 β-2 肾上腺素能受体激动剂， 例如沙丁胺 醇 (salbutamol)、 奥西那林、 特布他林、 沙甲胺醇非诺特罗、 丙卡特罗， 尤其是福莫特罗及其 药学上可接受的盐， 和 WO 0075114 的式 I 化合物 ( 游离或盐或溶剂合物形式 )， WO0075114 的文件结合到本文作为参考， 优选其实施例化合物， 尤其是下式化合物
及其药学上可接受的盐， 和 WO 04/16601 的式 I 化合物 ( 游离或盐或溶剂合物形 式 )， 以及 WO 04/033412 的化合物。
合适的支气管扩张药物包括抗胆碱能或抗毒蕈碱化合物， 尤其是异丙托溴铵、 氧 托溴铵、 噻托铵盐和 CHF 4226(Chiesi) 和格隆铵盐， 以及在 WO 01/04118、 WO 02/51841、 WO 02/53564、 WO 03/00840、 WO 03/87094、 WO 04/05285、 WO 02/00652、 WO 03/53966、 EP 424021、 US 5171744、 US 3714357、 WO 03/33495 和 WO 04/018422 中所述那些盐。
合适的趋化因子受体包括例如 CCR-1、 CCR-2、 CCR-3、 CCR-4、 CCR-5、 CCR-6、 CCR-7、 CCR-8、 CCR-9 和 CCR10、 CXCR1、 CXCR2、 CXCR3、 CXCR4、 CXCR5， 尤 其 是 CCR-5 拮 抗 剂 例 如 Schering-Plough 拮抗剂 SC-351125、 SCH-55700 和 SCH-D、 Takeda 拮抗剂例如 N-[[4-[[[6， 7- 二氢 -2-(4- 甲基苯基 )-5H- 苯并 - 环庚烯 -8- 基 ] 羰基 ] 氨基 ] 苯基 ]- 甲基 ] 四氢 -N， N- 二甲基 -2H- 吡喃 -4- 氯化铵 (TAK-770)， 和在 US 6166037( 尤其是权利要求 18 和 19)、 WO 00/66558( 尤其是权利要求 8)、 WO 00/66559( 尤其是权利要求 9)、 WO 04/018425 和 WO 04/026873 中所述 CCR-5 拮抗剂。
合适的抗组胺药物包括盐酸西替立嗪、 对乙酰氨基酚、 富马酸氯马司汀、 异丙 嗪、 氯雷他定、 地氯雷他定、 盐酸苯海拉明 (diphenhydramine) 和盐酸非索非那定、 阿伐 斯汀 (activastine)、 阿司咪唑、 氮 司汀、 依巴司汀、 依匹司汀、 咪唑司汀和特芬那定(tefenadine) 和在 WO 03/099807、 WO04/026841 和 JP 2004107299 中公开的那些药物。
用于可能的组合的治疗药物尤其是一种或多种抗增生、 细胞抑制或细胞毒化合物， 例如一种或几种药物， 所述药物包括但不限于聚胺生物合成抑制剂 ； 蛋白激酶抑制 剂， 尤其是丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶例如蛋白激酶 C 的抑制剂， 或酪氨酸蛋白激酶例如 EGF 受体酪氨酸激酶抑制剂， 例如 VEGF 受体酪氨酸激酶抑制剂例如 PTK787 或 抗配体 VEGF 抗体， 或 PDGF 受体酪氨酸激酶抑制剂例如 STI571 PI3K( 例如 Novartis 的 BEZ235) 和 mToR 抑制剂， 例如雷帕霉素、 RAD001、 细胞因子、 负性生 长调节剂例如 TGF-β 或 IFN-β ； 芳香酶抑制剂例如来曲唑 或阿那曲唑 ； SH2 域与磷酸化蛋白相互作用的抑制剂 ； 抗雌激素 ； 拓扑异构酶 I 抑制剂例如伊立替康、 拓扑异 构酶 II 抑制剂 ； 微管活性药物例如紫杉醇或埃坡霉素 (epothilone) ； 烷化剂 ； 抗增生抗代 谢药物例如吉西他滨或卡培他滨 ； 铂化合物例如卡铂或顺铂 ； 二膦酸盐例如 或
和单克隆抗体例如抗 HER2， 例如曲妥单抗。通过数字代码、 通用名或商品名辨别的活性药物的结构可取自具体版的标准概论 “The Merck Index” ( 默克索引 ) 或数据库例如 PatentsInternational( 国际专利 )( 例如 IMS World Publications)。其相关内容结合到本文中作为参考。
可与式 (I) 化合物联用的上述化合物可按本领域中所述方法例如以上引用的文 献制备和给药。 因此， 在又一个实施方案中， 本发明涉及组合产品， 尤其是药物组合产品， 该药物 组合产品含有治疗有效量的游离形式或药学上可接受的盐形式的式 (I) 化合物和第二种 治疗活性药物， 用于同时或顺序给药。另一种治疗药物优选选自抗癌药物 ； 抗炎药物。
本发明还涉及治疗响应 C-Met 酪氨酸激酶的疾病或病症， 尤其是增生性病症或疾 病尤其是癌症的方法， 所述方法包括给予有需要的患者尤其是人有效量的药物组合产品， 该组合产品含有 ： (a) 式 (I) 化合物 ； 和 (b) 一种或多种有效量的药物。
本发明还涉及药物组合产品的用途， 该药物组合产品含有 ： (a) 式 (I) 化合物 ； 和 (b) 一种或多种有效量药物， 所述药物用于治疗响应 C-Met 酪氨酸激酶的疾病或病症， 尤其 是增生性病症或疾病尤其是癌症。
本发明还涉及药物组合产品的用途， 该药物组合产品含有 ： (a) 式 (I) 化合物 ； 和 (b) 一种或多种有效量的药物， 所述药物组合产品用于制备治疗响应 C-Met 酪氨酸激酶的 疾病或病症， 尤其是增生性病症或疾病， 尤其是癌症的药物。
本发明还涉及药物组合产品， 该药物组合产品含有 (a) 式 (I) 化合物和 (b) 有效 药物 ； 和 (c) 药学上可接受的载体 ； 其中至少一种有效的药物为抗癌药物。
本发明还涉及市售包装产品或产物， 它们包含 ：
(a) 式 (I) 化合物 ； 和 (b) 有效药物的制剂， 用于同时、 一起、 分别或顺序使用 ； 其 中至少一种有效的药物为抗癌药物。
另外， 两次或更多次顺序、 分别和同时给予的组合产品可优选这种组合产品， 在这 种组合产品中组合药物组分显示联合疗效超过组合产品中组合药物组分在时间间隔中独 立使用时发现的作用， 前者疗效太强以致无法发现药物疗效之间的相互作用， 尤其优选协 同作用。
本文中使用的术语 “延迟进程” 表示给予处于首次出现前或首次出现的早期或欲 治疗的疾病复发的患者药物组合产品， 其中患者例如被诊断出相应疾病发作前的形式或患 者处于状态例如在医学治疗期间或由事故导致的状态， 在该状态下相应疾病很可能发展。
术语 “有效联合治疗” 或 “联合疗效” 表示化合物可在一定时间间隔内分别给予 ( 按长期交替方式， 尤其是顺序特定方式 )， 以致它们优选在治疗的温血动物， 尤其人中依 然显示 ( 优选协同 ) 相互作用 ( 联合疗效 )。联合疗效还可通过显示两种化合物在至少一 定时间间隔中存在于治疗的人血液中的血液水平确定。
术语 “药物有效的” 优选指阻止本文中公开的疾病或病症进行的治疗有效或按更 广含义理解也可为预防有效的。
本文中使用的术语 “市售包装产品” 或 “产物” 尤其按以上定义的组分 (a) 和 (b) 可独立给药或通过使用具有不同量的组分 (a) 和 (b) 的固定药物组合， 即同时或者在不同 时间点给药的含义定义 “药盒部分” 。另外， 这些术语包括市售包装产品， 该包装产品包含 ( 尤其是合并 ) 作为活性成分的组分 (a) 和 (b) 和说明书一起用于同时、 顺序 ( 优先按特 定时间顺序缓慢交替 ) 或 ( 次选 )， 在延迟增生性疾病进程或治疗增生性疾病中分别使用。 然后， 药盒部分的部分可例如同时或缓慢交替即在不同时间点和按对应于药盒部分的任何 部分的相同或不同时间间隔给予。非常优选， 选择时间间隔以使在联用各部分时治疗疾病 的作用大于通过仅使用药物组合产品药物 (a) 和 (b) 中任一组分得到的作用 ( 可按标准方 法测定 )。 在联合制剂中， 可改变待给药的药物组合产品中药物 (a) 与药物组合产品中药物 (b) 的总量比， 例如以满足欲治疗的患者亚群体因患者的具体疾病、 年龄、 性别、 体重等所致 的需要或单个患者的不同需要。 优选， 存在至少一种有益作用， 例如相互增强组合产品联合 药物 (a) 和 (b) 的作用， 尤其大于加成作用， 从而可用组合药物中比在仅用未形成组合的相 应的单独药物治疗时可耐受的量低的剂量的各药物得到该有益作用， 例如副作用较小或在 一个或所有两个组合药物 ( 组分 )(a) 和 (b) 的非有效剂量下得到的联合疗效， 非常优选强 协同的组合药物 (a) 和 (b)。 在使用组分 (a) 和 (b) 的组合产品和市售包装产品两种情况下， 同时、 顺序和分别 使用的任何组合也是可行的， 表示组分 (a) 和 (b) 可在一个时间点同时给予， 然后在后一个 时间点， 长时间例如超过 3-4 周每日仅给予具有较低宿主毒性的一个组分， 随后在更后一 个时间点给予另一个组分或两种组分的组合 ( 为在随后使用药物组合的疗程中得到最佳 作用 ) 等。
在又一个方面， 本发明涉及制备式 (I) 化合物及其中间体的方法。式 (I) 化合物 可通过本身已知的方法制备， 但是此类方法尚未用于制备本发明的新化合物， 因此它们也 形成新方法。以下流程用于说明此类制备方法。流程 1 提供得到式 (I) 化合物的合成策略 的总括。
流程 1
式 (I#a) 化合物的制备
步骤 a ： 使式 (III) 化合物
其中 X1 代表卤素， 尤其是氯， X1 ＊代表卤素， 尤其是溴， 先与格氏型 (Gringnardtype)Mg- 化合物， 尤其是 EtMgBr 反应， 然后与式 (IV) 的醛反应， 得到式 (II#d) 化合物 5
HCO-R (IV) 5
其中 R 定义同本文，
步骤 b ： 使式 (II#d) 化合物
其中各取代基定义同本文， 与还原剂例如次磷酸和碘的组合反应， 得到式 (II#a) 化合物， 和
步骤 c ： 使式 (II#a) 化合物
其中各取代基定义同本文， 与式 R1R2NH2 的胺， 优选哌嗪或哌嗪酮衍生物， 优选 N- 甲基吡咯烷酮在 KF 或 KF 和 N- 乙基二异丙胺的存在下， 在有机溶剂中反应， 得到式 (I#a) 化合物。
式 (I#c) 化合物的制备
步骤 d ： 使式 (II#d) 化合物其 中 各 取 代 基 定 义 同 本 文，与 氧 化 剂 例 如 戴 斯 - 马 丁 氧 化 剂 (Dess-Martinperiodinane) 或 2- 碘酰苯甲酸反应， 得到式 (II#e) 化合物，
步骤 e ： 使式 (II#e) 化合物
其中各取代基定义同本文， 与甲基镁反应， 得到式 (II#f) 化合物 ；或者通过 步骤 f ： 使式 (II#g) 化合物其中各取代基定义同本文， 与由 X2-R5(V)( 其中 X2 为 H 或者可为卤代， 例如 Br 或 I) 和二异丙基氨化锂或丁基锂得到的有机锂类化合物反应， 得到式 (II#f) 化合物 ； 并且
使式 (II#f) 化合物
按类似于步骤 b 反应， 得到式 (II#c) 化合物 ； 并且 使式 (II#c) 化合物
按类似于步骤 c 反应， 得到式 (I#c) 化合物。 式 (I#b) 化合物的制备 步骤 g ： 将式 (II#c) 化合物的对映体
其中各取代基定义同本文， 通过使用手性色谱分离， 得到式 (II#b) 的纯对映体 ； 并且使式 (II#b) 化合物
按类似于步骤 c 反应， 得到式 (I#b) 化合物 ； 或者通过 使式 (II#c) 化合物
按类似于步骤 c 分离， 得到式 (I#c) 化合物， 使式 (I#c) 化合物的对映体
按类似于步骤 g 反应， 得到式 (I#b) 化合物。 流程 2
式 (I#e) 化合物的另一种制备方法 步骤 h ： 使式 (I#d) 化合物与烷化剂或酰化 ( 优选酰化 ) 剂例如乙酰氯或甲酸 4- 硝基苯酯或氯甲酸甲酯在 有机碱例如吡啶的存在下反应， 得到式 (I#e) 化合物。
反应条件
当在上下文中给出温度时， 必须加入 “约” ， 作为与给出数值的微小偏差， 例如可接 受 ±10％的偏差。所有反应均在一种或多种稀释剂和 / 或溶剂的存在下发生。可按等摩尔 量使用原材料 ； 或者， 可使用过量的化合物， 例如起溶剂或推动平衡或通常加快反应速度的 作用。 反应助剂例如酸、 碱或催化剂可按本领域中已知、 反应需要和与通常已知方法相符的 合适量加入。
保护基
如果本文中所述原材料或任何其它前体中的一个或多个其它功能基例如羧基、 羟 基、 氨基、 巯基等被保护或需要被保护， 因为它们不应参加反应或干扰反应， 那么这些保护 基团是例如通常用于肽化合物、 头孢菌素类和青霉素类， 以及核酸衍生物和糖类合成的一 类基团。按本文中使用的含义， 该含义为在原材料或中间体阶段加入并在除去之后得到最 终化合物的基团， 保护基是一旦被除去不再存在于最终化合物中的一类基团， 而作为取代 基保留的基团不是保护基。另外， 在式 (I) 化合物转化为不同式 (I) 化合物的情况下， 如果
有用或需要， 可引入和除去保护基。
保护基可已存在于前体中， 应将有关官能团保护以避免不需要的副反应， 例如酰 化、 醚化、 酯化、 氧化、 溶剂解和类似反应。它们自身容易除去而无需不需要的副反应， 例 如在类似于生理条件的条件下， 通常通过醋解、 质子分解、 溶剂解、 还原、 光解或通过酶活 性除去且它们不存在于终产物中， 这是保护基的特性。专家懂得或可容易确定哪些保护 基适合上下文中所述的反应。被此类保护基保护的此类官能团、 保护基自身和除去它们 的反应的描述在例如标准参考著作， 例如 J.F.W.McOmie， “ProtectiveGroups in Organic Chemistry” ( 有机化学中的保护基 )， Plenum Press， 伦敦和纽约 1973 ； 和 T.W.Greene， “Protective Groups in Organic Synthesis” ( 有机合成中的保护基 )， 第 3 版， Wiley ， 纽 约 1999 ； 和 “The Peptides” ( 肽类 ) ； 第 3 卷 ( 编辑 ： E.Gross and J.Meienhofer)， Academic Press， 伦 敦 和 纽 约 1981， 和 “Methoden der organischen Chemie” (Methods of organicchemistry)( 有机化学方法 )， Houben Weyl， 第 4 版， 第 15/I 卷， GeorgThieme Verlag ， Stuttgart 1974 ； 和 H.-D.Jakubke and H.Jescheit ， “ Peptide， Proteine” (Amino acids， peptides， proteins)( 氨 基 酸、 肽、 蛋 白 )， Verlag Chemie， Weinheim， Deerfield Beach， and Basel 1982 ； 以 及 Jochen Lehmann， “Chemie der Kohlenhydrate ： Monosaccharide undDerivate” (Chemistry of carbohydrates ： monosaccharides andderivatives)″ ( 糖化学 ： 单糖和衍生物 )， Georg Thieme Verlag， Stuttgart 1974 中找到。
含盐形成基团的式 (I) 化合物的盐可按本身已知方式制备。因此， 可通过用酸或 合适的阴离子交换剂处理， 得到式 (I) 化合物的酸加成盐。也可将含两个酸分子的盐 ( 例 如式 (I) 化合物的二卤化物 ) 转化为含一个酸分子 / 化合物的盐 ( 例如单卤化物 ) ； 可通 过加热至熔融， 或例如通过在高真空下在升高的温度例如 130-170℃下加热， 保持固体状态 不变， 使每个式 (I) 化合物分子排除一分子的酸， 实现该过程。通常可通过用合适的碱性化 合物， 例如通过用合适的碱例如用碱金属碳酸盐、 碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物， 通常 为碳酸钾或氢氧化钠处理， 将盐转化为游离化合物。
可通过合适的分离方法， 按本身已知的方式将立体异构体混合物例如非对映体的 混合物分离为它们的相应的异构体。例如， 可通过分级结晶、 色谱、 溶剂分配和类似方法将 非对映体的混合物分离为它们的单独非对映体。该分离可在起始化合物或式 (I) 化合物本 身水平上发生。 可通过形成非对映体盐， 例如通过用对映体纯手性酸形成盐， 或通过色谱方 法例如通过使用含手性配体的色谱底物的 HPLC 将对映体分离。
应强调的是， 类似于本章节中所述转化的反应也可在适当的中间体水平上发生 ( 因此可用于相应原材料的制备 )。
以下实施例用于说明本发明但不限制其范围。在提供的实施例中， 温度按摄氏度 测量。除另有说明外， 分析型 HPLC 条件如下 ：
条件 1 ：
流速为 2mL/ 分钟乙腈和水 ( 均 +0.1％ TFA)
0-8.0 分钟 ： 2％ -100％乙腈
8.0-10.0 分钟 ： 100％乙腈
柱： Merck 的 Chromolith Performance， RP-18e 4.6×100mm条件 2 ： 流速为 0.7mL/ 分钟的 20％正己烷和 80％乙醇 柱： Daicel 的 Chiralpak AD， 4.6×250mm 条件 3 ： 流速为 0.7mL/ 分钟的 20％正己烷和 80％乙醇 柱： Daicel 的 Chiralcel OJ， 4.6×250mm 条件 4 ： 流速为 2mL/ 分钟的乙腈和水 ( 均 +0.1％ TFA) 0-2.2 分钟 ： 5％ -95％乙腈 2.2-2.7 分钟 ： 95％乙腈 2.7-2.9 分钟 ： 95％ -5％乙腈 2.9-3.5 分钟 ： 5％乙腈 柱： Waters 的 Sunfire C18 3.5μm， 2.1×20mm 条件 5 ： 流速为 2mL/ 分钟的乙腈和水 ( 均 +0.1％甲酸 ) 0-8.0 分钟 ： 2％ -100％乙腈 8.0-10.0 分钟 ： 100％乙腈 柱： Merck 的 Chromolith Performance， RP-18e 4.6×100mm 预柱 ： Merck 的 Chromolith Performance， RP-18e 4.6×5mm 条件 6 ： 流速为 2mL/ 分钟的乙腈和水 ( 均 +0.1％ TFA) 0-2.2 分钟 ： 5％ -95％乙腈 2.2-2.7 分钟 ： 95％乙腈 柱： WatersAtlantis T3 3μm 4.6×30mm。 在以下实施例中， 使用以下给出的缩略语 ：大气压 二氯甲烷 N， N- 二甲基甲酰胺 二甲亚砜 当量 乙醚 乙酸乙酯 小时34CN 102482287 A HPLC HV LDA MeOH Min mL MPLC MS MW n-BuLi NMP
RM RT SPE TBME TFA THF tR UPLC UV
说明书高效液相色谱 高真空 二异丙基氨化锂 甲醇 分钟 毫升 中压液相色谱 质谱 微波 正丁基锂 N- 甲基吡咯烷酮29/68 页反应混合物 室温 固相萃取 甲基·叔丁基醚 三氟乙酸 四氢呋喃 保留时间 超效液相色谱 紫外光中间体的合成 ： 中间体 A、 B、 C 和 D 的合成 ：
中间体 A 6-[(R)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉
