抑制 HCV 复制。此外， 直接抑制 HCV 蛋白质且妨碍病毒复制的低分子量化合物被视为控制 HCV 感染的有吸引力的策略。在病毒靶点之中， NS3/4A 蛋白酶 / 解旋酶和 NS5b RNA 依赖型 RNA 聚合酶被视为新药的最有前途的病毒靶点。参见， 例如 Ni， Z.J. 和 Wagman， A.S.Curr. Opin.Drug Discov.Devel.2004， 7， 446-459 ； Beaulieu， P.L. 和 Tsantrizos， Y.S.Curr. Opin.Investig.Drugs 2004， 5， 838-850 ； 及 Griffith 等， Ann.Rep.Med.Chem 39， 223-237， 2004。 除了靶向病毒基因及其转录和翻译产物之外， 抗病毒活性还可通过靶向病毒复制 所必需的宿主细胞蛋白质来获得。例如， Watashi 等， Molecular Cell， 19， 111-122， 2005 显 示病毒活性可如何通过抑制宿主细胞亲环素来获得。或者， 已经显示有效的 TLR7 激动剂降 低人类的血浆 HCV 水平。参见 Horsmans 等， Hepatology， 42， 724-731， 2005。
据称可用于治疗 HCV 感染的化合物例如公开在 WO 2008/064218(Leivers 等 )、 WO 2008/244380(Bachand 等 ) 和 US 2009/0068140(Bachand 等 ) 中。这些参考文献还公开了 制备所述化合物的方法、 包含所述化合物的组合物、 包含所述化合物及其他化合物的药物 组合物、 治疗 HCV 的方法、 所述化合物的盐、 给予路径及关于如何制备、 配制和使用所述化 合物的其他信息。
发明概述
简要地讲， 一方面， 本发明公开了式 I 化合物 ：
其中 R1 各自独立地为 H 或 C1-3 烷基 ； R2 各自独立地为 C1-3 烷基 ； X 各自独立地为 CRR、 O或S； n为2或3； 且 R 各自独立地为甲基、 氢或氘。 另一方面， 本发明公开了式 II 化合物 ：其中 R1 各自独立地为 H 或 C1-3 烷基 ； R2 各自独立地为 C1-3 烷基 ； X 各自独立地为 CRR、 O或S； n 各自独立地为 2 或 3 ； 且 R 各自独立地为甲基、 氢或氘。 另一方面， 本发明公开了式 III 化合物 ：其中 R1 各自独立地为 H 或 C1-3 烷基 ；
R2 各自独立地为 C1-3 烷基 ；
在存在 R3 基团的各碳上， 两个 R3 各自为 H 或所述 R3 基团连同与其连接的碳一起 形成 4、 5 或 6 元饱和螺环， 前提条件是在各饱和含氮环上存在不超过 1 个螺环 ； 3
由 R 基团形成的各饱和螺独立地为环烷基， 或可含有 1 或 2 个氧原子， 或1或2个 4 硫原子， 或 1 个 SO2， 或 1 个 NR ； 4
R 各自独立地为 H、 C(O)OC1-4 烷基、 C(O)C1-4 烷基、 C(O)NC1-4 烷基或 SO2C1-4 烷基 ；
各螺环可任选被氘、 氟或 1 或 2 个甲基取代。
另一方面， 本发明公开了式 I、 II 或 III 的化合物的药学上可接受的盐。
另一方面， 本发明公开了包含式 I、 II 或 III 的化合物或其药学上可接受的盐的药 物组合物。
另一方面， 本发明公开了治疗人类的病毒性感染、 例如 HCV 感染的方法， 其包括给 予本发明的药物组合物。
发明详述
在上述式 I、 II 和 III 中， 除了当 R1 为氢时以外， 与 R1 连接的碳为手性的。另外， 在两个所描绘的含氮 5 元饱和杂环中每一个中的所描绘叔碳也为手性的。因此， 所述化合 1 物含有至少两个手性碳原子， 且当 R 各自为 C1-3 烷基时， 所述化合物含有至少 4 个手性碳原 子。因此， 所述化合物可以各种对映异构混合物存在。
在本发明的一个实施方案中， 式 I、 II 或 III 的化合物或其药学上可接受的盐在对 映异构上富集， 其中所有在前一段落中提到的手性碳原子均处于 S 构型。一般来讲， 提到对 映异构富集化合物或盐意欲指出所指定的对映异构体将构成超过化合物或盐的所有对映 异构体总重量的 50％重量。具有四个以 S 构型的手性碳的化合物的实例如下所示 ：
在本发明的一个实施方案中， 各 X 相同。
在本发明的一个实施方案中， 所有 R 中的每一个为 H 或所有 R 都为氘 (D)。换句话 说， 在本发明的一个实施方案中， 螺环中的每一个 CRR 基团为 CH2 或螺环中的每个 CRR 基团 为 CD2。氘以微小量自然存在于氢化合物中。将取代基指定为氘或 D， 申请人的意思是氘的 天然同位素量已经增加， 使得与 H 相比， 特定取代基中超过一半为 D。
在本发明的一个实施方案中， 仅仅 2 个 R 为甲基。
在本发明的一个实施方案中， 在式 III 化合物中， 当 R3 基团在各饱和含氮环上形 成螺环时， 所述螺基各自与各饱和含氮环中的同一相关碳原子连接。
药学上可接受的盐可通过本领域熟知的方法制备。合适的盐包括例如在以 下文献中描述的那些盐： P.Heinrich Stahl， Camilleg.Wermuth( 编 )， handbook of Pharmaceutical( 药物手册 )， Salts properties， selection， and Use( 盐性质、 选择和使 用) ； 2002。 例如参见 WO 2009/020828(Kimet.Al)， 其描述某些抗病毒化合物的结晶盐的制 备。优选的盐包括盐酸盐， 例如二盐酸盐 ； 和硫酸盐。
