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取代的黄嘌呤衍生物
    相关申请
     本申请要求于 2010 年 9 月 1 日提交的美国专利申请号 12/873,991 和于 2009 年 9 月 2 日提交的美国临时申请号 61/239,342 的优先权权益， 其全部教导以引用方式合并于 此。
     背景技术 目前许多药物具有差的吸收、 分布、 代谢和 / 或排泄 (ADME) 性质， 这阻止其广泛应 用。差的 ADME 性质也是未能成为临床试验的候选药物的主要理由。尽管在一些情况中可 使用制剂技术和前药策略来改善某些 ADME 性质， 但这些方法未能克服许多药物和候选药 物存在的固有的 ADME 问题。一个固有问题是快速代谢， 其使得本来在治疗疾病中将非常高 效的许多药物过快地从机体清除。 对于快速药物清除的一种可能的解决方法是频繁或高剂 量给药， 从而获得足够高的药物血浆水平。然而， 这会引起许多潜在的治疗问题， 例如患者 对给药方案的差的顺应性、 在较高剂量时变得更严重的副作用以及增加的治疗成本。
     在一些选择性情况下， 代谢抑制剂将和快速清除的重要药物一起施用。用于治疗 HIV 感染的蛋白酶抑制剂类药物就是这种情况。 这些药物通常和利托那韦 (ritonavir)( 一 种细胞色素 P450 酶 CYP3A4 的抑制剂 ) 一起施用， 酶负责其代谢。利托那韦本身具有副作 用， 且其增加了 HIV 患者的药物负担， 所述 HIV 患者必须一直摄取不同药物的组合。 类似地， 正在测试经受快速 CYP2D6 代谢的右美沙芬和 CYP2D6 抑制剂奎尼丁组合， 用于治疗假性延 髓疾病。
     通常， 药物和细胞色素 P450 抑制剂的组合不是降低药物清除的令人满意的策略。 CYP 酶活性的抑制可以通过同一种酶影响其他药物的代谢和清除。这可以引起其他药物在 机体内积累到毒性水平。
     用于改善药物的代谢性质的可能具有引力的策略是氘改性 ( 如果起作用 )。在该 方法中， 人们试图通过用氘原子代替一个或多个氢原子来减慢 CYP 介导的代谢。氘是氢的 安全、 稳定、 非放射性同位素。氘与碳形成的键比氢与碳形成的键更强。在选择性情况下， 由氘赋予的增加的键强度可以正面影响药物的 ADME 性质， 产生药物效力、 安全性和耐受性 改善的可能性。 同时， 因为氘的大小和形状和氢基本上相同， 与仅包含氢的原有化学实体相 比， 预期由氘代替氢不会影响药物的生化效力和选择性。
     在过去的 35 年内， 已经报告了极少百分比的批准药物的氘置换对代谢速度的影 响 ( 例如参见 Blake， MI 等， J Pharm Sci， 1975， 64 ： 367-91 ； Foster， AB， Adv Drug Res 1985， 14 ： 1-40(“Foster” )； Kushner， DJ 等， Can J Physiol Pharmacol 1999， 79-88 ； Fisher， MB 等， Curr Opin Drug Discov Devel， 2006， 9： 101-09(“Fisher” ))。结果是变 化的和无法预测的。对于一些化合物而言， 氘化引起体内代谢清除降低。对于其他化合物， 代谢没有变化。再其他化合物证实代谢清除降低。氘效果的易变性也导致专家怀疑或取消 氘改性作为抑制不利代谢的可行的药物设计策略。( 参见 Foster 第 35 页和 Fisher 第 101 页 )。
     即使当氘原子结合在已知的代谢位置时， 氘改性对药物代谢性质的影响仍是无法 预测的。仅通过实际制备并测试氘化药物， 人们可以确定代谢速度是否和其未氘化对应物 不同， 以及代谢速度和其未氘化对应物有多少不同。 许多药物具有可能代谢的多个位置。 需 要氘置换的位置和观察对代谢的影响 ( 如果有的话 ) 所需的氘化程度对各种药物而言将是 不同的。
     发明简述
     本发明涉及作为取代的黄嘌呤衍生物的新颖化合物及其药学可接受的盐。例如， 本发明涉及结构上与己酮可可碱 (pentoxifvlline) 相关的新颖的取代的黄嘌呤衍生物。 本发明也提供含有一种或多种本发明化合物和载体的组合物， 和所公开的化合物和组合物 在治疗己酮可可碱和相关化合物对其有益的疾病和病症中的用途。 附图说明
     图 1A 和 1B 描述了经口施用己酮可可碱和本发明化合物的组合后， 在四只单独的 狗中本发明化合物、 己酮可可碱和某些其各自的代谢物的血清水平。
     图 2 描述了用大鼠全血温孵本发明的各种化合物、 己酮可可碱、 (S)-M1 和 (R)-M1 后， 在图 3 中测得的特定代谢物的产生的时程。 图 3 描述了用大鼠全血温孵本发明的各种化合物、 己酮可可碱、 (S)-M1 和 (R)-M1 后， 所产生的特定代谢物的相对含量。
     图 4 描述了用人肝微粒体温孵本发明的各种化合物、 己酮可可碱、 (S)-M1 和 (R)-M1 后， 在图 5 中测得的特定代谢物的产生的时程。
     图 5 描述了用人肝微粒体温孵本发明的各种化合物、 己酮可可碱、 (S)-M1 和 (R)-M1 后， 所产生的特定代谢物的相对含量。
     发明详述
     术语 “改善” 和 “治疗” 可互换使用， 并包括治疗性治疗和预防性治疗两者。这两 个术语是指降低、 抑制、 减弱、 削弱、 阻止疾病 ( 例如， 本发明描述的疾病或紊乱 ) 的发展或 进展或使疾病的发展或进展稳定、 减轻疾病的严重程度或改善与疾病有关的症状。
     “疾病” 是指损害或干扰细胞、 组织或器官的正常功能的任何病症或紊乱。
     应理解， 取决于用于合成的化学材料的来源， 合成化合物中发生天然同位素 丰度的一些变化。因此， 己酮可可碱的制剂将固有地包含少量氘化的同位素异数体 (isotopologues)。尽管有着这种变化， 与本发明化合物的稳定的同位素置换程度相比， 天 然丰度稳定的氢和碳同位素的浓度是小且不重要的。 例如参见 Wada E 等， Seikagaku， 1994， 66 ： 15 ； Gannes LZ 等， Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol， 1998， 119 ： 725。在本 发明化合物中， 当特定位置指明含有氘时， 应理解该位置的氘的丰度显著大于氘的天然丰 度 (0.015％ )。所述化合物中指明含有氘的位置的指明为氘的各原子处的最低同位素富集 系数通常为至少 3340(50.1％氘结合 )。
     本发明所使用的术语 “同位素富集系数” 是指特定同位素的同位素丰度与天然丰 度之比。
     在其他实施方式中， 本发明化合物的各指明的氘原子的同位素富集系数为至少 3500( 各指明的氘原子处的 52.5 ％氘结合 )、 至少 4000(60 ％氘结合 )、 至少 4500(67.5 ％
     氘结合 )、 至少 5000(75 ％氘 )、 至少 5500(82.5 ％氘结合 )、 至少 6000(90 ％氘结合 )、 至 少 6333.3(95 ％ 氘 结 合 )、 至 少 6466.7(97 ％ 氘 结 合 )、 至 少 6600(99 ％ 氘 结 合 ) 或 至 少 6633.3(99.5％氘结合 )。
     本发明化合物中， 非特别称为特定同位素的任何原子是指代表该原子的任何稳定 的同位素。除非另有说明， 当一个位置特别称为 “H” 或 “氢” ， 该位置应理解为含有天然丰度 同位素组成的氢。同样， 除非另有说明， 当一个位置特别称为 “D” 或 “氘” ， 该位置应理解为 含有丰度比氘的天然丰度 (0.015％ ) 至少大 3340 倍的氘 ( 即， 至少 50.1％氘结合 )。
     术语 “同位素异数体” 是指仅在其同位素组成上不同于本发明特定化合物的种类。
     当指本发明化合物时， 术语 “化合物” 是指除了所述分子的组成原子之间的同位素 变化之外， 具有同一化学结构的分子集合。因此， 本领域技术人员将理解， 由包含指定氘原 子的特定化学结构代表的化合物也将包含较少量的在该结构中指定的氘位置中的一个或 多个具有氢原子的同位素异数体。 这种同位素异数体在本发明化合物中的相对含量将取决 于许多因素， 包括用于制备所述化合物的氘化试剂的同位素纯度和用于制备所述化合物的 各个合成步骤中氘结合的效率。 然而， 如上所述， 这种同位素异数体的总相对含量将小于化 合物的 49.9％。 本发明也提供本发明化合物的盐。 本发明化合物的盐在酸和所述化合物的碱性基 团 ( 例如氨基官能团 ) 之间形成， 或在碱和所述化合物的酸性基团 ( 例如羧基官能团 ) 之 间形成。根据另一个实施方式， 所述化合物是药学可接受的酸加成盐。
     本发明所使用的术语 “药学可接受” 是指在正确的医学判断范围内， 适用于和人及 其他哺乳动物的组织接触， 而无不当毒性、 刺激性、 变态反应等， 且与合理的效益 / 风险比 率相称的组分。 “药学可接受的盐” 是指一经施用于接受者， 能直接或间接提供本发明化合 物的任何无毒盐。 “药学可接受的抗衡离子” 是一经施用于接受者就从盐中释放的无毒盐的 离子部分。
     通常用于形成药学可接受的盐的酸包括无机酸， 例如硫化氢、 盐酸、 氢溴酸、 氢碘 酸、 硫酸和磷酸， 以及有机酸， 例如对甲苯磺酸、 水杨酸、 酒石酸、 酸式酒石酸 (bitartaric acid)、 抗坏血酸、 马来酸、 苯磺酸 (besylic acid)、 富马酸、 葡糖酸、 葡糖醛酸、 甲酸、 谷氨 酸、 甲磺酸、 乙磺酸、 苯磺酸、 乳酸、 草酸、 对溴苯磺酸、 碳酸、 琥珀酸、 柠檬酸、 苯甲酸和乙酸， 以及相关无机酸和有机酸。因此， 这种药学可接受的盐包括硫酸盐、 焦硫酸盐、 硫酸氢盐、 亚硫酸盐、 亚硫酸氢盐、 磷酸盐、 磷酸一氢盐、 磷酸二氢盐、 偏磷酸盐、 焦磷酸盐、 氯化物、 溴 化物、 碘化物、 醋酸盐、 丙酸盐、 癸酸盐、 辛酸盐、 丙烯酸盐、 甲酸盐、 异丁酸盐、 癸酸盐、 庚酸 盐、 丙炔酸盐、 乙二酸盐、 丙二酸盐、 琥珀酸盐、 辛二酸盐、 癸二酸盐、 富马酸盐、 马来酸盐、 丁 炔 -1， 4- 二酸盐 (butyne-1， 4-dioate)、 己炔 -1， 6- 二酸盐、 苯甲酸盐、 氯苯甲酸盐、 甲基苯 甲酸盐、 二硝基苯甲酸盐、 羟基苯甲酸盐、 甲氧基苯甲酸盐、 邻苯二甲酸盐、 对苯二酸盐、 磺 酸盐、 二甲苯磺酸盐、 苯乙酸盐、 苯丙酸盐、 苯丁酸盐、 柠檬酸盐、 乳酸盐、 β- 羟基丁酸盐、 羟 乙酸盐、 马来酸盐、 酒石酸盐、 甲磺酸盐、 丙磺酸盐、 萘 -1- 磺酸盐、 萘 -2- 磺酸盐、 扁桃酸盐 和其他盐。 在一个实施方式中， 药学可接受的酸加成盐包括与无机酸 ( 例如盐酸和氢溴酸 ) 形成的那些盐， 和特别是与有机酸 ( 例如马来酸 ) 形成的那些盐。
     本发明也包括本发明化合物的溶剂合物和水合物。如本发明所使用， 术语 “水合 物” 是指还包括通过非共价分子间作用力结合的化学计量或非化学计量的水的化合物。如
     本发明所使用， 术语 “溶剂合物” 是指还包括通过非共价分子间作用力结合的化学计量或非 化学计量的溶剂的化合物， 所述溶剂例如为水、 丙酮、 乙醇、 甲醇、 二氯甲烷、 2- 丙醇等。 1 2
     应理解， 在一些情况下， 式 A、 A1、 I 和 B 中携带取代基 Y 和 Y 的碳原子可以是手 1 2 3 性的 ( 当 Y 、 Y 和 R 彼此不同时 )， 和在其他情况下， 它可以是非手性的 ( 当 Y1、 Y2 和 R3 中 至少两个相同时 )。所述碳原子 ( 即携带 Y1 和 Y2 的碳原子 ) 在式 A、 A1、 I 和 B 中通过 “*” 表示。因此， 本发明手性化合物可以作为单个对映体存在， 或作为对映体的外消旋或非手 性 (scalemic) 混合物存在。因此， 本发明化合物将包括外消旋和非手性对映体混合物， 以 及基本上不含其他可能的立体异构体的单个各自的立体异构体。本发明所使用的术语 “基 本上不含其他立体异构体” 是指存在小于 25％的其他立体异构体、 优选小于 10％的其他立 体异构体、 更优选小于 5％的其他立体异构体和最优选小于 2％的其他立体异构体， 或小于 “X” ％的其他立体异构体 ( 其中 X 是 0 到 100 的数字， 包括端点 )。获得或合成给定化合物 的单个对映体的方法是本领域熟知的， 且可适用于最终化合物或适用于原料或中间体 ( 可 实行的话 )。
     除非另有说明， 当公开的化合物以不指定立体化学的结构命名或描述， 并具有一 个或多个手性中心时， 应理解表示所述化合物的所有可能的立体异构体。 如本发明所使用的术语 “稳定化合物” 是指具有足以允许其制备的稳定性并在足 够长的时间内保持化合物完整性， 从而用于本发明详述目的 ( 例如， 配制成治疗产物、 用于 制备治疗化合物的中间体、 可分离或可储存的中间化合物、 治疗对治疗剂起反应的疾病或 病症 ) 的化合物。
     “D” 是指氘。 “立体异构体” 是指对映体和非对映体两者。 “Tert” 、 “t” 和 “t-” 分 别表示叔位的。 “US” 是指美国。
     如本发明所使用， 术语 “亚烷基” 是指直链或支链的二价烃基， 优选具有 1 到 6 个 碳原子 (C1-6 亚烷基 )。在一些实施方式中， 所述亚烷基具有 1 到 4 个碳原子 (C1-4 亚烷基 )。 本发明所使用的 “亚烷基” 的实例包括但不限于亚甲基 (-CH2-)、 亚乙基 (-CH2CH2-)、 亚丙基 (-CH2CH2CH2-) 及其支链形式， 例如 (-CH(CH3)-)， -CH2CH(CH3)- 等。
     “卤代” 是指氯代、 溴代、 氟代或碘代。
     “烷基” 是指脂族烃基， 其可以是直链或支链的， 链中含有 1 到 15 个碳原子。优选 的烷基链中含有 1 到 12 个碳原子， 更优选 1 到 6 个碳原子。支链是指一个或多个低级烷 基 ( 例如甲基、 乙基或丙基 ) 连接在直链烷基链上。 “低级烷基” 是指直链或支链的链中有 约 1 到约 4 个碳原子。典型的烷基包括甲基、 氟甲基、 二氟甲基、 三氟甲基、 环丙基甲基、 环 戊基甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 叔丁基、 正戊基、 3- 戊基、 庚基、 辛基、 壬基、 癸基和 十二烷基 ； 优选的是甲基、 二氟甲基和异丙基。 烷基可任选被一个或多个选自下组的基团取 代： 卤素、 氰基、 羟基、 羧基、 烷氧基、 烷氧羰基、 氧代、 氨基、 烷基氨基、 二烷基氨基、 杂环烷基 (cycloheteroalkyl)、 烷基杂环烷基、 芳基、 烷基芳基、 杂芳基和烷基杂芳基。 通常烷基取代 基的任何烷基或烷氧基部分含有 1 到 6 个碳原子。
     “芳基” 是指含有 6 到 10 个碳原子的芳族碳环基团。典型的芳基包括苯基或萘基。 芳基可任选被一个或多个相同或不同的基团取代， 所述基团选自烷基、 芳基、 芳烷基、 烷氧 基、 芳氧基、 芳烷氧基、 卤素和硝基。
     通常芳基取代基的任何烷基或烷氧基部分含有 1 到 6 个碳原子。
     “杂芳基” 是指 5 元到 10 元芳族单环或多环烃环系统， 其中环系统中一个或多个碳原子是除了碳之外的元素， 例如氮、 氧或硫。 杂芳基可任选被一个或多个相同或不同的基团 取代， 所述基团选自烷基、 芳基、 芳烷基、 烷氧基、 芳氧基、 芳烷氧基、 卤素和硝基。典型的杂 芳基包括吡嗪基、 呋喃基、 噻吩基、 吡啶基、 嘧啶基、 异噁唑基、 异噻唑基、 哒嗪基、 1， 2， 4- 三 嗪基、 喹啉基和异喹啉基。
     “芳烷基” 是指芳基烷基， 其中芳基和烷基部分如上所述。优选的芳烷基包括低级 烷基部分。典型的芳烷基包括苯甲基和 2- 苯乙基。
     “杂芳烷基” 是指杂芳基烷基， 其中杂芳基和烷基部分如上所述。
     “环烷基” 是指 3 到 10 个碳原子的非芳族单环、 多环或桥接环系统。环烷基任选 被一个或多个卤素或烷基取代。 典型的单环环烷基环包括环戊基、 氟环戊基、 环己基和环庚 基。
     “杂环烷基” 是指非芳族单环、 二环或三环或桥接烃环系统， 其中所述环系统中的 一个或多个原子是除了碳之外的元素， 例如氮、 氧或硫。优选的杂环烷基包括环大小为 3-6 个环原子的环。 典型的杂环烷基包括吡咯烷、 哌啶、 四氢吡喃、 四氢呋喃、 四氢噻喃和四氢噻 吩。
     “环烷基烷基” 是指其中环烷基和烷基部分如上所述的基团。
     “杂环烷基烷基” 是指其中环烷基和烷基部分如上所述的基团。
     术语 “任选被氘取代” 是指涉及部分或化合物中的一个或多个氢原子可被相应数 目的氘原子替换。
     整个说明书中， 变量可以泛指 ( 例如， “各 R” ) 或可以特指 ( 例如， R1、 R2、 R3 等 )。 除非另有说明， 当变量泛指时， 意味着包括特定变量的所有具体实施方式。
     治疗的化合物
     本发明提供式 A 化合物或其药学可接受盐 ：
     其中 ：
     R1 和 R2 各自独立选自氢、 -(C1-C4) 烷基或 -(C1-C4) 亚烷基 -O-(C1-C2) 烷基， 其中 各种情况下的烷基和亚烷基独立且任选被氘取代 ；
     R3 选自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； 4
     R 是任选被氘取代的正亚丁基 ；
     R5 选自氢、 氘、 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 环烷基烷基、 杂环烷基烷基、 芳基和杂芳 基， 其中， 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 环烷基烷基、 杂环烷基烷基、 芳基和杂芳基各自可任选被 取代， 且所述烷基、 环烷基、 杂环烷基、 环烷基烷基、 杂环烷基烷基、 芳基或杂芳基或其任选 的取代基中的一个或多个氢原子可被相应数目的氘原子替换 ； 和 1 2
     (a)Y 和 Y 各自是氟， 或连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O， 或 (b)Y1 选自氟和
     OH ； Y2 选自氢、 氘、 -CH3， -CH2D， -CHD2 和 -CD3 ； 条件是 ： 1 2
     当 Y 和 Y 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O 时， 则 R1、 R2、 R3、 R4 和 R5 中的至少 一个携带至少一个氘原子 ； 和 1 2
     当 Y 为 OH 且 Y 为氢或 -CH3 时， 则 R1、 R 2、 R3、 R4 和 R5 中的至少一个携带至少一个 氘原子。
     在其他实施方式中， 式 A 化合物不是以下化合物 ：
     在式 A 的另一个实施方式中， 当 R1 和 R2 各自为任选被氘取代的甲基且 R5 是氢或 氘时， 则： (i)Y1 是氟代 ； 或 (ii)Y1 是 OH， 且 Y2 选自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3。在该实施方 式的一方面， 所述化合物不是
     在该实施方式的更具体的方面， Y2、 R1、 R 2、 R3 和 R4 中的至少一个携带至少一个氘原子。 在式 A 的又一个实施方式中， R1 和 R2 各自为任选被氘取代的甲基 ； R5 是氢或氘， 且： (a)Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成＝ O， 或 (b)Y1 是 -OH 且 Y2 选自氢和氘， 条件 是：
     当 Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O 时， 则 R1、 R2、 R3、 R4 和 R5 中的至少 一个携带至少一个氘原子 ； 和
     当 Y1 为 OH 时， 则 Y2、 R1、 R2、 R3、 R4 和 R5 中的至少一个携带至少一个氘原子。
     在式 A 或其盐的另一个实施方式中， R5 为 D， 所述化合物具有式 A1 ：
     其中 R1、 R2、 R3、 R4、 Y1 和 Y2 如式 A 所定义。11CN 102480968 A
     说明书和17/85 页在 式 A1 的 一 方 面， R1 和 R2 各 自 独 立 选 自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； R3 选 表示化合物中与 C(Y )(Y ) 连接的 R 基团部分 ； 且 (a)Y 是 OH 且 Y2 选自氢和氘 ；1 2 4自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； R4 选自 -(CH2)4-、 -(CD2)4-、 其中或 (b)Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。
     在式 A1 的更具体的方面， R1 和 R2 各自独立选自 -CH3 和 -CD3 ； R3 选自 -CH3 和 -CD3 ； R4 选自 -(CH2)4- 和 且 (a)Y1 是 OH 且 Y2 选自氢和氘 ； 或 (b)Y1 和 Y2 连同它 们所连接的碳一起形成 C ＝ O。
     在式 A1 的另一方面， R1 和 R2 各自独立选自 -CH3 和 -CD3 ； R3 选自 -CH3 和 -CD3 ； R4 选自 -(CH2)4- 和
     且 Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。另一个实施方式中， 本发明提供式 A 化合物或其盐， 其中 R5 是氢， 所述化合物具有式I：
     其中 ：
     R1 和 R2 各自独立选自氢、 -(C1-C4) 烷基或 -(C1-C4) 亚烷基 -O-(C1-C2) 烷基， 其中 各种情况下的烷基和亚烷基独立且任选被氘取代 ；
     R3 选自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； 4
     R 是任选被氘取代的正亚丁基 ； 和
     (a)Y1 和 Y2 各自是氟， 或连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O ； 或 (b)Y1 选自氟和 OH ； Y2 选自氢、 氘、 -CH3， -CH2D， -CHD2 和 -CD3 ； 条件是 ：
     当 Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O 时， 则 R1、 R2、 R3 和 R4 中的至少一 个携带至少一个氘原子 ； 和
     当 Y1 为 OH 且 Y2 为氢或 -CH3 时， 则 R1、 R2、 R3 和 R4 中的至少一个携带至少一个氘 原子。
     在式 I 的更具体的方面， R1 和 R2 各自独立选自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； R3 选
     -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； R4 选自 -(CH2)4-、 -(CD2)4-、 自 -CH3、 其中1 2 4 1和表示化合物中与 C(Y )(Y ) 连接的 R 基团部分 ； 且： Y 是 OH 且 Y2 选自氢和氘 ； 或Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。
     在式 I 的另一方面， R1 和 R2 各自独立选自 -CH3 和 -CD3 ； R3 选自 -CH3 和 -CD3 ； R4 选 自 -(CH2)4- 和 且： Y1 是 OH 且 Y2 选自氢和氘 ； 或 Y1 和 Y2 连同它们所连接的 碳一起形成 C ＝ O。
     在式 I 的另一方面， R1 和 R2 各自独立选自 -CH3 和 -CD3 ； R3 选自 -CH3 和 -CD3 ； R4 选 自 -(CH2)4- 和
     12且 Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。在上述任何方面的另一个实施方式中， 式 I 化合物不是以下化合物 ：CN 102480968 A说明书8/85 页
     在上述任何方面的又一个实施方式中， 式 I 化合物不是以下化合物 ：
     在上述任何方面的又一个实施方式中， 式 I 化合物不是以下化合物 ：
     本发明的另一个实施方式提供式 II 化合物或其盐 ：R1 和 R2 各自独立选自氢、 -(C1-C4) 烷基或 -(C1-C4) 亚烷基 -O-(C1-C2) 烷基， 其中 各种情况下的烷基和亚烷基独立且任选被氘取代 ；
     R3 选自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； 4
     R 是任选被氘取代的正亚丁基 ； 和 2 3 4
     其中 R 、 R 和 R 中的至少一个携带至少一个氘原子。
     一 个 实 施 方 式 涉 及 式 A、 A1、 I 或 II 化 合 物， 其 中 R2 和 R3 各 自 独 立 选 自 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3。
     另一个实施方式涉及式 A、 A1、 I 或 II 化合物， 其中 R2 和 R3 各自独立选自 -CH3 和 -CD3。
     另一个实施方式涉及式 A、 A1、 I 或 II 化合物， 其中 R1 选自氢、 (C1-C3) 烷基和 (C1-C2) 亚烷基 -O(C1-C2) 烷基。
     另一个实施方式涉及式 A、 A1、 I 或 II 化合物， 其中 R1 是氢、 -CH3、 -CD3、 -CH2CH2CH3
     、 -CD2CH2CH3、 -CD2CD2CH3、 -CD2CD2CD3、 -CH2OCH2CH3、 -CH2OCD2CH3、 -CH2OCD2CD3、 -CD2OCH2CH3、 -CD2OCD 2CH3 或 -CD2OCD2CD3。
     另一个实施方式涉及式 A 化合物， 其中 R5 选自氢、 氘、 烷基、 环烷基、 杂环烷基、 环 烷基烷基和杂环烷基烷基， 其中各个烷基、 环烷基、 杂环烷基、 环烷基烷基和杂环烷基烷基 可被任选取代。
     在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中 ： 4
     a)R 中各亚甲基单元选自 -CH2- 和 -CD2- ； 更具体地 R4 选自 -(CH2)4-、 -(CD2)4-、 和
     ， 其中表示化合物中 R4 与 C(Y1)(Y2) 连接的点 ；b) 当 Y1 是 F 时， Y2 选自氢、 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3 ； 或 1 2 c) 当 Y 是 F 时， Y 是氟 ； 或 d) 当 Y1 和 Y2 不同且 Y2 和 R3 不同且 Y1 和 R3 不同时， “*” 的立体化学由表示 ； 或
     e) 当 Y1 和 Y2 不同且 Y2 和 R3 不同且 Y1 和 R3 不同时， “*” 的立体化学由表示。
     在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中， R1 是 -CD3 ； R2 和 R3 是 -CH3 ； Y1 和 Y2 一起形成 C 和-(CD2)4-、 ＝O； 且 R4 选自 -(CH2)4-、
     在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中， R1 是 -CD3 ； R2 和 R3 是 -CH3 ； Y1 和 Y2 一起形成 C ＝O； 且 R4 选自 -(CH2)4- 和 -(CD2)4-。
     在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中， R1 是 -CD3 ； R2 和 R3 是 -CH3 ； R4 是 -(CH2)4- ； Y1 是氟代 ； 且 Y2 选自氘、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3。
     在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中， R1 是 -CD3 ； R2 和 R3 是 -CH3 ； R4 是 -(CH2)4- ； Y1 是氟代 ； 且 Y2 是氟。
     在式 A 或 A1 的其他实施方式中， R1 是 -CD3 ； R2 和 R3 是 -CH3 ； R4 是 -(CH2)4- ； R5 是 氘； Y1 是氟 ； 且 Y2 选自氘、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3。
     在式 A 或 A1 的其他实施方式中， R1 是 -CD3 ； R2 和 R3 是 -CH3 ； R4 是 -(CH2)4- ； R5 是 氘； Y1 是氟 ； 且 Y2 是氟。 在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中， Y1 是 F ； Y2 选自氢 ； R3 是 -CH3 ； 且 R4 是 -(CH2)4-。
     在式 A、 A1 或 I 的其他实施方式中， Y1 是 F ； Y2 是氟 ； R3 是 -CH3 ； 且 R4 是 -(CH2)4-。 一个实施方式提供式 B 化合物或其药学可接受盐 ：
     其中 R1 和 R2 各自独立选自 -CH3 和 -CD3 ； R5 是氢或氘 ； 各 Z3 是氢或氘 ； 各 Z4 是氢或氘 ； 各 Z5 是氢或氘 ； 且 (a)Y1 是 OH 且 Y2 是氢或氘， 或 (b)Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一 起形成 C ＝ O。
     一个实施方式提供式 B 化合物， 其中 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氢。一方面， R1 和 R2 各自 是 -CD3。另一方面， R5 是氘。另一方面， Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。又 一方面， Y1 是 OH 且 Y2 是氢或氘。
     另一个实施方式提供式 B 化合物， 其中 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氘。一方面， R1 和 R2 各 自是 -CD3。另一方面， R5 是氘。另一方面， Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。又 一方面， Y1 是 OH 且 Y2 是氢或氘。
     又一个实施方式提供式 B 化合物， 其中 R1 和 R2 各自是 -CD3。一方面， R5 是氘。另 一方面， Z3、 Z4 和 Z5 各自是氢且 R5 是氘。另一方面， Z3、 Z4 和 Z5 各自是氘且 R5 是氘。