中间体 B 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉用制备型 HPLC( 柱 ： AD-H 温度 ： 40℃； 流动相 ： 甲醇 /CO2 ＝ 40/60， 流速 ： 3mL/ 分钟 ； 反压 ： 150 巴 )， 由手性分离 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 10.0g， 28.5mmol)， 得到标题化合物， 为白色固体 ：
中间体 A( 第 1 峰 ) ： (tR3.60 分钟 ( 条件 1)， tR 9.76 分钟 ( 条件 2)， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.93(d， 1H) ； 8.43(d， 1H) ； 8.16(d， 1H) ； 7.93(s， 1H) ； 7.67(d， 1H) ； 7.58(m， 1H) ； 7.25(d， 1H) ； 5.06(q， 1H) ； 1.88(d， 3H))。 中间体 B( 第 2 峰 ) ： (tR 3.60 分钟 ( 条件 1)， 1 tR 10.87 分钟 ( 条件 2)， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.93(s， 1H) ； 8.43(d， 1H) ； 8.16(d， 1H) ； 7.93(s， 1H) ； 7.67(d， 1H) ； 7.58(m， 1H) ； 7.25(d， 1H) ； 5.06(q， 1H) ； 1.88(d， 3H))。
中间体 C
(rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉
1
将 (rac)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-1-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙 醇 ( 中间体 D， 23.2g， 63.7mmol 溶于乙酸 (317mL)， 加入 23 支微波反应瓶。然后将碘化物 (2.11g×23， 191mmol)、 H3PO250％ (2.28mL x 23， 464mmol) 依次加入各瓶。然后， 将它们在 150℃下用微波辐照 5 分钟。将合并的 RM 真空浓缩， 将残渣用水稀释， 通过 4M NaOH 溶液碱 化， 用 EtOAc 萃取 (3×)。 将有机液合并， 用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 将溶剂除去。 将残渣用 异丙醚研磨。将形成的沉淀滤出， 得到浅褐色固体 (tR 3.60 分钟 ( 条件 1)， tR 9.76/10.87 1 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 345， 在 DMSO-d6 中的 H-NMR ： 8.93(d， 1H) ； 8.43(d， 1H) ； 8.16(d， 1H) ； 7.93(s， 1H) ； 7.67(d， 1H) ； 7.58(m， 1H) ； 7.25(d， 1H) ； 5.06(q， 1H) ； 1.88(d， 3H))。
中间体 D
(rac)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-1-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙 醇
在 -78 ℃ 下， 将 5， 7- 二 氟 - 喹 啉 (CAS 34522-72-0， 18.57g， 112mmol) 的 无 水 THF(120mL) 溶液滴加到新制 LDA 溶液 (n-BuLi 77mL 和二异丙胺 18.94mL， 123mmol， 溶于 500mL THF 溶液 )。将溶液在该温度下搅拌 1h， 然后在 -70℃下滴加 1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙酮 (CAS 90734-71-7， 20.0g， 102mmol) 的 400mL THF 溶液。在 -70 至 30℃下再搅拌 45 分钟后， 将 RM 用 1M NH4Cl 淬灭， 用水稀释， 用 EtOAc 萃取 (3×)。将有机 层用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣经闪层析纯化， 然后使其在 DCM 中结晶， 得 1 到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 2.94 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 361， 在 DMSO-d6 中的 H-NMR ： 8.93(d， 1H) ； 8.43(d， 1H) ； 8.18(d， 1H) ； 7.92(s， 1H) ； 7.57(m， 2H) ； 7.24(d， 1H) ； 6.49(s， 1H) ； 2.18(s， 3H))。 中间体 E、 F 和 G 的合成 ：
中间体 E 6- 氯 -3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪
和 中间体 F 6- 氯 -3-[(R)-1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪
用制备型 HPLC( 柱 ： OD Sepaxcel ； 温度 ： 39 ℃ ； 流动相 ： 甲醇 /CO2 ＝ 30/70 ； 流 速： 3mL/ 分 钟 ； 反压 ： 151 巴 )， 由 手 性 分 离 (rac)-6- 氯 -3-[1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 G， 10.0g， 30.3mmol)， 得到标题化合物， 为浅黄色固体 ：
中间体 E( 第 1 峰 ) ： (tR 4.04 分钟 ( 条件 1)， tR 14.39 分钟 ( 条件 2)， 在 DMSO-d6 1 中 的 H-NMR ： 8.19(d， 1H) ； 7.92(s， 1H) ； 7.80(s， 1H) ； 7.55(d， 1H) ； 7.42(d， 1H) ； 7.28(d， 1H) ； 4.84(m， 1H) ； 3.96(s， 3H) ； 1.71(d， 3H))。
中间体 F( 第 2 峰 ) ： (tR 4.04 分钟 ( 条件 1)， tR 16.40 分钟 ( 条件 2)， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.19(d， 1H) ； 7.92(s， 1H) ； 7.80(s， 1H) ； 7.55(d， 1H) ； 7.42(d， 1H) ； 7.28(d， 1H) ； 4.84(m， 1H) ； 3.96(s， 3H) ； 1.71(d， 3H))。
中间体 G
(rac)-6- 氯 -3-[1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪1
将 (rac)-1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙醇 ((i)， 21.4g， 61.9mmol) 溶于乙酸 (310mL)， 加入 20 支微波反应瓶。 将碘化 物 (2.36g×20， 186mmol)、 H3PO250％ (2.56mL×20， 464mmol) 依次加入各瓶。 然后， 将它们在 150℃下用微波辐照 10 分钟。 将合并的 RM 真空浓缩， 将残渣用水稀释， 通过 4M NaOH 溶液碱 化， 用 EtOAc 萃取两次。将有机液合并， 用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 将溶剂除去。将残渣用
异丙醚研磨。 将形成的沉淀滤出， 得到浅褐色固体 (tR 4.08 分钟 ( 条件 1) ； tR 14.39/16.40 1 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 330， 在 DMSO-d6 中的 H-NMR ： 8.19(d， 1H) ； 7.92(s， 1H) ； 7.80(s， 1H) ； 7.55(d， 1H) ； 7.42(d， 1H) ； 7.28(d， 1H) ； 4.84(m， 1H) ； 3.96(s， 3H) ； 1.71(d， 3H))。
(rac)-1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙醇 (i)
在 38 ℃ 下，搅 拌 下，在 15 分 钟 期 间，向 (6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 甲酮 ((ii)， 25.45g， 74mmol) 和 THF(4L) 悬浮液加入甲基溴化镁 (3M， 43mL)。将混合物在 38℃下搅拌 20 分钟。将 RM 冷却至 RT， 用 1M NaHCO3 淬灭， 用 EtOAc 萃取 (3×)。将有机层用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。在 DCM-TBME(1 ∶ 2) 结晶后， 得到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 3.30 分钟 ( 条件 1) ； MH+ ＝ 346)。
(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 甲酮 (ii)
在 RT 下， 搅拌下， 向 (rac)-6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 甲醇 ((iii)， 25.5g， 77mmol) 的丙酮 (2L) 悬浮液中加入 2- 碘酰基 苯甲酸 (CAS 61717-82-6 44.4g， 154mmol)。将混合物在回流温度下搅拌 7h。将 RM 冷却至 RT， 真空浓缩。向残渣加入水 (1L) 和 1M NaOH(1L)， 在 RT 下， 将得到的悬浮液搅拌过夜。将 结晶滤出， 用水洗涤 (3×)， 干燥， 得到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 4.06 分钟 ( 条件 1) ； MH+ ＝ 330.0)。
(rac)-6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 甲 醇 (iii)
将 3- 溴 -6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 (CAS 13526-66-4， 19.69g， 85mmol) 悬浮 于 THF(303mL)， 在 0-5℃下， 在氩气环境下， 缓慢加入乙基镁溶液 (1M， 102mL)。将 RM 在 RT下搅拌 30 分钟。将 RM 冷却至 0℃， 在 0-5℃下， 缓慢加入 6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 甲 醛 ((iv)， 15.4g， 85mmol) 的 THF(303mL) 溶液。将 RM 在 RT 下再搅拌 2h。将 RM 真空浓缩。 向残渣加入水 (0.5L)， 将得到的悬浮液在 RT 下搅拌过夜。将结晶滤出， 用水洗涤 (1×)， 干 燥。向粗产物加入 EtOAc(0.5L)， 将得到的悬浮液在 RT 下搅拌过夜。将结晶滤出， 用 EtOAc 洗涤 (1×)， 干燥， 得到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 3.26 分钟 ( 条件 1) ； 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 8.22(d， 1H) ； 8.07(s， 1H) ； 7.90(d， 1H) ； 7.50(d， 1H) ； 7.48(s， 1H) ； 7.37(d， 1H) ； 6.44(d， 1H) ； 6.30(d， 1H) ； 2.48(s， 3H))。
6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 甲醛 (iv)
在氮气下， 将 2M 正丁基氯化镁的 THF 溶液 (22.4mL， 44.8mmol) 加入甲苯 (160mL)， 冷却至 -10℃。 向该溶液中加入 1.6M 正丁基锂的己烷溶液 (57mL， 91mmol)， 1h 后， 将 RM 冷却 至 -30℃。 然后向 RM 加入 5- 溴 -6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 ((v)19.0g， 83mmol) 的 THF(160mL) 溶液， 使反应物升温至 -10℃。1h 后， 加入 DMF(8.23mL， 106mmol)， 将 RM 在 -10℃下再搅拌 1h。将反应物用 2N HCl 淬灭， 让其温度升至室温。30 分钟后， 将 RM 用饱和 NaHCO3 水溶液 碱化， 然后用 EtOAc 萃取。将有机相用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 真空蒸发。将残渣用 Et2O 研磨。将形成的沉淀滤出， 得到浅褐色固体， 鉴定为需要的甲醛 (tR 3.61 分钟 ( 条件 1)， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 NMR ： 10.16(s， 1H) ； 8.36(d， 1H) ； 8.30(s， 1H) ； 7.70(d， 1H) ； 4.03(s， 3H))。
5- 溴 -6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 (v)
在 5℃下， 向 NaH(8.84g， 221mmol) 的 THF(50mL) 悬浮液中滴加 5- 溴 -6- 氟 -1H- 吲 唑 (CAS 105391-70-6， 44.1g， 201mmol) 的 THF(200mL) 溶液。在 5 ℃下保持 15 分钟后， 在 5℃下加入 MeI(31.7mL， 221mmol)， 将 RM 在 0℃ -5℃下搅拌 1.5h。将反应物用 0.5M HCl 淬 灭， 用 EtOAc 萃取。将有机相合并， 用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 真空干燥。通过 MPLC， 用庚 烷和 EtOAc 将形成的 2 个异构体分离， 得到标题化合物， 为黄色固体 (tR 5.07 分钟 ( 条件 1)， 在 DMSO-d6 中测得的 NMR ： 8.14(d， 1H) ； 8.04(s， 1H) ； 7.79(d， 1H) ； 4.00(s， 3H))。
中间体 H 和 I 的合成 ：
中间体 H 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-5， 7- 二氟 - 喹啉搅 拌 下，向 (rac)-6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 甲 醇 ((vi)， 21.0g， 60.6mmol) 和 乙 酸 (303mL) 溶 液 中 依 次 加 入 H3PO250 ％ (33.3mL， 303mmol)、 碘化物 (30.7g， 121mmol)。将混合物在回流温度 ( 油浴温度＝ 130℃ ) 下搅拌 2h。 将 RM 真空浓缩， 将残渣用水稀释， 用 2MNaOH 溶液碱化， 用 DCM 萃取两次。 将有机 液合并， 经 Na2SO4 干燥， 将溶剂除去。将残渣用 Et2O 研磨。将形成的沉淀滤出， 得到浅褐色 固体 (tR 3.55 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 331.0， 在 DMSO-d6 中测得的 NMR ： 8.97(d， 1H) ； 8.48(d， 1H) ； 8.19(d， 1H) ； 7.74(d， 1H) ； 7.61(d， 1H) ； 7.60(s， 1H) ； 7.33(d， 1H) ； 4.50(s， 2H))。
(rac)-6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 甲 醇 (vi)
将 3- 溴 -6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 (CAS 13526-66-4， 15.0g， 63.9mmol) 悬浮 于 THF(235mL)， 冷却至 0 ℃， 在 0-5 ℃下， 在氩气环境下， 缓慢加入乙基镁溶液 (1M， 77mL)。 将 RM 在 RT 下搅拌 30 分钟。将 RM 冷却至 0℃， 滴加 5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 甲醛 ( 中间体 I， 12.46g， 63.9mmol) 的 THF(235mL) 溶液。将 RM 在 RT 下再搅拌 1 小时， 然后真空浓缩。向 残渣加入水 (0.4L)， 将得到的悬浮液在 RT 下搅拌过夜。将结晶滤出， 用盐水洗涤 (1×)， 干 燥。向粗产物加入 EtOAc(0.5L)， 将得到的悬浮液在 RT 下搅拌 2h。将结晶滤出， 用 EtOAc 洗涤 (1×)， 干燥， 得到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 2.94 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 347)。
中间体 I 5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 甲醛
将 5， 7- 二氟 -6- 乙烯基 - 喹啉 ((vii)， 614mg， 3.21mmol) 溶于二烷 (1.7mL) 和水 (0.6mL)。将 2， 6- 二甲基吡啶 (0.761mL， 6.42mmol)、 高碘酸钠 (2.75g， 12.85mmol) 和四 氧化锇 (653mg， 0.064mmol) 加入前述溶液。将 RM 在 RT 下搅拌 15 分钟。形成沉淀。将水加 入 RM， 将其用 EtOAc 萃取两次。将有机液合并， 用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 将溶剂除去。残 渣经 MPLC 纯化， 用己烷和 EtOAc 洗脱， 得到标题化合物， 为白色固体 (tR 1.2 分钟 ( 条件 4)， 1 MH+ ＝ 244， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 10.36(s， 1H) ； 9.15(s， 1H) ； 8.65(d， 1H) ； 7.79(d， 1H) ； 7.69(dd， 1H))。