本发明的化合物和盐可单独使用或与一种或多种其他治疗剂组合使用。一方面， 其他治疗剂选自治疗疗法的标准物， 诸如干扰素 / 利巴韦林、 小分子 HCV 复制抑制剂 ( 更 常称为直接作用病毒 )。合适的组合疗法例如描述在 WO 2008/064218(Leivers 等 )、 WO 2008/244380(Bachand 等 ) 和 US 2009/0068140(Bachand 等 ) 中。这些参考文献还含有关 于给药途径的大量公开内容及关于如何制备、 配制和使用所述化合物的其他信息。
实施例
该实验部分中使用的缩写表如下所列 ：中间体 1： {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4 ′ -( 氨 基 乙 酰 基 )-4- 联 苯 基 ]-1H- 咪 唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯
中间体 1 可如由以下反应方案所说明来制备。将 [2-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基甲酸 1， 1- 二甲基乙
酯 ( 中间体 11)(3.8g， 6.3mmol) 在 DCM(40mL) 中的溶液用 HCl(10mL， 4M， 在二烷中 ) 处理以得到作为浅黄色固体的 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪 唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 1)(3.5g， 定量 )。
中间体 2 ： (3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸
中间体 2 可如以下反应方案中所说明来制备。向 (3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧 杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸甲酯 ( 中间体 14)(360mg， 0.932mmol) 在 THF(4mL)、 叔丁 醇 (1mL) 和水 (1mL) 的混合溶剂中的搅拌溶液中加入 LiOH(44mg， 1.86mmol)。将所得混合 物在室温下搅拌 2 小时， 之后用 1N HCl 酸化到 pH 为约 3 且进一步用乙酸乙酯 (100mL) 稀 释。 将该溶液用盐水洗涤。 将有机层经 Na2SO4 干燥， 过滤并蒸发以得到作为固体的 (3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 ( 中间体 2)(315mg， 产率 ： 91％ )。ES LC-MS m/z ＝ 373(M+H)+。
中间体 4 ： 2- 氨基 -1-(4- 溴苯基 ) 乙酮
向 2- 溴 -1-(4- 溴苯基 ) 乙酮 (130g， 0.478mol) 在甲苯 (2500mL) 中的搅拌溶液 中加入六亚甲基四胺 (65.6g， 0.478mol)。将混合物在 40℃下搅拌 16 小时。将所得固体滤 出且用甲苯和乙醚洗涤以得到白色固体。向该白色固体在乙醇 (800mL) 中的搅拌悬浮液中 加入浓盐酸 (300mL)。将该混合物在周围温度下搅拌 20 小时。固体通过过滤收集且用乙 醇和水洗涤并真空干燥以得到作为白色固体的 2- 氨基 -1-(4- 溴苯基 ) 乙酮 (4)(95g， 产 1 率： 92％ )， 其不经纯化而用于下一步骤。 H NMR(300MHz， DMSO-d6)δppm 8.58(s， br， 2H)， 7.96(d， J ＝ 8.7Hz， 2H)， 7.81(d， J ＝ 8.7Hz， 2H)， 4.48-4.52(m， 2H).ES LC-MS m/z ＝ 214， + 216(M+H) 。
中间体 5 ： [2-(4- 溴苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基甲酸 1， 1- 二甲基乙酯
在 0 ℃ 下 向 2- 氨 基 -1-(4- 溴 苯 基 ) 乙 酮 盐 酸 盐 ( 中 间 体 4)(50g， 0.2mol)、 Boc2O(48g， 0.22mol) 在 DCM(1000mL) 中 的 混 合 物 中 逐 滴 加 入 TEA(68.8mL， 0.5mol)。 添 加之后， 将所得混合物在周围温度下搅拌过夜并过滤。将滤出物用 1N HCl(300mL×3) 和 盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 真空浓缩以得到灰白色固体， 将其用石油醚进一步洗涤以提供 [2-(4- 溴苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基甲酸 1， 1- 二甲基乙酯 ( 中间体 5)(40g， 产率 ： 64％ )。 1 H NMR(300MHz， CDCl3)δppm 7.83(d， J ＝ 8.7Hz， 2H)， 7.65(d， J ＝ 8.7Hz， 2H)， 5.48(s， br， + 1H)， 4.60-4.62(m， 2H)， 1.49(s， 9H).ES LC-MS m/z ＝ 336(M+Na) 。