     其他实施方式提供式 B 化合物， 其中 Y1 和 Y2 连同它们所连接的碳一起形成 C ＝ O。 一方面， R5 是氘。另一方面， Z3、 Z4 和 Z5 各自是氢且 R5 是氘。另一方面， Z3、 Z4 和 Z5 各自是 氘且 R5 是氘。另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3。另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3 且 R5 是氘。 另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3， 且 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氘。另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3， 且 3 4 5 5 1 2 3 4 5 Z、 Z 和 Z 各自是氘且 R 是氘。另一方面， R 和 R 各自是 -CD3， 且Z、 Z 和 Z 各自是氢。另 1 2 3 4 5 5 一方面， R 和 R 各自是 -CD3， 且Z、 Z 和 Z 各自是氢且 R 是氘。
     其他实施方式提供式 B 化合物， 其中 Y1 是 OH 且 Y2 是氢或氘。一方面， R5 是氘。另 一方面， Z3、 Z4 和 Z5 各自是氢且 R5 是氘。另一方面， Z3、 Z4 和 Z5 各自是氘且 R5 是氘。另一方 面， R1 和 R2 各自是 -CD3。另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3 且 R5 是氘。另一方面， R1 和 R2 各 自是 -CD3， 且 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氘。另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3， 且 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氘 且 R5 是氘。另一方面， R1 和 R2 各自是 -CD3， 且 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氢。另一方面， R1 和 R2 各 自是 -CD3， 且 Z3、 Z4 和 Z5 各自是氢且 R5 是氘。
     另一个实施方式提供式 B 化合物， 其中 R5 是氘。
     另一个实施方式提供式 B 化合物， 其中 R5 是氘， Z3、 Z4 和 Z5 是氢且 R1 是 -CD3。
     式 A、 A1、 I 或 II 化合物的具体实施方式包括 ( 下 ) 表 1-6 中所示化合物或其药学 可接受的盐， 其中 表示化合物中与 C(Y1)(Y2) 连接的 R4 部分， 在表中， 表示为 “(R)” 或 “(S)” 的化合物是指携带 Y1 取代基的碳的立体化学。无任何表示并含有与 Y1 和 Y2 结合的 手性碳原子的化合物用于表示对映体的外消旋混合物。
     表1： 式 I 的具体化合物的实例。己酮可可碱及其代谢物的氘化和 / 或氟化类似 物。
     上表 1 显示式 I 的具体化合物的实例。这些实例是己酮可可碱及其代谢物的氘化 和 / 或氟化的类似物。
     表2： 显示式 I 的具体化合物的实例， 其中 R1 是 H 且 Y2 是 CH3 或 CD3。
     上表 2 显示式 I 的具体化合物的实例， 其中 R1 是 H 且 Y2 是 CH3 或 CD3。这些化合 物包括阿比茶碱 (Albifylline)(HWA-138) 的氘化和氟化类似物。研究了阿比茶碱的与己 酮可可碱有关的用途。
     表3： 式 I 的具体实例， 其中 R1 是任选被氘取代的 -CH2-O-CH2CH3。
     上表 3 显示式 I 具体化合物的实例， 其中 R1 是任选被氘取代的 -CH2-O-CH2CH3。在 这些实例中， Y1 是 OH 或 F 且 Y2 是 CH3 或 CD3。这些化合物包括托巴茶碱 (torbafylline) (HWA-448) 的氘化和氟化类似物。研究了托巴茶碱用于治疗抑郁症、 尿失禁、 肠易激综合征 和多发性硬化。
     表4： 式 I 的具体实例， 其中 R1 是任选被氘取代的 -CH2CH2CH3 且 Y1 是 OH 或 F。
     上表 4 显示式 I 具体化合物的实例， 其中 R1 是任选被氘取代的 -CH2CH2CH3。在这 些实例中， Y1 是 OH 或 F， 且 Y2 是 CH3 或 CD3。这些化合物包括 A-802715 的氘化和氟化类似 物。研究了 A-802715 用于治疗感染性休克和抑制同种异体移植反应的影响。
     表5： 式 I 的具体实例， 其中 R1 是任选被氘取代的 -CH2CH2CH3 且 Y1 和 Y2 一起形成 ＝O
     上表 5 显示式 I 具体化合物的实例， 其中 R1 是任选被氘取代的 -CH2CH2CH3。在 这些实例中， Y1 和 Y2 与介于它们中间的碳一起形成羰基。这些化合物包括丙戊茶碱 (propentofylline) 的氘化类似物。研究了丙戊茶碱用于治疗阿尔茨海默病、 神经性疼痛、 外伤性脑损伤、 排尿困难、 视网膜或视神经乳头损害和消化性溃疡。 也研究其用于控制眼内 压、 稳定脑血流量的自动调节和抑制同种异体移植反应的影响。
     表6： 式 A 的具体化合物的实例。己酮可可碱及其代谢物的氘化和 / 或氟化的类 5 似物， 其中 R 是 D。
     上表 6 显示式 A 的具体化合物的实例。这些实例是己酮可可碱及其代谢物的氘化 和 / 或氟化的类似物， 其中 R5 是氘。
     在上述实施方式的一方面， 所述化合物不是化合物 100、 116 或 149 中的任何一个。
     本发明的具体化合物的实例包括以下化合物 ：
     本发明提供式 C 化合物或其药学可接受盐 ：其中 R1 选自 -CH3 和 -CD3 ； R2 选自 -CH3 和 -CD3， Y1 和 Y2 中的一个是 -OH ； 且 Y 1 和 Y2 中的另一个是氘或氢，
     条件是如果 R1 是 CD3 且 R2 是 CH3， 则 Y2 是 -OH。
     一个实施方式提供式 C 化合物， 其中 R1 是 -CH3。
     一个实施方式提供式 C 化合物， 其中 R1 是 -CD3。
     一个实施方式提供式 C 化合物， 其中 R2 是 -CH3。
     一个实施方式提供式 C 化合物， 其中 R2 是 -CD3。
     一个实施方式提供式 C 化合物， 其中 R1 是 -CH3 且 R2 是 -CH3。该实施方式的一方 面， Y1 是 -OH。另一方面， Y2 是 OH。
     一个实施方式提供式 C 化合物或其药学可接受盐， 其中所述化合物具有如下结 构：
     该实施方式的一方面， Y1 是氘。另一方面， Y1 是氢。 一个实施方式提供式 C 化合物或其药学可接受盐， 其中所述化合物具有如下结构：
     该实施方式的一方面， Y2 是氘。另一方面， Y2 是氢。 式 C 化合物的实例包括以下化合物及其药学可接受盐 ：
     本发明也提供式 D 化合物或其药学可接受盐 ：其中 R1 选自 -CH3 和 -CD3 ； R2 选自 -CH3 和 -CD3 ； Y1 和 Y2 中的一个是 -OH ； 且 Y1 和 Y2 中的另一个是氘或氢 ；
     条件是 ：
     (i) 如果 Y1 和 Y2 中的任一个是氘， 则 R2 是 CD3 ； 和 1 2 1
     (ii) 如果 Y 和 Y 中的任一个是氢， 则 R 是 CH3。
     一个实施方式提供式 D 化合物， 其中 R1 是 -CH3。
     一个实施方式提供式 D 化合物， 其中 R1 是 -CD3。
     一个实施方式提供式 D 化合物， 其中 R2 是 -CH3。
     一个实施方式提供式 D 化合物， 其中 R2 是 -CD3。
     一个实施方式提供式 D 化合物， 其中 R1 是 -CH3 且 R2 是 -CH3。该实施方式的一方 面， Y1 是 -OH。另一方面， Y2 是 OH。
     一个实施方式提供式 D 化合物或其药学可接受盐， 其中所述化合物具有如下结构：
     该实施方式的一方面， Y1 是氘。另一方面， Y1 是氢。 一个实施方式提供式 D 化合物或其药学可接受盐， 其中所述化合物具有如下结构：
     该实施方式的一方面， Y2 是氘。另一方面， Y2 是氢。 式 D 化合物的实例包括以下化合物及其药学可接受盐 ：在另一组实施方式中， 上述任何实施方式中的未指明为氘的任何原子以其天然同 位素丰度存在。
     本发明化合物的合成可由本领域普通的合成化学工作者实现。相关过程和中间 体例如在 Sidzhakova， D 等， Farmatsiya， (Sofia， Bulgaria)1988， 38(4) ： 1-5 ； Davis， PJ 等， Xenobiotica， 1985， 15(12) ： 1001-10 ； Akgun， H 等， JPharm Sci， 2001， 26(2) ： 67-71 ； 德 国 专 利 申 请 DD 274334 ； 捷 克 专 利 CS237719， CS201558 ； PCT 专 利 申 请 WO9531450 以 及 日 本 专 利 公 布 JP58150594、 JP58134092、 JP58038284、 JP57200391、 JP57098284、 JP57011981、 JP57024386、 JP57085387、 JP57062278、 JP57080385、 JP57056481、 JP57024385 、 JP57024382、 JP56077279、 JP56032477、 JP56007785、 JP56010188、 JP56010187、 JP55122779 和 JP55076876 中公开。
     这种方法可使用相应的氘化试剂以及任选的含有其他同位素的试剂和 / 或中间 体来进行， 从而合成本发明描述的化合物， 或使用本领域已知的标准合成方案来进行， 从而 将同位素原子引入化学结构中。
     示例合成
     合成式 I 化合物的方法在以下路线中描述。
     路线 1A ： 式 I 化合物的合成
     如路线 1A 所示， 氘化化合物 10 在碳酸钾存在下用氘化的中间体 11 烷基化 ( 其中 X 是氯化物、 溴化物或碘化物 )， 形成式 I 化合物。或者， 可根据美国专利 4289776 的方法使 用甲醇水溶液中的氢氧化钠来形成式 I 化合物。
     路线 1B ： 由式 II 化合物制备其中 Y1 ＝ OH 的化合物
     如路线 1B 所示， 式 II 化合物可用于制备其中 Y1 是 OH 的化合物。因此， 可根据欧 洲专利公开说明书 0330031 的一般方法用硼氢化钠或硼氘化钠 ( 可商购， 99 原子％ D) 还原 式 II 化合物， 来形成其中 Y1 是 OH 且 Y2 是氢或氘的化合物。例如， 通过 Nicklasson， M 等， Chirality， 2002， 14(8) ： 643-652 的方法分离对映体醇产物。在可选方法中， 使用 Pekala， E 等， Acta Poloniae Pharmaceutica， 2007， 64(2) ： 109-113 或 Pekala， E 等， Biotech J， 2007， 2(4) ： 492-496 中公开的方法， 酶促还原得到富含对映体的醇产物。
     由其中 C(Y1)(Y2) 是 C ＝ O 的相应化合物立体选择性制备其中 C(Y1)(Y2) 是 C(H) OH 或 C(D)OH 的化合物可在酮还原酶或羰基还原酶的存在下进行。本发明的其中 C(Y1) (Y2) 是 C(H)OH 或 C(D)OH 的化合物可由其中 C(Y1)(Y2) 是 C ＝ O 的相应化合物通过在酮 还原酶或羰基还原酶存在下在适当的 pH 下在对映体过量至少 80％的情况下用氢化物源 或氘化物源处理从而立体选择性地制备。有助于形成其中 C(H)OH 或 C(D)OH 基的立体化 学是 (S) 的化合物的酮还原酶或羰基还原酶例如可以是 ALMAC 羰基还原酶 CRED A131、 CRED A801、 CRED A901、 CRED A251 或 CRED A271( 各自从 ALMAC Group Ltd， Craigavon， England 商购 ) 中的任何一种、 CODEXIS 酮还原酶 KRED-119、 KRED-137、 KRED-148、 KRED-169、 KRED-174、 KRED-NADH 101、 KRED-NADH 102、 KRED-NADH112 或 KRED-NADH 126( 各 自 从 Codexis Inc.， Redwood City， CA 商购 ) 或 SYNCORE 酮还原酶 ES-KRED-121、 ES-KRED-128、
     ES-KRED-130、 ES-KRED-142、 ES-KRED-175、 ES-KRED-169 或 ES-KRED-171( 各自从 Syncore Labs， Shanghai， China 商 购 ) 中 的 任 何 一 种。 一 方 面， 所 述 酶 选 自 CRED A131、 CRED A251、 KRED-NADH 101、 KRED-NADH 102、 KRED-NADH 112、 KRED-NADH 126、 ES-KRED-121、 ES-KRED-128、 ES-KRED-130、 ES-KRED-142、 ES-KRED-169 或 ES-KRED-171。在更具体的方面， 所述酶选自 CREDA131、 CRED A251 和 KRED-NADH 101。有助于形成其中 C(H)OH 或 C(D)OH 基的立体化学是 (R) 的化合物的酮还原酶或羰基还原酶例如可以是 KRED-NADP-118、 CRED A601-NADP、 CRED A291-NADP、 CREDA311-NADP、 KRED-NAD-110、 ES-KRED-120、 ES-KRED-131、 CREDA101-NADP 中的任何一种。
     反应中所使用的酮还原酶或羰基还原酶的量为底物重量百分比的 0.05 重量％到 10 重量％， 例如 0.5 重量％到 5 重量％。在一个实施方式中， 酶的量为 1.0 重量％到 2.0 重 量％。 在更具体的方面， 酶的量为约 1.0 重量％。 氢化物源是能提供氢负离子或氢负离子的 合成子的化合物或混合物。 氘化物源是能提供氘负离子或氘负离子的合成子的化合物或混 合物。氢化物源或氘化物源包含催化的辅因子 (co-factor) 和任选的辅因子再生系统。和 酮还原酶或羰基还原酶一起用于本发明方法的催化的辅因子选自 NAD、 NADP、 NADH、 NADPH、 2 2 NAD H 和 NADP H。辅因子的选择可以基于 (a) 辅因子再生系统的存在或不存在 ； (b) 氢化物 源和氘化物源的要求 ； 和 (c) 进行本发明方法的适当的 pH 是指在整个反应中保持 pH 为 6.0 到 7.5 的缓冲条件。在一个实施方式中， 反应的 pH 保持为 6.5 到 7.3。在另一个实施方式 中， 反应的 pH 保持为 6.0 到 7.0。通常逐滴加入 KOH 用于保持所需 pH， 因为酶促反应产生 酸。一方面， 反应的 pH 保持为 6.90 到 7.05。所述方法可在约 20℃到 37℃的温度下进行。 该实施方式的一方面， 温度为约 29℃到 32℃。所述方法可在约 12 小时到约 24 小时的时期 内进行。在一个实施方式中， 所述时期为约 24 小时到约 40 小时。在一个实施方式中， 所述 时期为约 40 小时到约 72 小时。在一个实施方式中， 所述时期为足以使存在的其中 C(Y1) (Y2) 是 C ＝ O 的化合物为初始量的小于约 5％的时期。
     化合物 10 的合成
     参考路线 1A， 可用作化合物 10 来制备式 I 化合物的化合物是已知的， 且包括但不 1 2 1 限于以下化合物 ： 可商购的可可碱 ( 其中 R 和 R 是 CH3)。其中 (a)R 是 -CD3 且 R2 是 -CH3 ； (b)R1 是 -CH3 且 R2 是 -CD3 ； 和 (c)R1 和 R2 是 -CD3 的 10 的同位素异数体 (isotopologue) 都是已知的。参见 Benchekroun， Y 等， J Chromatogr B， 1977， 688 ： 245 ； Ribon， B 等， Coll nd INSERM， 1988， 164 ： 268 ； 和 Horning， MG 等， Proc Int Conf Stable Isot 2 ， 1976， 41-54。 1 2 1 其中 R 是正丙基且 R 是 -CH3 的 3- 甲基 -7- 丙基黄嘌呤是可商购的。其中 R 是 CH2OCH3 且 R2 是 CH3 的化合物也是已知的。参见德国专利申请 DE 3942872A1。
     路线 2 ： 化合物 10 的合成
     以可商购的 N- 亚硝基 -N- 甲脲为原料的化合物 10 的合成如路线 2 所示。根据 Boivin， JL 等， Canadian Journal of Chemistry， 1951， 29 ： 478-81 的方法， 用水中的适当氘 化的胺 12 处理， 形成 N- 烷基脲 13。根据 Dubey， PK 等， Indian Journal of Heterocyclic Chemistry， 2005， 14(4) ： 301-306 的方法， 可用 2- 氰基乙酸和乙酸酐处理脲 13， 形成氰基 乙酰胺衍生物 14， 其首先用 NaOH 水溶液然后用 HCl 水溶液处理， 形成环化嘧啶二酮 15。或 者， 可通过 Fulle， F 等， Heterocycles， 2000， 53(2) ： 347-352 的方法， 用三甲基甲硅烷基氯 化物和六甲基二硅氮烷处理氰基乙酰胺 14， 形成环化产物 15。
     根据 Merlos， M 等， European Journal of Medicinal Chemistry， 1990， 25(8) ： 653-8 的方法， 先用乙酸中的亚硝酸钠， 然后用氢氧化铵和连二亚硫酸钠处理嘧啶二酮 15， 生成化合物 16， 其用甲酸处理形成嘌呤衍生物 17。根据 Rybar， A 等在捷克专利申请 CS 263595B1 公开的方法， 在碳酸钾存在下和任选在添加剂例如 NaBr、 KBr、 NaI、 KI 或碘的存在 下用适当的氘化亲电子试剂 18(X 是氯、 溴或碘 ) 烷化 17， 形成化合物 10。
     参 考 路 线 2， 有 用 的 氘 化 胺 试 剂 12 包 括 但 不 限 于 可 商 购 化 合 物， 例如正丙 基 -d7- 胺，或 已 知 化 合 物，例 如 1- 丙 烷 -1， 1-d2- 胺 (Moritz， F 等， Organic Mass Spectrometry， 1993， 28(3) ： 207-15)。有用的氘化脲试剂 13 可包括但不限于可商购化合
     物， 例如 N- 甲基 -d3- 脲
     或甲基脲有用的氘化亲电子试剂 18 可包括但不限于可商购化合物， 例如碘代甲烷 -d3、 或 溴代甲烷 -d3、 或 1- 溴代丙烷 -d7、 或 1- 溴代丙烷 -1， 1-d2， 或已知的化合物， 例如 ( 氯甲氧 基 -d2)- 乙烷 (Williams， AG， WO2002059070A1) 或溴甲氧基甲烷 -d2(Van der Veken， BJ 等， Journal of Raman Spectroscopy， 1992， 23(4) ： 205-23) 或 ( 溴甲氧基 -d2)- 甲烷 -d3(Van der Veken， BJ 等， Journal of Raman Spectroscopy， 1992， 23(4) ： 205-23)。上述可商购氘 化中间体 12、 13 和 18 可以至少 98 原子％ D 的同位素纯度购得。
     中间体 11a-d5( 参见路线 1A) 的合成
     路线 3 ： 中间体 11a-d5 的合成
     化合物 11a-d5( 参见路线 1A) 的制备方法 ( 其中 R3 是 CD3 ； R4 是且 Y1 和 Y2 一起形成＝ O) 在路线 3 中描述。因此， 根据 Zhang， Q 等， Tetrahedron， 2006， 62(50) ： 11627-11634 的方法将甲基锂加入可商购的 Δ- 戊内醌 19 中， 形成酮 20。根据 Fodor-Csorba K， Tet Lett， 2002， 43 ： 3789-3792 的一般方法， 在微波条件下用 D2O(99 原 子％ D) 中的 TFA-d1(99 原子％ D) 处理 20， 形成氘化酮 21。根据 Clément， J-L， Org Biomol Chem， 2003， 1： 1591-1597 的一般过程， 一旦用三苯基膦和四氯化碳处理， 21 的醇部分就转 化为氯化物， 形成氯化物 11a-d5。
     路线 4 ： 中间体 11a-d9 和 11a-d11 的合成路线 4 描述化合物 11a-d9 和化合物 11a-d11 的合成。因此， 可根据 Esaki， 等， Chem Eur J， 2007， 13 ： 4052-4063 的一般方法， 在 Pd/C 和氢气存在下在 D2O(99 原子％ D) 中加热 可商购的 4- 苯基丁酸 22， 获得氘化酸 23。根据 Porta， A 等， J Org Chem， 2005， 70(12) ： 4876-4878 的一般方法， 在氯化三甲基甲硅烷的存在下加入氘化甲基锂， 获得酮 24。酮 24 用 D2SO4(99 原子％ D) 和可商购的乙二醇 -d2(99 原子％ D) 处理， 从而转化为缩醛 25。根
     据 Gamier， J-M 等， Tetrahedron ： Asymmetry， 2007， 18(12) ： 1434-1442 的一般方法用 NaIO4 和 RuCl3 处理 25， 得到羧酸 26。用 LiAlH4 或 LiAlD4(98 原子％ D) 还原得到醇 ( 未显示 )， 其再用三氯氧化磷或三苯基膦和 N- 氯代琥珀酰亚胺氯化 (Naidu， SV 等， Tet Lett， 2007， 48(13) ： 2279-2282)， 然后用 D2SO4 裂解缩醛 (Heathcock， CH 等， J Org Chem， 1995， 60(5) ： 1120-30)， 分别得到 11a-d9 和 11a-d11。
     路线 4a ： 中间体 11b-(R) 的合成
     路线 4b ： 氯化物 11b-(S) 的合成路线 4a 和 4b 描述氯化物 11b-(R)( 其中 Y1 是氟 ； Y2 选自氢和氘 ； 且所述化合物为 1 2 (R) 构型 ) 和 11b-(S)( 其中 Y 是氟 ； Y 选自氢和氘 ； 且所述化合物为 (S) 构型 ) 的特定对映 体的合成。在路线 4a 中， 氘化 ( 或非氘化 ) 苯甲基保护的醇 27， 例如已知的 [[[(5R)-5- 氟 己基 ] 氧基 ] 甲基 ]- 苯 (PCT 公布说明书 WO2000031003) 在 Pd/C 存在下通过氢化脱保护， 获得醇 28。根据 Lacan， G 等， J Label Compd Radiopharm， 2005， 48(9) ： 635-643 的一般方 法用亚硫酰氯氯化所述醇， 获得氯化物 11b-(R)。
     在路线 4b 中， 氯化氘化 ( 或非氘化 ) 的醇 29， 例如已知的 (S)-(+)-5- 氟己醇 (Riswoko， A 等， Enantiomer， 2002， 7(1) ： 33-39) 来获得氯化物 11b-(S)。
     路线 5 ： 中间体 11c 和 11e 的合成
     路线 5 描述了其他中间体 11c 和 11e 的合成。因此， 根据 Kutner， Andrzej 等， Journal of Organic Chemistry， 1988， 53(15) ： 3450-7 或 Larsen， SD 等， Journal of Medicinal Chemistry， 1994， 37(15) ： 2343-51 的方法， 化合物 30 或 31( 其中 X 是卤化物 ) 可用氘化格氏试剂 32 处理， 来获得中间体 11c， 其中 R3 和 Y2 相同， Y1 是 OH 且 X 是卤化物。 根据 Karst， NA 等， Organic Letters， 2003， 5(25) ： 4839-4842 或 Kiso， M 等， Carbohydrate Research， 1988， 177 ： 51-67 的一般方法用二氯甲烷或甲苯中的三氟化二乙氨基硫 (DAST) 处理， 得到中间体 11e， 其中 R3 和 Y2 相同， Y1 是 F 且 X 是卤化物。
     如路线 5 所公开， 可商购的卤化物可用于制备化合物 11。例如， 可商购的 5- 氯代 戊酰氯， 或可商购的 5- 溴代戊酰氯， 或可商购的 5- 溴戊酸乙酯可用作试剂 30 或 31。再次
     参考路线 5， 用可商购的甲基 -d3- 碘化镁作为格氏试剂 32， 获得亲电子试剂 11， 其中 R3 和 Y2 同时是 CD3。
     路线 6 ： 中间体 11e(X ＝ Br) 的合成
     路线 6 描述了中间体 11e( 其中 R3 和 Y2 相同且 X ＝ Br) 的其他合成。因此， 根据 Hester， JB 等， Journal of Medicinal Chemistry， 2001， 44(7) ： 1099-1115 的方法， 用 3， 4- 二氢 -2H- 吡喃 (DHP) 和樟脑磺酸 (CSA) 处理来保护可商购的 4- 氯 -1- 丁醇， 获得氯化物 3 2 2 33。用镁产生相应的格氏试剂， 然后加入丙酮 (R ＝ Y ＝ CH3) 或丙酮 -d6(Y ＝ R3 ＝ CD3)， 获得醇 34。用 CH2Cl2 中的三氟化二乙氨基硫 (DAST) 进行氟化， 获得氟化物 35。用 MeOH 中 的 CSA 脱保护， 获得醇 36， 并用 N- 溴代琥珀酰亚胺和三苯基膦处理获得中间体 11e。 路线 7 ： 中间体 11e(X ＝ Br) 的其他方法合成
     路线 7 描述了中间体 11e( 其中 R3 和 Y2 相同且 X ＝ Br) 的合成。因此， 用 DHP 和 CSA 或用 DHP、 TsOH 和吡啶处理可商购的 4- 羟基丁酸乙酯 37， 获得酯 38。用 LiAlD4 还原 形成氘化醇 39， 其用 CCl4 中的三苯膦处理 (Sabitha， G 等， Tetrahedron Letters， 2006， (volume date 2007)， 48(2) ： 313-315)， 或用 DMF 中的甲磺酰氯化物、 氯化锂和 2， 6- 二甲 基吡啶处理 (Blaszykowski， C 等， Organic Letters， 2004， 6(21) ： 3771-3774)， 获得氯化物 40。根据与路线 6 相同的方法， 可将氯化物 40 转化为 11e。
     路线 8 ： 中间体 11e-d8(X ＝ Br) 的合成
     路线 8 描述了中间体 11e-d8( 其中 R3 和 Y2 相同且 X ＝ Br) 的合成。
     因 此， 可 根 据 Yang， A 等， Huagong Shikan， 2002， 16(3) ： 37-39 的 一 般 方 法 用 DCl 和 ZnCl2 处 理 可 商 购 的 THF-d841， 获 得 已 知 氯 化 物 42(Alken， Rudolf-Giesbert， WO 2003080598A1)。根据与路线 6 相同的方法， 可将氯化物 42 转化为 11e-d8。
     路线 9 ： 中间体 11c-d8(X ＝ Br) 的合成
     路线 9 描述了中间体 11c-d8( 其中 R3 和 Y2 相同且 X ＝ Br) 的合成。因此， 用重氮 甲烷 ( 根据 Garrido， NM 等， Molecules， 2006， 11(6) ： 435-443 的一般方法 ) 或用氯化三甲 基甲硅烷和甲醇 -d1( 根据 Doussineau， T 等， Synlett， 2004， (10) ： 1735-1738 的一般方法 ) 处理已知的羧酸 43(Lompa-Krzymien， L 等， Proc.Int.Conf.Stable Isot.2nd， 1976， Meeting Date 1975， 574-8) 来形成甲酯 44。如路线 5 所示， 用氘化格氏试剂 45 处理酯来获得中间 体 11c-d8。例如， 用可商购的甲基 -d3- 碘化镁作为格氏试剂 45 来获得 11c-d8， 其中 R3 和 Y2 同时是 CD3。
     路线 10 ： 中间体 11c-d2 的合成
     路线 10 描述了 11c-d2( 其中 R3 和 Y2 相同 ) 的制备。因此， 用四溴化碳和三苯基 膦 (Brueckner， AM 等， European Journal of Organic Chemistry， 2003， (18) ： 3555-3561) 处理已知的氘化酯 46(Feldman， KS 等， Journal of Organic Chemistry， 2000， 65(25) ： 8659-8668)， 获得酯 47( 其中 X 是溴 )， 或用甲磺酰氯化物和三乙胺处理， 然后用氯化锂和 DMF 处理 (Sagi， K 等， Bioorganic & Medicinal Chemistry， 2005， 13(5) ： 1487-1496)， 获得 酯 47( 其中 X 是氯 )。如路线 5 所示， 用可商购的甲基 -d3- 碘化镁作为氘化格氏试剂 48 来 3 2 获得 11c-d2， 其中 R 和 Y 同时是 CD3。
     可 用 作 路 线 1A 的 试 剂 11 的 其 他 已 知 氯 化 物 包 括 ： 1- 氯 -5， 5- 二 氟 - 己 烷 (Rybczynski， PJ 等， J Med Chemistry， 2004， 47(1) ： 196-209) ； 1- 氯 -5- 氟己烷 (Chambers， RD 等， Tetrahedron， 2006， 62(30) ： 7162-7167) ； 6- 氯 -2- 己 醇 ( 欧 洲 专 利 公 布 说 明 书 0412596) ； (S)-6- 氯 -2- 己醇 (Keinan， E 等， J Am Chem Soc， 1986， 108(12) ： 3474-3480) ； 可商购的 (R)-6- 氯 -2- 己醇 ； 可商购的 6- 氯 -2- 己酮 ； 已知的 6- 氯 -2- 甲基己 -2- 醇 (Kutner， A 等， Journal of Organic Chemistry， 1988， 53(15) ： 3450-7) ； 已知的 6- 溴 -2- 甲 基己 -2- 醇 (Kutner， A 等， Journal of Organic Chemistry， 1988， 53(15) ： 3450-7) ； 已知的 1- 溴 -5- 氟 -5- 甲基己烷 (Hester， JB 等， Journal of Medicinal Chemistry， 2001， 44(7) ：