5， 7- 二氟 -6- 乙烯基 - 喹啉 (vii)
在微波反应器中， 将 6- 溴 -5， 7- 二氟 - 喹啉 ((viii)， 1g， 4.10mmol)、 四 ( 三苯 基膦 ) 合钯 (0)(47mg， 0.041mmol) 和三丁基 ( 乙烯基 ) 锡 (1.34g， 4.10mmol) 与二 烷 (3.7mL) 混合在一起， 在 150 ℃下搅拌 25 分钟。将溶剂除去， 残渣经 MPLC 纯化， 用己烷和 EtOAc 洗脱。得到标题化合物， 为无色油状物 (tR 1.1 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 192)。中间体 J、 K 和 L 的合成 ：
中间体 J 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-7- 氟 - 喹啉由按中间体 H 中所述条件用碘和 H3PO2 处理 (rac)-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲醇 (ix)， 得到标题化合物 (tR 4.41 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 313)。
(rac)-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲醇 (ix)
将 3- 溴 -6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 (CAS 13526-66-4， 1.327g， 5.71mmol) 溶于 THF(40mL)， 在氮气环境下， 将其冷却至 0 ℃， 加入乙基溴化镁溶液 (1M， 6.85mL)。将 RM 在 RT 下搅拌 30 分钟， 然后在 0℃左右加入 7- 氟 - 喹啉 -6- 甲醛 ( 中间体 K， 1.0g， 5.71mmol) 的 THF(20mL) 溶液。将 RM 在 RT 下搅拌 2h。通过蒸发将溶剂部分除去， 将水 (40mL) 加 入残余糊状物。搅拌 1h 后， 将结晶产物过滤， 真空干燥过夜， 得到标题化合物， 为粉末 (tR 1 3.70 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 329， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.90(dd， 1H) ； 8.46(d， 1H) ； 8.29-8.23(m， 2H) ； 7.72(d， 1H) ； 7.54-7.49(m， 2H) ； 7.40(d， 1H) ； 6.56-6.49(m， 2H))。
中间体 K
7- 氟 - 喹啉 -6- 甲醛
和 中间体 L5- 氟 - 喹啉 -6- 甲醛通过将相应区域异构体 (x)、 (xi) 分别溶于 DCM， 在 RT 下用 10 当量 MnO2 处理， 得 到各标题化合物。搅拌 16h 后， 将黑色固体在硅藻土上滤除， 将滤液中溶剂除去， 得到白色 固体。
中 间 体 K(tR 4.04 分 钟 ( 条 件 5)， MH+ ＝ 176， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 1H-NMR ： 10.31(s， 1H) ； 9.05(s， 1H) ； 8.66(d， 1H) ； 8.63(d， 1H) ； 7.91(d， 1H) ； 7.64(dd， 1H))。
中 间 体 L(tR 4.37 分 钟 ( 条 件 5)， MH+ ＝ 176， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 1H-NMR ： 10.47(s， 1H) ； 9.13(s， 1H) ； 8.70(d， 1H) ； 8.05(t， 1H) ； 7.97(d， 1H) ； 7.75(dd， 1H))。
(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲醇 (x) 和 (5- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲醇 (xi)
在氮气下， 将区域异构体的混合物 ((xii)， 792mg， 3.6mmol) 溶于 THF(7.5mL)， 用 冰水浴冷却至 0℃。然后缓慢加入 LiAlH4(1M 的 THF 溶液， 4.3mL) 溶液。将形成的沉淀滤 除， 将滤液浓缩。残渣经 MPLC 纯化， 用 DCM/MeOH 梯度洗脱， 得到 ：
(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲醇 (x)， 为白色固体 (tR 0.3 分钟 ( 条件 6)， MH+ ＝ 178)。
(5- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲醇 (xi)， 为黄色固体， 通过 1H-NMR 测得纯度 79％ (tR0.3 分钟 ( 条件 6)， MH+ ＝ 178)。
5- 氟 - 喹啉 -6- 甲酸乙酯和 7- 氟 - 喹啉 -6- 甲酸乙酯混合物 (xii)
向 4- 氨基 -2- 氟 - 苯甲酸 (1g， 6.38mmol) 的 75％硫酸 (15mL) 悬浮液中加入无水 甘油 (2.108mL， 28.72mmol) 和 3- 硝基磺酸钠 (2.93g， 12.8mmol)。将混合物在 100℃下搅 拌 4h。然后将其冷却至 60℃， 加入 EtOH。然后将混合物在 60℃下搅拌 45h。将溶液倾入冰 水混合物， 然后用饱和氢氧化铵水溶液碱化。将其用 EtOAc 萃取两次。将有机相合并， 用盐 水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 浓缩。残渣经 MPLC 纯化， 用 DCM/MeOH 梯度洗脱， 得到黄色油状物， 为 5- 氟 - 喹啉 -6- 甲酸乙酯和 7- 氟 - 喹啉 -6- 甲酸乙酯的 (1 ∶ 1) 混合物 (tR 1.3 分钟， tR 1.1 分钟 ( 条件 6)， MH+ ＝ 220)。
中间体 M 的合成 ：
中间体 M (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-7- 氟 - 喹啉向 (rac)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-1-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙 醇 ((xiii)， 200mg， 0.584mmol) 的 乙 酸 (3.2mL) 溶 液 中 加 入 碘 (296mg， 1.167mmol) 和 H3PO2(0.642mL 50％水溶液， 5.84mmol)。将 RM 在 150℃下加热 30 分钟。冷却至 RT 后， 将 乙酸减压蒸发， 加入水， 将溶液用 10％ NaHCO3 溶液中和。将沉淀的产物用 DCM 萃取， 合并 的有机相经 MgSO4 干燥， 过滤， 蒸发至干， 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为灰白色结 1 晶固体 (tR 4.61 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 327.2， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.85(dd， 1H) ； 8.28(dd， 1H) ； 8.20(d， 1H) ； 7.85(s， 1H) ； 7.78-7.68(2H， m) ； 7.44(dd， 1H) ； 7.29(d， 1H) ； 4.95(q， 1H) ； 1.79(d， 3H))。
(rac)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-1-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙醇(xiii) 在 40 ℃下， 将 (6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲 酮 ((xiv)， 294mg， 0.9mmol) 溶于无水 THF(70mL)， 缓慢加入甲基溴化镁的 Et2O 溶液 (3M， 0.36mL)， 然后使 RM 冷却至 RT， 搅拌 2h。再加入甲基溴化镁的 Et2O 溶液 (3M， 0.5mL)， 将 RM 再搅拌 1h。然后将其加入 DCM 和 10％ NaHCO3 水溶液， 萃取。有机相经 MgSO4 干燥。溶 剂蒸发后， 粗产物经闪层析纯化， 得到标题化合物 (tR 3.74 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 343， 在 1 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.87(dd， 1H) ； 8.50(d， 1H) ； 8.49(d， 1H) ； 8.18(d， 1H) ； 7.85(s， 1H) ； 7.59(d， 1H) ； 7.51(dd， 1H) ； 7.23(d， 1H) ； 6.33(s， 1H) ； 2.13(s， 3H))。
(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 甲酮 (xiv)
将 (rac)-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )-(7- 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 甲 醇 ((ix)， 329g， 1.0mmol) 溶于丙酮 (40mL)， 加入 2- 碘酰基苯甲酸 (45％， 1.245g， 2.0mmol)。 将 RM 加热至回流 3h( 悬浮液 )。然后将丙酮减压除去， 将残渣溶于水和 2M NaOH。将浅褐色悬 浮液过滤， 用水洗涤， 真空干燥过夜， 得到标题化合物， 为浅褐色粉末 (tR 4.31 分钟 ( 条件 1 9.03(d， 1H) ； 8.53(d， 1H) ； 8.49-8.41(m， 2H) ； 5)， MH+ ＝ 327， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.39(s， 1H) ； 7.90(d， 1H) ； 7.74(d， 1H) ； 7.62(dd， 1H))。
中间体 N
6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-5- 氟 - 喹啉
由用类似于用于制备中间体 J 的方法处理 5- 氟 - 喹啉 -6- 甲醛 ( 中间体 L)， 得到标题化合物 (tR 4.96 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 313)。
中间体 O
6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5- 氟 - 喹啉
由用类似于用于制备中间体 M 的方法处理 5- 氟 - 喹啉 -6- 甲醛 ( 中间体 L)， 得到 标题化合物 (tR 0.9 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 176)。
P、 Q、 R 和 S 的合成 ：
中间体 P 6- 氯 -3-[(R)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b]哒嗪
和 中间体 Q 6- 氯 -3-[(S)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b]哒嗪
由用制备型 HPLC( 柱 ： AD-H 温度 ： 25℃； 流动相 ： 己烷 / 乙醇 (0.1％ DEA) ＝ 70/30 ； 流速 ： 1mL/ 分钟 ) 将 (rac)-6- 氯 -3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪 唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 R， 580mg， 1.67mmol) 手性分离得到标题化合物， 为白色固体 ：
中间体 P( 第 1 峰 ) ： (tR 5.36 分钟 ( 条件 5)， tR 8.48 分钟 ( 条件 2)， 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 8.16(d， 1H) ； 8.11(s， 1H) ； 7.85(s， 1H) ； 7.43(d， 1H) ； 7.25(d， 1H) ； 4.94(m， 1H) ； 3.97(s， 3H) ； 1.81(d， 3H))。
中间体 Q( 第 2 峰 ) ： (tR 5.39 分钟 ( 条件 5)， tR 10.50 分钟 ( 条件 2)， 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 8.16(d， 1H) ； 8.11(s， 1H) ； 7.85(s， 1H) ； 7.43(d， 1H) ； 7.25(d， 1H) ； 4.94(m， 1H) ； 3.97(s， 3H) ； 1.81(d， 3H))。
中间体 R
(rac)-6- 氯 -3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b]哒嗪 将 (rac)-1-(6- 氯 - 咪唑并 l[1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙醇 ((xv)， 1.1g， 3.02mmol 溶于乙酸 (16mL)， 加入 2 支微波反应瓶。然后向 各瓶中依次加入碘化物 (1.15g×2， 9.07mmol)、 H3PO250 ％ (1.18mL×2,22.68mmol)。然后 将它们放入热油浴 (150℃ ) 保持 10 分钟。将合并的 RM 真空浓缩， 将残渣用水稀释， 通过 用 EtOAc 萃取 (3×)。将有机液合并， 用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 将 10％ NaHCO3 溶液碱化， 溶剂除去。残渣经闪层析纯化， 然后在 EtOAc/ 戊烷中结晶， 得到标题化合物， 为黄色固体。 (tR 5.41 分钟 ( 条件 5)， (tR 8.59/10.78 分钟 ( 条件 2)， (MH+ ＝ 348.1， 在 DMSO-d6 中测得 1 的 H-NMR ： 8.16(d， 1H) ； 8.12(s， 1H) ； 7.86(s， 1H) ； 7.43(d， 1H) ； 7.25(d， 1H) ； 4.94(m， 1H) ； 3.97(s， 3H) ； 1.81(d， 3H))。
(rac)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙醇 (xv)
在 -78℃下， 将 6.88mL n-BuLi 滴加到 4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 ((xvi)， 1.68g， 10mmol) 的无水 THF(50mL) 溶液中。将溶液在该温度下搅拌 1h， 然后在 -70/75℃下， 滴加 1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 酮 (CAS90734-71-7， 1.95g， 10mmol) 的 50mL THF 溶液。在 -70/75 ℃下再搅拌 3h 后， 将 RM 用 10 ％ NH4Cl 淬灭， 在 0 ℃下， 用水稀释， 用 EtOAc 萃取 (3×)。 将有机相用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。 残渣经闪层析纯化， 得
到标题化合物， 为黄色泡沫状物 (tR 4.40 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 364.2， 在 DMSO-d6 中测得 1 的 H-NMR ： 8.16(d， 1H) ； 8.11(s， 1H) ； 7.85(s， 1H) ； 7.30(d， 1H) ； 7.22(d， 1H) ； 6.26(s， 1H) ； 3.96(s， 3H) ； 2.12(d， 3H))。4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 (xvi)
按 Svnthethic Communications( 合成通讯 )， 1997， 27(7)， 1199-1207 中所述方 法合成标题化合物 ： N- 甲基 -N′ -[1-(2， 4， 6- 三氟 - 苯基 )- 亚甲基 ]- 肼 (xvii)(1.84g， 9.8mmol) 在 150 ℃下熔融 1h。残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为黄色结晶粉末 (tR 1 5.26 分钟 ( 条件 5)， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.17(s， 1H) ； 7.45(dt， 1H) ； 7.00(td， 1H) ； 4.00(s， 3H))。
N- 甲基 -N′ -[1-(2， 4， 6- 三氟 - 苯基 )- 亚甲基 ]- 肼 [1- 甲基 -2-(2， 4， 6- 三氟 亚苄基 ) 肼 ](xvii)
将 2， 4， 6- 三 氟 - 苯 甲 醛 (4.5g， 27.3mmol) 溶 于 Et2O，加 入 甲 肼 (1.43mL， 27.3mmol)， 将 RM 搅拌过夜。将溶剂蒸发， 将固体残渣悬浮于戊烷和 EtOAc 的混合物， 过滤 后， 得到标题化合物， 为亮黄色结晶固体 (tR 4.95 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 198.1)。
中间体 S
4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 甲醛