中间体 6 ： {2- 氧代 -2-[4-(4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 ) 苯基 ] 乙基 } 氨基甲酸 1， 1- 二甲基乙酯
中间体 6 可如以下反应方案中所说明来制备。将 Pd(dppf)Cl2(2.6g， 3.18mmol) 加 到 [2-(4- 溴 苯 基 )-2- 氧 代 乙 基 ] 氨 基 甲 酸 1， 1- 二甲基乙酯 ( 中间体 5)(20g， 63.7mmol)、 硼酸双频哪醇酯 (19.4g， 76.4mmol) 和
KOAc(24.8g， 0.254mol) 在二烷 (300mL) 中的混合物中， 将烧瓶用氮气吹扫 (3×) 且在氮气氛下加热到 80℃历时 16 小时。 将反应混合物用己烷 (300mL) 稀释， 过滤， 浓缩且残余物通 过硅胶色谱 ( 石油醚 / 乙酸乙酯＝ 5/1) 纯化以得到作为白色固体的 {2- 氧代 -2-[4-(4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 ) 苯基 ] 乙基 } 氨基甲酸 1， 1- 二甲基乙酯 1 ( 中间体 6)(13.3g， 产率 ： 58％ )。 H NMR(300MHz， CDCl3)δppm 7.90-7.93(m， 4H)， 5.55(s， + br， 1H)， 4.68(s， 2H)， 1.48(s， 9H)， 1.35(s， 12H).ES LC-MS m/z ＝ 384(M+Na) 。
中间体 7 ： (2S)-2-({[2-(4- 溴苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-1- 吡咯烷甲酸 1， 1- 二甲基乙酯
将 1-{[(1， 1- 二甲基乙基 ) 氧基 ] 羰基 }-L- 脯氨酸 (50g， 0.233mol)、 HATU(106g， 0.279mol) 和 DIEA(150mL) 在 DMF(400mL) 中的混合物在周围温度下搅拌 10 分钟。加入在 DMF(500mL) 中的 2- 氨基 -1-(4- 溴苯基 ) 乙酮盐酸盐 ( 中间体 4)(70g， 0.279mol) 且将所 得混合物搅拌过夜， 之后用 EtOAc(4L) 稀释。将溶液用 1N HCl(500mL×4) 和盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 浓缩。 使粗产物从石油醚 / 乙酸乙酯 (2/1) 的混合物中重结晶以得到作为黄色 固体的 (2S)-2-({[2-(4- 溴苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-1- 吡咯烷甲酸 1， 1- 二甲基 1 乙酯 ( 中间体 7)(58.4g， 产率 ： 61％ )。 H NMR(300MHz， DMSO)δppm 8.22(s， 1H)， 7.93(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 7.77(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 4.46-4.51(m， 2H)， 4.15-4.21(m， 1H)， 3.28-3.40(m， 2H)， 1.78-1.90(m， 4H)， 1.29-1.41(m， 9H).ES LC-MS m/z ＝ 411.1， 4113.1(M+H)+。
中间体 8 ： (2S)-2-[4-(4- 溴苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷甲酸 1， 1- 二甲基 乙酯
在密封反应器中将 (2S)-2-({[2-(4- 溴苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-1- 吡 咯 烷 甲 酸 1， 1- 二 甲 基 乙 酯 (7)(40.0g， 97.2mmol) 和 NH4OAc(60g， 0.778mol) 在 二 甲 苯 (400mL) 中的混合物加热到 150 ℃历时 5 小时。将反应混合物浓缩， 且将残余物溶解于 EtOAc(500mL) 中并用 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤。有机相经 Na2SO4 干燥， 浓缩至干。粗产物 通过硅胶色谱 ( 石油醚 / 乙酸乙酯＝ 1/1) 纯化以得到作为褐色固体的 (2S)-2-[4-(4- 溴 苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷甲酸 1， 1- 二甲基乙酯 ( 中间体 8)(34g， 产率 ： 89％ )。 1 H NMR(300MHz， CDCl3)δppm 7.52(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 7.46(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 7.20(s， 1H)， 5.58-5.71(m， 1H)， 3.38-3.42(m， 1H)， 2.80-2.87(m， 2H)， 2.03-2.06(m， 2H)， 1.88-2.00(m， + 2H)， 1.49(s， 9H).ES LC-MS m/z ＝ 392， 394(M+H) 。