     1099-1115)。
     路线 11 ： 式 A1 化合物的合成
     路线 11 描述了式 A1 化合物的合成。因此， 用 D2O 中的碳酸钾处理式 I 化合物以 实现氢 - 向 - 氘的交换反应， 提供式 A1 化合物。本领域技术人员应理解其他的氢 - 向 - 氘 的交换反应也可发生在分子的其他地方。
     路线 12 ： 式 A1 化合物的其他合成方法
     路线 12 描述了式 A1 化合物的其他合成方法。因此， 用 D2O 中的碳酸钾处理中间 体 10( 参见路线 1A) 以实现氢 - 向 - 氘的交换反应， 提供作为 N-D 或 N-H 种类的化合物 50。 在碳酸钾存在下烷化中间体 11 得到式 A1 化合物。
     路线 12b ： 式 I 化合物的其他合成方法
     路线 12b 描述了式 I 化合物的其他合成方法。因此， 用水中的碳酸钾处理式 A1 化 合物以实现氢 - 向 - 氘的交换反应， 其生成其他的式 I 化合物。 优选地， 路线 12b 的方法中， 1 2 1 2 (a)Y 和 Y 各自是氟 ； 或 (b)Y 选自氟和 OH ； 且 Y 选自氢、 氘、 -CH3、 -CH2D、 -CHD2 和 -CD3。
     许多新的中间体可用于制备式 A 化合物。因此， 本发明也提供选自以下的这种化合物 ：
     以上化合物 a-d 可以如 Org.Lett.， 2005， 7： 1427-1429 一般描述的使用适当氘化 的原料来制备。化合物 e-o 可由上列的适当溴化物参考如下显示的路线 15 来制备。
     用于本发明的某些黄嘌呤中间体也是新颖的。因此， 本发明提供氘化的黄嘌呤中 间体 III ：
     其中其中 W 是氢或氘， R1 和 R2 各自独立选自氢、 氘、 任选被氘取代的 C1-3 烷基以及 1 2 任选被氘取代的 C1-3 烷氧基烷基。R 和 R 中， C1-3 烷基的实例包括 -CH3、 -CD3、 -CH2CH2CH3 和 -CD2CD2CD3。C1-3 烷 氧 基 烷 基 的 实 例 包 括 -CH2OCH2CH3、 -CD2OCH2CH3、 -CD2OCD2CH3 和 -CD2OCD2CD3。
     式 III 的具体实例包括以下 ：
     式 III 的每一个上述实例中， W 是氢。在一组相应实例中， W 是氘。式 III 化合物 的盐也是有用的， 包括相对于已知的黄嘌呤有用的盐。 有用的盐的实例包括但不限于锂盐、 钠盐、 钾盐和铯盐。特别有用的盐的实例是钾盐。
     上述特定方法和化合物不是限制性的。本发明路线中的化学结构描述了用本发 明化合物通式中的相应位置的化学基团定义 ( 部分、 原子等 ) 相应地限定的变量， 不管是 1 2 3 否通过相同的变量名称 ( 即， R、 R、 R 等 ) 来确定。化合物结构中的用于合成另一种化合
     物的化学基团的适配性在本领域技术人员的知识范围内。合成本发明化合物及其合成前 体的其他方法， 包括没有明确显示在本发明路线路线内的那些， 在本领域普通化学工作者 的能力范围之内。用于合成适用化合物的合成化学转化和保护基方法 ( 保护和脱保护 ) 是本领域已知的， 且包括例如 Larock R， Comprehensive Organic Transformations， VCH rd Publishers(1989) ； Greene TW 等， Protective Groups in Organic Synthesis， 3 Ed.， John Wiley and Sons(1999) ； Fieser L 等， Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis， John Wiley and Sons(1994) ； 和 Paquette L， 编著， Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis， John Wiley and Sons(1995) 及其后续版本中所描述的那些。
     本发明预期的取代基和变量的组合是仅导致稳定化合物的形成的那些。
     组合物
     本发明也提供无热原的组合物， 其含有有效量的本发明化合物或其药学可接受的 盐； 以及可接受的载体。优选地， 本发明组合物被配制成药用形式 (“药物组合物” )， 其中 所述载体是药学可接受的载体。载体是 “可接受的” 的意思是， 其与制剂的其他成分相容， 以及在药学可接受的载体情况下， 药物中的所使用量对其接受者是无毒的。
     可用于本发明药物组合物的药学可接受的载体、 辅剂和介质包括但不限于， 离子 交换剂 ； 氧化铝 ； 硬脂酸铝 ； 卵磷脂 ； 血清蛋白， 例如人血清白蛋白 ； 缓冲物质， 例如磷酸盐 ； 甘氨酸 ； 山梨酸 ； 山梨酸钾 ； 饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物 ； 水； 盐或电解质， 例如硫酸 鱼精蛋白、 磷酸氢二钠、 磷酸氢钾、 氯化钠、 锌盐 ； 胶体硅 ； 三硅酸镁 ； 聚乙烯基吡咯烷酮 ； 微 晶纤维素 ； 纤维素基物质 ； 聚乙二醇 ； 羧甲基纤维素钠 ； 聚丙烯酸酯 ； 蜡； 聚乙烯 - 聚氧丙 烯 - 嵌段共聚物 ； 聚乙二醇和羊毛脂。
     如果需要， 药物组合物中的本发明化合物的溶解度和生物利用率可通过本领域 熟知的方法来提高。一种方法包括在制剂中使用脂质赋形剂。参见 “Oral Lipid-Based Formulations ： Enhancing the Bioavailability of Poorly Water-Soluble Drugs(Drugs and the Pharmaceutical Sciences)， ” David J.Hauss， 编 著 Informa Healthcare， 2007 ； 和 “Role of Lipid Excipients in Modifying Oral and Parenteral Drug Delivery ： Basic Principles and Biological Examples， ” Kishor M.Wasan， 编 著 Wiley-Interscience， 2006。
     提高生物利用率的另一种已知方法是采用本发明化合物的无定形形式， 其任选 TM TM 和泊洛沙姆， 例如 LUTROL 和 PLURONIC (BASF Corporation)， 或环氧乙烷和环氧丙烷的 嵌段共聚物一起配制。参见美国专利 7,014,866 ； 和美国专利公布说明书 20060094744 和 20060079502。
     本发明的药物组合物包括适于经口、 直肠、 鼻、 局部 ( 包括颊和舌下 )、 阴道或胃肠 外 ( 包括皮下、 肌内、 静脉内和皮内 ) 施用的那些。在某些实施方式中， 本发明通式化合物 透皮施用 ( 例如， 使用透皮贴剂或离子导入 (iontophoretic) 技术 )。其他制剂可方便地 存在于单元剂型中， 例如， 片剂、 持续释放胶囊和脂质体， 且可通过制药领域熟知的任何方 法制备。例如参见 Remington’ s Pharmaceutical Sciences， Mack Publishing Company， Philadelphia， PA(17th ed.1985)。
     这种制备方法包括使待施用分子和构成一种或多种辅助成分的成分 ( 例如载体 ) 混合的步骤。通常， 所述组合物通过使活性成分用液体载体、 脂质体或精细粉碎的固体载体， 或两者均匀且密切地混合， 然后， 如有必要， 成形为产品。
     在某些实施方式中， 所述化合物经口施用。适于经口施用的本发明组合物可作为 离散单元存在， 例如各自包含预定量的活性成分的胶囊、 小袋或片剂 ； 粉末或颗粒 ； 水溶液 或非水溶液中的溶液或悬浮液 ； 和水包油液体乳剂 ； 油包水液体乳剂 ； 包封在脂质体中 ； 或 作为丸剂等。软明胶胶囊可用于包含这种悬浮液， 其可有利地增加化合物吸收率。
     在用于经口使用的片剂情况下， 常用载体包括乳糖和玉米淀粉。通常也添加润滑 剂， 例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口施用， 有用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当 经口施用水性悬浮液时， 活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要， 加入某些甜味剂和 / 或矫味剂和 / 或着色剂。
     适于经口施用的组合物包括锭剂 (lozenges)， 其在通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪 胶的矫味基质中含有活性成分 ； 以及软锭剂 (pastilles)， 其在例如为凝胶和甘油， 或蔗糖 和阿拉伯胶的惰性基质中含有活性成分。
     适于肠胃外施用的组合物包括水性和非水性灭菌注射溶液， 其可包含抗氧化剂、 缓冲剂、 抑菌剂和溶质， 其使得制剂和预定接受者的血液等渗 ； 以及水性和非水性灭菌悬浮 液， 其可包括悬浮剂和增稠剂。所述制剂可以存在于单元剂量容器或多剂量容器中， 例如， 密封安瓿和小瓶中， 并以冷冻干燥 ( 冻干 ) 形式贮存， 只需在使用之前， 加入灭菌液体载体 ( 例如注射用水 )。即时注射溶液和悬浮液可由灭菌粉末、 颗粒和片剂制备。
     这种注射溶液例如可以是灭菌可注射水性或油质悬浮液形式。 所述悬浮液可根据 本领域已知技术使用适当的分散剂或润湿剂 ( 例如吐温 80) 和悬浮剂来配制。灭菌可注射 制剂也可以是无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液或悬浮液， 例如， 作 为 1， 3- 丁二醇中的溶液。可使用的可接受的介质和溶剂是甘露醇、 水、 林格溶液和等渗氯 化钠溶液。此外， 灭菌的不挥发油也常用作溶剂或悬浮介质。为此目的， 可使用任何温和的 不挥发油， 包括合成的甘油一酯或甘油二酯。 脂肪酸， 例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制 备注射剂， 例如天然药学可接受的油， 例如橄榄油或蓖麻油， 特别是以其聚氧乙烯化形式。 这些油溶液或悬浮液也可以包含长链醇稀释剂或分散剂。
     本发明药物组合物可以以栓剂形式用于直肠施用。 这些组合物可通过将本发明化 合物与适当的非刺激赋形剂混合来制备， 所述赋形剂在室温下是固体而在直肠温度下是液 体， 因此将熔化在直肠中以释放活性成分。这种材料包括但不限于可可油、 蜂蜡和聚乙二 醇。
     本发明药物组合物可通过鼻气雾剂或吸入施用。这种组合物根据药物制剂的本 领域熟知技术制备， 并可使用苯甲醇或其他适当的防腐剂、 增加生物利用率的吸收促进剂、 碳氟化合物和 / 或本领域已知的其他增溶剂或分散剂制成盐水溶液。例如参见转让给 Alexza Molecular Delivery Corporation 的 Rabinowitz， JD 和 Zaffaroni， AC 的美国专 利 6,803,031。
     当所需治疗涉及通过局部施用易达到的区域或器官时， 本发明药物组合物的局部 施用特别有用。对于局部地向皮肤局部施用， 药物组合物应该配制成包含悬浮或溶解在载 体中的活性组分的适当的膏剂。用于本发明化合物的局部施用的载体包括但不限于矿物 油、 液体石油、 白凡士林、 丙二醇、 聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、 乳化蜡和水。 或者， 所述药物组 合物可配制成包含悬浮或溶解在载体中的活性化合物的适当的洗剂或霜剂。 适当的载体包括但不限于矿物油、 山梨醇单硬脂酸酯、 聚山梨酸酯 60、 鲸烷基酯蜡、 鲸蜡硬脂醇、 2- 辛基 十二烷醇、 苯甲醇和水。本发明药物组合物也可以通过直肠栓剂或适当的灌肠剂局部施用 至下段肠道。本发明也包括局部透皮贴剂和离子导入施用。
     主题治疗的施加可以是局部的， 从而在目的位点施用。可使用各种技术将主题组 合物提供至目的位点， 例如注射、 采用导管、 套管针、 抛射体 (projectiles)、 pluronic 凝 胶、 支架、 持续药物释放聚合物或提供进入内部的其他装置。
     因此， 根据又一个实施方式， 本发明化合物可被加入组合物中， 用于涂覆可植入医 疗装置， 例如假体、 人工瓣膜、 血管移植物、 支架或导管。 经涂层的可植入装置的适当涂层和 一般制备是本领域已知的并在美国专利 6,099,562 ； 5,886,026 和 5,304,121 中例示。涂层 通常是生物相容的聚合材料， 例如水凝胶聚合物、 聚甲基二硅氧烷、 聚己酸内酯、 聚乙二醇、 聚乳酸、 乙烯 - 乙酸乙烯酯及其混合物。所述涂层可任选再由适当的氟硅氧烷、 聚糖、 聚乙 二醇、 磷脂或其组合的外涂层覆盖， 从而赋予组合物控制释放特征。 用于侵入性装置的涂层 被包括在药学可接受的载体、 辅剂或介质的定义内， 如本发明所使用的那些术语。
     根据另一个实施方式， 本发明提供涂覆可植入医疗装置的方法， 包括使所述装置 和上面描述的涂层组合物接触的步骤。 本领域技术人员将理解装置的涂覆将发生在植入哺 乳动物之前。
     根据另一个实施方式， 本发明提供浸渍可植入药物释放装置的方法， 包括使所述 药物释放装置与本发明化合物或组合物接触的步骤。 可植入药物释放装置包括但不限于可 生物降解的聚合物胶囊或弹状物、 不可降解的、 可扩散的聚合物胶囊和可生物降解的聚合 物晶片。
     根据另一个实施方式， 本发明提供可植入医疗装置， 所述装置涂有化合物或含有 本发明化合物的组合物， 这样所述化合物是治疗活性的。
     根据另一个实施方式， 本发明提供可植入药物释放装置， 所述装置浸渍有或包含 化合物或含有本发明化合物的组合物， 这样所述化合物从所述装置中释放并且是治疗活性 的。
     当器官或组织因为从患者去除而可接近时， 这种器官或组织可以浴浸在含有本发 明组合物的介质中， 本发明组合物可以涂在器官上， 或本发明组合物可以以任何其他方便 的形式施加。在另一个实施方式中， 本发明化合物占组合物的 28 到 68％ (w/w)。在该实施 方式中， 硬脂酸镁和微晶纤维素占组合物的约 2％ (w/w)。
     在另一个实施方式中， 本发明组合物还包括第二治疗剂。所述第二治疗剂可选自 当和具有与己酮可可碱相同的作用机制的化合物一起施用时， 已知具有或显示有利性质 的任何化合物或治疗剂。这种试剂包括显示可用于和己酮可可碱组合的那些， 包括但不 限于 WO 1997019686、 EP 0640342、 WO 2003013568、 WO 2001032156、 WO 2006035418 和 WO 1996005838 中描述的那些。
     优选地， 所述第二治疗剂是可用于治疗或预防选自以下疾病或病症的药物 ： 外周 梗阻性血管病 ； 血管球性肾炎 ； 肾病综合征 ； 非酒精性脂肪性肝炎 ； 利什曼病 ； 硬化 ； 肝功 能衰竭 ； 杜兴肌营养不良 (Duchenne’ s muscular dystrophy) ； 晚期辐射诱导的损伤 ； 辐射 诱导的淋巴水肿 ； 辐射相关的坏死 ； 酒精性肝炎 ； 辐射相关的纤维化 ； 早产儿的坏死性小肠 结肠炎 ； 糖尿病性肾病 ； 高血压诱导的肾衰竭和其他慢性肾病 ； 局灶节段性肾小球硬化 ； 肺结节病 ； 复发性口疮性口炎 ； 乳腺癌患者的慢性乳房疼痛 ； 脑和中枢神经系统肿瘤 ； 营养失 调 - 炎症 - 恶病质综合症 ； 白介素 -1 介导的疾病 ； 移植物抗宿主反应和其他同种异体移植 物反应 ； 饮食诱导的脂肪肝病症 ； 动脉粥样化损害 ； 脂肪肝变性及其他饮食诱导的高度脂 肪或酒精诱导的组织退化性病症 ； 1 型人类免疫缺陷性病毒 (HIV-1) 及其他人逆转录病毒 感染 ； 多发性硬化 ； 癌症 ； 纤维增生性疾病 ； 真菌感染 ； 药物诱导的肾中毒性 ； 胶原性结肠 炎以及以血小板衍生的生长因子 (PDGF) 或其他炎症性细胞因子的水平升高为特征的其他 疾病和 / 或病症 ； 子宫内膜异位 ； 与获得性免疫缺乏综合症 (AIDS)、 免疫紊乱疾病或多发性 硬化相关的视神经病和 CNS 损害 ； 自身免疫性疾病 ； 上呼吸道病毒感染 ； 抑郁 ； 尿失禁 ； 肠 易激综合征 ； 感染性休克 ； 阿尔茨海默痴呆 ； 神经性疼痛 ； 排尿困难 ； 视网膜或视神经损害 ； 消化性溃疡 ； 胰岛素依赖型糖尿病 ； 非胰岛素依赖型糖尿病 ； 糖尿病性肾病 ； 代谢性综合 症； 肥胖 ； 胰岛素抵抗 ； 血脂异常 ； 病理性葡萄糖耐量 ； 高血压 ； 高脂质血症 ； 高尿酸血症 ； 痛风 ； 血凝过快 ； 以及与嗜中性趋药性和 / 或脱粒作用有关的炎症或损伤。 本发明化合物也 可用于对通过体检确定需要这种控制的受试者控制眼内压或稳定脑血流量的自动调节。
     在一个实施方式中， 所述第二治疗剂选自 α- 生育酚和羟基脲。
     在另一个实施方式中， 所述第二治疗剂用于治疗糖尿病或相关紊乱， 且选自胰岛 素或胰岛素类似物、 胰高血糖素样肽 -1(GLP-1) 受体激动剂、 磺酰脲药物、 双胍药物、 α- 葡 萄糖苷酶抑制剂、 PPAR 激动剂、 美格列奈药物、 二肽 - 肽酶 (DPP)IV 抑制剂、 其他的磷酸二 酯酶 (PDE1、 PDE5、 PDE9、 PDE10 或 PDE1) 抑制剂、 糊精激动剂 (amylin agonist)、 辅酶 A 抑 制剂和抗肥胖药物。 胰岛素的具体实例包括但不限于 ( 人 胰 岛 素， rDNA 来 源 )、 ( 人 胰 岛 素， rDNA 来 源 )、 BR( 人 缓 冲 普 通 胰 岛 素， rDNA 来 源 )、 ( 人胰岛素， 吸入 ) 及其他形式的吸入胰岛素， 例如通过 Mannkind 的 “Technosphere Insulin System” 递送。
     胰 岛 素 类 似 物 的 具 体 实 例 包 括 但 不 限 于 novarapid、 地 特 胰 岛 素 (insulin detemir)、 赖脯胰岛素 (insulin lispro)、 甘精胰岛素 (insulin glargine)、 胰岛素锌悬浮 液和 Lys-Pro 胰岛素 (Lys-Pro insulin)。
     胰 高 血 糖 素 样 肽 -1 受 体 激 动 剂 的 具 体 实 例 包 括 但 不 限 于 BIM-51077(CAS-No.275371-94-3)、 EXENATIDE(CAS-No.141758-74-9)、 C J C - 1 1 3 1 ( C A S - N o . 5 3 2 9 5 1 - 6 4 - 7 ) 、L I R A G L U T I D E ( C A S - N o . 2 0 6 5 6 - 2 0 - 2 ) 和 ZP-10(CAS-No.320367-13-3)。
     磺 酰 脲 药 物 的 具 体 实 例 包 括 但 不 限 于 TOLBUTAMIDE(CAS-No.000064-77-7)、 T O L A Z A M I D E ( C A S - N o . 0 0 1 1 5 6 - 1 9 - 0 ) 、G L I P I Z I D E ( C A S - N o . 0 2 9 0 9 4 - 6 1 - 9 ) 、 C A R B U T A M I D E ( C A S - N o . 0 0 0 3 3 9 - 4 3 - 5 ) 、G L I S O X E P I D E ( C A S - N o . 0 2 5 0 4 6 - 7 9 - 1 ) 、 G L I S E N T I D E ( C A S - N o . 0 3 2 7 9 7 - 9 2 - 5 ) 、G L I B O R N U R I D E ( C A S - N o . 0 2 6 9 4 4 - 4 8 - 9 ) 、 GLIBENCLAMIDE(CAS-NO.010238-21-8) 、GLIQUIDONE(CAS-No.033342-05-1) 、 GLIMEPIRIDE(CAS-No.093479-97-1) 和 GLICLAZIDE(CAS-No.021187-98-4)。
     双胍药物的具体实例包括但不限于 METFORMIN(CAS-No.000657-24-9)。
     α- 葡 萄 糖 苷 酶 抑 制 剂 的 具 体 实 例 包 括 但 不 限 于 A C A R B O S E ( C a s - N o . 0 5 6 1 8 0 - 9 4 - 0 ) 、M I G L I T O L ( C A S - N o . 0 7 2 4 3 2 - 0 3 - 2 ) 和
     VOGLIBOSE(CAS-No.083480-29-9)。
     PPAR 激动剂的具体实例包括但不限于 MURAGLITAZAR(CAS-No. 331741-94-7)、 ROSIGLITAZONE(CAS-NO.122320-73-4)、 PIOGLITAZONE(CAS-No.111025-46-8)、 RAGAGL ITAZAR(CAS-NO.222834-30-2)、 FARGLITAZAR(CAS-No.196808-45-4)、 TESAGLITAZAR(CA S-No.251565-85-2)、 NAVEGLITAZAR(CAS-No.476436-68-7)、 NETOGLITAZONE(CAS-NO.1 61600-01-7)、 RIVOGLITAZONE(CAS-NO.185428-18-6)、 K-1 11(CAS-No.221564-97-2)、 GW-677954(CAS-No.622402-24-8) 、FK-614(CAS-No193012-35-0) 和 (-)- 卤 芬 酯 (halofenate)(CAS-No.024136-23-0)。 优 选 的 PPAR 激 动 剂 是 ROSGLITAZONE 和 PIOGLITAZONE。
     美格列奈药物的具体实例包括但不限于 REPAGLINIDE(CAS-No.135062-02-1)、 NATEGLINIDE(CAS-No.105816-04-4) 和 MITIGLINIDE(CAS-No.145375-43-5)。
     DPP IV 抑制剂的具体实例包括但不限于 SITAGLIPTIN(CAS-No.486460-32-6)、 SAXAGLIPTIN(CAS-No.361442-04-8) 、VILDAGLIPTIN(CAS-No.274901-16-5) 、 DENAGLIPTIN(CAS-No.483369-58-0)、 P32/98(CAS-No.251572-70-0) 和 NVP-DPP-728(CASNo.247016-69-9)。
     PDE5 抑 制 剂 的 具 体 实 例 包 括 但 不 限 于 SILDENAFIL(CAS-No.139755-83-2)、 VARDENAFIL(CAS-No.224785-90-4) 和 TADALAFIL(CAS-No.171596-29-5)。 可 用 于 本 发 明 的 PDE1、 PDE9、 PDE10 或 PDE11 抑制剂的实例例如可以在 US20020160939、 WO2003037432、 US2004220186、 WO2005/003129、 WO2005012485、 WO2005120514 和 WO03077949 中发现。
     糊精激动剂的具体实例包括但不限于 PRAMLINITIDE(CAS-No.151126-32-8)。
     辅酶 A 抑制剂的具体实例包括但不限于 ETOMOXIR(CAS-No.082258-36-4)。
     抗 肥 胖 药 物 的 具 体 实 例 包 括 但 不 限 于 HMR-1426(CAS-No.262376-75-0)、 CETILISTAT(CAS-No.282526-98-1) 和 SIBUTRAMINE(CAS-No.106650-56-0)。
     在另一个实施方式中， 本发明提供本发明化合物和一种或多种任何以上所述的第 二治疗剂的单独剂型， 其中所述化合物和第二治疗剂彼此相连。这里使用的术语 “彼此相 连” 是指单独剂型包装在一起或彼此连接， 这样很明显， 单独的剂型旨在一起销售或施用 ( 彼此在小于 24 小时内， 连续或同时 )。
     在本发明药物组合物中， 本发明化合物以有效量存在。此处使用的术语 “有效量” 是指当以适当的给药方案施用时， 足以治疗 ( 治疗性或预防性 ) 目标紊乱的量。例如， 有效 量足以降低或改善待治疗紊乱的严重程度、 持续性或进展， 阻止待治疗紊乱的进展， 引起待 治疗紊乱的衰退， 或增加或提高另一疗法的预防性或治疗性效果。
     动物和人的剂量 ( 基于毫克每平方米体表 ) 的相互关系在 Freireich 等， Cancer Chemother.Rep， 1966， 50 ： 219 中描述。体表面积可通过患者的身高和体重大致确定。例如 参见 Scientific Tables， Geigy Pharmaceuticals， Ardsley， N.Y.， 1970， 537。
     在一个实施方式中， 本发明化合物的有效量为每次治疗 20mg 到 2000mg。 在更具体 的实施方式中， 所述量为每次治疗 40mg 到 1000mg， 或 100mg 到 800mg， 或更具体地为 200mg 到 400mg。通常每天施用一到三次。
     如本领域技术人员所了解， 有效剂量也将取决于以下因素而变化 ： 待治疗疾病、 疾 病的严重程度、 施用途径、 患者性别、 年龄和总体健康状况、 使用赋形剂、 与其他治疗法 ( 例如使用其他药物 ) 一起使用的可能性和治疗医师的判断。例如， 选择有效量的指导可通过 参考己酮可可碱的处方信息而确定。
     对于包括第二治疗剂的药物组合物， 第二治疗剂的有效量为通常用于仅使用该药 物的单一疗法的剂量的约 20％到 100％。优选地， 有效量为通常单一疗法剂量的约 70％到 100 ％。这些第二治疗剂的通常单一疗法剂量是本领域技术人员已知的， 例如参见 Wells 等， 编 著， Pharmacotherapy Handbook， 第 2 版， Appleton and Lange， Stamford， Conn. (2000) ； PDR Pharmacopoeia， Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000， Deluxe Edition， Tarascon Publishing， Loma Linda， Calif.(2000)， 各参考文献以引用方式合并于此。
     预期以上提及的一些第二治疗剂将与本发明化合物协同作用。当这种情况发生 时， 将允许第二治疗剂和 / 或本发明化合物的有效剂量比单一疗法所需的剂量低。这具有 以下优点 ： 使本发明化合物的第二治疗剂的毒性副作用最小、 效力的协同改善、 改善的易于 施用或使用和 / 或化合物制备或制剂的整体费用降低。
     治疗方法
     在一个实施方式中， 本发明提供抑制细胞中磷酸二酯酶 (PDE) 的活性的方法， 包 括使细胞与一种或多种式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 的化合物接触。
     除其 PDE 抑制活性之外， 已知己酮可可碱能抑制许多其他生物学试剂的产生， 例 如白介素 -1(IL-1)、 IL-6、 IL-12、 TNF-α、 纤维蛋白原和各种生长因子。因此， 在另一个实 施方式中， 本发明提供抑制细胞中白介素 -1(IL-1)、 IL-6、 IL-12、 TNF-α、 纤维蛋白原和各 种生长因子的产生的方法， 包括使细胞与一种或多种式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物接触。
     根据另一个实施方式， 本发明提供一种治疗能通过用己酮可可碱治疗而受益的需 要治疗的患者的疾病的方法， 包括将有效量的式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物或含有式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物和药学可接受的载体的药物组合物施用于所述患者的步骤。
     这种疾病是本领域所熟知的， 并在包括但不限于以下专利和公开申请中公开 ： WO 1988004928、 EP 0493682、 US 5112827、 EP 0484785、 WO 1997019686、 WO 2003013568、 WO 2001032156 、 WO 1992007566 、 WO 1998055110 、 WO 2005023193 、 US 4975432 、 WO 1993018770、 EP0490181 和 WO 1996005836。这种疾病包括但不限于 ： 外周梗阻性血管病 ； 血管球性肾炎 ； 肾病综合征 ； 非酒精性脂肪性肝炎 ； 利什曼病 ； 硬化 ； 肝功能衰竭 ； 杜兴肌 营养不良 ； 晚期辐射诱导的损伤 ； 辐射诱导的淋巴水肿 ； 辐射相关的坏死 ； 酒精性肝炎 ； 辐 射相关的纤维化 ； 早产儿的坏死性小肠结肠炎 ； 糖尿病性肾病 ； 高血压诱导的肾衰竭和其 他慢性肾病 ； 局灶节段性肾小球硬化 ； 肺结节病 ； 复发性口疮性口炎 ； 乳腺癌患者的慢性乳 房疼痛 ； 脑和中枢神经系统肿瘤 ； 营养失调 - 炎症 - 恶病质综合症 ； 白介素 -1 介导的疾病 ； 移植物抗宿主反应和其他同种异体移植物反应 ； 饮食诱导的脂肪肝病症 ； 动脉粥样化损 害； 脂肪肝变性及其他饮食诱导的高度脂肪或酒精诱导的组织退化性病症 ； 1 型人类免疫 缺陷性病毒 (HIV-1) 及其他人逆转录病毒感染 ； 多发性硬化 ； 癌症 ； 纤维增生性疾病 ； 真菌 感染 ； 药物诱导的肾中毒性 ； 胶原性结肠炎以及以血小板衍生的生长因子 (PDGF) 或其他炎 症性细胞因子的水平升高为特征的其他疾病和 / 或病症 ； 子宫内膜异位 ； 与获得性免疫缺 乏综合症 (AIDS)、 免疫紊乱疾病或多发性硬化相关的视神经病和 CNS 损害 ； 自身免疫性疾 病； 上呼吸道病毒感染 ； 抑郁 ； 尿失禁 ； 肠易激综合征 ； 感染性休克 ； 阿尔茨海默痴呆 ； 神经 性疼痛 ； 排尿困难 ； 视网膜或视神经损害 ； 消化性溃疡 ； 胰岛素依赖型糖尿病 ； 非胰岛素依赖型糖尿病 ； 糖尿病性肾病 ； 代谢性综合症 ； 肥胖 ； 胰岛素抵抗 ； 血脂异常 ； 病理性葡萄糖 耐量 ； 高血压 ； 高脂质血症 ； 高尿酸血症 ； 痛风 ； 血凝过快 ； 急性酒精性肝炎 ； 嗅觉紊乱 ； 动 脉导管未闭以及与嗜中性趋药性和 / 或脱粒作用有关的炎症或损伤。
     式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物可用于对通过体检确定需要这种控制的受试者控 制眼内压或稳定脑血流量的自动调节。