在 -78 ℃ 下， 将 4， 6- 二 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 ((xvi)， 168mg， 1mmol) 的 无 水 THF(1mL) 溶液滴加到新制 LDA(n-BuLi 1.25mL 和二异丙胺 0.285mL， 2mmol， 10mL THF 溶液 ) 溶液。将溶液在该温度下搅拌 2h， 然后在 -70 ℃下滴加 N- 甲基甲酰苯胺 (formanilide) (0.247mL， 2mmol)。在 -78℃下再搅拌 2 小时后， 将 RM 用冰乙酸淬灭， 用水稀释， 用 EtOAc 萃 取两次。将合并的有机相用盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 将溶剂除去。残渣经闪层析纯化， 得 到标题化合物， 为微黄色结晶粉末 (tR 4.49 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 197， 在 DMSO-d6 中测得 1 的 H-NMR ： 10.2(s， 1H) ； 8.42(s， 1H) ； 7.61(d， 1H) ； 4.04(s， 3H))。
中间体 T
6- 氯 -3-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪
由用类似于用于制备中间体 J 的方法处理 4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 甲醛 ( 中间体 S) 得到标题化合物 (tR 5.28 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 334.1)。
中间体 U
(rac)-6- 氯 -3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪
按类似于中间体 R 方法， 通过用 4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 (xviii) 代替 4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑反应， 得到标题化合物 (tR 7.60 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 376.2， 在 1 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.16(d， 1H)， 8.14(s， 1H)， 7.86(s， 1H)， 7.50(d， 1H)， 7.26(d， 1H)， 4.93(m， 2H)， 1.81(d， 3H)， 1.42(m， 6H)，
4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 (xviii)
将 1N- 异丙基 -N′ -[1-(2， 4， 6- 三氟 - 苯基 )- 亚甲基 ]- 肼 ((xix)， 865mg， 4mmol) 溶于 5mL 均三甲苯， 加入 K2CO3(1.65g， 12.00mmol)， 在 170℃下搅拌 6h。 将 RM 冷却， 过滤， 用 EtOAc 洗涤， 浓缩。 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为黄色油状物 (tR 6.86 分钟 ( 条件 1 5)， MH- ＝ 195， 在 CDCl3 中测得的 H-NMR ： 7.25(s， 1H) ； 6.89(d， 1H)， 6.60(m， 1H)， 4.70(m， 1H)， 1.58(d， 6H)。
N- 异丙基 -N ′ -[1-(2， 4， 6- 三氟 - 苯基 )- 亚甲基 ]- 肼 [1- 异丙基 -2-(2， 4， 6- 三氟亚苄基 ) 肼 ](xix)
将 2， 4， 6- 三氟苯甲醛 (CAS 58551-83-0， 658mg， 4.11mmol) 溶于 Et2O(11mL)， 加入 盐酸异丙肼 (CAS 16726-41-3， 500mg， 4.52mmol)、 水 (1mL) 和 NaHCO3(380mg， 4.52mmol)， 在 RT 下搅拌 3h。形成乳液， 加入 Et2O， 用盐水洗涤， 经 MgSO4 干燥， 将溶剂除去， 得到标题化合 物， 为浅黄色液体 (898mg， tR 5.81 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 217.2)。
实施例 1
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(84mg， 1.45mmol) 和 1- 甲基哌嗪 -2- 酮盐酸盐 (65mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(0.483mL)。 将 RM 在 180℃下搅拌 5h。 将混合物过滤， 得到的滤液经 反相层析 ( 水 +0.1％ TFA/ 乙腈 +0.1％ TFA) 纯化。将收集的流分浓缩， 将残渣溶于 MeOH， 使通过 PL-HCO3MP SPE 短柱。将滤液浓缩， 得到标题化合物， 为微褐色油状物 (tR 3.19 分
钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 423)。
实施例 2
4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
将 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 B， 3.0g， 8.58mmol)、 KF(2.52g， 42.9mmol)、 1- 甲 基 哌 嗪 -2- 酮 盐 酸 盐 (3.88g， 25.7mmol)、 N- 乙基二异丙胺 (5.99mL， 35mmol) 悬浮于 MP(60mL)。将 RM 在 180 ℃下搅拌 8.5h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M Na2CO3(1×) 和水 (2×) 洗涤。将水层再用 EtOAc 萃 取 (2×)。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣经闪层析纯化， 然后在 EtOAc 中结 晶， 得到标题化合物， 为白色固体 (tR 3.19 分钟 ( 条件 1)， (tR 8.84 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 1 8.94(d， 1H) ； 8.45(d， 1H) ； 7.84(d， 1H) ； 7.63(s， 1H) ； 423.2， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 7.59(m， 2H) ； 7.08(d， 1H) ； 4.98(m， 1H) ； 4.02(d， 1H) ； 3.73(d， 1H) ； 3.60(m， 2H) ； 3.31(m， 1H) ； 3.25(m， 1H) ； 2.80(s， 3H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 3
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 6.40g， 18.21mmol)、 KF(5.34g， 91.0mmol)、 哌嗪 -2- 酮 (5.64g， 54.6mmol) 悬浮 于 NMP(60mL)。将 RM 在 180℃下搅拌 7h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M Na2CO3(1×) 和水 (2×) 洗涤。将水层再用 EtOAc 萃取 (2×)。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残 渣经闪层析纯化， 然后在 DCM 中结晶， 得到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 3.02 分钟 ( 条件 1)， (tR 7.58/10.54 分钟 ( 条件 3， MH+ ＝ 409.1， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.94(d， 1H) ； 8.45(d， 1H) ； 8.05(s， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.63(m， 1H) ； 7.62(s， 1H) ； 7.59(m， 1H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.99(m ， 1H) ； 3.97(d ， 1H) ； 3.69(d ， 1H) ； 3.51(m ， 2H) ； 3.19(m ， 1H) ； 3.12(m ， 1H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 4
4-{3-[(R)-1-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌 嗪 -2- 酮
用制备型 HPLC( 柱 ： Chiracel OJ 10×50cm 流动相 ： 庚烷 - 乙醇 60 ∶ 40 流速 ： 110mL/min 检测 ： UV 210nm) 将实施例 3 化合物手性分离， 得到标题化合物。第一个洗脱峰 (tR 85min) 在 EtOAc 中结晶后提供标题化合物， 为微浅褐色固体 (tR 3.00 分钟 ( 条件 1)， (tR 7.58 分钟 ( 条件 3)， MH+ ＝ 409.1， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.94(d， 1H) ； 8.45(d， 1H) ； 8.05(s ， 1H) ； 7.83(d ， 1H) ； 7.63(m ， 1H) ； 7.62(s ， 1H) ； 7.59(m ， 1H) ； 7.05(d ， 1H) ； 4.99(m， 1H) ； 3.97(d， 1H) ； 3.69(d， 1H) ； 3.51(m， 2H) ； 3.19(m， 1H) ； 3.12(m， 1H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 5
4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌 嗪 -2- 酮
用制备型 HPLC( 柱 ： Chiracel OJ 10×50cm 流动相 ： 庚烷 - 乙醇 60 ∶ 40 流速 ： 110mL/ 分钟检测 ： UV 210nm) 将实施例 3 化合物手性分离， 得到标题化合物。第二个洗脱峰 (tR 130min) 在 EtOAc 中结晶后提供标题化合物， 为微浅褐色固体 (tR 3.00 分钟 ( 条件 1)， (tR 10.54 分钟 ( 条件 3)， MH+ ＝ 409.1， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.94(d， 1H) ； 8.45(d， 1H) ； 8.05(s ， 1H) ； 7.83(d ， 1H) ； 7.63(m ， 1H) ； 7.62(s ， 1H) ； 7.59(m ， 1H) ； 7.05(d ， 1H) ； 4.99(m， 1H) ； 3.97(d， 1H) ； 3.69(d， 1H) ； 3.51(m， 2H) ； 3.19(m， 1H) ； 3.12(m， 1H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 6
(rac)-5， 7- 二氟 -6-[1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]- 喹 啉
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二 氟 - 喹 啉 ( 中间体 C， 200mg， 0.569mmol)、 KF(371mg， 6.26mmol) 和哌嗪 (490mg， 5.69mmol) 悬浮于 NMP(2.85mL)。将 RM 在 170℃下搅拌 1h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M Na2CO3(1×) 和水 (2×) 洗涤。将水层再用 EtOAc 萃取 (2×)。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残 渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为黄色泡沫状物 (tR 2.78 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 395)。
实施例 7 5， 7- 二氟 -6-[(S)-1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]- 喹啉
将 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 B， 200mg， 0.569mmol)、 KF(371mg， 6.26mmol) 和 哌 嗪 (490mg， 5.69mmol) 悬 浮 于 NMP(2.85mL)。将 RM 在 170 ℃下搅拌 1h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M Na2CO3(1×) 和 水 (2×) 洗涤。将水层再用 EtOAc 萃取 (2×)。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓 缩。残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为黄色泡沫状物 (tR 2.78 分钟 ( 条件 1)， MH+ 1 ＝ 395， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.45(d， 1H) ； 7.77(d， 1H) ； 7.61(d， 1H) ； 7.59(s， 1H) ； 7.58(m， 1H) ； 7.02(d， 1H) ； 4.95(m， 1H) ； 3.23(m， 2H) ； 3.07(m， 2H) ； 2.62(m， 2H) ； 2.56(m， 2H) ； 1.87(d， 3H))。实施例 8
(rac)-5， 7- 二 氟 -6-{1-[6-(4- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 ]- 乙基 }- 喹啉
(rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中 间 体 C， 69mg， 0.20mmol)、 KF(58mg， 1.0mmol) 和 N- 甲 基 - 哌 嗪 (60mg， 0.60mmol) 悬 浮 于 NMP(1.0mL)。将 RM 在 170 ℃下搅拌 2h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M Na2CO3(1×) 和水 (2×) 洗涤。将水层再用 EtOAc 萃取 (2×)。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣 经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为黄色泡沫状物 (tR 2.83 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 409.1)。
实施例 9
5， 7- 二 氟 -6-{(S)-1-[6-(4- 甲 基 - 哌 嗪 -1- 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 ]- 乙基 }- 喹啉
按类似于实施例 8 的方法， 用 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 B) 代 替 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉制备标题化合物 (tR 2.85 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 1 409.1， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.94(d， 1H) ； 8.45(d， 1H) ； 7.78(d， 1H) ； 7.63(d， 1H) ； 7.60(s， 1H) ； 7.59(d， 1H) ； 7.04(d， 1H) ； 4.96(m， 1H) ； 3.15-3.35(m， 4H) ； 2.22-2.11(m， 4H) ； 2.06(s， 3H) ； 1.87(d， 3H))。
实施例 10
(rac)-1-(4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )- 乙酮
将 (rac)-5， 7- 二氟 -6-[1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]- 喹 啉 ( 实 施 例 6， 50mg， 0.127mmol) 溶 于 吡 啶 (1.27mL)， 加 入 乙 酰 氯 (0.014mL， 0.190mmol)。将 RM 在 RT 下搅拌 0.5h。将混合物浓缩， 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合 MH+437). 物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 3.36 分钟 ( 条件 1)，
实施例 11
1-(4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )- 乙酮
按类似于实施例 10 的方法， 用 5， 7- 二氟 -6-[(S)-1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]- 喹 啉 ( 实 施 例 7) 代 替 (rac)-5， 7- 二 氟 -6-[1-(6- 哌 嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]- 喹啉制备标题化合物 (tR 3.39 分钟 ( 条件 1)， (tR 8.38 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 437， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.94(d， 1H) ； 8.49(d， 1H) ； 7.82(d， 1H) ； 7.65(d， 1H) ； 7.62(s， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.07(d， 1H) ； 4.98(m， 1H) ； 3.15-3.40(m， 8H) ； 1.98(s， 3H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 12