中间体 9 ： 4-(4- 溴苯基 )-2-[(2S)-2- 吡咯烷基 ]-1H- 味唑
将 (2S)-2-[4-(4- 溴苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷甲酸 1， 1- 二甲基乙酯 ( 中 烷 (200mL) 中的饱和 HCl 处理， 且在周围温度下搅拌过间体 8)(72.4g， 185mmol) 用在二夜。 将所得固体过滤并用石油醚洗涤以得到作为黄色固体的 4-(4- 溴苯基 )-2-[(2S)-2- 吡 咯烷基 ]-1H- 咪唑 ( 中间体 9)(60g， 产率 ： 90％ )。1H NMR(300MHz， DMSO-d6)δppm 8.10(s， 2H)， 7.88(d， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 7.70(d， J ＝ 6.6Hz， 2H)， 7.49(s， 1H)， 7.32(s， 1H)， 7.16(s， 1H)， 4.50-4.52(m， 1H)， 3.15-3.40(m， 2H)， 1.88-2.88(m， 4H).ES LC-MS m/z ＝ 291.1， + 293.1(M+H) 。中间体 10 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4- 溴苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯将 在 DCM(1000mL) 中 的 N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酸 (43.1g， 0.246mol) 和 HATU(93.5g， 0.246mol) 搅拌 10 分钟。引入 4-(4- 溴苯基 )-2-[(2S)-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪 唑 ( 中间体 9)(60g， 0.205mol)， 接着逐滴引入 DIEA(82.6mL， 0.308mol)。将混合物在周 围温度下搅拌过夜， 之后用 DCM(1000mL) 稀释且用 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤。有机相经 Na2SO4 干燥， 浓缩至干。粗产物通过硅胶色谱 ( 石油醚 / 乙酸乙酯＝ 1/1) 纯化以得到作 为黄色固体的 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4- 溴苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 10)(62g， 产率 ： 67％ )。1H NMR(300MHz， CDCl3) δ： 7.43-7.51(m， 4H)， 7.17(s， 1H)， 5.53-5.57(m， 1H)， 5.20-5.22(m， 1H)， 5.29-5.33(m， 1H)， 3..64-3.71(m， 5H)， 2.99-3.03(m， 1H)， 1.88-2.31(m， 4H)， 0.88-0.92(m， 6H).ES LC-MS + m/z ＝ 449， 451(M+H) 。
中间体 11 ： [2-(4′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁 酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基甲酸 1， 1- 二甲基 乙酯
向 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4- 溴 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 10)(62g， 0.138mol)、 {2- 氧代 -2-[4-(4， 4， 5， 5- 四甲基 -1， 3， 2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 ) 苯基 ] 乙基 } 氨基甲酸 1， 1- 二甲基乙酯 ( 中 间 体 6)(47.7g， 0.152mol) 和 NaHCO3(34.2g， 0.414mol) 在 混 合 DME(800mL) 和 水 (260mL) 中的混合物中加入 Pd(dppf)Cl2(5.63g， 6.9mmol)。将烧瓶用氮气吹扫 (3×)， 之后加热到 80℃历时 16 小时。将反应冷却到室温且过滤。将滤液用 EtOAc(1000mL) 稀释， 且将溶液用 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤， 经 Na2SO4 干燥， 浓缩。残余物通过硅胶色谱 ( 石油醚 / 乙酸乙酯 ＝ 1/2) 纯化以得到作为黄色固体的 [2-(4′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基甲 酸 1， 1- 二甲基乙酯 ( 中间体 11)(45g， 产率 ： 54％ )。1H NMR(300MHz， CDCl3)δppm 8.03(d， J ＝ 8.4Hz， 2H)， 7.88-760(m， 6H)， 5.58(S， br， 1H)， 5.42(m， 1H)， 5.28-5.30(m， 1H)， 4.71(s， 2H)， 4.32-4.35(m， 1H)， 3.70-3.84(m， 5H)， 2.96(s， br， 1H)， 1.96-2.11(m， 4H)， 1.49(s， 9H)， + 0.88-0.92(m， 6H).ES LC-MS m/z ＝ 604， (M+H) 。