     在一个具体实施方式中， 本发明方法用于治疗需要治疗的患者的疾病或病症， 选 自基于肢体的慢性闭塞性动脉疾病及其他外周梗阻性血管病的间歇性跛行 ； 血管球性肾 炎； 局灶节段性肾小球硬化 ； 肾病综合征 ； 非酒精性脂肪性肝炎 ； 利什曼病 ； 硬化 ； 肝功能 衰竭 ； 杜兴肌营养不良 ； 晚期辐射诱导的损伤 ； 辐射诱导的淋巴水肿 ； 酒精性肝炎 ； 辐射诱 导的纤维化 ； 早产儿的坏死性小肠结肠炎 ； 糖尿病性肾病 ； 高血压诱导的肾衰竭和其他慢 性肾病 ； 肺结节病 ； 复发性口疮性口炎 ； 乳腺癌患者的慢性乳房疼痛 ； 脑和中枢神经系统肿 瘤； 肥胖 ； 急性酒精性肝炎 ； 嗅觉紊乱 ； 子宫内膜异位相关的不育症 ； 营养失调 - 炎症 - 恶病 质综合症 ； 和动脉导管未闭。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于治疗糖尿病性肾病、 高血压性肾病或基于肢 体的慢性闭塞性动脉疾病的间歇性跛行。在该实施方式的一个具体方面， 本发明方法用于 治疗糖尿病性肾病。
     在另一个具体实施方式中， 本发明方法用于治疗需要治疗的患者的疾病或病症， 选自基于肢体的慢性闭塞性动脉疾病的间歇性跛行。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于治疗慢性肾病。所述慢性肾病可选自血管球 性肾炎、 局灶节段性肾小球硬化、 肾病综合征、 回流尿路病或多囊肾病。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于治疗慢性肝病。所述慢性肝病选自非酒精性 脂肪性肝炎、 脂肪肝变性或其他饮食引起的高度脂肪或酒精引起的组织退化性病症、 硬化、 肝功能衰竭或酒精性肝炎。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于治疗糖尿病相关疾病或病症。所述疾病可选 自胰岛素抵抗、 视网膜病、 糖尿病性溃疡、 辐射相关的坏死、 急性肾衰竭或药物诱导的肾中 毒性。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于治疗罹患囊性纤维化的患者， 包括罹患慢性 假单胞菌支气管炎的那些患者。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于促使伤口愈合。可以治疗的伤口类型的实例 包括静脉曲张性溃疡、 糖尿病性溃疡和压迫性溃疡。
     在另一个具体实施方式中， 本发明方法用于治疗需要治疗的患者的疾病或病症， 选自胰岛素依赖型糖尿病、 非胰岛素依赖型糖尿病、 代谢综合症、 肥胖、 胰岛素抵抗、 血脂异 常、 病理性葡萄糖耐量、 高血压、 高脂质血症、 高尿酸血症、 痛风和血凝过快。
     在一个实施方式中， 本发明方法用于治疗需要治疗的患者的疾病或病症， 选自贫 血、 格雷夫斯病 (Graves disease)、 视网膜静脉闭塞、 狼疮肾炎、 黄斑变性、 脊髓发育不良、 HIV 来源的瘙痒症、 肺性高血压症、 视网膜动脉闭塞、 肠炎、 缺血性视神经病、 急性胰炎、 镰刀 形红细胞贫血病和 β 地中海贫血。
     本发明描述的方法也包括其中患者被鉴定为需要特殊规定治疗的那些。 患者需要 这种治疗的鉴定可通过患者或健康护理专业人员的判断进行， 且可以是主观 ( 例如意见 )或客观 ( 可通过测试或诊断方法测定 ) 的。
     在另一个实施方式中， 任何上述治疗方法还包括将一种或多种第二治疗剂一起施 用于患者的步骤。 第二治疗剂的选择可由已知用于和己酮可可碱一起施用的任何第二治疗 剂进行。第二治疗剂的选择也取决于待治疗的特定疾病或病症。可用于本发明方法的第二 治疗剂的实例是上述所列的用于含有本发明化合物和第二治疗剂的联合组合物的那些。
     特别地， 本发明的联合治疗包括将式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物和第二治疗剂一 起施用， 用于治疗以下病症 ( 病症后的括号中显示具体的第二治疗剂 ) ： 晚期辐射诱导的损 伤 (α- 生育酚 )、 辐射诱导的纤维化 (α- 生育酚 )、 辐射诱导的淋巴水肿 (α- 生育酚 )、 乳腺癌患者的慢性乳房疼痛 (α- 生育酚 )、 2 型糖尿病性肾病 ( 卡托普利 )、 营养失调 - 炎 症 - 恶病质综合症 ( 经口营养增补剂， 例如 Nepro ； 和经口抗炎组件， 例如 Oxepa) ； 和脑和中 枢神经系统肿瘤 ( 放疗和羟基脲 )。
     本发明的联合治疗也包括将式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物和第二治疗剂一起施 用， 用于治疗胰岛素依赖型糖尿病 ； 非胰岛素依赖型糖尿病 ； 代谢综合症 ； 肥胖 ； 胰岛素抵 抗； 血脂异常 ； 病理性葡萄糖耐量 ； 高血压 ； 高脂质血症 ； 高尿酸血症 ； 痛风 ； 和血凝过快。
     本发明所使用的术语 “一起施用” 是指第二治疗剂可作为单一剂型 ( 例如含有本 发明化合物和上面描述的第二治疗剂的本发明组合物 ) 的一部分与本发明化合物一起施 用， 或作为单独的多剂型与本发明化合物一起施用。或者， 可在施用本发明化合物之前、 同 时或之后施用其他试剂。在这种联合治疗中， 本发明化合物和第二治疗剂都通过常规方法 施用。 将含有本发明化合物和第二治疗剂的本发明组合物施用于患者不排除在治疗过程期 间的其他时间单独施用相同的治疗剂、 任何其他第二治疗剂或本发明任何化合物。
     有效量的这些第二治疗剂是本领域技术人员所熟知的， 且施用指导可在本发明 提及的专利和公开的专利申请， 和 Wells 等， 编著， Pharmacotherapy Handbook， 第 2 版， Appleton and Lange， Stamford， Conn.(2000) ； PDR Pharmacopoeia， Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000， Deluxe Edition， Tarascon Publishing， Loma Linda， Calif.(2000) 以及其他医学文章中发现。然而， 本领域技术人员很容易确定第二治疗剂的最佳有效量范 围。
     在第二治疗剂施用于受试者的一个实施方式中， 本发明化合物的有效量小于不给 予第二治疗剂的情况下的其有效量。在另一个实施方式中， 第二治疗剂的有效量小于不给 予本发明化合物的情况下的其有效量。以此方式， 可最小化与任何一种试剂有关的不想要 的副作用。其他可能的优点 ( 包括但不限于改进的给药方案和 / 或降低的药物成本 ) 对本 领域技术人员而言是显而易见的。
     另一方面， 本发明提供式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物单独或与一种或多种上述第 二治疗剂在制备药物中的用途， 其作为单个组合物或作为单独剂型， 用于治疗或预防患者 的以上所列的疾病、 紊乱或症状。本发明的另一方面是式 A、 A1、 I、 II、 B、 C 或 D 化合物用于 治疗或预防患者的本发明描述的疾病、 紊乱或症状。
     合成实施例
     以下合成实施例提供制备本发明某些化合物的详细过程。 本发明的其他化合物可 参考上述这些过程和路线通过采用其他试剂或中间体来制备， 这对本领域技术人员而言是 显而易见的。所制得的化合物通过所显示的 NMR、 质谱法和 / 或元素分析来分析。1HNMR 在300MHz 装置上测定， 其用于确定氘结合。 除非另有说明， 以下实施例中不存在 NMR 信号表示 至少为 90％的氘结合水平。
     实施例 1 ： 3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1-(5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 100) 的合成
     路线 13 ： 化合物 100 和 409 的制备
     步骤 1 ： 3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 (51)。 将 3- 甲基黄嘌 呤 50(5.0g， 30.1mmol， 1 当量 ) 和粉末状 K2CO3(5.0g， 36.0mmol， 1.2 当量 ) 在 DMF(95mL) 中 的悬浮液加热到 60℃， 并通过注射器加入碘代甲烷 -d3(Cambridge Isotopes， 99.5 原子％ D， 2.2mL， 36.0mmol， 1.2 当量 )。所得混合物在 80℃下加热 5 小时 (h)。将反应混合物冷却 到室温 (rt) 并在减压下蒸发 DMF。将粗残余物溶解在 5％的 NaOH 水溶液 (50mL) 中， 形成 暗黄色溶液。用 CH2Cl2 洗涤水溶液三次 ( 总共 500mL)。用乙酸 (6mL) 将水层酸化至 pH5， 形成褐色沉淀物。混合物在冰水浴中冷却， 过滤固体并用冷水洗涤。在真空烘箱中干燥固 体， 得到 2.9g 的褐色固体 51。滤液浓缩至约 25mL， 通过过滤再次收获 (0.70g)51。51 的总 产量为 3.6g。粗制材料不经进一步纯化而使用。
     步骤 2 ： 3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1-(5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化 合 物 100)。 将 粗 的 51(1.50g， 8.2mmol， 1 当 量 ) 和 粉 末 状 K2CO3(2.28g， 16.4mmol， 2 当量 ) 悬浮在 DMF(30mL) 中， 并加热至 50℃。向所得的褐色悬浮液中加入 6- 氯 -2- 己酮 (52， 1.2mL， 9.0mmol， 1.1 当量 )， 并将反应温度升高至 130℃。在 130℃持续加热 2h， 在此 期间悬浮液变得较细且颜色变深。反应混合物冷却到 rt， 并在减压下蒸发 DMF。将残余的 褐色糊状物悬浮在 EtOAc(250mL) 中， 并过滤去除不溶性物质。减压下浓缩滤液， 得到黄色 油状物。用 Analogix 色谱系统纯化粗产物， 用 100 ％ EtOAc 洗脱 (10 分钟 )， 然后用 0 到 25MeOH/EtOAc 在 50 分钟 (min) 内梯度洗脱。减压下浓缩产物馏分， 得到浅黄色油状物， 其
     在放置几分钟后固化。用庚烷 (100mL) 磨碎所述固体并过滤， 得到 2.00g 灰白色固体 100， 1 mp 101.8-103.0 ℃。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.68(m， 4H)， 2.15(s， 3H)， 2.51(t， 13 J ＝ 7.0， 2H)， 3.57(s， 3H)， 4.01(t， J ＝ 7.0， 2H)， 7.52(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ 20.95 ， 27.41 ， 29.69 ， 29.98 ， 40.80 ， 43.18 ， 107.63 ， 141.41 ， 148.75 ， 151.45 ， 155.26 ， 208.80。HPLC( 方法 ： 20mm C18-RP 柱 - 梯度法， 3.3min 内 2 到 95％ ACN+0.1％甲酸， 95％ ACN 保持 1.7min ； 波长 ： 254nm) ； 保留时间 ： 2.54min ； 98.5％纯度。 MS(M+H) ： 282.0。 元素分 析 (C13H15D3N4O3) ： 计算值 C ＝ 55.50， H ＝ 6.45， N ＝ 19.92。实测值 ： C ＝ 55.58， H ＝ 6.48，N ＝ 19.76。
     由于上述 1H-NMR 谱中在 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲 1 基 (R ) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实施例 2 ： 8-d1-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1-(6-d3-4-d2-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 409) 的合成
     8-d1-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1-(6-d3-4-d2-5- 氧 代 己 基 )-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 409)。 在 回 流 条 件 下 搅 拌 100(1.80g， 6.4mmol， 1 当量 ) 和粉末状 K2CO3(0.23g， 1.7mmol， 0.25 当量 ) 在 D2O(Cambridge Isotope Labs， 99 原子％ D)(45mL) 中 的悬浮液 24h， 在此时间期间悬浮液变成浅黄色溶液。将反应混合物冷却到 rt， 用氯化钠饱 和， 用二氯甲烷 ( 总共 400mL) 提取四次。用 Na2SO4 干燥合并的有机溶液， 过滤， 并在减压 下蒸发， 得到 1.7g 浅黄色油状物， 其一经放置就固化。用新鲜的 K2CO3 和 D2O 使粗制材料再 经受上面描述的氢 / 氘交换条件。相同检查后， 用己烷 (100mL) 磨碎灰白色固体并过滤得 1 到 1.61g 灰白色固体 409， mp99.6-99.8 ℃。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.69(m， 4H)， 13 3.57(s， 3H)， 4.01(t， J ＝ 7.0， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ21.05， 27.61， 29.90， 41.02， 107.83， 148.99， 151.69， 155.50， 209.28。 HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法 14min(1.0mL/min) 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸， 95％ ACN 保持 4min ； 波长 ： 254nm) ； 保留时间 ： 3.26min ； 98％纯度。MS(M+H ： 288.3。元素分析 (C13H9D9N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.35， H ＝ 6.31， N ＝ 19.50。实测值 ： C ＝ 54.36， H ＝ 6.32， N ＝ 19.10。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 2.15ppm 处的单峰， 指示不存在甲基酮 氢； 约 2.51ppm 的三重峰， 指示不存在亚甲基酮氢 ； 以及约 7.52ppm 处的单峰， 指示在嘌呤 1 环第 8 位不存在氢。由于上述 H-NMR 谱中 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 1 位的 N- 甲基 (R ) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     将 100 中的 CH3C(O)CH2 官能团转化成 409 中的 CD3C(O)CD2 官能团的 H/D 交换反应 通常可在将羰基具有一个或多个 α 氢的化合物转化为具有一个或多个氘代替相应的一个 或多个氢的化合物的类似条件下进行。在一个实施方式中， 根据需要进行连续的 H/D 交换 反应来进一步增加氘结合的量。在该实施方式的一方面， 给定批量运行的第二次 H/D 交换 反应结束时任何过量的 D2O 可用于随后批量运行的第一次 H/D 交换反应 ； 且给定批量运行 的第三次 H/D 交换反应结束时任何过量的 D2O 可用于随后批量运行的第二次 H/D 交换反应。
     下表显示具有 CH3C(O)CH2 官能团的化合物的三批单独批次的示范性的氘化， 并显 示可根据本发明使用的氘化剂 ( ≥ 99％ D2O 或由另一个批次的稍后氘化循环获得的水相 )。
     举例来说， 己酮可可碱
     向以下结构的转化可在连续批次中实现。
     下表显示各批次己酮可可碱的 50kg 连续批量运行的每个甲基 (CO)、 (CO) 亚甲基 和咪唑环次甲基碳中的氘结合的百分比 ：
     批次 2
     批次 3
     R1-2 ： 从批次 1， 交换 2 再循环 R1-3 ： 从批次 1， 交换 3 再循环 R2-2 ： 从批次 2， 交换 2 再循环R2-3 ： 从批次 2， 交换 3 再循环
     在一个实施方式中， 交换 4 是任选的。在表所示的批次 3 运行中， 交换 4 以一半体 积进行， 以确保批次 3 的高的氘结合。
     实施例 3 ： 3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1-(5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化 合物 101) 的合成
     路线 14 ： 化合物 101 和 413 的制备
     步骤 1 ： 3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 (55)。黄嘌呤 53(2.00g， 13.2mmol， 1.0 当量 ) 和六甲基二硅氮烷 (32mL) 在甲苯 (60mL) 中的悬浮液加热至回流并搅 拌 4 天。反应混合物冷却到室温， 用另外的甲苯 (50mL) 稀释并滤过硅藻土以去除任何未反 应的原料。减压下蒸发滤液至干生成白色固体 54(4.1g)。将该材料的一部分 (3.00g) 置 于 100mL 密封管反应容器中， 然后添加甲苯 (60mL) 和 CD3I(4mL， Cambridge Isotopes， 99.5 原子％ D)。在 120℃油浴中加热反应混合物并搅拌 24 小时， 该时间期间反应混合物转变 为黄色并形成固体。反应混合物冷却到室温， 使全部反应混合物固化为黄色固体。用丙酮 (30mL) 和 MeOH(5mL) 稀释混合物， 并在 N2 流下过滤。用丙酮 (100mL) 洗涤固体， 去除黄色
     形成灰白色固体。在 N2 流下干燥所述固体， 得到大致比率为 1 ∶ 1 的 55 和单烷基化副产 物 7-( 甲基 -d3)- 黄嘌呤的混合物。总回收质量是 2.6g( 粗产率 42％ )。由于该混合物的 差的溶解度， 其不经过进一步纯化转入下一步。
     步骤 2 ： 3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1-(5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合 物 101)。将粗制 55(2.50g， 13.4mmol， 1.0 当量 ) 和粉末状 K2CO3(2.20g， 16mmol， 1.2 当量 ) 在 DMF(50mL) 中的悬浮液加热到 60℃。 向所得褐色悬浮液中添加 6- 氯 -2- 己酮 52(2.0mL， 14.8mmol， 1.1 当量 )， 并将混合物加热至 140℃。 在 140℃持续加热 4 小时， 在此期间悬浮液 变得较细且颜色变深。 反应混合物冷却到室温并在减压下蒸发 DMF。 将所得褐色糊状物悬浮 在 1 ∶ 1 二氯甲烷 / 乙酸乙酯 (200mL) 中， 并过滤去除不溶性物质。减压下浓缩滤液， 得到 微黄棕色油状物 (3.0g)。在硅胶上吸收粗反应产物并干法装载在装有 100％二氯甲烷的硅 胶柱上。用 0-5％ MeOH/ 二氯甲烷梯度洗脱柱。在减压下浓缩含有产物的馏分， 得到 0.75g 黄色油状物。 LCMS 显示该材料的纯度为约 90％。 用 Analogix 色谱系统进一步纯化所述黄色 油状物， 首先用 60％ EtOAc/ 庚烷洗脱， 然后在 20min 内用 60-100％ EtOAc/ 庚烷梯度洗脱。 在约 20 分钟洗脱出所需产物。 减压下浓缩含有产物的馏分， 得到 0.55g(16％ ) 浅黄色油状 1 化合物 101， 其一经放置就固化。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.69(m， 4H)， 2.15(s， 3H)， 2.51(t， J ＝ 7.0， 2H)， 4.02(t， J ＝ 7.0， 2H)， 7.51(s， 1H)。13C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ20.97， 27.43， 29.97， 40.80， 43.19， 107.64， 141.40， 148.78， 151.48， 155.29， 208.77。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μmC18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.24min ； 98.6％纯 度。 MS(M+H) ： 285.3， (M+Na) ： 307.2。 元素分析 (C13H12D6N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.92， H ＝ 6.38， N ＝ 19.71。实测值 ： C ＝ 54.90， H ＝ 6.40， N ＝ 19.50。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中在约 3.57ppm 处不存在单峰， 指示在嘌呤环 3 位不存在N- 甲基氢。 由于上述 1H-NMR 谱中 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲 1 基 (R ) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实施例 4 ： 8-d1-3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 413) 的合成。
     8-d1-3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1-(4-d2-6-d3-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 413)
     加热化合物 101(0.60g， 2.1mmol， 1.0 当量 ) 和粉末状 K2CO3(0.10g， 0.72mmol， 0.30 当量 ) 在 D2O(15mL， Cambridge Isotopes， 99 原子％ D) 中的悬浮液并在回流下搅拌 16 小时， 在此时间期间所述悬浮液变成浅黄色溶液。 反应混合物冷却到室温， 用氯化钠饱和， 用二氯 甲烷 (200mL) 提取四次。 用 Na2SO4 干燥合并的有机溶液， 过滤， 并在减压下蒸发， 得到 0.53g 浅黄色油状物， 其一经放置就固化。用新鲜的粉末状 K2CO3 和 D2O 使粗反应产物再经受上述 反应条件。 相同检查后， 用己烷 (50mL) 磨碎灰白色固体并过滤得到 0.45g(74％ ) 灰白色固 体化合物 413， mp99.2-99.3℃。1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.71(m， 4H)， 4.01(t， J＝ 13 7.0， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ20.85， 27.41， 40.81， 107.63， 148.80， 151.50， 155.31， 209.09。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μmC18-RP 柱 - 梯度法， 14 分钟内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN+0.1％甲酸保持 4 分钟 ； 波长 ： 254nm) ： 保留 时间 ： 3.25min ； 98.7％纯度。MS(M+H) ： 291.3， (M+Na) ： 313.2。元素分析 (C13H6D12N4O3) ： 计 算值 ： C ＝ 53.78， H ＝ 6.25， N ＝ 19.30。实测值 ： C ＝ 53.76， H ＝ 6.39， N ＝ 19.11。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 2.15ppm 处的单峰， 指示不存在甲基酮 氢； 约 2.51ppm 的三重峰， 指示不存在亚甲基酮氢 ； 约 3.57ppm 处的单峰， 指示在嘌呤环 3 位 不存在 N- 甲基氢 ； 约 7.51ppm 的单峰， 指示在嘌呤环的第 8 位不存在氢。由于上述 1H-NMR 谱中 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 (R1) 上氢的存在或不存 在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实施例 5 ： 3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1-(6， 6， 6-d3-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 99) 的合成。
     路线 15 ： 化合物 99 的制备
     步骤 1 ： 5-(3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-2， 3， 6， 7- 四 氢 -1H- 嘌 呤 -1- 基 )-N- 甲 氧 基 -N- 甲基戊酰胺 (57)。将 51(1.50g， 8.2mmol， 1.0 当量， 参见实施例 1 的制备 ) 和粉末状K2CO3(1.80g， 12.9mmol， 1.6 当量 ) 在 DMF(40mL) 中的悬浮液加热到 60℃。 加入 5- 溴 -N- 甲 氧 基 -N- 甲 基 戊 酰 胺 56(2.21g， 9.8mmol， 1.2 当 量， 如 Org.Lett.， 2005， 7： 1427-1429 所 述制备 )， 混合物在 110℃下加热 4 小时， 在此时间期间悬浮固体变成变得较细且颜色变为 褐色。反应混合物冷却到室温并在减压下蒸发 DMF。将所得褐色糊状物悬浮在 1 ∶ 1 的 CH2Cl2 ∶乙酸乙酯 (250mL) 中， 并过滤去除不溶性物质。减压下浓缩滤液得到黄色油状物。 用 Analogix 自动色谱系统纯化该粗反应产物， 用 100％ CH2Cl2 洗脱 8 分钟， 然后在 40 分钟 内用 0-5％ MeOH/CH2Cl2 梯度洗脱。在约 24 分钟洗脱出所需产物。减压下浓缩含有产物的 馏分， 得到浅黄色油状物。 油状物的 1H NMR 显示其包含约 10％的未反应的 51。 在 Analogix 自动色谱系统上再次纯化， 用 100％ CH2Cl2 洗脱 10 分钟， 然后在 50 分钟内用 0-5％ MeOH/ CH2Cl2 梯度洗脱， 以去除杂质。减压下浓缩包含产物的馏分得到浅黄色油状物， 其放置后结 晶成为灰白色白色。用庚烷 (100mL) 磨碎所述固体并过滤得到 1.29g(49％ ) 灰白色固体 57。
     步骤 2 ： 3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1-(6， 6， 6-d3-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 99)。57(0.72g， 2.2mmol， 1.0 当 量 ) 在 THF(20mL) 中 的 悬 浮 液 冷 却 到 2 ℃并经由注射器以一定速度逐滴添加 1MCD3MgI 的乙醚溶液 (2.4mL， 2.4mmol， 1.1 当 量， Aldrich ＞ 99 原子％ D) 以保持温度低于 5℃。在添加期间， 混合物变成较细的、 浅黄 色悬浮液。当添加完成时， 反应混合物加热到室温并搅拌 3 小时。混合物冷却到 2℃并加 入额外部分的 CD3MgI 溶液 (0.4mL， 0.4mmol)。混合物加热到室温并再搅拌 3 小时。用 1N HCl(4mL) 终止反应并用 H2O(10mL) 稀释， 获得浅黄色溶液， 其用 CH2Cl2(3X， 200mL) 提取。 用 Na2SO4 干燥合并的有机提取物， 过滤， 并在减压下浓缩至黄色油状物。用 Analogix 自 动色谱系统纯化该粗产物， 用 100 ％ CH2Cl2 洗脱 8 分钟， 然后在 40 分钟内用 0-5 ％ MeOH/ CH2Cl2 梯度洗脱。首先在约 22 分钟洗脱出所需产物， 然后是未反应的原料。减压下浓缩含 有所需产物的馏分， 得到黄色油状物， 其一经放置就固化。用己烷 (25mL) 磨碎所述固体， 并经由真空过滤收集得到 0.33g(53％ ) 白色固体状化合物 99。熔点 93.7-94.4℃。也收 集并浓缩含有未反应原料的馏分， 浓缩得到 0.21g 透明无色油状物 57。回收材料再经受上 述烷化反应， 检查和纯化后得到额外的 0.06g(33％， 基于总原料总共 62％ ) 的化合物 99， 1 熔 点 93.3-94.0 ℃。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.68(m， 4H)， 2.50(t， J ＝ 7.0， 2H)， 13 3.58(s， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.0， 2H)， 7.51(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ21.16， 27.65， 29.91， 41.03， 43.41， 107.87， 141.62， 149.00， 151.69， 155.50， 209.12。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 保 持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.24min ； 99.0 ％ 纯 度。 MS(M+H) ： 285.3， (M+Na) ： 307.2。元素分析 (C13H12D6N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.92， H ＝ 6.38， N ＝ 19.71。实测值 C ＝ 54.85， H ＝ 6.36， N ＝ 19.49。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中在约 2.15ppm 处不存在单峰， 指示不存在甲基酮氢。由于 1 上述 H-NMR 谱中 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 (R1) 上氢的 存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实 施 例 6： (±)8-d1-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 419) 的合成。