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 甲醛
将 (rac)-5， 7- 二氟 -6-[1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]- 喹 啉 ( 实 施 例 6， 50mg， 0.127mmol) 和 甲 酸 4- 硝 基 苯 酯 (29.7mg， 0.177mmol) 溶 于 DCM(1.27mL)， 加入三乙胺 (0.021mL， 0.152mmol)。将 RM 在 RT 下搅拌 0.5h。将混合物浓 缩， 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为白色泡沫状物 (tR 3.25 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 423)。
实施例 13
4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌 嗪 -1- 甲醛
按类似于实施例 12 的方法， 用 5， 7- 二氟 -6-[(S)-1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]- 喹 啉 ( 实 施 例 7) 代 替 (rac)-5， 7- 二 氟 -6-[1-(6- 哌 嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]- 喹啉制备标题化合物 (tR 3.28 分钟 ( 条件 1)， (tR 9.84 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 423， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.95(d， 1H) ；
8.47(d， 1H) ； 8.02(s， 1H) ； 7.82(d， 1H) ； 7.65(d， 1H) ； 7.63(s， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.08(d， 1H) ； 4.98(m， 1H) ； 3.15-3.40(m， 8H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 14
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 甲酸甲酯
将 (rac)-5， 7- 二氟 -6-[1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]- 喹啉 ( 实施例 6， 35mg， 0.089mmol) 溶于吡啶 (0.89mL)， 加入氯甲酸甲酯 (0.010mL， 0.133mmol)。将 RM 在 RT 下搅拌 1.5h。将混合物浓缩， 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合 物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 3.70 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 453)。
实施例 15
( 外 消 旋 )4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 甲酰胺
按 类 似 于 实 施 例 3 的 方 法，用 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C) 和哌嗪 -1- 甲酰胺代替哌嗪 -2- 酮制备 标题化合物 (tR 3.16 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 438， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.46(d， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.65(d， 1H) ； 7.61(s， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.08(d， 1H) ； 6.07(s， 2H) ； 4.98(m， 1H) ； 3.15-3.40(m， 8H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 16
4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌 嗪 -1- 甲酰胺
按类似于实施例 3 的方法， 用 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 B) 和哌嗪 -1- 甲酰胺代替哌嗪 -2- 酮制备标题化合物 (tR 3.17 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 438， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.46(d， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.65(d， 1H) ； 7.61(s， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.08(d， 1H) ； 6.07(s， 2H) ； 4.98(m， 1H) ； 3.15-3.40(m， 8H) ； 1.88(d， 3H))。实施例 17
(rac)-1-(4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )-2， 2， 2- 三氟 - 乙酮
将 (rac)-5， 7- 二氟 -6-[1-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]- 喹啉 ( 实施例 6， 50mg， 0.127mmol) 和三乙胺 (0.141mL， 1.014mmol) 溶于 THF(1.27mL)， 加入三氟乙酸酐 (0.070mL， 0.507mmol)。将 RM 在 RT 下搅拌 0.75h。将混合物用 EtOAc 稀 释， 用 1M NaHCO3(1×) 和盐水 (1×) 洗涤。 将水层再用 EtOAc 萃取 (1×)。 合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 4.00分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 491， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.48(d， 1H) ； 7.86(d， 1H) ； 7.66(d， 1H) ； 7.64(s， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.06(d， 1H) ； 4.99(m， 1H) ； 3.25-3.55(m， 8H) ； 1.88(d， 3H))。
实施例 18
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-3- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 55mg， 0.160mmol)、 KF(46.3mg， 0.798mmol)、 3- 甲基哌嗪 (54.6mg， 0.479mmol) 悬浮于 NMP(532μL)。将 RM 在 180 ℃搅拌 16h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。收集流分， 将乙腈除去。将流分溶于 EtOAc/MeOH(9/1)， 用 5％ Na2CO3 溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥， 将溶剂除去。得到褐色固体 (tR 0.9 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 423)
实施例 19
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-[1， 4] 二氮杂环庚 -5- 酮
按类似于实施例 18 的方法， 用 1， 4- 二氮杂环庚 -5- 酮代替 3- 甲基哌嗪 -2- 酮， 在 180℃下保持 5h， 制备标题化合物 (tR 0.9 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 423)
实施例 20
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1- 环戊基哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(84mg， 1.450mmol)、 1- 环戊基哌嗪 -2- 酮 TFA 盐 (129mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(483μL)。将 RM 在 180℃搅拌 5h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙 腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。将流分收集， 将乙腈除去。将残渣溶于 MeOH， 使其通过 polymer lab 的 PL-HCO3MP SPE 柱。将溶剂除去， 得到褐色固体 (tR 1.1 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 477)。
实施例 21
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1， 3- 二甲基哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(84mg， 1.450mmol)、 1， 3- 二甲基哌嗪 -2- 酮 HCl 盐 (75mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(483μL)。将 RM 在 180℃下搅拌 20h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。将流分收集， 将乙腈除去。将残渣溶于 MeOH， 使溶液通过 polymer lab 的 PL-HCO3MP SPE 短柱。将溶剂除去， 得到褐色固体 (tR 0.9 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 437)。
实施例 22
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1- 苯基哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中 间 体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(84mg， 1.450mmol)、 1- 苯 基 哌 嗪 -2- 酮 TFA 盐 (133mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(483μL)。将 RM 在 180℃下搅拌 5h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。将流分收集， 将乙腈除去。将残渣溶于 MeOH， 使溶液通过 polymer lab 的 PL-HCO3MPSPE 短柱。将溶剂除去， 得到褐色固体 (tR 1.0 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 485)。
实施例 23
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-5- 甲基哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(84mg， 1.450mmol)、 5- 甲基哌嗪 -2- 酮盐酸盐 (65.5mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(483μL)。将 RM 在 180℃下搅拌 16h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。将流分收集， 将乙腈除去。将残渣溶于 MeOH， 使溶液通过 polymer lab 的 PL-HCO3MPSPE 短柱。将溶剂除去， 得到褐色固体 (tR 0.9 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 423)。
实施例 24
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-6- 甲基哌嗪 -2- 酮将 (rae)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中 间体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(42.1mg， 0.725mmol)、 6- 甲基哌嗪 -2- 酮 (49.7mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(483μL)。将 RM 在 180℃下搅拌 16h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。将流分收集， 将乙腈除去。将残渣溶于 MeOH， 使溶液通过 polymer lab 的 PL-HCO3MPSPE 短柱。将溶剂除去， 得到褐色固体 (tR 0.9 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 423)。
实施例 25
(rac)-4-{3-[1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1-( 吡啶 -2- 基 ) 哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 C， 50mg， 0.145mmol)、 KF(84mg， 1.450mmol)、 1-( 吡啶 -2- 基 ) 哌嗪 -2- 酮二盐酸 盐 (109mg， 0.435mmol) 悬浮于 NMP(483μL)。将 RM 在 180℃下搅拌 16h。混合物经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1％ TFA) 洗脱。将流分收集， 将乙腈除去。将残渣溶于 MeOH， 通 过 polymer lab 的 PL-HCO3MP SPE 短柱。将溶剂除去， 得到褐色固体 (tR 1.0 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 486)。
实施例 26
4-{3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
将 6- 氯 -3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 ( 中 间 体 E， 50.0mg， 0.152mmol)、 KF(26.4mg， 0.455mmol) 和 1- 甲 基 哌 嗪 (perazine)-2- 酮盐酸盐 (51.9mg， 0.455mmol) 悬浮于 NMP(1mL)。 将 RM 在 180℃下搅拌 5h。 将混合物用 EtOAc 稀释， 用 10％ NaHCO3(2×) 和水 (4×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干 燥， 过滤， 浓缩。 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 3.66 分钟 ( 条
件 5)， (tR 12.22 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 408.2， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 7.92(s， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.49(m， 3H) ； 7.11(d， 1H) ； 4.78(m， 1H) ； 4.00(d， 1H) ； 3.95(s， 3H) ； 3.86(d， 1H) ； 3.67(m， 2H) ； 3.30(m， 2H) ； 2.80(s， 3H) ； 1.71(d， 3H))。
实施例 27
(rac)-4-{3-[1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6- 氯 -3-[1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 G， 100mg， 0.303mmol)、 KF(88mg， 1.5mmol)、 哌嗪 -2- 酮 (91mg， 0.91mmol) 悬浮于 NMP(1mL)。将 RM 在 180℃下搅拌 2h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M NaHCO3(1×) 过滤， 浓 和水 (2×) 洗涤。将水层再用 EtOAc 萃取 (2×)。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 缩。残渣经制备型 HPLC 纯化， 用乙腈和水 (+0.1 ％ TFA) 洗脱。将流分合并， 冻干。将残 渣溶于 MeOH， 通过 HCO3 SPE 短柱， 以除去 TFA 盐， 将残渣用戊烷研磨。将沉淀滤出， 得到标 1 题化合物， 为白色固体 (tR 0.88 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 394， 在 DMSO-d6 中得到的 H-NMR ： 8.10(br.s， 1H) ； 7.95-7.87(m， 2H) ； 7.65(s， 1H) ； 7.51(s， 1H) ； 7.54(d， 1H) ； 7.49(s， 1H) ； 7.22(d， 1H) ； 4.79(q， 1H) ； 3.95(s， 4H) ； 3.87-3.78(m， 1H) ； 3.67-3.55(m， 2H) ； 3.22(dd， 1H) ； 3.29-3.14(m， 1H) ； 1.71(d， 3H))。