中间体 12 ： N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -(4R)-4- 羟基 -L- 脯氨酸甲酯
向 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酸 (2.89g， 16.52mmol) 在 DCM 中的搅拌溶液中加 入 TEA(3.51g， 34.7mmol) 和 HATU(3g， 16.52mmol)。在搅拌约 10 分钟之后， 引入 (4R)-4- 羟 基 -L- 脯氨酸甲酯盐酸盐 (3g， 16.52mmol)。 将所得混合物在室温下额外搅拌 4 小时， 之后用 NaHCO3(ss) 猝灭。将各层分离且将水层用 DCM(2×) 萃取。将合并的有机相经 MgSO4 干燥， 过滤并浓缩。粗产物通过柱色谱 ( 硅胶， 在己烷中的 0-70％乙酸乙酯 ) 纯化以得到 N-[( 甲 氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -(4R)-4- 羟基 -L- 脯氨酸甲酯 ( 中间体 12)(3.5g， 产率 ： 70％ )。 1 H NMR(400MHz，氯 仿 -d)δppm 5.34-5.54(m， 1H)4.69(t， J ＝ 8.41Hz， 1H)4.55(br.s.， 1H)4.21(s， 1H)3.92-4.08(m， 1H)3.74(s， 4H)3.66(s， 3H)2.29-2.50(m， 1H)1.92-2.19(m， 2H)0.86-1.13(m， 6H).ES LC-MS m/z ＝ 303.5(M+H)W。
中间体 13 ： N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -4- 氧代 -L- 脯氨酸甲酯
在室温下向 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -(4R)-4- 羟基 -L- 脯氨酸甲酯 ( 中 间体 12)(3.5g， 11.9mmol) 在 DCM(80mL) 中的搅拌溶液中加入 Dess-Martin(10g)。将所得 混合物额外搅拌 4 小时， 之后用 5％硫代硫酸钠 (350mL) 猝灭且随后用饱和 NaHCO3(200mL) 猝灭。继续搅拌 10 分钟且将混合物用 DCM(2×300mL) 萃取。将有机层经 MgSO4 干燥， 过 滤并浓缩。粗产物通过柱色谱 ( 硅胶， 在己烷中的 0-70％乙酸乙酯 ) 纯化以得到 N-[( 甲 氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -4- 氧代 -L- 脯氨酸甲酯 ( 中间体 13)(701mg， 产率 ： 20 ％ )。 1 H NMR(400MHz，氯 仿 -d)δppm 5.25(d， J ＝ 9.18Hz， 1H)5.07(dd， J ＝ 10.74， 2.93Hz， 1H)4.36(d， J ＝ 17.77Hz， 1H)3.97-4.23(m， 2H)3.69-3.77(m， 3H)3.63(s， 3H)2.92(dd， J＝ 18.94， 10.74Hz， 1H)2.62(dd， J ＝ 18.94， 2.73Hz， 1H)2.01(t， J ＝ 3.32Hz， 1H)0.86-1.16(m， 6H)。
中间体 14 ： (3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸甲酯
将 N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 -4- 氧 代 -L- 脯 氨 酸 甲 酯 ( 中 间 体 13) (650mg， 2.164mmol)、 (2S， 4S)-2， 4- 戊 二 醇 (902mg， 8.66mmol) 和 TsOH(82mg， 0.43mmol) 在甲苯 (40mL) 中在分离器 (Dean-Stark Trap) 存在下加热到回流过夜。在冷却到室温且 用乙酸乙酯稀释之后， 将所得溶液用 NaHCO3( 饱和溶液 ) 和盐水洗涤。将有机层经 MgSO4 干燥， 过滤并蒸发。粗产物通过柱色谱 ( 硅胶， 在己烷中的 0-50％乙酸乙酯 ) 纯化以得到 作为油的 (3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧 1 杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸甲酯 ( 中间体 14)(366mg， 产率 ： 44％ )。 H NMR(400MHz， 氯 仿 -d)δppm.38-5.51(m， 1H)4.54(t， J ＝ 8.03Hz， 1H)4.25-4.36(m， 1H)3.91-4.05(m， 2H)3.85(d， J ＝ 10.04Hz， 1H)3.54-3.77(m， 6H)2.46-2.53(m， 1H)2.12(dd， J ＝ 12.92， 7.65Hz， 1H)2.00-2.06(m， 1H)1.54-1.75(m， 3H)1.10-1.25(m， 6H)1.03(d， J ＝ 6.78Hz， + 3H)0.84-0.96(m， 3H).ES LC-MS m/z ＝ 409.3(M+Na) 。