     路线 16 ： 化合物 419、 419(R) 和 419(S) 的制备(±)8-d1-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 419)。将化合物 409(0.50g， 1.7mmol， 1.0 当量， 见实施例 2) 溶解 在 EtOD(13mL， Aldrich 99.5 原子％ D) 中， 并加入 NaBH4(0.07g， 1.9mmol， 1.1 当量 )。观察 到温度从 24℃升高到 28℃。在室温下搅动反应 2 小时， 然后通过加入 D2O(30mL， Cambridge Isotope Labs， 99 原子％ D) 终止。 形成白色悬浮液， 用 MTBE(4X， 总共 200mL) 提取。 用 Na2SO4 干燥合并的有机提取物， 过滤， 并在减压下浓缩至透明无色油状物 (0.45g)。用硅胶色谱纯 化该粗产物， 首先用 1％ MeOH/CH2Cl2 洗脱， 然后用 1-5％ MeOH/CH2Cl2 梯度洗脱。减压下浓 缩包含产物的馏分， 得到透明无色油状物化合物 419(0.41g， 83％ )， 其一经放置就固化。
     实 施 例 7： (R)-8-d1-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 419(R)) 和 (S)-8-d1-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 419(S)) 的手性分 离。
     化合物 419 的对映体的分离。将由上述实施例 6 获得的化合物 419(0.38g) 溶解 在最小量的 iPrOH(6mL， HPLC 等级， 如果需要进行加热 )， 并用己烷 (4mL， HPLC 等级 ) 稀 释。使用配备有制备型 Daicel Chiralpak AD 柱 (20X250mm) 的 Waters HPLC 实现对映 体的分离。对于该运行的第一分钟， 流动相是 80％己烷和 20％ iPrOH 以及 0.1％二乙胺。 第一分钟后， 在 15 分钟内使用 75 ％己烷和 25 ％ iPrOH 以及 0.1 ％二乙胺的梯度， 然后以 18mL/min 的流速在该溶剂比率保持 17 分钟。该方法导致基线分离， 其中 419(R) 首先洗脱 (21.0min)， 然后是 419(S)(24.1min)。减压下浓缩包含各对映体的馏分， 得到灰白色固体 419(R)(mp107.8-108.8℃ ) 和 419(S)(mp 108.3-108.4℃ ) 各 0.16g。
     A) ： (R)-8-d1-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 419(R))。1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.36-1.50(m， 2H)， 13 1.60-1.74(m， 3H)， 3.58(s， 3H)， 3.80(s， 1H)， 4.02(t， J ＝ 7.3， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.70， 27.86， 29.71， 41.14， 67.66， 107.66， 148.78， 151.54， 155.40。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95 ％ ACN+0.1 ％甲酸保持 4min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 3.26min ； 99.9 ％纯度。手 性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法 (isocratic method)， 78％己烷 /22％异丙 醇 /0.01％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 27.51min( 主要对映 体)； 31.19min( 预期为次要对映体 ) ： ＞ 99.9％ ee 纯度。MS(M+H) ： 290.1， (M+Na) ： 312.3。 元素分析 (C13H11D9N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 53.97， H ＝ 6.97， N ＝ 19.36。
     实测值 ： C ＝ 54.39， H ＝ 7.11， N ＝ 18.98。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 1.19ppm 处的峰， 指示不存在羟基的 α 甲基氢 ； 以及约 7.51ppm 的单峰， 指示在嘌呤环第 8 位上不存在氢。由于上述 1H-NMR 谱中 在 1.36-1.50ppm 存在多重峰和在 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于羟基的 α 亚甲基氢 的存在或不存在的 1.51ppm 处的峰的存在或不存在， 或测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 1 (R ) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     B) ： (S)-8-d1-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 419(S))。1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.41-1.48(m， 2H)， 13 1.64-1.72(m， 3H)， 3.58(s， 3H)， 3.79(s， 1H)， 4.02(t， J ＝ 7.4， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.70， 27.86， 29.71， 41.15， 67.66， 107.67， 148.78， 151.54， 155.41。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 3.26min ； 99.9％纯度。 手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.01％二乙胺， 1.00mL/ min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 31.19min( 主要对映体 ) ； 27.51min( 预期为次要 对映体 ) ： ＞ 99.9％ ee 纯度。MS(M+H) ： 290.1， (M+Na) ： 312.3。元素分析 (C13H11D9N4O3) ： 计 算值 ： C ＝ 53.97， H ＝ 6.97， N ＝ 19.36。实测值 ： C ＝ 54.35， H ＝ 7.28， N ＝ 18.75。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 1.19ppm 处的峰， 指示不存在羟基的 α 甲基氢 ； 以及约 7.51ppm 的单峰， 指示在嘌呤环第 8 位上不存在氢。由于上述 1H-NMR 谱中 在 1.36-1.50ppm 存在多重峰和在 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于羟基的 α 亚甲基氢 的存在或不存在的 1.51ppm 处的峰的存在或不存在， 或测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 1 (R ) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实 施 例 8： (±)8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 435) 的合成。
     路线 17 ： 化合物 435、 435(R) 和 435(S) 的制备。
     (±)8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 435)。
     向化合物 409(0.50g， 1.7mmol， 1.0 当量 ) 的 EtOD(13mL， Aldrich99.5 原子％ D) 溶液中加入 NaBD4(0.08g， 1.9mmol， 1.1 当量， Cambridge Isotope Labs， 99 原子％ D)。 观察 到温度从 24℃升高到 27℃。 在室温下搅动反应 2 小时， 然后通过加入 D2O(30mL)(Cambridge Isotope Labs， 99 原子％ D) 终止。形成白色悬浮液， 用 MTBE(4X， 总共 200mL) 提取。用
     Na2SO4 干燥合并的有机提取物， 过滤， 并在减压下浓缩至透明无色油状物 (0.45g)。用硅胶 色谱纯化该粗产物， 首先用 1％ MeOH/CH2Cl2 洗脱， 然后用 1-5％ MeOH/CH2Cl2 梯度洗脱。减 压下浓缩包含产物的馏分， 得到 0.40g(81％ ) 透明无色油状物化合物 435， 其一经放置就固 化。
     实 施 例 9： (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 435(R)) 和 (S)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 435(S)) 的手性分离。
     化合物 435 的对映体的分离。 将上述实施例 8 获得的化合物 435(0.32g) 溶解在最 小量的 iPrOH(5mL， HPLC 等级， 如果需要进行加热 )， 并用己烷 (4mL， HPLC 等级 ) 稀释。使用 配备有制备型 Daicel Chiralpak AD 柱 (20X250mm) 的 Waters HPLC 实现对映体的分离。 对 于该运行的第一分钟， 流动相是 80％己烷和 20％ iPrOH 以及 0.1％二乙胺。 第一分钟后， 在 15 分钟内使用 75％己烷和 25％ iPrOH 以及 0.1％二乙胺的梯度， 然后以 18mL/min 的流速在 该溶剂比率保持 17 分钟。该方法导致基线分离， 其中化合物 435(R) 首先洗脱 (21.9min)， 然后是化合物 435(S)(25.2min)。减压下浓缩包含各对映体的馏分得到灰白色固体 435(R) (mp108.0-108.1℃ ) 和 435(S)(mp 107.6-107.7℃ ) 各 0.12g。
     A) ： (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 435(R))。1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.40-1.48(m， 3H)， 13 1.66-1.70(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.5， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.66， 27.86， 29.71， 41.15， 107.67， 148.80， 151.54， 155.41。HPLC( 方 法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％甲酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 3.25min ； 99.8％纯度。手性 HPLC( 方 法： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.01％二乙胺， 1.00mL/min 洗 脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 27.24min( 主要对映体 ) ； 31.11min( 预期为次要对映 体)： ＞ 99.9％ ee 纯度。MS(M+H) ： 291.3， (M+Na) ： 313.2。元素分析 ： (C13H10D10N4O3) ： 计算 值： C ＝ 53.78， H ＝ 6.94， N ＝ 19.30。实测值 ： C ＝ 54.01， H ＝ 7.07， N ＝ 18.90。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 1.19ppm 处的峰， 指示不存在羟基的 α 甲基氢 ； 约 3.80ppm 的峰， 指示在次甲基羟基位置上不存在氢 ； 以及约 7.51ppm 的单峰， 指 1 示在嘌呤环第 8 位上不存在氢。由于上述 H-NMR 谱中在 1.36-1.50ppm 存在多重峰和在 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于羟基的 α 亚甲基氢的存在或不存在的 1.51ppm 处的 峰的存在或不存在， 或测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 (R1) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     B) ： (S)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 435(S))。1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.41-1.48(m， 3H)， 13 1.62-1.72(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 4.03(t， J ＝ 7.4， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.69， 27.90， 29.70， 41.17， 107.69， 148.82， 151.58， 155.43。HPLC( 方 法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％甲酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 3.25min ； 99.5％纯度。手性 HPLC( 方 法： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.01％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 31.11min( 主要对映体 ) ； 27.24min( 预期为次要对映 体)： ＞ 99.9％ ee 纯度。MS(M+H) ： 291.3， (M+Na) ： 313.2。元素分析 ： (C13H10D10N4O3) ： 计算 值： C ＝ 53.78， H ＝ 6.94， N ＝ 19.30。实测值 ： C ＝ 54.01， H ＝ 7.11， N ＝ 18.78。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 1.19ppm 处的峰， 指示不存在羟基的 α 甲基氢 ； 约 3.80ppm 的峰， 指示在次甲基羟基位置上不存在氢 ； 以及约 7.51ppm 的单峰， 指 1 示在嘌呤环第 8 位上不存在氢。由于上述 H-NMR 谱中在 1.36-1.50ppm 存在多重峰和在 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于羟基的 α 亚甲基氢的存在或不存在的 1.51ppm 处的 峰的存在或不存在， 或测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 (R1) 上氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实 施 例 10 ： 8-d1-3， 7- 二 甲 基 -1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 氧 代 己 基 )-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 407) 的合成。
     路线 18 ： 化合物 407、 437、 437(R) 和 437(S) 的制备。
     8-d1-3， 7- 二甲基 -1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 407)。
     使 可 商 购 的 58(7.95g， 28.6mmol) 和 碳 酸 钾 (990mg， 7.2mmol) 在 D2O(195mL， Cambridge Isotopes， 99.9 原子％ D) 中的混合物加热至回流， 进行 24 小时。逐渐溶解的 悬浮固体形成黄色溶液。溶液冷却到约 40 ℃， 并在减压下浓缩成褐色固体。所述固体溶 解在 D2O(195mL) 中， 所述溶液加热至回流， 再进行 24 小时。溶液冷却到室温并在减压下
     浓缩成褐色固体。加入乙酸乙酯 (200mL)， 在约 40℃搅拌混合物 0.5 小时。滤掉不溶性物 质， 减压下浓缩滤液得到黄色固体， 用 MTBE(40mL) 磨碎所述固体得到 7.5g(93％ ) 灰白色 1 固 体 化 合 物 407。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.68(m， 4H)， 3.57(s， 3H)， 3.99(s， 3H)， 13 3.99-4.04(m， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ20.84， 27.40， 29.69， 33.57， 40.81， 107.62， 148.77， 151.48， 155.28， 209.07。 HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.24min ； 99.9％纯度。MS(M+H) ： 285.3， (M+Na) ： 307.2。元素分析： (C13H12D6N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.92， H ＝ 6.38， N ＝ 19.71。 实测值 ： C ＝ 54.89， H ＝ 6.38， N ＝ 19.70。
     注意到上述 1H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 2.15ppm 处的单峰， 指示不存在甲基酮 氢； 约 2.51ppm 的三重峰， 指示不存在亚甲基酮氢 ； 以及约 7.52ppm 处的单峰， 指示在嘌呤 环第 8 位不存在氢。
     实 施 例 11 ： (±)8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437) 的合成。
     (±)8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 437)。0 ℃ 下 将 硼 氘 化 钠 (1.06g， 25.3mmol， Cambridge Isotopes， 99atom％ D) 加入 407(6.5g， 22.9mmol) 在乙醇 -d1(65mL， Aldrich， 99.5 原子％ D) 的悬浮液 中。混合物加热至室温， 并搅拌直到生成透明溶液 ( 约 1 小时 )。用氯化铵 -d4(Cambridge Isotopes， 98 原子％ D) 的 D2O(8mL， Cambridge Isotope， 99.9 原子％ D) 饱和溶液终止反 应， 减压下蒸发乙醇 -d1， 并用 EtOAc(160mL) 提取残渣。用 D2O(20mL) 洗涤有机相， 用硫酸 钠干燥， 过滤并在减压下浓缩得到 4.8g(73％ ) 的浅黄色固体化合物 437。
     实 施 例 12 ： (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437(R)) 和 (S)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437(S)) 的手性分离
     化合物 437 的对映体的分离。将由上述实施例 11 获得的化合物 437(1.60g) 溶解 在 iPrOH(20mL， HPLC 等级， 如果需要进行加热 ) 中。使用配备有制备型 Chiralpak AD 保 护柱 (20x50mm Daicel， 10μM) 然后是制备型 Chiralpak AD 柱 (20x250mm Daicel， 10μM) 的 Waters HPLC 实现对映体的分离。对于该运行的第一分钟， 用 20％ iPrOH/ 己烷 ( 此后用 0.1％二乙胺作为助洗脱液 ) 洗脱样品， 同时使流速从 15mL/min 增加到 18mL/min。在接下 来的 15 分钟内， 以 18mL/min 的流速用 20％到 25％ iPrOH/ 己烷的梯度洗脱样品。 对于接下 来的 19 分钟， 以 18mL/min 的流速用 25％ iPrOH/ 己烷洗脱样品。在接下来的 0.5 分钟内， 以 18mL/min 的流速用 25％到 20％ iPrOH/ 己烷的梯度洗脱样品。在接下来的 4.5 分钟内， 以 18mL/min 的流速用 20％ iPrOH/ 己烷洗脱样品。这种洗脱法导致基线分离， 其中化合物 437(R) 首先洗脱 ( 保留时间约 29min)， 化合物 437(S) 随后洗脱 ( 保留时间约 33min)。 减压 下收集并浓缩包含各对映体的馏分， 得到 340mg 灰白色固体的 437(R)(mp 112.0-114.5℃ ) 和 375mg437(S)(mp 111.9-112.3℃ )。[ 注意 ： 仅从上述制备溶液中注入 1.0g 437。]
     A： (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 437(R))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.36-1.50(m， 2H)， 1.54(s， 1H)， 13 1.64-1.74(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 3.99(s， 3H)， 4.00-4.05(m， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.66， 27.86， 29.70， 33.59， 41.14， 107.65， 148.76， 151.52， 155.40。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95 ％ ACN+0.1 ％甲酸保持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.28min ； 99.9 ％纯度。手 性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78 ％己烷 /22 ％异丙醇 /0.01 ％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 25.20min( 主要对映体 ) ； 28.39min( 预 期为次要对映体 ) ： ＞ 99.9 ％ ee 纯 度。MS(M+H) ： 288.3， (M+Na) ： 310.2。 元 素 分 析 ： (C13H13D7N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.34， H ＝ 7.02， N ＝ 19.50。实测值 ： C ＝ 54.32， H ＝ 7.23， N＝ 19.35。
     注意到上述 1H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 1.19ppm 处的峰， 指示不存在羟基的 α 甲基氢 ； 约 3.80ppm 的峰， 指示在次甲基羟基位置上不存在氢 ； 以及约 7.51ppm 的单峰， 指 1 示在嘌呤环第 8 位上不存在氢。 由于上述 H-NMR 谱中在 1.36-1.50ppm 存在多重峰， 测定对 应于羟基的 α 亚甲基氢的存在或不存在的 1.51ppm 处的峰的存在或不存在是不可能的。
     B： (S)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 437(S))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.38-1.48(m， 2H)， 1.55(s， 1H)， 13 1.64-1.72(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 3.99(s， 3H)， 4.00-4.05(m， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.65， 27.84， 29.71， 33.59， 41.13， 107.64， 148.75， 151.52， 155.39。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95 ％ ACN+0.1 ％甲酸保持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.27min ； 99.9 ％纯度。手 性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78 ％己烷 /22 ％异丙醇 /0.01 ％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 28.39min( 主要对映体 ) ； 25.20min( 预 期为次要对映体 )： ＞ 99.9 ％ ee 纯 度。MS(M+H) ： 288.3， (M+Na) ： 310.2。 元 素 分 析 (C13H13D7N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.34， H ＝ 7.02， N ＝ 19.50。实测值 ： C ＝ 54.33， H ＝ 7.30， N ＝ 19.36。
     注意到上述 1H-NMR 谱中不存在以下峰 ： 约 1.19ppm 处的峰， 指示不存在羟基的 α 甲基氢 ； 约 3.80ppm 的峰， 指示在次甲基羟基位置上不存在氢 ； 以及约 7.51ppm 的单峰， 指 1 示在嘌呤环第 8 位上不存在氢。 由于上述 H-NMR 谱中在 1.36-1.50ppm 存在多重峰， 测定对 应于羟基的 α 亚甲基氢的存在或不存在的 1.51ppm 处的峰的存在或不存在是不可能的。
     实 施 例 13 ： (S)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437(S)) 的其他合成法
     路线 19 ： 化合物 437(S) 的制备
     (S)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 437(S))。 将 D- 葡 萄 糖 酸 -δ- 内 酯 59(5g， 28.09 毫 摩 尔 ) 一 次 性 加入冰冷水 (35mL， 0-3 ℃ ) 中， 并搅拌 10min。在 10min 内缓慢加入新鲜制备的冰冷的 NaBD4(0.294g， 7.02 毫摩尔， 99 ％ D) 在 10mL 水中的溶液。该反应是轻微放热的 (2 ℃到 10℃ )， 且反应的 pH 是 7.42。搅拌持续 30min， 通过冷却使温度保持在 0-3℃。加入乙酸 (0.32mL， 5.61 毫摩尔 )， 并再持续搅拌 30min。
     用 18mL 水稀释反应混合物， 并使溶液加热至 25-30℃。将 KH2PO4(0.85g) 加入所 得混合物中， 并用 4M KOH 溶液将 pH 调节至 7。向所得混合物中加入 (2.5g， 8.8 毫摩尔 ) 的 化合物 407。加入 NAD(15mg)、 GDH(2.5mg)、 KRED 101(25mg) 在 12.5mL 的 0.1KH2PO4 缓冲液 中的溶液。在 25-30℃搅拌所得溶液。如果需要， 通过逐滴添加 4M KOH 溶液使反应混合物 的 pH 保持在 6 到 7。反应的 HPLC 监控指示 12 小时后反应完成， HPLC 分析显示 99.97A％转 化率。加入氯化钠 (12.5g)， 并搅拌 30min。用乙酸乙酯 (3x25mL) 提取混合物。分离有机 层， 滤过硅藻土垫， 并浓缩至小体积 ( 约 5 倍体积 )。产物固体在浓缩期间沉淀。浆料加热 至 40-60℃， 并在 10 分钟内加入庚烷 (20mL)。在 20-25℃搅拌浆料过夜并过滤。湿滤饼在 50℃干燥 12 小时， 得到白色固体状化合物 437(S)。(2.12g， 85％产率 )。通过 HPLC 分析测 定产物纯度＞ 99.5A％。通过手性 HPLC 分析观察到单个对映体。次甲基 5 位处氘结合为约 95％ D。 HPLC( 方法 ： Waters Symmetry 4.6x50mm 3.5μm C18 柱 - 梯度法 ： 15％ MeOH+85％ 0.1 ％甲酸水溶液， 洗脱 5min(1.25mL/min)， 变为 80 ％ MeOH+20 ％ 0.1 ％甲酸水溶液， 洗脱 5min， 变为 15％ MeOH+85％ 0.1％甲酸水溶液， 洗脱 6s， 然后以 15％ MeOH+85％ 0.1％甲酸 水溶液保持 3.9min ； 波长 ： 274nm) ： ＞ 99.5％纯度。手性 HPLC 分析 ( 方法 ： ChiralpakAD-H 25cm 柱 - 等度法， 75％正庚烷 /25％异丙醇， 以 1.25mL/min 洗脱 25min ； 波长 ： 274nm) ： 保留 时间 17.56min( 主要对映体 ) ； 15.5min( 预期为次要对映体 ) ： ＞ 99.95％ ee 纯度。
     实 施 例 14 ： (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437(R)) 的其他合成法
     (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437(R))
     由化合物 407 制备化合物 437(R) ：