实施例 28
4-{3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -2- 酮
将 6- 氯 -3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 E， 66.0mg， 0.2mmol)、 KF(59.3mg， 1.0mmol) 和哌嗪 -2- 酮 (61.9mg， 0.6mmol) 悬浮于 NMP(0.5mL)。将 RM 在 180℃下搅拌 3h。将混合物用 CH3CN 稀释， 经反相层析 (Büchi MPLC ： 5-24％ CH3CN， 0.1％ HCOOH) 纯化。将流分合并， 浓缩， 用 NaHCO3 中和， 用 EtOAc 萃取。 合并的有机液经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩， 得到标题化合物， 为黄色泡沫状物 (tR 3.53 分 钟 ( 条件 4)， (tR 8.25( 条件 5)， MH+ ＝ 394.3， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.04(s， 1H) ； 7.92(s， 1H) ； 7.81(d， 1H) ； 7.50(m， 1H) ； 7.46(d， 1H) ； 7.06(d， 1H) ； 4.78(m， 1H) ； 3.95(s， 3H) ； 3.95(d， 1H) ； 3.80(d， 1H) ； 3.58(m， 2H) ； 3.22(m， 2H) ； 1.71(d， 3H))。
实施例 29
1-(4-{3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )- 乙酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 6- 氯 -3-[(S)-1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 E)(50mg， 0.153mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (39.2mg， 0.306mmol) 制备标题化合物。(tR 3.67 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 421， 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 7.93(s， 1H) ； 7.81(d， 1H) ； 7.52(d， 1H) ； 7.50(s， 1H) ； 7.47(d， 1H) ； 4.75(m， 1H) ； 3.95(s， 3H) ； 3.42(m， 6H) ； 2.00(s， 3H) ； 1.70(d， 3H))。
实施例 30
4-[3-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ]-1- 甲基 - 哌 嗪 -2- 酮
按类似于实施例 1 的方法， 用 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-5， 7- 二 氟 - 喹啉 ( 中间体 H) 代替 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉制备标题化合物。(tR 3.49 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 409.1， 在 DMSO-d6 中测得 1 的 H-NMR ： 8.94(m， 1H) ； 8.48(d， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.66(d， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.40(s， 1H) ； 7.12(d， 1H) ； 4.43(s， 2H) ； 4.02(s， 2H) ； 3.73(m， 2H) ； 3.38(m， 2H) ； 2.85(s， 3H))。
实施例 31
4-[3-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ]- 哌嗪 -2- 酮
按类似于实施例 3 的方法， 用 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-5， 7- 二 氟 - 喹啉 ( 中间体 H) 制备标题化合物 (tR 2.79 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 395， 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 8.97(d， 1H) ； 8.49(d， 1H) ； 8.12(s， 1H) ； 7.84(d， 1H) ； 7.68(d， 1H) ； 7.61(m， 1H) ； 7.41(s， 1H) ； 7.11(d， 1H) ； 4.45(s， 2H) ； 3.99(s， 2H) ； 3.66(m， 2H) ； 3.27(m， 2H))。
实施例 32
5， 7- 二氟 -6-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )- 喹啉
按类似于实施例 6 的方法， 用 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-5， 7- 二 氟 - 喹啉 ( 中间体 H) 制备标题化合物 (tR 2.96 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 381.2， 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 8.94(d， 1H) ； 8.46(d， 1H) ； 8.75(d， 1H) ； 7.67(d， 1H) ； 7.59(m， 1H) ； 7.37(s， 1H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.41(s， 2H) ； 3.30(m， 4H) ； 2.70(m， 4H))。
实施例 33
5， 7- 二氟 -6-[6-(4- 甲基 - 哌嗪 -1- 基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 ]- 喹 啉
按类似于实施例 8 的方法， 用 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 H) 制备标题化合物 (tR 2.97 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 395.1， 在 1 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR， 600MHz ： 9.03(d， 1H) ； 8.55(d， 1H) ； 8.28(d， 1H) ； 8.17(s， 1H) ； 7.78(m， 2H) ； 7.66(m， 1H) ； 4.55(s， 2H) ； 4.39(d， 2H) ； 3.56(d， 2H) ； 3.33(m， 2H)3.07(m， 2H) ； 2.80(s， 3H))。
实施例 34
1-{4-[3-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 甲 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ]- 哌 嗪 -1- 基 }- 乙酮
按类似于实施例 10 的方法， 用 5， 7- 二氟 -6-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基甲基 )- 喹啉 ( 实施例 32) 制备标题化合物 (tR 3.58 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 423.1， 1 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.49(d， 1H) ； 7.81(d， 1H) ； 7.68(d， 1H) ； 7.59(m， 1H) ； 7.40(s， 1H) ； 7.11(d， 1H) ； 4.42(s， 2H) ； 3.47(s， 6H) ； 3.40(m， 2H) ； 2.01(s， 3H))。
实施例 35
4-[3-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ]- 哌嗪 -1- 甲 醛
按类似于实施例 12 的方法， 用 5， 7- 二氟 -6-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )- 喹啉 ( 实施例 32) 制备标题化合物 (tR 3.53 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 1 409.1， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.48(d， 1H) ； 8.06(s， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.68(d， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.42(s， 1H) ； 7.14(d， 1H) ； 4.43(s， 2H) ； 3.50(m， 2H) ； 3.42(s， 2H) ； 3.32(s， 4H))。
实施例 36
4-[3-(5， 7- 二氟 - 喹啉 -6- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ]- 哌嗪 -1- 甲 酸甲酯
按类似于实施例 14 的方法， 用 5， 7- 二氟 -6-(6- 哌嗪 -1- 基 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基甲基 )- 喹啉 ( 实施例 32) 制备标题化合物 (tR 3.88 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 439.1， 1 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.95(d， 1H) ； 8.48(d， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.68(d， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.44(s， 1H) ； 7.13(d， 1H) ； 4.43(s， 2H) ； 3.61(s， 3H) ； 3.42(m， 8H))。
实施例 37
4-[3-(7- 氟 - 喹 啉 -6- 基 甲 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ]-1- 甲 基 - 哌 嗪 -2- 酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 6-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 甲 基 )-7- 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 J， 50mg， 0.160mmol) 和 1- 甲 基 哌 嗪 -2- 酮 盐 酸 盐 (36.5mg， 0.320mmol) 制备标题化合物 (tR 3.11 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 391， 在 DMSO-d6 中测得的 1 H-NMR ： 8.84(d， 1H) ； 8.33(d， 1H) ； 7.95(s， 1H) ； 7.85(d， 1H) ； 7.71(d， 1H) ； 7.48(m， 1H) ； 7.46(s， 1H) ； 7.15(d， 1H) ； 4.42(s， 2H) ； 4.06(s， 2H) ； 3.75(m， 2H) ； 3.49(m， 2H) ； 2.83(m， 3H))。
实施例 38
4-[3-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ]- 哌嗪 -2- 酮
将 6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲基 )-7- 氟 - 喹啉 ( 中间体 J， 50mg， 0.160mmol)、 哌嗪 -2- 酮 (80mg， 0.799mmol) 和 KF(27.9mg， 0.480mmol) 悬浮于 NMP(1.0mL) 制备标题化合物。将 RM 在 180℃下搅拌 5h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 1M NaHCO3(1×) 和水 (2×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣经闪层析纯化， 得到标 1 题化合物， 为泡沫状物 (tR 2.88 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 377， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.85(d， 1H) ； 8.33(d， 1H) ； 8.07(s， 1H) ； 7.98(d， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.74(m， 1H) ； 7.5(s， 2H) ； 7.11(d， 1H) ； 4.41(s， 2H) ； 4.00(s， 2H) ； 3.67(m， 2H) ； 3.26(m， 2H))。
实施例 39
1-{4-[3-(7- 氟 - 喹 啉 -6- 基 甲 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ]- 哌 嗪 -1- 基 }- 乙酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 6-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 甲 基 )-7- 氟 - 喹啉 ( 中间体 J， 50mg， 0.160mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (41.0mg， 0.320mmol) 制备 1 标题化合物 (tR 3.17 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 391， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.85(d， 1H) ； 8.33(d， 1H) ； 7.94(d， 1H) ； 7.84(d， 1H) ； 7.74(d， 1H) ； 7.46(m， 1H) ； 7.44(s， 1H) ； 7.14(d， 1H) ； 4.40(s， 2H) ； 3.48(s， 6H) ； 3.42(m， 2H) ； 2.00(s， 3H))。
实施例 40
(rac)-4-{3-[1-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }-1- 甲 基 - 哌嗪 -2- 酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法，用 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-7- 氟 - 喹啉 ( 中间体 K， 50mg， 0.153mmol)、 1- 甲基哌嗪 -2- 酮盐酸盐 (46.1mg， 0.306mmol) 制备标题化合物 (tR 3.24 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 404， 在 DMSO-d6 中 1 测 得 的 H-NMR ： 8.83(d， 1H) ； 8.28(d， 1H) ； 7.84(s， 1H) ； 7.81(d， 1H) ； 7.72(d， 1H) ； 7.56(s， 1H) ； 7.43(m ， 1H) ； 7.11(d ， 1H) ； 4.88(m ， 1H) ； 3.98(d ， 1H) ； 3.83(m ， 1H) ； 3.25(m ， 2H) ； 2.77(s， 3H) ； 1.78(d， 3H))。
实施例 41
(rac)-4-{3-[1-(7- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -2- 酮
按 类 似 于 实 施 例 3 的 方 法，用 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-7- 氟 - 喹啉 ( 中间体 K) 代替 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉制备标题化合物 (tR 2.55 分钟 ( 条件 1)， MH+ ＝ 1 391.1， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.85(d， 1H) ； 8.31(d， 1H) ； 8.07(s， 1H) ； 7.85(m， 2H) ； 7.74(d， 1H) ； 7.55(s， 1H) ； 7.46(m， 1H) ； 7.09(d， 1H) ； 4.91(m， 1H) ； 3.97(d， 1H) ； 3.80(d， 1H) ； 3.58(m， 2H) ； 3.20(m， 2H) ； 1.80(d， 3H))。
实施例 42
(rac)-1-(4-{3-[1-(7- 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )- 乙酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法，用 (rac)-6-[1-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-7- 氟 - 喹啉 ( 中间体 K， 50mg， 0.153mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (39.2mg， 0.306mmol) 制备标题化合物 (tR 3.33 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 419， 在 DMSO-d6 中测得的 1 H-NMR ： 8.83(d， 1H) ； 8.30(d， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.74(d， 1H) ； 7.56(s， 1H) ； 7.44(m， 1H) ； 7.10(d， 1H) ； 4.87(m， 1H) ； 3.37(m， 8H) ； 1.98(s， 3H) ； 1.78(d， 3H))。