中间体 15 和 17 使用与中间体 2 的制备中概述的程序类似的程序制备。
中间体 15 ： (3S， 7R， 9R)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸
H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.53(br.s.， 1H)， 7.49(d， 1H)， 4.34(d， 1H)， 4.24(t， 1H)， 4.06(br.m， 2H)， 3.93(t， 1H)， 3.37(m， 4H)， 2.35(m， 1H)， 2.09-1.86(br.m， 2H)， 1.59(m， 2H)， 1.17(m， 6H)， 0.91(m， 6H)。
中间体 16 ： (8S)-7-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸甲酯
1
ES LC-MS m/z ＝ 345.3(M+H)+。中间体 17 ： (8S)-7-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸H NMR(400MHz ，DMSO-d 6 ) δ ppm 12.56(br.s. ， 1H)7.40(d ，J ＝ 8.39Hz ， 1H)4.33(dd， J ＝ 8.78， 7.02Hz， 1H)3.81-4.10(m， 5H)3.41-3.66(m， 5H)2.28-2.43(m， 1H)1.94-2.11(m， 1H)1.74-1.94(m， 1H)0.67-1.05(m， 6H).ES LC-MS m/z ＝ 331.6(M+H)+。
实 施 例 1： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S， 7S， 9S)-7， 9- 二 甲 基 -2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 味唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 味唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲 基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
1向 ((3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 ( 中间体 2)(96mg， 0.258mmol) 在 DMF(2mL) 中的搅 拌溶液中加入 TEA(78mg， 0.773mmol) 和 HATU(108mg， 0.284mmol)。在搅拌约 3 分钟之后， 引入 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯 烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 ( 中间体 1)(149mg， 0.258mmol)。在 将反应物在室温下额外搅拌 2 小时之后， 将混合物直接装载到 RP HPLC 中， 用 5-80％乙腈 / 水 (0.2％ NH3H2O( 浓 )) 洗脱， 以得到作为固体的 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧 杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯 1 烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 3)(135mg， 产率 ： 61％ )。 HNMR(400MHz，
氯 仿 -d)δppm 10.40-11.01(m， 1H)7.32-8.30(m， 10H)5.28(br.s.， 2H)4.53-4.96(m， 4H)4.17-4.53(m， 1H)3.40-4.17(m， 11H)2.83-3.22(m， 1H)2.26-2.74(m， 3H)1.54-2.26(m， + 8H)0.47-1.43(m， 18H).ES LC-MS m/z ＝ 858.6(M+H) 。