     (R)-8-d1-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 437(R)) 将 D- 葡萄糖酸 -δ- 内酯 59(5g， 28.09 毫摩尔 ) 一次性加入冰 冷水 (35mL， 0-3℃ ) 中并搅拌 10min。 在 10min 内缓慢加入新鲜制备的冰冷的 NaBD4(0.294g， 7.02 毫摩尔， 99％ D) 在 10mL 水中的溶液。该反应是轻微放热的 (2℃到 10℃ )， 且反应的 pH 是 7.42。搅拌持续 30min， 通过冷却使温度保持在 0-3℃。加入乙酸 (0.32mL， 5.61 毫摩 尔 )， 并再持续搅拌 30min。
     用 18mL 水稀释反应混合物， 并使溶液加热至 25-30℃。将 KH2PO4(0.85g) 加入所 得混合物中， 并用 4M KOH 溶液将 pH 调节至 7。向所得混合物中加入 2.5g(8.8 毫摩尔 ) 的 407。加入 NADP(15mg)、 GDH(2.5mg)、 CRED A311-NADP(25mg) 在 12.5mL 的 0.1KH2PO4 缓冲 液中的溶液。在 25-30℃搅拌所得溶液。通过逐滴添加 4M KOH 溶液使反应混合物的 pH 保 持在 6 到 7。通过 HPLC 监控反应， 12 小时后反应完成， HPLC 分析显示 99.97％转化率。加 入氯化钠 (12.5g)， 并搅拌 30min。用乙酸乙酯 (3x25mL) 提取混合物。分离有机层， 滤过硅
     藻土垫并浓缩至小体积 ( 约 5 倍体积 )， 沉淀产物固体。在 10 分钟内将庚烷 (20mL) 加入浆 料 (40-60℃ )。在 20-25℃搅拌浆料过夜并过滤。湿滤饼在 50℃干燥 12 小时， 得到白色固 体状化合物 437(R)。(2.12g， 85％产率 )。通过 HPLC 分析出分离产物的纯度＞ 99.95％， 并 通过手性 HPLC 证实为单一对映体。
     实施例 15 ： (±)1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 131) 的合成。
     路线 20 ： 化合物 131、 131(R) 和 131(S) 的制备。
     (±)1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 131)。根据与以上合成化合物 437 相同的一般方法， 用 EtOH 中的 NaBD4 处理化合 物 100( 参见实施例 1) 获得化合物 131。
     实施例 16 ： (R)-1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 131(R)) 和 (S)-1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7-( 甲基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 131(S)) 的手性分离
     化合物 131 的对映体的分离。用与对于以上外消旋化合物 437 相同的方法分离 由以上实施例 15 获得的一部分外消旋化合物 131， 得到分离的对映体化合物 131(R)(mp 112.2-112.7℃ )(210mg) 和化合物 131(S)(mp 112.0-112.1℃ )(220mg)。
     A： (R)-1-(5-d1-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 131(R))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.19(s， 3H)， 1.39-1.56(m， 5H)， 13 1.64-1.74(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 4.03(t， J ＝ 7.3， 2H)， 7.51(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ 22.87 ， 23.40 ， 27.89 ， 29.71 ， 38.64 ， 41.13 ， 107.68 ， 141.40 ， 148.76 ， 151.52 ， 155.39 。 HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 保 持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ：
     3.29min ； 99.9％纯度。手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％ 异丙醇 /0.01％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 25.14min( 主要 对映体 ) ； 28.51min( 预期为次要对映体 ) ： ＞ 99.9 ％ ee 纯度。MS(M+H) ： 285.3， (M+Na) ： 307.2。元素分析 (C13H16D4N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.92， H ＝ 7.09， N ＝ 19.71。实测值 ： C＝ 54.67， H ＝ 7.04， N ＝ 19.35。
     注意到上述 1H-NMR 谱中在约 3.80ppm 处不存在峰， 指示在次甲基位置不存在氢。 1 由于上述 H-NMR 谱中 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 (R1) 上 氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。B： (S)-1-(5-d1-5- 羟 基 己 基 )-3- 甲 基 -7-( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 131(S))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.18(s， 3H)， 1.39-1.55(m， 5H)， 13 1.67-1.72(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 4.03(t， J ＝ 7.3， 2H)， 7.51(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ 23.10 ， 23.63 ， 28.12 ， 29.94 ， 38.87 ， 41.36 ， 107.91 ， 141.63 ， 148.99 ， 151.75 ， 155.62 。 HPLC( 方 法 ： Waters AtlantisT3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯 度 法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 保 持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.29min ； 99.9％纯度。手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％ 异丙醇 /0.01％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 28.51min( 主要 对映体 ) ； 25.14min( 预期为次要对映体 ) ： ＞ 99.9 ％ ee 纯度。MS(M+H) ： 285.3， (M+Na) ： 307.2。元素分析 (C13H16D4N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.92， H ＝ 7.09， N ＝ 19.71。实测值 ： C＝ 54.65， H ＝ 7.04， N ＝ 19.32。
     注意到上述 1H-NMR 谱中在约 3.80ppm 处不存在峰， 指示在次甲基位置不存在氢。 1 由于上述 H-NMR 谱中 4.01ppm 处存在三重峰， 测定对应于嘌呤环的 7 位的 N- 甲基 (R1) 上 氢的存在或不存在的约 3.99ppm 处的单峰的存在或不存在是不可能的。
     实施例 17 ： (±)1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -8-d-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 421) 的合成。
     路线 21 ： 化合物 421、 421(R) 和 421(S) 的制备。
     (±)1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -8-d-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 421) 的合成。根据与上述实施例 11 合成化合物 437 相同的一般方法， 对化合 物 407( 参见实施例 10) 用 EtOD 中的 NaBD4 处理并用 CH2C12 提取获得化合物 421。
     实施例 18 ： (R)-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -8-d-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 421(R)) 和 (S)-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -8-d-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 421(S)) 的手性分离。
     由 (±) 化合物 421 分离对映体 421(R) 和 421(S)。 用与对于外消旋化合物 437( 见 实施例 12) 相同方法分离由上述获得的一部分外消旋化合物 421， 得到分离的对映体化合 物 421(R)(560mg) 和化合物 421(S)(520mg)。
     A： (R)-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -8-d-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H，
     7H)- 二 酮 ( 化 合 物 421(R))1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.41-1.48(m， 2H)， 1.64-1.72(m， 13 3H)， 3.58(s， 3H)， 3.79(s， 1H)， 3.99(s， 3H)， 4.03(t， J ＝ 7.3， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.69， 27.84， 29.72， 33.60， 41.14， 67.62， 107.64， 148.74， 151.51， 155.38。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲 酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN 保持 4min ； 波长 254nm) ： 保留时间 ： 3.33min ； ＞ 99.9 ％纯度。 手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.1％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 24.77min(R 对映体 ) ； 28.16min( 预期为 S 对映体 ) ； ＞ 99.9％ ee 纯度。MS(M+H-H2O) ： 269.1 ； (M+H) ： 287.1 ； (M+Na) ： 309.3。元素分 析 (C13H14D6N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.53， H ＝ 7.04， N ＝ 19.57。实测值 ： C ＝ 54.44， H ＝ 7.18， N ＝ 19.32。
     B： (S)-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -8-d-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二酮 ( 化合物 421(S))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.37-1.48(m， 2H)， 1.64-1.74(m， 13 3H)， 3.58(s， 3H)， 3.79(s， 1H)， 3.99(s， 3H)， 4.03(t， J ＝ 7.4， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.70， 27.84， 29.71， 33.60， 41.14， 67.61， 107.64， 148.74， 151.51， 155.38。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲 酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN 保持 4min ； 波长 254nm) ： 保留时间 ： 3.34min ； ＞ 99.9 ％纯度。 手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.1％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 28.16min(S 对映体 ) ； 24.77min( 预期为 R 对映体 ) ； ＞ 99.9％ ee 纯度。MS(M+H-H2O) ： 269.1 ； (M+H) ： 287.1 ； (M+Na) ： 309.3。元素分 析 (C13H14D6N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.53， H ＝ 7.04， N ＝ 19.57。实测值 ： C ＝ 54.54， H ＝ 7.18， N ＝ 19.31。
     注意到 421(R) 和 421(S) 的 1H-NMR 谱中都不存在约 7.51ppm 处的峰， 指示在咪唑 环系统上的 2 位不存在氢。
     421(R) 的其他制备法
     使用 CRED A131 从化合物 407 制备化合物 421(R)
     在配备有暖气罩、 J-Kem 热电偶、 磁性搅拌棒、 回流冷凝器和 pH 探头的 100mL3 颈 RB 烧瓶中加入 10mL 缓冲液 (0.1M KH2PO4， pH ＝ 7.0) 中的 407(500mg， 1.75mmol)、 D(+) 葡萄 糖 (750mg， 1.5wt)， 并加热至 25-30℃。加入 NADP(15mg， 3 重量％ )、 GDH(3mg， 0.6 重量％ )、 ALMAC CRED A311-NADP(30mg， 6 重量％ ) 在 0.1M KH2PO4 缓冲液中的溶液， 并保持反应温度 为 25-30℃。 向该溶液中加入 1mL 甲基叔丁基醚 (MTBE)。 通过逐滴加入 4M KOH 溶液使反应 混合物的 pH 保持在 6 到 7。通过 HPLC 监控反应， 并在 29 小时后完成反应， 其中通过 HPLC 测得 99.87A ％的转化率。加入氯化钠 (2.5g， 5wt) 并搅拌 20min。用乙酸乙酯 (3x15mL) 提取反应混合物。分离有机层， 滤过硅藻土垫并浓缩至小体积 ( 约 5 倍体积 )， 产物固体沉 淀。在 5 分钟内将庚烷 (5mL) 加入浆料 (40-60℃ )。在 20-25℃搅拌浆料并过滤。湿滤饼
     在 50℃干燥 12 小时得到白色固体状 421(R)。(0.422g， 84％产率 )。通过 HPLC 分析出分离 产物的纯度＞ 99.95％， 并通过手性 HPLC 证实为单一对映体。
     实施例 19 ： (±)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 137) 的合成。
     路线 22 ： 化合物 137 的制备
     (±)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 137) 的合成。用 K2CO3(270mg， 2mmol) 的水 (10mL) 溶液搅拌化合物 437(560mg， 约 2mmol， 见实施例 11)。 在 120-130℃加热混合物获得透明溶液并加热过夜。 用 CH2Cl2(1x50mL， 2x20mL) 提取该溶液， 并用 (Na2SO4) 干燥 CH2Cl2 溶液并过滤。去除溶剂后， 用 K2CO3(140mg， 1mmol) 的水 (10mL) 溶液搅拌固体并如上述加热过夜来确保氘 - 向 - 氢交 2x20mL) 提取后， 用 Na2SO4 干燥 CH2Cl2 溶液， 过滤并浓缩。用 换的完全。用 CH2Cl2(1x50mL， 硅胶色谱纯化粗产物， 用 2-3％ MeOH/CH2Cl2 洗脱得到 480mg(86％ )137。
     HPLC( 方 法 ： Zorbax 4.6x50mm SB-Aq 3.5μm 柱 - 梯 度 法， 6.0min 内 2-98 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸， MSD/ESI 正 离 子 模 式 ； 0.63mL/min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 2.51min ； 98.7％纯度。MS(M+H) ： 287.1 ； (M+Na) ： 309.0。
     通常， 具有以下基团的本发明 A 任何化合物
     可以通过用适当的碱和质子源 ( 例如水 ) 处理来进一步转化为具有相同结构但不 具有以下基团的本发明化合物
     实 施 例 20 ： (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 137(R)) 的合成。
     路线 23 ： 化合物 137(R) 的制备。
     (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 137(R)) 的合成。在 110℃ ( 浴温 ) 加热 437(R)(650mg， 2.26mmol， 见实施例 12) 和 K2CO3(320mg， 2.3mmol) 的水 (40mL) 溶液 26 小时。将所述溶液浓缩至干， 再溶解在 水中 (30mL) 并加热至 100℃另外 6 小时。冷却到室温后， 用 CH2Cl2(4x50mL) 提取溶液。用 Na2SO4 干燥有机溶液， 过滤， 浓缩， 然后在真空下干燥获得 565mg 灰白色固体状 137(R)。 1
     H-NMR(300MHz， CDCl 3) ： δ1.38-1.48(m， 2H)， 1.64-1.72(m， 3H)， 3.58(s， 3H)， 13 3.99(d， J ＝ 0.5， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.4， 2H)， 7.51(d， J ＝ 0.6， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.65， 27.84， 29.71， 33.61， 41.13， 107.67， 141.43， 148.73， 151.50， 155.37。HPLC( 方 法： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％ 甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN 保持 4min ； 波长 305nm) ： 保留时间 ： 3.30min ； ＞ 99.9％纯度。 MS(M+H-H2O) ： 269.4 ； (M+H) ： 287.1 ； (M+Na) ： 309.3。元素分析 (C13H14D6N4O3) ： 计算值 ： C＝
     54.53， H ＝ 7.04， N ＝ 19.57。实测值 ： C ＝ 54.43， H ＝ 6.93， N ＝ 19.44。
     (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 137(R)) 的可选合成法。在 3L 的 3 颈 RB 烧瓶中加入化合物 437(R)(100g)， 然 1 后加入水 (1.0L) 和 K2CO3(0.25 当量 )。反应混合物加热至 80±5℃， 并通过 H NMR 监控。 24 小时后反应完全， 并在 65 小时后进行检查。用 EtOAc 提取所得产物三次， 合并来自三次 提取物中的固态产物， 并在 60-65℃下再溶解在 5 倍体积的 EtOAc 中。在 60-65℃在 15 分 钟内加入正庚烷 (5.5 倍体积 )， 并冷却到 20℃过夜 (16 小时 )。过滤浆料并用正庚烷 (2x1 倍体积 ) 洗涤湿滤饼， 在 40-50℃干燥后获得产物化合物 137(R)。总共分离 92.4g 化合物 137(R)。HPLC 纯度是 99.92％ (AUC)， 且 “S” 对映体的手性选择性是 100％。1H NMR 分析显 示在 3， 4， 5， 7- 四氢 -1H- 嘌呤 -2， 6- 二酮环的 8 位有 99.2％的 “H” 且在甲基位置有 99.4％ 的 “D” 。
     实施例 21 ： (S)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 137(S)) 的合成
     根据与上述实施例 20 中合成化合物 137(R) 相同的一般方法， 将一部分化合物 437(S)( 见实施例 12) 转化为 310mg 化合物 137(S)。 1
     H-NMR(300MHz ，CDCl 3 ) ： δ 1.36-1.45(m ， 2H) ， 1.62(s ， 1H) ， 1.64-1.74(m ， 13 2H) ， 3.58(s ， 3H) ， 3.99(s ， 3H) ， 4.02(t ， J ＝ 7.3 ， 2H) ， 7.50(s ， 1H) 。 C-NMR(75MHz ， CDCl3) ： δ23.05， 28.24， 30.07， 33.95， 41.49， 107.92， 141.57， 148.93， 151.68， 155.53。
     HPLC(method ： Waters AtlantisT3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN 保持 4min ； 波长 305nm) ： 保留时间 ： 3.34min ； 99.6％ 纯度。 MS(M+H-H2O) ： 269.1 ； (M+H) ： 287.1 ； (M+Na) ： 309.3。 元素分析 (C13H14D6N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.53， H ＝ 7.04， N ＝ 19.57。实测值 ： C ＝ 54.71， H ＝ 7.28， N ＝ 19.53。 1
     注意到 137(S) 的 H-NMR 谱中不存在约 3.80ppm 处的峰， 指示在次甲基羟基位置 不存在氢。
     实 施 例 22 ： (±)-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 121) 的合成。
     根 据 与 上 述 实 施 例 19 中 合 成 化 合 物 137 相 同 的 一 般 方 法， 将一部分化合物 421( 见实施例 17) 转化为 2.1g 化合物 121。
     H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.41-1.48(m， 2H)， 1.64-1.72(m， 2H)， 1.85(bs， 1H)， 3.58(s， 3H)， 3.79(s， 1H)， 3.99(d， J ＝ 0.5， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.3， 2H)， 7.52(d， J ＝ 0.6， 13 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.69， 27.82， 29.70， 33.61， 41.14， 67.55， 107.66， 141.44， 148.72， 151.49， 155.35。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯 度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN 保持 4min ； 波长 305nm) ： 保留 时间 ： 3.31min ； 99.3％纯度。 MS(M+H-H2O) ： 268.2 ； (M+H) ： 286.2 ； (M+Na) ： 308.1。 元素分析 (C13H15D5N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.72， H ＝ 7.07， N ＝ 19.64。实测值 ： C ＝ 54.75， H ＝ 6.85， N ＝ 19.54。
     实施例 23 ： R-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 (Compound 121(R))。
     1根据与上述实施例 20 中合成化合物 137(R) 相同的一般方法， 将一部分化合物 421(R)( 见实施例 18) 转化为 1.3g 化合物 121(R)。 1
     H-NMR(300MHz ，CDCl 3 ) ： δ 1.37-1.48(m ， 2H) ， 1.64-1.73(m ， 2H) ， 1.72(bs ， 0.5H)， 3.58(s， 3H)， 3.79(s， 1H)， 3.99(s， 3H)， 4.00(t， J ＝ 7.5， 2H)， 7.51(d， J ＝ 0.6， 13 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.67， 27.83， 29.67， 33.57， 41.12， 67.60， 107.66， 141.40， 148.75， 151.51， 155.37。 HPLC(method ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯 度法， 4.5min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN 保持 1.5min(1.5mL/min) ； 波 长 305nm) ： 保留时间 ： 3.29min ； 99.7％纯度。手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等
     度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.1％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时 间： 25.20min(R 对映体 ) ； 28.78min( 预期为 S 对映体 ) ； ＞ 99 ％ ee 纯度。MS(M+H-H2O) ： 268.2 ； (M+H) ： 286.2 ； (M+Na) ： 308.1。
     实施例 24 ： S-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 121(S))
     根据与上述实施例 20 中合成化合物 137(R) 相同的一般方法， 将一部分化合物 421(S)( 见实施例 18) 转化为 590mg 化合物 121(S)。 1
     H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.37-1.48(m， 2H)， 1.64-1.73(m， 2H)， 1.86(bs， 0.5H)， 3.58(s， 3H)， 3.79(s， 1H)， 3.99(d， J ＝ 0.6， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.4， 2H)， 7.52(d， J ＝ 0.7， 13 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.70， 27.84， 29.71， 33.62， 41.14， 67.59， 107.67， 141.43， 148.73， 151.50， 155.37。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯 95 ％ ACN 保 持 4min ； 波 长 305nm) ： 度 法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 (1.0mL/min)， 保留时间： 3.37min ； 99.5 ％ 纯 度。 手 性 HPLC( 方 法 ： Chiralpak AD25cm 柱 - 等 度 法， 78 ％己烷 /22 ％异丙醇 /0.1 ％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 25.20min( 预期为 R 对映体 ) ； 28.78min(S 对映体 ) ； ＞ 99％ ee 纯度。 MS(M+H-H2O) ： 268.2 ； (M+H) ： 286.2 ； (M+Na) ： 308.1。元素分析 (C13H15D5N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 54.72， H ＝ 7.07， N＝ 19.64。实测值 ： C ＝ 54.77， H ＝ 7.13， N ＝ 19.59。
     或者， 根据路线 22a 以二步法由己酮可可碱 (58) 制备化合物 121(S)。
     路 线 24 ： S-1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 (Compound 121(S)) 的可选制备法