实施例 43
4-[3-(5- 氟 - 喹 啉 -6- 基 甲 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ]-1- 甲 基 - 哌 嗪 -2- 酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 6-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 甲 基 )-5- 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 N， 70mg， 0.224mmol)、 1- 甲 基 哌 嗪 -2- 酮 盐 酸 盐 (67.4mg， 0.448mmol) 制备标题化合物 (tR 3.31 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 391， 在 DMSO-d6 中测得的 1 H-NMR ： 8.91(m， 1H) ； 8.47(d， 1H) ； 7.85(d， 1H) ； 7.78(d， 1H) ； 7.69(d， 1H) ； 7.66(s， 1H) ； 7.61(m， 1H) ； 7.50(s， 1H) ； 4.42(s， 2H) ； 4.03(s， 2H) ； 3.74(m， 2H) ； 3.35(m， 2H) ； 2.84(s，
3H))。
实施例 44 4-[3-(5- 氟 - 喹啉 -6- 基甲基 )- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ]- 哌嗪 -2- 酮按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 6-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 甲 基 )-5- 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 N， 100mg， 0.320mmol)、 哌 嗪 -2- 酮 (96mg， 0.959mmol) 制 备 标 1 题化合物 (tR 3.16 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 377， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.91(m， 1H) ； 8.47(d， 1H) ； 8.07(s， 1H) ； 7.84(d， 1H) ； 7.78(d， 1H) ； 7.69(m， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.47(s， 1H) ； 7.12(d， 1H) ； 4.42(s， 2H) ； 3.98(s， 2H) ； 3.66(m， 2H) ； 3.25(m， 4H))。
实施例 45
1-{4-[3-(5- 氟 - 喹 啉 -6- 基 甲 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ]- 哌 嗪 -1- 基 }- 乙酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 6-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 甲 基 )-5- 氟 - 喹啉 ( 中间体 N， 70mg， 0.224mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (57.4mg， 0.448mmol) 制备 1 标题化合物 (tR 3.40 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 405， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.92(m， 1H) ； 8.49(d， 1H) ； 7.83(d， 1H) ； 7.79(d， 1H) ； 7.67(m， 1H) ； 7.61(m， 1H) ； 7.45(s， 1H) ； 7.13(d， 1H) ； 4.41(s， 2H) ； 3.47(s， 4H) ； 3.41(m， 1H) ； 3.28(m， 1H) ； 2.00(s， 3H))。
实施例 46
(rac)-4-{3-[1-(5- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }-1- 甲 基 - 哌嗪 -2- 酮
按 类 似 于 实 施 例 38 的 方 法， 用 (rac)-6-(6- 氯 - 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 甲基 )-5- 氟 - 喹啉 ( 中间体 O， 100mg， 0.306mmol) 和 1- 甲基哌嗪 -2- 酮盐酸盐 (92mg， MH+ ＝ 405， 在 DMSO-d6 中测得的 0.612mmol) 制备标题化合物 (tR 3.44 分钟 ( 条件 5)， 1 H-NMR ： 8.91(m， 1H) ； 8.49(d， 1H) ； 7.94(d， 1H) ； 7.75(d， 1H) ； 7.68(s， 1H) ； 7.60(m， 1H) ； 7.55(m， 1H) ； 7.12(d， 1H) ； 4.97(m， 1H) ； 4.01(d， 1H) ； 3.77(d， 1H) ； 3.62(m， 2H) ； 3.23(m，
2H) ； 2.77(s， 3H) ； 1.77(d， 3H))。
实施例 47
(rac)-4-{3-[1-(5- 氟 - 喹啉 -6- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌 嗪 -2- 酮
按类似于实施例 38 的方法， 用 (rac)-6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲 基 )-5- 氟 - 喹啉 ( 中间体 O， 100mg， 0.320mmol) 和哌嗪 -2- 酮 (92mg， 0.918mmol) 制备标 题化合物 (tR 3.33 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 391， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.91(m， 1H) ； 8.48(d， 1H) ； 8.00(s， 1H) ； 7.81(d， 1H) ； 7.74(d， 1H) ； 7.59(m， 3H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.97(m， 1H) ； 3.96(d， 1H) ； 3.72(d， 1H) ； 3.54(m， 2H) ； 3.15(m， 2H) ； 1.77(d 3H))。
实施例 48
(rac)-1-(4-{3-[1-(5- 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )- 乙酮
按类似于实施例 38 的方法， 用 (rac)-6-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -3- 基甲 基 )-5- 氟 - 喹啉 ( 中间体 O， 100mg， 0.306mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (78mg， 0.612mmol) 制备 1 标题化合物 (tR 3.56 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 419， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.92(m， 1H) ； 8.52(d， 1H) ； 7.79(d， 1H) ； 7.75(d， 1H) ； 7.60(m， 2H) ； 7.53(m， 2H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.95(s， 1H) ； 3.34(m， 8H) ； 1.95(s， 3H) ； 1.77(d， 3H))。
实施例 49
(rac)-4-(3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 )-1- 甲基哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6- 氯 -3-(1-(6- 氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 ( 中 间 体 R， 69.5mg， 0.2mmol)、 KF(58.1mg， 1.0mmol) 和 1- 甲 基 哌 嗪 -2- 酮 盐 酸 盐 (95.0mg， 0.6mmol) 悬浮于 NMP(0.5mL)。将 RM 在 180℃下搅拌 4.5h。将混合物用 CH3CN 稀 释， 经反相层析 (Büchi MPLC ： 3-26％ CH3CN， 0.1％ HCOOH) 纯化。 将流分合并， 浓缩， 用 NaHCO3
中和， 用 EtOAc 萃取。合并的有机液经 Na2SO4 纯化， 过滤， 浓缩， 得到标题化合物， 为浅褐色 1 泡沫状物 (tR 3.76 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 426.2， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.08(s， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.53(s， 1H) ； 7.36(d， 1H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.85(m， 1H) ； 4.01(d， 1H) ； 3.95(s， 3H) ； 3.77(d， 1H) ； 3.62(m， 2H) ； 3.25(m， 2H) ； 2.81(s， 3H) ； 1.79(d， 3H))。
实施例 50
4-{3-[(S)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-1- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
将 6- 氯 -3-[(S)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 Q， 50.0mg， 0.144mmol)、 KF(42.6mg， 0.719mmol) 和 1- 甲基哌嗪 -2- 酮 盐酸盐 (67.0mg， 0.431mmol) 悬浮于 NMP(0.4mL)。将 RM 在 180 ℃下搅拌 4h。将混合物用 过滤， 浓 EtOAc 稀释， 用 10％ NaHCO3(2×) 和水 (4×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 缩。残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 3.75 分钟 ( 条件 5)， (tR 1 11.35 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 425.9， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.07(s， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.52(s， 1H) ； 7.36(d， 1H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.85(m， 1H) ； 4.01(d， 1H) ； 3.95(s， 3H) ； 3.78(d， 1H) ； 3.62(m， 2H) ； 3.27(m， 2H) ； 2.81(s， 3H) ； 1.79(d， 3H))。
实施例 51
(rac)-4-{3-[1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -}- 哌啶 -2- 酮
按类似于实施例 28 的方法， 用 (rac-6- 氯 -3-[1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 R) 代替 (rac)-6- 氯 -3-[1-(6- 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪制备标题化合物 (tR 0.96 分钟 ( 条 1 件 4)， MH+ ＝ 412， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.13-8.00(m， 2H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.54(s， 1H) ； 7.37(d， 1H) ； 7.04(d， 1H) ； 4.85(d， 1H) ； 4.02-3.89(m， 4H) ； 3.72(d， 1H) ； 3.54(q， 2H) ； 3.21(d， 1H) ； 3.13(d， 1H) ； 1.79(d， 3H))。
实施例 52
4-{3-[(S)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -2- 酮
将 6- 氯 -3-[(S)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 Q， 50mg， 0.144mmol)、 KF(42.6mg， 0.719mmol) 和哌嗪 -2- 酮 (44.5mg， 0.431mmol) 悬浮于 NMP(0.3mL)。 将 RM 在 170℃下搅拌 3h。 将混合物用 EtOAc 稀释， 用 10％ NaHCO3(2×) 和水 (4×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣经闪层析纯 化， 然后在 EtOAc/ 戊烷中结晶， 得到标题化合物， 为浅褐色固体 (tR 3.63 分钟 ( 条件 5)， (tR 1 10.82 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 412.2， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.07(s， 1H) ； 8.03(s， 1H) ； 7.79(d， 1H) ； 7.52(s， 1H) ； 7.36(d， 1H) ； 7.02(d， 1H) ； 4.85(m， 1H) ； 3.95(d， 1H) ； 3.95(s， 3H) ； 3.73(d， 1H) ； 3.54(m， 2H) ； 3.17(m， 2H) ； 1.79(d， 3H))。
实施例 53
1-(4-{3-[(S)-1-(4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 乙基 ]- 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 }- 哌嗪 -1- 基 )- 乙酮
将 6- 氯 -3-[(S)-1-(4， 6- 二 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 Q， 36.6mg， 0.105mmol)、 KF(30.6mg， 0.526mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (40.5mg， 0.316mmol) 悬浮于 NMP(0.4mL)。将 RM 在 180℃下搅拌 3.5h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 10％ NaHCO3(2×) 和水 (4×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残 渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 3.80 分钟 ( 条件 5)， tR 13.31 1 分 钟 ( 条 件 3)， MH+ ＝ 440.3， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.12(s， 1H) ； 7.79(d， 1H) ； 7.52(s， 1H) ； 7.39(d， 1H) ； 7.04(d， 1H) ； 4.84(m， 1H) ； 3.96(s， 3H) ； 3.36(m， 8H) ； 1.99(s， 3H) ； 1.79(d， 3H))。
实施例 54
4-[3-(4， 6- 二 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 甲 基 )- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ]- 哌嗪 -2- 酮
按类似于实施例 52 的方法， 用 6- 氯 -3-((4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 甲 基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 T， (100mg， 0.300mmol) 和哌嗪 -2- 酮 (90mg， 0.899mmol) 制备标题化合物 (tR 3.47 分钟 ( 条件 4)， MH+ ＝ 398， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.13(s，
1H) ； 8.11(s ， 1H) ； 7.81(d ， 1H) ； 7.45(d ， 1H) ； 7.27(s ， 1H) ； 7.09(d ， 1H) ， 4.27(s ， 2H) ； 3.98(m， 5H) ； 3.67(m， 2H)， 3.29(m， 2H))。
实施例 55
1-(4-(3-((4， 6- 二 氟 -1- 甲 基 -1H- 吲 唑 -5- 基 ) 甲 基 ) 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 乙酮