     步骤 1 ： 化合物 407。己酮可可碱 (58 ； 1mol 当量 ) 与甲苯 (20 倍体积 ) 混合。向 该混合物中添加 D2O(1.5 倍体积 ) 和碳酸钾 (0.25 当量 )， 加热混合物至回流 ( 约 87℃ )， 进行 3-4 小时。将混合物冷却到 40-50℃， 并去除水层。向剩余甲苯溶液中加入 D2O(1.5 倍 体积 ) 和碳酸钾 (0.25 当量 )， 加热混合物至回流 ( 约 87℃ )， 进行 3-4 小时。将混合物冷 却到 40-50℃， 并去除水层。向剩余甲苯溶液中加入 D2O(1.5 倍体积 ) 和碳酸钾 (0.25 当 量 )， 加热混合物至回流 ( 约 87℃ )， 进行 3-4 小时。 将混合物冷却到 40-50℃， 并去除水层。 有机层在低于 45℃下浓缩至约 5 倍体积， 冷却到 20-25℃， 然后加入庚烷 (1 倍体积 )， 然后 在 20-25℃搅拌 30min。过滤浆料并用庚烷洗涤， 然后在真空中在 40-50℃干燥至恒重。化 合物 407 的产率为约 90％。
     步骤 2 ： 化合物 421(S)。向配备有暖气罩、 J-Kem 热电偶、 机械搅拌器和 pH 探头 的 3 颈 12L 的 RB 烧瓶加入葡萄糖 (547.5g， Aldrich lot#088K0039)， 然后加入 3.47L 的 0.1M KH2PO4， pH ＝ 7.0(“缓冲液” ； 9.5 倍体积 )。搅拌反应混合物以溶解所有固体。加 入化合物 407(365g) 在缓冲液 (2.92L) 中的混合物， 用缓冲液 (1.28L) 冲洗容器。将冲洗 液加入反应器中。起初， 反应混合物是非常薄的乳状悬浮液。将 KRED-NADH-101(3.65g， CODEXIS lot#1021908WW)、 NAD(2.19g， SPECTRUM lot#YA0655)、 GDH(365mg， CODEXIS lot#22016700017) 在缓冲液 (1.46L) 中的溶液加入反应器中。 用缓冲液 (2x0.91L) 冲洗容 器并将冲洗液加入反应器中。加热反应混合物至 20-30℃， 并通过 pH 计监控。30 分钟后反 应混合物变透明。如果需要， 通过逐滴添加 4M KOH 溶液使反应混合物的 pH 保持在 6.50 到 6.90。通过 HPLC 监控反应， 在 5 小时后反应完全， 通过 HPLC 测得的转化率为 99.97％。在 20-25℃搅拌反应混合物过夜， 并加热至 30℃， 用于检查。将氯化钠 (1.825kg) 加入反应混 合物中， 并在搅拌 15 分钟后完全溶解。 用 EtOAc(10 倍体积 ) 提取该批次。 有机相包含薄的 固体凝胶， 当轻微搅拌后其立即变成介于水层和有机层之间的粘性独立相。可将粘性物保 持在滤纸上， 但其形成薄的不透水层， 这阻止其流过滤纸。观察到样品上少量助滤剂 ( 硅藻 土 ) 容易吸收粘性物。将水层倒回反应器， 并用 EtOAc(10 倍体积 ) 提取。将助滤剂 (100g) 加入反应器来吸收粘性物。过滤该批次 ( 小于一小时 ) 并收集有机层。然后用 EtOAc(2x5 倍体积 ) 提取水层， 没有任何问题 ( 再没有观察到粘性物或乳液 )。 浓缩合并的有机提取物 至约 10 倍体积， 并精密过滤以去除少量无机固体。滤液进一步浓缩至约 5 倍体积， 沉淀产 物固体。在 30 分钟内将正庚烷 (8 倍体积 ) 加入浆料 (40-60℃ )。在 20-25℃搅拌浆料过 夜并过滤。用正庚烷 (2x1 倍体积 ) 洗涤滤饼。在周末在 40-50℃干燥湿滤饼 (370g)， 得到 白色固体状化合物 421(S)(332.0g， 90.0％产率 )。滤液浓缩后用庚烷沉淀， 再次收获化合 物 421(S)(7.1g， 1.9％产率 )。为了检查产物的质量平衡， 再用 EtOAc(10 倍体积 ) 提取水 层， 仅获得 4.8g 白色固体状化合物 421(S)(1.3％产率 )。浓缩合并的母液， 得到 2.0g 黄色 1 固体状化合物 421(S)(0.5％产率 )。通过 H NMR 测得在甲基位置的 “D” 结合率为 99.5％ 的主要批次中， 分离产物的质量非常高 ( 通过 HPLC 测得的纯度为 100％ ) 且是单一对映体 ( 通过手性 HPLC 测得 100/0 的 S/R％ )。
     步骤 2( 可选方法 ) ：
     [1] 向配备有暖气罩、 J-Kem 热电偶、 机械搅拌器、 回流冷凝器和 pH 探头的 12L 的 3 颈 RB 烧瓶加入 CRED A131(9.5g， ALMAC lot#IM-1311-061-1) 和 2L 缓冲溶液 (0.1M KH2PO4， pH ＝ 7.0， 以下同 )。搅拌反应混合物以溶解所有固体。一次性加入葡萄糖 (558g， Aldrichlot#088K0039) 在缓冲液 (2L) 中的溶液， 然后加入 NAD(19.25g， Spectrum lot#YA0655) 在 缓冲液 (500mL) 中的溶液和 GDH(1.5g， ALMAC lot#IM-1311-131-1) 在缓冲液 (500mL) 中 的溶液。最初反应混合物的 pH 为 6.98。在 30℃向反应混合物中加入化合物 407 在缓冲液 (3L) 中的混合物， 并用缓冲液 (1.6L) 冲洗容器。 将冲洗液加入反应器中。 反应混合物的 pH 为 6.99。加热反应混合物至 30℃， 并通过 pH 计监控。将反应温度保持在 29.0 到 31.5℃， 且如果需要， 通过逐滴添加 4M KOH 溶液使反应混合物的 pH 保持在 pH 6.93 到 pH 7.02。22 小时后反应完全， 通过 HPLC 测得的转化率为 99.96％。 所得产物的手性 HPLC 分析显示所需 S- 醇的手性选择性为 99.85％。
     [2] 反应混合物和 NaCl(2kg) 混合并用 EtOAc(1x4L and 3x2L) 提取。 在第一次提 取期间形成油水界层 (rag layer)， 反应混合物滤过硅藻土垫。 过滤后没有遇到其他的相分 离问题。在 50-60℃将合并的有机提取物浓缩至约 1.5L， 加入正庚烷 (2L) 沉淀固体。浆料 冷却到 20℃并过滤。用滤液冲洗烧瓶来完成转化。用正庚烷 (2x500mL) 洗涤滤饼， 并在周 末在 40-50℃干燥， 得到化合物 421(S)(366g， 94％产率 )。通过 HPLC(99.95％纯度 )、 手性 1 HPLC(99.88/0.12 的 S/R) 和 H NMR( 甲基位置 99.5％“D” 结合 ) 分析产物。
     步骤 3 ： 化合物 121(S)。向 3L 的 3 颈 RB 烧瓶中加入化合物 421(S)(100g)， 然后加 1 入水 (1.0L) 和 K2CO3(0.25 当量 )。将反应混合物加热至 80±5℃， 并通过 H NMR 监控。24 小时后反应完全， 并在 65 小时后检查。 用 EtOAc 提取所得产物三次， 并合并来自三次提取物 中的固体产物， 并 60-65℃下再溶解在 5 倍体积的 EtOAc 中。在 60-65℃下、 15 分钟内加入 正庚烷 (5.5 倍体积 )， 并冷却到 20℃过夜 (16 小时 )。过滤浆料并用正庚烷 (2x1 倍体积 ) 洗涤湿滤饼， 在 40-50℃干燥后获得产物化合物 121(S)。总共分离 92.4g 化合物 121(S)。 HPLC 纯度是 99.92％ (AUC)， 且 “S” 对映体的手性选择性是 100％。1H NMR 分析显示在 3， 4， 5， 7- 四氢 -1H- 嘌呤 -2， 6- 二酮环的 8 位有 99.2％的 “H” ， 且在甲基位置有 99.4％的 “D” 。
     实 施 例 25 ： 3， 7- 二 甲 基 -1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 氧 代 己 基 )-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 107) 的合成。
     路线 25 ： 化合物 107 的制备。
     3， 7- 二甲基 -1-(4， 4， 6， 6， 6-d5-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化 合物 107) 的合成。将化合物 121(0.49g， 1.72mmol， 见实施例 22) 和 N- 甲基吗啉 -N- 氧化 物 “NMO” (301mg， 2.58mmol) 溶解在 CH2Cl2(20mL) 中。加入四丙基过钌酸铵 “TPAP” (27mg， 0.086mmol)， 并在环境温度搅拌溶液 2.5 小时。 TLC(EtOAc) 显示反应完全。 浓缩反应物并通 过用 EtOAc 洗脱的硅胶色谱纯化。 在真空炉 (50℃ ) 中干燥该物质 4 小时， 得到 400mg(82％ ) 化合物 107。该物质进一步通过结晶化 (EtOAc/ 庚烷 ) 来纯化， 得到 320mg 107。NMR 和 LCMS 分析显示没有损失氘。 1
     H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.64-1.70(m， 4H)， 3.57(s， 3H)， 3.99(d， J ＝ 0.6， 3H)， 4.01-4.04(m， 2H)， 7.51(d， J ＝ 0.6， 1H)。13C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ20.82， 27.38， 29.69，
     33.61， 40.80， 107.75， 141.42， 148.76， 151.46， 155.26。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％甲酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN 保持 4min ； 波长 305nm) ： 保留时间 ： 3.28min ； ＞ 99.9％纯度。 MS(M+H) ： 284.1 ； (M+Na) ： 306.0。
     实 施 例 26 ： (±)1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 ( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 434) 的合成。
     路线 26 ： 化合物 434、 434(R) 和 434(S) 的制备。
     (±)1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 434) 的合成。根据与以上实施例 11 合成化合物 437 相同的一般方法， 将一部分化合物 413( 参见实施例 4) 用 EtOD 中的 NaBD4 处理并用 CH2Cl2 提取， 获得 190mg 化合物 434。
     实 施 例 27 ： (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 ( 甲 基 -d3)-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 434(R)) 和 (S)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 434(S)) 的手性分离。
     化合物 434 的对映体的分离。如上所述获得的一部分外消旋化合物 434 以与对 于外消旋化合物 437 相同的方法 ( 参见实施例 12) 进行分离， 得到分离的对映体化合物 434(R)(72mg) 和化合物 434(S)(74mg)。
     A： (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二酮 ( 化合物 434(R))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.34-1.52(m， 2H)， 1.59-1.76(m，
     3H)， 4.02(t， J ＝ 7.3， 2H)。13C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.65， 27.84， 41.12， 107.64， 151.52， 155.40。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN 保持 4min ； 波长 254nm) ： 保留时间 ： 3.29min ； 99.5 ％纯度。手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD25cm 柱 - 等度法， 78 ％己烷 /22 ％异丙醇 /0.1 ％二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 24.34min(R 对映体 ) ； 28.82min( 预期为 S 对映体 ) ； ＞ 99％ ee 纯度。 MS(M+H-H2O) ： 276.3 ； (M+H) ： 294.3 ； (M+Na) ： 316.2。
     B： (S)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3， 7- 二 ( 甲基 -d3)-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二酮 ( 化合物 434(S))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.36-1.50(m， 2H)， 1.64-1.76(m， 13 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.5， 2H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.65， 27.84， 41.12， 151.52， 155.40。HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN 保持 4min ； 波长 254nm) ： 保留时间 ： 3.29min ； 99.4％ 纯度。手性 HPLC( 方法 ： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78 ％己烷 /22 ％异丙醇 /0.1 ％ 二乙胺， 1.00mL/min 洗脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 24.34min( 预期为 R 对映体 ) ； 28.82min(S 对映体 ) ； ＞ 99％ ee 纯度。 MS(M+H-H2O) ： 276.3 ； (M+H) ： 294.3 ； (M+Na) ： 316.2。
     实施例 28 ： (±)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 135) 的合成。
     路线 27 ： 化合物 135、 135(R) 和 135(S) 的制备。
     (±)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 135) 的合成。根据与上述实施例 19 合成化合物 137 相同的一般方法， 将一部分化合物 435( 参见实施例 8) 转化为 0.99g 化合物 135。
     实施例 29 ： (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 135(R)) 和 (S)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲 基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 135(S)) 的手性分离。
     化合物 135 的对映体的分离。如上所述获得的一部分外消旋化合物 135 以与对 于外消旋化合物 437 相同的方法 ( 参见实施例 12) 进行分离， 得到分离的对映体化合物 135(R)(352mg) 和化合物 135(S)(343mg)。
     A： (R)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 135(R))。1H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.41-1.48(m， 2H)， 1.64-1.74(m， 13 3H)， 3.58(s， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.4， 2H)， 7.50(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.65， 27.84 ， 29.68 ， 41.12 ， 107.67 ， 141.38 ， 148.76 ， 151.52 ， 155.37 。 HPLC( 方 法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95 ％ ACN 保持 4min ； 波长 305nm) ： 保留时间 ： 3.27min ； 99.6 ％纯度。手性 HPLC( 方 法： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78 ％己烷 /22 ％异丙醇 /0.1 ％二乙胺， 1.00mL/min 洗 脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 25.21min(R 对 映 体 ) ； 28.42min( 预 期 为 S 对 映 体)； ＞ 99.5 ％ ee 纯 度。MS(M+H-H2O) ： 272.1 ； (M+H) ： 290.1 ； (M+Na) ： 312.3。 元 素 分 析 (C13H11D9N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 53.97， H ＝ 6.97， N ＝ 19.36。实测值 ： C ＝ 53.83， H ＝ 6.98， N ＝ 19.30。
     B： (S)-1-(4， 4， 5， 6， 6， 6-d6-5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 1 7H)- 二酮 ( 化合物 135(S))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.38-1.48(m， 2H)， 1.64-1.74(m， 13 3H)， 3.58(s， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.4， 2H)， 7.50(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.64， 27.84 ， 29.68 ， 41.12 ， 107.67 ， 141.38 ， 148.76 ， 151.52 ， 155.37 。 HPLC( 方 法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/ min)， 95 ％ ACN 保持 4min ； 波长 305nm) ： 保留时间 ： 3.27min ； 99.8 ％纯度。手性 HPLC( 方 法： Chiralpak AD 25cm 柱 - 等度法， 78％己烷 /22％异丙醇 /0.1％二乙胺， 1.00mL/min 洗 脱 40min ； 波长 ： 254nm) ： 保留时间 ： 25.39min(R 对映体， 次要产物 ) ； 28.42min(S 对映体， 主 要产物 ) ； 99.1 ％ ee 纯度。MS(M+H-H2O) ： 272.1 ； (M+H) ： 290.1 ； (M+Na) ： 312.3。元素分析 (C13H11D9N4O3) ： 计算值 ： C ＝ 53.97， H ＝ 6.97， N ＝ 19.36。实测值 ： C ＝ 53.93， H ＝ 7.03， N ＝ 19.29。
     实施例 30 ： (±)1-(5- 羟基己基 )-3- 甲基 -7- 甲基 -d3-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 116) 的合成。
     根据与以上实施例 11 合成化合物 437 相同的一般方法， 对化合物 100( 参见实施 例 1) 用 EtOH 中的 NaBD4 处理并用 CH2Cl2 提取， 获得化合物 116。
     MS(M+H-H2O) ： 266.1 ； (M+H) ： 284.1 ； (M+Na) ： 306.0。
     实施例 31 ： (±)1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 133) 和化合物 133 的 (R) 和 (S) 对映体的合成。
     路线 28 ： 化合物 133、 133(S) 和 133(R) 的制备。
     (±)1-(5-d1-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化 合 物 133)。根据与合成化合物 437 相同的一般方法 ( 参见实施例 11)， 用 EtOH 中的 NaBD4 1 处理可商购的 58 获得化合物 133。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.18(s， 3H)， 1.39-1.55(m， 3H)， 1.61-1.64(m， 1H)， 1.66-1.76(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 3.99(s， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.4， 2H)，
     7.51(s， 1H)。13C-NMR(75MHz， CDCl3) ： δ22.87， 23.37， 27.89， 29.67， 33.57， 38.64， 41.12， 67.11， 67.40， 67.69， 107.67， 141.40， 148.79， 151.51， 155.36。 HPLC( 方法 Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯 度 法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.32min ； ＞ 99％纯度。MS(M+H) ： 282.0。 元素分析 (C13H19DN4O3) ： 计算值 ： C ＝ 55.50， H ＝ 7.17， N ＝ 19.92 实测值 ： C ＝ 55.4， H ＝ 7.34， N ＝ 19.72。
     实施例 32 ： (R)-1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 133(R)) 和 (S)-1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 133(S)) 的手性分离。
     化合物 133 的对映体的分离。 如以上实施例 31 所获得的一部分外消旋化合物 133 以与对于外消旋化合物 437 相同方法 ( 参见实施例 12) 进行分离， 得到分离的对映体。化 合物 133(R)(mp 112.9-113.1℃ )(290mg) 和化合物 133(S)(mp 112.1-112.2℃ )(302mg)。
     A： (R)-1-(5-d1-5- 羟 基 己 基 )-3， 7- 二 甲 基 -1H- 嘌 呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 1 ( 化 合 物 133(R))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.18(s， 3H)， 1.40-1.54(m， 3H)， 1.61(s， 1H)， 1.65-1.72(m， 2H)， 3.58(s， 3H)， 3.99(s， 3H)， 4.03(t， J ＝ 7.5， 2H)， 7.50(s， 1H)。 13 C-NMR(75MHz ， CDCl 3) ： δ 23.47 ， 24.00 ， 28.50 ， 30.30 ， 34.19 ， 39.25 ， 41.73 ， 142.01 。 HPLC( 方法 ： Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 (1.0mL/min)， 95 ％ ACN+0.1 ％ 甲 酸 保 持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时间 ： 3.31min ； ＞ 99％纯度。MS(M+H) ： 282.0。元素分析 (C13H19DN4O3) ： 计算值 ： C ＝ 55.50， H＝ 7.17， N ＝ 19.92。实测值 ： C ＝ 55.73， H ＝ 7.02， N ＝ 19.83。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中在约 3.80ppm 处不存在峰， 指示在次甲基羟基位置不存在 氢。
     B： (S)-1-(5-d1-5- 羟基己基 )-3， 7- 二甲基 -1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合 1 物 133(S))。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： δ1.19(s， 3H)， 1.39-1.56(m， 3H)， 1.65-1.74(m， 3H)， 13 3.58(s， 3H)， 3.99(t， J ＝ 7.3， 2H)， 4.03(t， J ＝ 7.4， 2H)， 7.51(s， 1H)。 C-NMR(75MHz， CDCl 3) ： δ 22.86 ， 23.38 ， 27.89 ， 29.67 ， 33.57 ， 38.64 ， 41.11 ， 141.40 ， 148.76 ， 151.51 ， 155.37。HPLC( 方法 Waters Atlantis T3 2.1x50mm 3μm C18-RP 柱 - 梯度法， 14min 内 5-95％ ACN+0.1％甲酸 (1.0mL/min)， 95％ ACN+0.1％甲酸保持 4min ； 波长 ： 305nm) ： 保留时 间： 3.30min ； ＞ 99％纯度。MS(M+H) ： 282.3。元素分析 (C13H19DN4O3) ： 计算值 ： C ＝ 55.50， H ＝ 7.17， N ＝ 19.92。实测值 ： C ＝ 55.51， H ＝ 7.10， N ＝ 19.72。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中在约 3.80ppm 处不存在峰， 指示在次甲基羟基位置不存在 氢。
     实施例 33 ： 3， 7- 二甲基 -1-(6， 6， 6-d3-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 157) 和 (S)-3， 7- 二甲基 -1-(6， 6， 6-d3-5- 羟基己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二 酮 ( 化合物 156(S)) 的合成。
     步骤 1 ： 5-(3， 7- 二甲基 -2， 6- 二氧代 -2， 3， 6， 7- 四氢 -1H- 嘌呤 -1- 基 )-N- 甲 氧基 -N- 甲基戊酰胺 (61)。向配备有磁性搅拌器和热电偶的 100mL 圆底烧瓶中加入 50(1.49g， 8.27mmol， 1.0 当量 ) 和 DMSO(40mL)。 搅拌混合物并加热到约 35℃以溶解所有物 质， 然后以单一部分加入 NaH(60％油中的分散体 ； 347mg， 8.68mmol， 1.05 当量 )。将混合物 加热至 50℃， 并在 50℃搅拌 30 分钟 ( 注意 ： 由于形成糊状混合物， 搅拌变得困难 )， 然后冷 却到室温。 然后经由注射器向混合物中加入粗制溴化物 56(1.95g， 8.68mmol， 1.05 当量 ) 的 DMSO(5mL) 溶液。在室温下搅拌混合物过夜。它变成透明的黄色溶液。用大量水 (200mL) 稀释溶液， 然后用 CH2Cl2(3x100mL) 提取。用水 (2x100mL) 洗涤合并的 CH2Cl2 层。在旋转
     蒸发器中去除有机挥发性物质后获得固体残渣。将所述固体残渣悬浮在 MTBE(25mL) 中， 在 50℃搅拌混合物 1hr， 然后在室温下放置一个小时， 然后经由中等孔隙度漏斗过滤， MTBE 冲 洗 (2x10mL)， 并在真空下干燥。收集 2.19g(82％ ) 灰白色固体状产物， AUC 纯度为 99A％。
     步骤 2 ： 3， 7- 二甲基 -1-(6， 6， 6-d3-5- 氧代己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化 合物 157)。向配备有磁性搅拌器和热电偶的 300mL 圆底烧瓶中加入 61(1.30g， 4.01mmol， 1.0 当量 ) 和 THF(45mL)。搅拌混合物， 并加热到约 45 ℃以溶解所有物质， 然后冷却到 0℃ ( 注意 ： 固体沉淀， 但加热之前存在固体较少 )。经由注射器以内部温度不升高超过 5℃ 的速率加入 CD3MgI(Et2O 中 1.0M， 8.82mL， 2.2 当量 )。添加完成后， 在 0℃搅拌混合物 30 分 钟， 然后去除冷浴并将混合物加热至室温。 在室温下搅拌混合物 1.5 小时， 在其上通过 HPLC 进行的 IPC 分析显示转化率为 80A％。在室温下再搅拌 1.5 小时， 如通过另一个 IPC 分析显 示， 没有再形成转化。混合物冷却到 0℃， 通过注射器再次加入 CD3MgI(Et2O 中 1.0M， 2.0mL， 0.5 当量 )。 将混合物加热到室温过夜。 第二天， 通过 HPLC 进行的 IPC 分析显示转化率高于 95A％。用 0.5N 柠檬酸水溶液 (40mL) 终止反应混合物， 并用 MTBE(60mL) 提取。分离相， 用 水 (20mL)、 饱和 NaHCO3 水溶液 (20mL)、 然后水 (20mL) 洗涤有机层。 在旋转蒸发器中浓缩有 机层， 得到 AUC 纯度为 91A％的粗品。通过在室温下在 MTBE(5mL) 中制浆过夜， 然后过滤以 及 MTBE 冲洗来进行进一步纯化。获得所需产物， 为 0.92g(81％ ) 白色固体， AUC 纯度为约 1 95A％。 H NMR ： 1.61-1.71(m， 4H)， 2.50(t， J ＝ 7.1， 2H)， 3.57(s， 3H)， 3.98(s， 3H)， 4.01(t， J ＝ 7.1， 2H)， 7.50(s， 1H)。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中在约 2.15ppm 处不存在单峰， 指示不存在甲基酮氢。
     步骤 3 ： (S)-3， 7- 二甲基 -1-(6， 6， 6-d3-5- 羟基己基 )-1H- 嘌呤 -2， 6(3H， 7H)- 二酮 ( 化合物 156)。向配备有磁性搅拌器和热电偶的 100mL 的 3 颈圆底烧瓶中加入化合物 157(563mg， 2.00mmol， 1.0 当量 )、 D(+)- 葡萄糖 (844mg) 和 0.1M KH2PO4(11mL)。在室温下 搅拌混合物。 将 NAD(3.4mg， 0.6w％ )、 GDH(0.6mg， 0.1w％ ) 和酶 KRED-NADH(5.6mg， 1.0w％ ) 溶解在 0.1N KH2PO4 中。将该溶液加入反应混合物中。在室温下搅拌所得的浑浊溶液 5 小 时， 期间向反应混合物中逐滴加入 4N KOH 水溶液以使其 pH 在 6 到 7， 如 pH 计所测定。将样 品等分并通过 HPLC 分析， 显示转化率大于 99.5A％。加入固体 NaCl( 约 3g)， 搅拌混合物 30 分钟。 加入 EtOAc(10mL)， 再搅拌混合物 30 分钟。 混合物滤过湿的硅藻土垫以去除凝胶样物 质， 并用 EtOAc(2x10mL) 冲洗湿滤饼。收集滤液， 分离相。用 EtOAc(2x60mL) 洗涤水层。在 旋转蒸发器中将合并的有机层浓缩至干。收集 527mg 粗品， 获得 93％的质量平衡。通过快 速色谱法 ( 硅胶， 洗脱液 MeOH/CH2Cl2， 梯度 2-20％ MeOH) 纯化残渣， 获得 398mg(70％ ) 所需 1 产物， 为白色固体， AUC 纯度为 99A％ . H NMR ： 1.45-1.57(m， 4H)， 1.63-1.74(m， 2H)， 3.57(s， 3H)， 3.76-3.83(m， 1H)， 3.98(s， 3H)， 4.02(t， J ＝ 7.3， 2H)， 7.50(s， 1H)。 1
     注意到上述 H-NMR 谱中在约 1.19ppm 处不存在峰， 指示不存在羟基的 α 甲基 氢。手性 HPLC 分析 ( 方法 ： Chiralpak AD-H 25cm 柱 - 等度法， 以 1.25mL/min 的速度用 75 ％正庚烷 /25 ％异丙醇洗脱 25min， 波长 ： 274nm) ： 保留时间 ： 17.5min( 主要对映体 ) ； 15.5min( 预期为次要对映体 ) ： ＞ 99.95％ ee 纯度。
     生物学评价
     实施例 34a ： 经口施用后狗中的药代动力学的评价。比较化合物 409 和己酮可可 碱
     雄性 beagle 狗经口施用后， 研究标题化合物的代谢。在多个时间点从给药的狗中 采集血样并从其分离血浆。血浆样品用于通过 LC-MS/MS( 液相色谱串联质谱 ) 测定血浆药 物水平， 从而评价药代动力学参数。
     分别将化合物 409 和己酮可可碱溶解在盐水中， 使其浓度为 4mg/mL。制备两种溶 液的 1 ∶ 1(v/v) 混合物， 形成化合物和己酮可可碱的最终浓度均为 2mg/mL 的溶液。
     两只雄性 beagle 狗禁食过夜， 然后用上述混合物经由灌胃法经口给药 2.5mg/kg 的化合物和己酮可可碱。在 0min( 给药前 )、 给药后 15min、 30min、 45min、 1hr、 1.5hr、 2hr、 3hr、 4hr、 6hr、 8hr、 10hr、 12hr、 16hr 和 24hr 经由股静脉收集血样 (1.5-2mL)。血样贮存在 冰上， 然后离心获得血浆样品。 离心发生在血液收集的 1 小时内， 以获得血浆 ( 最大体积 )。 立即倒出血浆并冷冻 / 贮存在 -70℃直到分析。
     表8： 狗中化合物 409 对比己酮可可碱的血浆水平 ( 实施例 29a)
     a)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     表 8 显示实施例 34a 所述的评价结果。化合物 409、 己酮可可碱的氘化形式的平 均 Cmax 和平均 AUC 明显大于己酮可可碱。在狗血浆中氘化化合物显示比己酮可可碱更多 的暴露量。
     实施例 34b ： 经口施用后狗中的药代动力学的重复评价。通过监控代谢物来比较 化合物 409 和己酮可可碱
     通过额外监控己酮可可碱和化合物 409 代谢物来重复实施例 34a。 在该实验中， 分 别将化合物 409 和己酮可可碱溶解在盐水中， 使其浓度分别为 4.4 和 4mg/mL。制备两种溶 液的 1 ∶ 1(v/v) 混合物， 形成化合物 409 的最终浓度为 2.2mg/mL 和己酮可可碱的最终浓 度为 2mg/mL 的溶液。给药后数据分析包括调节化合物 409 和己酮可可碱之间剂量浓度引 起的 10％差异。
     四只 beagle 狗 ( 年龄 2-3 岁， 体重 5 到 8kg) 禁食过夜， 然后用上述混合物经由灌 胃法经口给药 2.75mg/kg 的化合物 409 和 2.5mg/kg 的己酮可可碱。在 0min( 给药前 )、 给 药后 5min、 15min、 30min、 45min、 1hr、 1.5hr、 2hr、 3hr、 4hr 和 6hr 经由股静脉收集血样 ( 约 1mL)。血样贮存在冰上， 离心获得血浆样品。离心发生在血液收集的 15 分钟内， 以获得血 浆 ( 最大体积 )。立即倒出血浆并冷冻 / 贮存在 -20℃直到分析。
     通过 LC-MS/MS 分析血浆样品中施用的化合物及其相应 M1 代谢物的存在 ：
     己酮可可碱M1化合物 409( 施用的 ) 化合物 419(M1 代谢物 )
     来自四只狗中每只的结果显示在图 1A 和 1B 中。四只狗中的一只狗 ( 狗 H， 图 1b) 的结果与其他三只不一致。这只狗显示施用后 5 分钟每种施用的化合物及其各自代谢物的 高出 10 倍的血浆浓度。此外， 这只狗不显示施用后 5 到 15 分钟施用的化合物的血浆浓度 的特征升高。 断定这只狗很可能被不适当灌胃， 化合物可能经过气管施用， 而不是如所要求 的进入胃肠道。因此， 从该分析中排除来自这只狗的数据。其余三只狗的概括性分析显示 在表 9 中。
     表9： 狗中化合物 409 对比己酮可可碱的血浆水平 ( 实施例 34b)
     a) 化合物 409 的剂量浓度比己酮可可碱的剂量浓度高 10％， 因此本发明报告的数 字反映 10％升高的调节。
     b)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     如表 9 所示， 当与以相同水平一起给药的己酮可可碱相比时， 观察到化合物 409 的 Cmax 和 AUC 水平更高。图 1 表明在经口给药的三只狗中， 化合物 409 从血浆中的清除比己酮 可可碱更慢。图 1a 和 1b 表明在经口给药的三只狗中， 化合物 409 从血浆中的清除比己酮 可可碱更慢。图 1a 和 1b 也表明施用化合物 409 后， 化合物 419(409 的氘化的 M1 代谢物 ) 的总的全身暴露量比施用己酮可可碱后， M1 代谢物的总的全身暴露量更大。
     实施例 34c ： 经口施用后狗中的药代动力学的评价。比较化合物 413 和己酮可可 碱
     除了评价化合物 413 之外， 该研究和实施例 34a 和 34b 所述类似。 四只雄性 beagle 狗通过灌胃法经口施用含有 2mg/mL 的盐水中的己酮可可碱和化合物 413 的混合物。如实 施例 34b 采集血样。
     表 10 ： 狗中化合物 413 对比己酮可可碱的血浆水平 ( 实施例 34c)
     a)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     该研究的结果概括在上面表 10 中。该表描述经口给药后化合物 413 对比己酮可 可碱的血浆水平。 当与以相同水平一起给药的己酮可可碱相比时， 观察到化合物 413 的 Cmax 和 AUC 水平更高。
     实施例 35 ： 化合物在大鼠全血中的稳定性评价。比较化合物 409、 435(S)、 435(R) 和己酮可可碱及其 M-1 代谢物。
     进行该研究来评价标题化合物在大鼠全血中的稳定性。因为酮 ( 或酮化合物， 己 酮可可碱或 409) 及其相应的 M-1 醇代谢物互相转化， 在将酮化合物添加到血液或添加 M-1
     后测定这些成分的水平。换句话说， 在一些测试中， 酮化合物是起始测试化合物， 在其他测 试中， M-1 代谢物是起始测试化合物。
     从 ViviSource Laboratories， Waltham， MA 获得新鲜的大鼠全血。在二甲亚砜 (DMSO) 中制备测试化合物的储备溶液 (7.5 毫摩尔 (mM))。7.5mM 的储备溶液在乙腈 (ACN) 中稀释至 500 微摩尔 (μM)。向 990 微升 (μL) 血液中 ( 预先加热至 37℃， 7 分钟 ) 中加 入 10μL 的 500μM 测试化合物， 使其最终浓度为 5μM。测试化合物是己酮可可碱、 己酮可 可碱的 (S)-M1 代谢物、 己酮可可碱的 (R)-M1 代谢物、 化合物 409、 化合物 435(S) 和化合物 435(R)。后两种测试化合物分别是化合物 409 的 (S)-M1 和 (R)-M1 代谢物。在 37℃温孵 反应混合物。在添加测试化合物后 0min、 5min、 15min、 30min、 1 小时和 2 小时取等分试样 (50μL)， 并加入到含有 150μL 冰冷的乙腈和内标的 96 孔板中以终止反应。将板在 -20℃ 贮存 20 分钟， 然后向板的孔中加入 100μL 的 50％乙腈 / 水， 然后离心获得小球状沉淀蛋 白。 将各上清液的 200μL 等分试样转移到另一个 96 孔板中， 并使用 Applied Bio-systems API 4000 质谱仪通过 LC-MS/MS 分析下表 11 所列的施用的化合物及其具体代谢物的量。
     表 11 ： 在大鼠全血中分析的化合物 - 代谢物对 ( 实施例 35 和 36)
     实验对 A B C D E F
     用血温孵的化合物 己酮可可碱 化合物 409 (S)-M1 化合物 435(S) (R)-M1 化合物 435(R) 分析的代谢物 (S)-M1a 化合物 419(S)a 己酮可可碱 化合物 409 己酮可可碱 化合物 409a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。基于公开的己酮可可碱代谢报告将立体化学假 定为≥ 95％ (S)。
     该研究的结果描绘在图 2 和 3 中。代谢物形成的时程显示于图 2。如图 3 所示， 基 于相对于在温孵混合物检测到该代谢物的最早时间点的 2hr 时存在的量， 计算所形成的代 谢物的相对量， A 和 B 为 5 分钟， C 为 15 分钟。
     如图 3 所示， 约 2 小时后， 用己酮可可碱温孵的大鼠全血中形成的 (S)-M1 的量 ( 图 3， 柱 A) 与用化合物 409 温孵的大鼠全血中形成的化合物 419(S) 的量 ( 图 3， 柱 B) 类似。 因此， 与由未氘化己酮可可碱形成的未氘化 (S)-M1 的相对水平相比， 化合物 409 中的氘取 代对所形成的氘化 (S)-M1 代谢物 ( 化合物 419(S)) 的相对水平没有可辨别的影响。
     对于 (S)-M1 向酮化合物的逆反应， 氘化确实具有显著影响。图 3 的柱 C 显示添加 (S)-M1 后所存在的己酮可可碱的可评估的量。相反， 添加化合物 435(S) 后 2 小时， 化合物 409 不可检测 ( 图 3， 柱 D)。在这些情况下， 化合物 435(S) 中的氘取代阻止该化合物转化为 相应酮。这种效果对增强所需 M-1 代谢物的血浆水平特别有益。该试验中对于己酮可可碱没有检测到 (R)-M1 代谢。类似地， 将化合物 435(R) 加 入到大鼠血后， 没有检测到化合物 409。因此， 关于氘化对 (R)-M1 向己酮可可碱的转化的 影响不能做出结论。图 2 显示用大鼠全血温孵施用的化合物期间所产生的具体代谢物的时 程。
     实施例 36 ： 人肝微粒体中化合物稳定性的评价。比较化合物 409、 435(S)、 435(R) 和己酮可可碱。
     除了用人肝微粒体代替大鼠全血来研究化合物的代谢之外， 实施例 36 的设计类 似于实施例 35。上表 11 显示该实施例 36 中分析的各对测试化合物和代谢物。
     人肝微粒体 (20mg/mL) 从 Xenotech， LLC(Lenexa， KS) 获得。β- 烟酰胺腺嘌呤二 核苷酸磷酸、 还原形式 (NADPH)、 氯化镁 (MgCl2) 和二甲亚砜 (DMSO) 从 Sigma-Aldrich 购得。
     在 DMSO 中制备含有 7.5mM 的测试化合物 ( 己酮可可碱、 (S)-M1 代谢物、 (R)-M1 代 谢物、 化合物 409、 化合物 435(S) 和化合物 435(R)) 的储备溶液。将 7.5mM 储备溶液在乙腈 (ACN) 中稀释至 250μM。人肝微粒体在含有 3mM MgCl2 的 pH7.4 的 0.1M 磷酸钾缓冲液中 稀释至 2.5mg/mL。将稀释的微粒体一式三份地加入 96 孔深孔聚丙烯板的孔中。将 10μL 的 250μM 的测试化合物加入微粒体中， 将混合物预热至 37℃保持 10 分钟。通过添加预热 的 NADPH 溶液开始反应。最终反应体积是 0.5mL 且含有于 3mM MgCl2 的 pH7.4 的 0.1M 磷 酸钾缓冲液中的 2.0mg/mL 人肝微粒体、 5μM 测试化合物和 2mM NADPH。在 37℃温孵反应 混合物， 并在 0、 5、 10、 20 和 30 分钟取 50μL 等分试样， 并加入到含有 50μL 冰冷的乙腈和 内标的浅孔 96 孔板中以终止反应。将板在 4 ℃贮存 20 分钟， 然后将 100μL 水加入板的 孔中， 然后离心获得小球状沉淀蛋白。将上清液转移到另一个 96 孔板中， 并使用 Applied Bio-systemsAPI 4000 质谱仪通过 LC-MS/MS 分析施用的化合物及其具体代谢物 ( 上表 11 所列的 ) 的量。
     该研究的结果描绘在图 4 和 5 中。代谢物形成的时程显示于图 4。如图 5 所示， 基于相对于在温孵混合物检测到该代谢物的最早时间点的 30 分钟时存在的量， 计算所形 成的代谢物的相对量， A、 B、 C 和 E 为 0 分钟， D 为 5 分钟， 以及 F 为 10 分钟。30 分钟后， 用 己酮可可碱温孵的人肝微粒体中形成的 (S)-M1 的量 ( 图 5， 柱 A) 与用化合物 409 温孵的 人肝微粒体中形成的化合物 419(S) 的量类似。因此， 与由未氘化己酮可可碱形成的未氘化 (S)-M1 的相对水平相比， 由化合物 409 所体现的己酮可可碱的氘化对所形成的氘化 (S)-M1 代谢物 ( 化合物 419(S)) 的相对水平没有可辨别的影响。人肝微粒体中的这些结果与使用 大鼠全血所观察到的结果一致。
     对于 (S)-M1 向酮化合物的逆反应， 氘化确实具有显著影响。图 5 的柱 C 显示添 加 (S)-M1 后 30 分钟存在的大量己酮可可碱。相反， 添加化合物 435(S) 后， 30 分钟后检测 的化合物 409 的水平小于 (S)-M1 的水平 ( 图 5， 柱 D)。由 (S)-M1 生成的己酮可可碱比由 435(S) 生成的化合物 409 多约 30％。在这些情况下， 化合物 435(S) 中的氘取代阻止该化 合物转化为相应酮。而氘在大鼠血中具有更大的影响， 结果是一致的。
     人肝微粒体中观察到氘对 (R)-M1 代谢物的代谢作用的显著影响。与由未氘化 (R)-M1 形成的未氘化己酮可可碱的量相比 ( 比较图 5 中的柱 E 和 F)， (R)-M1 的氘化 ( 化 合物 435(R)) 使得用人肝微粒体温孵 30 分钟后形成的氘化己酮可可碱 ( 化合物 409) 的量 降低了几乎 5 倍。图 4 显示在用人肝微粒体温孵施用的化合物期间所产生的具体代谢物的时程。
     实施例 37 ： 经口和静脉内给药后 (S)-M1 和化合物 435(S) 在大鼠中的药代动力学研究。 将 (S)-M1 和化合物 435(S)((S)-M1 的氘化形式 ) 以 10mg/mL 的浓度分别溶解在 盐水中。然后制备两种化合物的 1 ∶ 1 混合物， 各化合物的最终浓度为 5mg/mL， 其用于静 脉内施用。对于经口施用， 将所述混合物进一步在盐水中稀释以使各化合物的最终浓度为 1mg/mL。
     三只雄性 Sprague-Dawley 大鼠用于各经口和静脉内研究。动物禁食过夜， 然后施 用化合物。通过将 5mg/kg 单剂量的 1 ∶ 1 组合推注入大鼠的插导管的颈静脉中来完成静 脉内施用。在给药前一天将导管插在已经用氯胺酮 (IM 30mg/kg) 麻醉的大鼠上。经口施 用通过经口灌胃 5mg/kg 的单剂量来实现。 给药后的多个时间点 (2min、 5min、 10min、 20min、 30min、 1hr、 2hr、 3hr、 4hr、 5hr 和 6hr) 通过对用异氟烷暂时麻醉的大鼠眼眶后静脉取样， 从 给药大鼠中采集血样 (250μL)。 将血样放置在含有 K2-EDTA 的试管中并贮存在冰上直到离 心。采集 30 分钟内， 通过离心分离血浆。取 100μL 等分试样， 与 200μL 乙腈混合并贮存 在 -20℃直到使用 Applied Bio-systems API 4000 质谱仪通过 LC-MS/MS 进一步分析。
     分析样品中施用的化合物、 相应酮 ( 己酮可可碱和化合物 409) 以及相应 M5 代 谢物的存在。将样品 (10μL) 注入 Zorbax SB-C8(Rapid Resolution) 柱中 (2.1x30mm， 3.5μm)。初始流动相条件是 100％ A(10mM 乙酸铵水溶液 ) 和 0％ B( 甲醇 )， 其中流速为 0.5mL/min。使流动相 B 在 3 分钟内到达 55％， 并在 1 分钟内从 55％到 90％， 然后在下一分 钟内回到 0％。总运行时间是 5 分钟。对于己酮可可碱及其 M1 和 M5 代谢物， 前体 / 产物离 子对设置为 m/z 281/193(M1)、 m/z 279/181( 己酮可可碱 ) 和 m/z 267/221(M5)。
     对于化合物 435(S) 和化合物 409， 设置一对以上离子对来检测由氘损失而产生的 种类。发现在与羰基碳邻近的位置的侧链上具有氘的本发明化合物 ( 例如化合物 409) 发 生某些程度的氘损失。氘的这种损失似乎通过未知机制在体内和体外均有发生。将乙腈添 加到血清样品是用于终止分析前任何额外的体外氘损失。通常， 最多 2 个氘原子被氢替代。 对于化合物 435(S)， 其在次甲基位置具有氘， 一旦氧化为酮化合物 409， 氘就消失了。 将 409 还原为 M1 代谢物在次甲基位置引入质子。当分析来自施用 435(S) 的动物的血清来测定施 用的化合物和代谢物时， 包括总量少了一个和两个较小侧链氘 ( 下文称为 “-1D” 和 “-2D” 种类 ) 的化合物种类。 因此， 对于化合物 435(S) 和化合物 409， 设置单独离子对来检测该化 合物及其相应的 -1D 和 -2D 种类。对于化合物 435(S)， 检测到三对离子对 ： m/z 291/197、 290/197 和 189/197。对于化合物 409， 监控离子对 m/z 288/186、 287/186 和 286/186。基 于己酮可可碱及其 M-1 代谢物的代谢作用和活性中什么是已知的， 在测定化合物 409 和化 合物 435(S) 中包括 -1D 和 -2D 种类能更准确地测定总活性种类且是合理的。化合物 409 或 409 的任何 M-1 代谢物的血浆暴露量增加将是所希望的， 这包括 -1D 和 -2D 种类。
     对于相应的氘化 M5 代谢物 (M5a) ：
     其在酸侧链上也不含氘， 仅在 m/z 271/225 使用一对离子对。该分析的内标是茚 地普隆 (indiplon)。
     表 12 ： 大鼠经口施用 435(S) 和 (S)-M1 后的药代动力学结果
     所测定的化合物 a 435(S) (S)-M1 ％差异 b AUC0- ∞ (hr*ng/mL) 4507±1015 1628±272 +177％ Cmax(ng/mL) 4105±964 1570±249 +162％435(S)+409 (S)-M1+ 己酮可可碱 ％差异 b13464±3502 4632±437 +191％15647±7421 5032±630 +212％氘化 M5(M5a) M5 ％差异 b
     1924±183 2985±601 -36％a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。基于公开的己酮可可碱代谢报告将立体化学假 定为≥ 95％ (S)。
     b)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     大鼠经口施用的结果显示于表 12。显示氘化化合物 435(S) 的 AUC0- ∞和 Cmax 明显 高于其未氘化对应物 (S)-M1。 因为 (S)-M1 和己酮可可碱之间有着显著的血清相互转化， 且 这两种都是治疗活性的， 所以我们也测定了 (S)-M1 连同己酮可可碱、 化合物 435(S) 连同化 合物 409 的 AUC0- ∞和 Cmax。分别经口施用 (S)-M1 和 435(S) 后， 显示化合物 435(S) 连同化 合物 409 的 AUC0- ∞和 Cmax 明显高于 (S)-M1 连同己酮可可碱的 AUC0- ∞和 Cmax。
     也测定由分别经口施用 (S)M1 和 435(S) 而产生的 M-5 和 M5a 代谢物的 AUC0- ∞。 M-5 代谢物可能与某些患者中的毒性有关， 并被认为是不合需要的。 表 12 显示， 经与施用非 氘化 (S)-M1 后获得的 M5 水平相比， 经口施用化合物 435(S) 提供相当少的 M5a。就活性种 类与 M5 代谢物的比率而言， 氘化化合物远比非氘化化合物有利。( 化合物 435(S)+ 化合物 409) 与 M5a 的比率是 7.0， 这远远好于 ((S)-M1+ 己酮可可碱 ) 与 M5 的比率 1.6。表 13 ： 大鼠静脉内施用后的药代动力学结果AUC0- ∞ (hr*ng/mL) 7127±816 3390±302 +110％435(S)+409 (S)-M1+ 己酮可可碱 ％差异 b11247±1326 6280±460 +79％氘化 M5(M5a) M5 ％差异 b
     1522±530 1795±521 -15％a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。基于公开的己酮可可碱代谢报告将立体化学假 定为≥ 95％ (S)。
     b)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     表 13 显示大鼠静脉内施用后的结果。静脉内施用的结果与经口施用类似。静脉 内施用后化合物 435(S) 的平均 AUC0- ∞比其未氘化对应物 (S)-M1 的平均 AUC0- ∞高 110％。 静脉内施用后化合物 435(S) 连同化合物 409 的平均 AUC0- ∞比 (S)-M1 连同己酮可可碱的平 均 AUC0- ∞高 79％。静脉内施用化合物 435(S) 提供的 M5a 代谢物的量比静脉内施用 (S)-M1 提供的 M5 代谢物的量少 15％。静脉内施用化合物 435(S) 的大鼠中活性种类与相应 M5 代 谢物的比率是 7.4， 而静脉内施用 (S)-M1 的大鼠中该比率是 3.5。
     实施例 38 ： 经口和静脉内给药后， 黑猩猩中己酮可可碱和化合物 435(S) 的药代动 力学研究
     将己酮可可碱和化合物 435(S) 以 10mg/mL 的浓度分别溶解在热 (65℃ ) 盐水中。 然后制备两种化合物的 1 ∶ 1 混合物， 其中各化合物的最终浓度为 5mg/mL。然后将混合物 无菌滤过 0.2μm 过滤器。
     两只黑猩猩 ( 一只雄性和一只雌性 ) 用于各经口和静脉内研究。动物禁食过夜， 然后施用化合物。所有动物用氯胺酮 ( 约 10mg/kg) 和 / 或泰拉瑞 (telazol， 约 5mg/kg) 镇静， 然后给药。通过在 10 分钟内 IV 滴注 75mg 各化合物 ( 总剂量溶液为 15mL) 来实现静 脉内施用。通过经口灌胃 75mg 单剂量的各化合物 ( 总剂量溶液为 15mL) 来实现经口施用。 在给药前后的多个时间从给药的黑猩猩采集血样 (6mL)。对于静脉内施用， 在 0min( 滴注前 )、 5min、 9.5min( 正好在滴注结束前 )、 滴注停止后 6、 15、 30 和 45min 以及 1、 2、 4、 6、 8、 10 和 12hr 采集血样。对于经口施用， 在 0min( 给药前 )、 给药后 15 和 30min 以及 1、 1.5、 2、 4、 6、 8、 10 和 12hr 采集血样。
     将血样放置在包含肝素钠的试管中， 混合并贮存在冰上直到离心。采集 30 分钟 内， 通过离心血样并取所得血浆的等分试样 (200μL) 来分离血浆。各 200μL 等分试样的 血浆与 400μL 乙腈混合， 并贮存在 -70℃直到使用 Applied Bio-systems API 4000 质谱仪 通过 LC-MS/MS 进一步分析。
     所有样品的 LC-MS/MS 分析按实施例 37 中对于大鼠血浆样品所述进行。
     表 14 ： 黑猩猩经口施用后的药代动力学结果
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。基于公开的己酮可可碱代谢报告将立体化学假 定为≥ 95％ (S)。
     b)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     表 14 显示显示黑猩猩中经口施用 435(S) 和己酮可可碱的结果。经口施用化合物 435(S) 和己酮可可碱的 1 ∶ 1 组合后， 化合物 435(S) 及其相应酮化合物 409 的平均 AUC0- ∞ 值都明显高于相应的未氘化对应物 (S)-M1 和己酮可可碱的平均 AUC0- ∞。化合物 435(S) 连 同化合物 409 的平均 AUC0- ∞明显高于 (S)-M1 连同己酮可可碱的平均 AUC0- ∞。另外， 不想要
     的氘化 M-5 代谢物 (M5a) 的平均 AUC0- ∞明显低于未氘化 M-5 的平均 AUC0- ∞。最后， 氘化化 合物的活性种类与 M5 代谢物的比率 {(435(S)+409) ∶ ( 氘化 M5)} 比未氘化种类的相应比 率 {((S)-M1+ 己酮可可碱 ) ∶ M5} 高约 8 倍。
     表 15 ： 黑猩猩静脉内施用后的药代动力学结果
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。基于公开的己酮可可碱代谢报告将立体化学假 定为≥ 95％ (S)。
     b)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     表 15 显示显示黑猩猩静脉内施用 435(S) 和己酮可可碱的结果。静脉内施用后的 结果显示有利的氘化化合物的差异， 尽管不如经口施用后观察到的差异显著。与施用己酮 可可碱相比， 由施用化合物 435(S) 产生的活性种类的量增加了 40 到 57％， 而所产生的 M5 代谢物的量减少 60 到 65%。静脉内施用化合物 435(S) 的黑猩猩中的活性种类与 M5 代谢物 的比率比施用己酮可可碱的黑猩猩中的比率高约 4 倍。
     上述结果表明本发明化合物比相应未氘化化合物提供明显更高的所需活性种类 的血浆暴露量。此外， 显示本发明化合物中的氘取代降低 M5 代谢物的水平， 这可能与肾损 害患者的不耐受有关。
     实施例 39 ： 经口给药后黑猩猩中的己酮可可碱和化合物 435(S) 的药代动力学研 究
     除了 (a) 所述化合物分别溶于水中而不是盐水中 ； (b) 两种化合物的混合物不 经过无菌过滤 ； 和 (c) 通过经口灌胃 65mg 单剂量的各化合物 ( 总剂量溶液为 13mL) 来实 现经口施用之外， 按照类似于实施例 38 的经口给药方案的方案测试己酮可可碱和化合物 435(S)。
     表 16 ： 黑猩猩经口施用后的药代动力学结果
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。基于公开的己酮可可碱代谢报告将立体化学假 定为≥ 95％ (S)。
     b)％差异＝ [( 氘化物质 )-( 非氘化物质 )](100)/( 非氘化物质 )
     表 16 显示黑猩猩经口施用 435(S) 和己酮可可碱的结果。类似于表 14 所示， 化合 物 435(S) 及其相应酮化合物 409 的平均 AUC0-12 值都明显高于相应的未氘化对应物 (S)-M1 和己酮可可碱， 其中 AUC0-12 是指 0 到 12 小时期间的曲线下面积。化合物 435(S) 连同化合 物 409 的平均 AUC0-12 明显高于 (S)-M1 连同己酮可可碱的平均 AUC0-12。
     氘化 M-5 代谢物 (M5a) 的平均 AUC0-12 明显低于未氘化 M-5 的平均 AUC0-12。
     实施例 40 ： 经口给药后黑猩猩中 435(S) 及其他代表性化合物的药代动力学研究。
     435(S) 和代表性化合物 121(S)、 137(S)、 421(S) 和 437(S) 分别以 [[10mg/mL]] 的 浓度溶解在热 (65℃ ) 水中。然后各代表性化合物进行如实施例 39 所述的相同方案。
     表 17i)-iv) ： 黑猩猩经口施用后的药代动力学结果
     i)
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。 ii)
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。
     iii)
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。 iv)
     a) 经由 LC-MS/MS 观察到的质量。
     表 17i)-iv) 显示黑猩猩分别经口施用 435(S) 和化合物 121(S)、 137(S)、 421(S) 和 437(S) 的 结 果。 对 于 各 黑 猩 猩， 各 121(S)、 137(S)、 421(S) 和 437(S) 的 AUC0-12 值 与
     435(S) 的 AUC0-12 值相当。类似地， 435(S) 和 409 的 AUC0-12 值的总和与各 121(S)、 137(S)、 421(S) 和 437(S) 及其相应的酮代谢物 107、 107、 407 和 407 的 AUC0-12 值的总和相当。
     最后， 也发现 435(S) 代谢物 M5a 的值和 121(S)、 137(S)、 421(S) 和 437(S) 的相应 代谢物 ( 即 M5、 M5、 M5b 和 M5b( 如下所示 )) 的值相当。
     无需进一步说明， 使用前面说明和说明性实施例， 据信本领域技术人员可以制备 并利用本发明化合物并实施所要求保护的方法。 应理解以上讨论和实施例仅代表某些优选 实施方式的详细说明。本领域技术人员理解在不离开本发明精神和范围的前提下， 可进行 各种修改并产生各种等价形式。