将 6- 氯 -3-((4， 6- 二氟 -1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 甲基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 T， 40.0mg， 0.12mmol)、 KF(34.8mg， 0.6mmol) 和 1- 乙酰基哌嗪 (46.1mg， 0.36mmol) 悬浮于 NMP(0.3mL)。 将 RM 在 180℃下搅拌 3h。 将混合物用 EtOAc 稀释， 用 10％ NaHCO3(2×) 和水 (4×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩。残渣经闪层析纯化， 得到标 题化合物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 3.72 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 426.3， 在 DMSO-d6 中测得 1 8.16(s， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.46(d， 1H) ； 7.27(s， 1H) ； 7.10(d， 1H) ； 4.27(s， 2H) ； 的 H-NMR ： 3.98(s， 3H) ； 3.50(s， 6H) ； 3.44(m， 2H) ； 2.03(s， 3H))。
实施例 56
(rac)-4-(3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 )-1- 甲基哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6- 氯 -3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 U， 56.4mg， 0.15mmol)、 KF(43.6mg， 0.75mmol) 和 1- 甲基哌嗪 -2- 酮 盐酸盐 (51.4mg， 0.45mmol) 悬浮于 NMP(0.4mL)。将 RM 在 180 ℃下搅拌 4h。将混合物用 EtOAc 稀释， 用 10％ NaHCO3(2×) 和水 (4×) 洗涤。合并的有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓 缩。 残渣经闪层析纯化， 得到标题化合物， 为浅褐色泡沫状物 (tR 4.06 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 1 454.3， 在 DMSO-d6 中 测 得 的 H-NMR ： 8.09(s， 1H) ； 7.81(d， 1H) ； 7.53(s， 1H) ； 7.43(d， 1H) ； 7.05(d， 1H)， 4.86(m， 2H) ； 4.03(d， 1H) ； 3.81(d， 1H) ； 3.64(m， 2H) ； 3.24(m， 2H) ； 2.80(s， 3H) ； 1.79(d， 3H)， 1.41(m， 6H))。
实施例 57
(rac)-4-(3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 -6- 基 ) 哌嗪 -2- 酮
将 (rac)-6- 氯 -3-(1-(4， 6- 二氟 -1- 异丙基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 乙基 ) 咪唑并 [1， 2-b] 哒嗪 ( 中间体 U， 56.4mg， 0.15mmol)、 KF(44.5mg， 0.75mmol) 和哌嗪 -2- 酮 (46.4mg， 0.45mmol) 悬浮于 NMP(0.5mL)。将 RM 在 180℃下搅拌 3h。将混合物用 CH3CN 稀释， 经反相 层析 (Büchi MPLC ： 5-28％ CH3CN， 0.1％ HCOOH) 纯化。将流分合并， 浓缩， 用 NaHCO3 中和， 用 EtOAc 萃取。合并的有机液经 Na2SO4 干燥， 过滤， 浓缩， 得到标题化合物， 为白色固体 (tR 1 3.98 分钟 ( 条件 5)， MH+ ＝ 440.3， 在 DMSO-d6 中测得的 H-NMR ： 8.09(s， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.53(s， 1H) ； 7.41(d， 1H) ； 7.05(d， 1H)， 4.86(m， 2H) ； 4.03(d， 1H) ； 3.74(d， 1H) ； 3.54(d， 2H) ； 3.17(m， 2H) ； 1.79(d， 3H) ； 1.41(m， 6H))。
实施例 58
(rac)-4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-3- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
按类似于实施例 18 的方法， 用对映体纯 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙基 ]-5， 7- 二氟 - 喹啉 ( 中间体 B， 50mg， 0.145mmol) 代替外消旋体并用反相 层析 (Büchi MPLC ： 5-24％ CH3CN， 0.1％ HCOOH) 纯化， 制备标题化合物 (tR 3.58 分钟 ( 条 件 5)， tR 7.38 和 8.53 分钟 ( 条件 2)， MH+ ＝ 423.1， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.92(m， 1H) ； 8.46(d， 1H) ； 7.90(s， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.69-7.54(m， 3H) ； 7.02(d， 1H) ； 4.95(m， 1H) ； 4.51 和 4.28(q， 1H) ； 3.87(m， 1H) ； 3.38-2.88(m， 3H) ； 1.86(m， 3H) ； 1.32 和 0.92(d， 3H))。
实施例 59
(R)-4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-3- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
按类似于实施例 18 的方法， 用对映体纯 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 B， 50mg， 0.145mmol) 和 (R)-3- 甲 基 - 哌 嗪 -2- 酮 (33.1mg， 0.29mmol) 代替外消旋体并用闪层析纯化， 制备标题化合物。标题化合 tR 8.66 和 10.19 分钟 物和实施例 60 化合物的 2 ∶ 1 的混合物 (tR 3.59 分钟 ( 条件 5)，
( 条件 3， 90％正己烷和 10％异丙醇 )， MH+ ＝ 423.1， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 8.91(m， 1H) ； 8.42(d， 1H) ； 7.90(s， 1H) ； 7.80(d， 1H) ； 7.69-7.50(m， 3H) ； 7.05(d， 1H) ； 4.93(m， 1H) ； 4.50 和 4.28(q， 1H) ； 3.87(m， 1H) ； 3.43-2.89(m， 3H) ； 1.84(m， 3H) ； 1.30 和 0.93(d， 3H))。
实施例 60
(S)-4-{3-[(S)-1-(5， 7- 二 氟 - 喹 啉 -6- 基 )- 乙 基 ]- 咪 唑 并 [1， 2-b] 哒 嗪 -6- 基 }-3- 甲基 - 哌嗪 -2- 酮
按类似于实施例 18 的方法， 用对映体纯 6-[(S)-1-(6- 氯 - 咪唑并 [1， 2-b] 哒 嗪 -3- 基 )- 乙 基 ]-5， 7- 二 氟 - 喹 啉 ( 中 间 体 B， 50mg， 0.145mmol) 和 (S)-3- 甲 基 - 哌 嗪 -2- 酮 (33.1mg， 0.29mmol) 代替外消旋体并用闪层析纯化， 制备标题化合物。标题化合 物和实施例 59 化合物的 70 ∶ 30 的混合物 (tR 3.54 分钟 ( 条件 5)， tR 8.63 和 10.13 分钟 8.92(m， ( 条件 3， 90％正己烷和 10％异丙醇 )， MH+ ＝ 423.1， 在 DMSO-d6 中测得的 1H-NMR ： 1H) ； 8.43(d， 1H) ； 7.90(s， 1H) ； 7.78(d， 1H) ； 7.66-7.51(m， 3H) ； 7.00(d， 1H) ； 4.93(m， 1H) ； 4.49 和 4.29(q， 1H) ； 3.85(m， 1H) ； 3.40-2.88(m， 3H) ； 1.85(m， 3H) ； 1.30 和 0.93(d， 3H))。
C-Met 酶测定
在基于抗体的激酶磷酸化测定中检测了多个本发明化合物， 所述测定方法如下。
EPK c-Met 造形 (Profiling) 测定 ：
用含该酶的胞质区的纯化重组 GST 融合蛋白， 开发了用于 c-Met 受体酪氨酸激酶 的 EPK 激酶测定方法。通过亲和层析纯化 GST-c-Met(969-1390)。
该激酶测定基于 LanthaScreenTM 技术。LanthaScreenTM 是用镧系元素螯合物测定 各种结合伴侣 (binding partner) 之间相互作用以检测时间分辨荧光免疫测定能量转移 (TR-FRET)。在 TR-FRET 激酶测定中， 长寿命镧系元素供体物与抗体缀合， 抗体与激酶反应 的磷酸化产物特异结合， 磷酸化产物用适当的受体荧光团标记。该抗体介导的相互作用使 镧系元素供体和受体接近以致发生共振能量转移， 导致可检测的 FRET 信号增加。
在 384 孔微量滴定板中进行激酶反应， 总反应体积为 9.05μL。用 “化合物稀释系 列的制备” 项下所述适当试验浓度以 0.05μL/ 孔试验化合物制备测定板。通过使 4.5μL ATP 溶液与 4.5μL 酶底物混合液 ( 由激酶和底物组成 ) 混合启动反应。激酶反应物的终浓 度为 35mM Tris/HCl， 1mM DTT， 0.025％吐温 20， 10μM 原钒酸钠， 0.25％ BSA， 0.6％ DMSO， 10mM MgCl2， 3mM MnCl2， 2μM ATP， 50nM 荧光素 -PolyEAY 和 0.3nM 酶。
将反应物在室温下温育 60 分钟， 通过加入 4.5μL 终止液 (50mM EDTA， 0.04 ％ NP40， 20mM Tris/HCl) 终止反应。然后将 4.5μL 检测混合液 (50mM Tris/HCl， 2mM DTT， 0.05％吐温 20， 20μM 原钒酸钠， 1％ BSA， 1.72μg/mL Tb-PY20 抗体 ) 加入终止的反应液。 在室温下温育 30 分钟后， 在 BMG Pherastar 荧光读板仪中测量板。在所有测定中， 均由线 性反应曲线得到化合物对酶活性的影响， 由一个读数确定 ( 终点测量 )。结果汇总于下表 1。
化合物稀释系列的制备
将试验化合物溶于 DMSO(10mM)， 然后转移到携带独特 2D 基质的 1.4mL 平底或 V 形 Matrix 试管。如果不立即使用， 将贮备液在 -20℃下贮存。试验时， 将试管解冻， 通过扫描 仪鉴定， 由此生成指导后续操作步骤的操作方案。
化合物稀释系列在 96 孔板中制备。该模式可最多测定包括 4 个参比化合物在内 的 8 个浓度 ( 单独点 ) 的 40 个单独的试验化合物。稀释方案包括 “预稀释板” 、 “母板” 和 “测定板” 的制备。
预稀释板 ： 将 96 孔聚丙烯孔板用作预稀释板。总共制备 4 个预稀释板， 在各板的 A1-A10 位置上包含 10 个试验化合物， A11 位上为一个标准化合物， A12 位上为一个 DMSO 对 照。所有稀释步骤均在 HamiltonSTAR 自动设备上进行。
母板 ： 将包括标准化合物和对照的 4 个 “预稀释板” 的 100μL 单个化合物稀释系 列转移到包含以下浓度的受试物的 “母板” 中： 1’ 820、 564、 182、 54.6、 18.2、 5.46、 1.82 和 0.546μM， 所有浓度均在 90％ DMSO 中制成。
测定板 ： 然后通过 HummingBird 384 道分配器， 将 “母板” 中的 50nL 各化合物稀 释系列加入 384 孔 “测定板” 制备同样的 “测定板” 。这些板直接用于测定， 测定总体积为 9.05μL。由此在测定中的终化合物浓度为 10、 3.0、 1.0、 0.3、 0.1、 0.03、 0.01 和 0.003μM， DMSO 的终浓度为 0.5％。表 1 ：
依赖 C-Met 细胞测定
按依赖 c-Met 的增殖和磷酸化测定法如下测定多个本发明化合物。GTL-16 增殖 测定 ： 在标准细胞培养条件下， 使 MET 扩增的胃癌细胞系 GTL-16 在补充 10％热灭活的胎牛 血清和 2mM L- 谷氨酰胺的 DMEM[Dulbecco 氏改良 Eagle 培养基 ]( 高浓度葡萄糖 ) 中生
长。为进行增殖测定， 将细胞按 3000 个 / 孔接种在 96 孔板中。24h 后， 在 DMSO 中制备各 化合物的 10 点稀释系列 (3 倍法， 浓度范围 1mM-0.05mM)。然后在生长培养基中， 按两步法 将化合物稀释 1000 倍， 然后按一式三份将稀释液加入细胞， 得到 100mL/ 孔终体积， 化合物 最大终浓度 1mM。包括仅含 DMSO 的对照。将细胞温育 72h， 然后通过加入 20mL MTS 试剂 (CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay， Promega) 测量 活细胞量， 再温育 30’ ， 在 490nm 下读取光密度。 用曲线拟合软件 XLFit 4.3.2 进行拟合， 由 该数据计算 IC50 值。
通过检测测定 GTL-16c-Met 自磷酸化 ：按 10’ 000 细胞密度， 将人 MET 扩增的胃癌细胞 GTL-16 加入在含 20μl 完全生长 培养基 ( 补充 10％ (v/v) 热灭活的胎牛血清和 1mM 丙酮酸钠的 DMEM 高浓度葡萄糖 ) 的 384 孔板中， 在 37％ C/5％ CO2/95％湿度下温育 20h。洗涤细胞， 加入 30μl 测定缓冲液 (DMEM 高浓度葡萄糖、 1mM 丙酮酸钠、 0.1％牛血清白蛋白 )。将化合物在 384 孔化合物板中稀释， 得到 40 个试验化合物的 90％ DMSO 溶液的 8 点系列稀释浓度和参比化合物加 16 个高 - 和 16 个低 ( 抑制 ) 对照。将这些化合物板在测定缓冲液中按 1 ∶ 200 预稀释为化合物预稀 释板， 用 384 孔移液枪将 10μl 预稀释化合物溶液转移到细胞板。得到 0.11％ DMSO 终浓 度。将细胞在 37％ C/5％ CO2/95％湿度下温育 1h。将上清液除去， 将细胞在补充 2mM 钒酸 钠和蛋白酶抑制剂混合物的 25μl RIPA[ 放射免疫沉淀测定 ] 溶胞缓冲液中溶胞， 将细胞 板在 -80℃下贮存。
为检测 p-c-Met， 使用基于的测定方法。(扩大的发光亲近均一测定 (Amplified Luminescent ProximityHomogeneous Assay)， ALPHA， Perkin Elmer， U.S.A) 为非放射性珠基亲近测定技术， 该技术为按均一微量滴定板形式研 究生物分子相互作用。 改进该技术以适合通过使用抗总蛋白和磷酸特异性表位的特异性抗 体对来测定细胞溶胞液中外源性细胞蛋白的磷酸化。 用 384 孔移液枪将 5μl 细胞溶胞液转 移到 384 孔小体积 Proxiplates， 进行检测。首先， 将补充 0.25％ (v/w)TOP BLOCK、 2mM 钒 酸钠和蛋白酶抑制剂混合物的 5μl 抗 c-Met 抗体 (0.25μg/ml f.c.)、 生物素化 PY20 抗体 ( 磷酸酪氨酸抗体， 0.05μg/ml f.c.) 和含 加入含 设置的
蛋白 A 偶联受体珠 (10μg/mlf.c.) 的 RIPA 缓冲液的预混物， 加入， 将板封闭， 在室温下， 在板摇床上温育 2 小时。然后， 包被链霉抗生物素的供体珠 (10μg/ml f.c.) 和 RIPA 缓冲液的 匹配读板仪上读板。结果汇总在下表 2 中。 表2： 2μl 稀释缓冲液， 按以上方法将板在板摇床上再温育 2 小时。在用标准溶解度
在 pH 7 下和模拟空腹状态肠液 (FaSSIF) 中， 按溶解度测定法分别测定了多个本 发明化合物。
通过将约 0.3-1.0mg 药物分别悬浮于 0.1mL pH 7 磷酸盐缓冲液和 FaSSIF 测定化 合物的溶解度。
pH 7 缓冲液得自 MERCK， 称为 磷酸盐缓冲液。按 J.Dressmann 刊物 Jantratid Ekarat ； Janssen Niels ； Reppas Christos ； Dressman Jennifer B Dissolution media simulating conditions in theproximal human gastrointestinal tract ： an update( 模拟人近端胃肠道环境的溶出度介质 ： 更新 ).Pharmaceutical research(2008)， 25(7)， 1663-76 开发模拟空腹状态上小肠的介质 ( 空腹状态模拟肠液 ) 或 FaSSIF。
FaSSIF 的成分如下表 3 所示。
表3：
先将牛磺酸钠和氯化钠溶于 400mL 纯化水， 然后加入 1mL 1N HCl。搅拌 30 分钟 后， 加入卵磷脂， 将混合物超声震荡 30 分钟。 将溶液搅拌 2 小时后， 加入马来酸和 500mL 水。 然后将溶液搅拌过夜， 次日晨用 1NNaOH 将 pH 调至 6.8， 将总体积调至 1 升。终溶液透明， 不 用时， 在 4℃下贮存。
在室温下， 将悬浮液或溶液搅拌过夜。通过过滤将未溶解部分分离 ( 用 0.45μm PVDF 或 PTFE 滤器离心 ) 后， 酌情将溶液用乙腈稀释， 得到小于 1.0mg/mL 的浓度， 然后进行 UPLC 分析。然后通过 UPLC 分析样品， 以得到在不同介质中化合物的浓度水平。分析前， 根 据校正 (an accordingcalibration) 开发出各化合物的分析方法。
UPLC 参 数 ： 柱 Aquity50 ＊ 2.1mm C18 1.7ym ； 柱 温： 40 ℃ ； 流 动 相 A： 水 MilliQ+0.1％ TFA， B 乙腈， 梯度， +0.1％ TFA。结果汇总于下表 4。
表4：
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