向 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S， 7S， 9S)-7， 9- 二 甲 基 -2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 )-2- 甲 基 丙 基 ] 氨 基 甲 酸 甲 酯 ( 中 间 体 3)(135mg， 0.157mmol) 在 二 烷 (3mL) 中 的 搅 拌 溶 液 中 加 入 乙 酸 铵 (121mg， 1.57mmol)。在密封管中将反应混合物加热到 110 ℃过夜。冷却到室温， 过滤 出过量的乙酸铵。将滤液蒸发且残余物通过柱色谱 ( 硅胶， 在乙酸乙酯中的 0-15 ％甲 醇 ) 纯 化 以 得 到 作 为 固 体 的 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S， 7S， 9S)-7， 9- 二 甲 基 -2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-6， 10- 二 氧 杂 -2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 1)(81mg， 产率 ： 58 ％ )。1HNMR(400MHz， 氯 仿 -d)δppm 10.23-11.01(m， 1H)7.31-8.08(m， 8H)7.23(d， J ＝ 8.03Hz， 2H)5.13-5.89(m， 4H)3.34-4.69(m， 13H)2.84-3.31(m， 2H)2.63-2.84(m， 1H)2.29-2.53(m， 1H)1.85-2.29(m， + 835.4456 ； 4H)1.56-1.85(m， 4H)1.16-1.47(m， 6H)0.63-1.16(m， 12H).HRMS ： (M+H) 计算值 ： 实测值 ： 835.4458。
实 施 例 2： [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-7-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
根据实施例 1 中概述的类似的两步合成程序， [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-7-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二氧杂 -7- 氮 杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯由 (8S)-7-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-1， 4- 二氧 杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸 ( 中间体 17) 和 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙 酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二 盐酸盐 ( 中间体 1) 得到。1H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 10.00-11.36(m， 2H)7.56(br.s.，
10H)7.02-7.34(m， 2H)5.05-5.89(m， 4H)3.76-4.65(m， 6H)3.53-3.83(m， 6H)2.77-3.54(m， + 2H)2.26-2.70(m， 2H)1.45-2.26(m， 6H)0.61-1.25(m， 12H).HRMS ： (M+H) 计算值 ： 797.3986 ； 实测值 ： 797.3981。
实施例 3 ： (4， 4 ′ - 联 苯 二 基 双 {1H- 味 唑 -4， 2- 二 基 [(3S， 7S， 9S)-7， 9- 二 甲 基 -6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3， 2- 二基 ][(2S)-3- 甲基 -1- 氧代 -1， 2- 丁二 基 ]}) 双氨基甲酸二甲酯在 N2 气氛下， 向 1， 1′ -(4， 4′ - 联苯二基 ) 双 (2- 溴乙酮 )(113mg， 0.285mmol， 根据在 WO2009020825 中提供的程序制备 ) 在乙腈 (5mL) 中的搅拌悬浮液中加入 (3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 ( 中间体 2)(212mg， 0.571mg)， 接着加入 TEA(57.5mg， 0.571mmol)。将混合物 在 50℃下搅拌， 直至悬浮液变澄清。 在将其冷却到室温之后， 将反应混合物用乙酸乙酯稀释 并用盐水洗涤。 将有机相经 MgSO4 干燥， 过滤并蒸发以得到 4， 4′ - 联苯二基双 -2- 氧代 -2， 1- 乙二基 (3S， 7S， 9S， 3′ S， 7′ S， 9′ S) 双 (7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬 氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸酯 )( 中间体 18)(280mg， 定量 )。ES + LC-MS m/z ＝ 979.6(M+H) 。
向在密封管中的 4， 4 ′ - 联苯二基双 -2- 氧代 -2， 1- 乙二基 (3S， 7S， 9S， 3 ′ S， 7′ S， 9′ S) 双 (7， 9- 二甲基 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮
杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸酯 )( 中间体 18)(280mg， 0.286mmol) 在二烷 (5mL) 中的搅拌溶液中加入乙酸铵 (441mg， 5.72mmol)。将反应混合物加热到 110℃过夜。冷却到室温， 过滤 出过量的乙酸铵。将滤液蒸发且残余物通过管柱 ( 硅胶， 在乙酸乙酯中的 0-15％甲醇 ) 纯 化以得到作为固体的 (4， 4′ - 联苯二基双 {1H- 咪唑 -4， 2- 二基 [(3S， 7S， 9S)-7， 9- 二甲 基 -6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3， 2- 二基 ][(2S)-3- 甲基 -1- 氧代 -1， 2- 丁二 1 基 ]}) 双氨基甲酸二甲酯 ( 实施例 3)(112mg， 产率 ： 40％ )。 H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 10.30-10.99(m， 2H)7.68-8.00(m， 2H)7.61(d， J ＝ 7.53Hz， 6H)7.26-7.35(m， 4H)5.59(d， J ＝ 8.53Hz， 1H)5.23-5.39(m， 1H)4.44(dd， J ＝ 8.41， 5.14Hz， 2H)4.02-4.23(m， 4H)3.97(d， J ＝ 10.29Hz， 2H)3.72(s， 6H)3.62(d， J ＝ 10.29Hz， 2H)3.04-3.32(m， 2H)2.70(d， J ＝ 13.05Hz ， 2H)1.93(br.s. ， 2H)1.56-1.82(m ， 4H)1.13-1.46(m ， 12H)0.60-1.02(m ， 12H). + HRMS ： (M+H) 计算值 ： 939.4980 ； 实测值 ： 939.4981。
实施例 4 ： (4， 4′ - 联苯二基双 {1H- 咪唑 -4， 2- 二基 (8S)-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂 螺 [4.4] 壬烷 -8， 7- 二基 [(2S)-3- 甲基 -1- 氧代 -1， 2- 丁二基 ]}) 双氨基甲酸二甲酯
(4， 4 ′ - 联苯二基双 {1H- 咪唑 -4， 2- 二基 (8S)-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8， 7- 二基 [(2S)-3- 甲基 -1- 氧代 -1， 2- 丁二基 ]}) 双氨基甲酸二甲酯使用类似于 在实施例 3 中概述的两步程序的方法由 1， 1 ′ -(4， 4 ′ - 联苯二基 ) 双 (2- 溴乙酮 ) 和 (8S)-7-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲 1 酸 ( 中间体 17) 得到。 H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 11.10-11.23(m， 1H)10.10-11.63(m， 2H)7.40-8.15(m， 8H)7.27-7.40(m， 2H)5.23-5.88(m， 2H)4.31(dd， J ＝ 8.68， 6.54Hz， 2H)3.83-4.21(m， 10H)3.57-3.83(m， 6H)3.05-3.46(m， 3H)2.47(dd， J ＝ 13.46， 8.59Hz， + 2H)1.51-2.20(m， 2H)1.08(d， J ＝ 6.83Hz， 2H)0.60-0.97(m， 12H).HRMS ： (M+H) 计 算 值 ： 855.4041 ； 实测值 ： 855.4039。
实 施 例 5： ((1S)-1- 甲 基 -2-{(3S)-3-[4-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 }-2- 氧代乙基 ) 氨基甲 酸甲酯
向 N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 丙 氨 酸 (22.5mg， 0.153mmol， 根 据 在 WO2003055474 中 提 供 的 程 序 制 备 ) 在 DMF(2mL) 中 的 搅 拌 溶 液 中 加 入 TEA(15.5mg， 0.153mmol) 和 HATU(58.2mg， 0.153mmol)。在搅拌约 3 分钟之后， 引入 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[ (3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 )-2- 甲 基 丙 基 ] 氨 基 甲 酸 甲 酯 ( 实 施 例 19)(100mg， 0.153mmol)。在于室温下额外搅拌 2 小时之后， 将反应混合物直接装载到 RP HPLC 中， 用 5-80 ％乙腈 / 水 (0.2 ％ NH3H2O( 浓 )) 洗脱， 以得到作为固体的 ((1S)-1- 甲基 -2-{(3S)
3-[4-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯 烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 }-2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 5)(36mg， 产率 ： 29％ )。1H NMR(400MHz， 氯 仿 -d)δppm 10.04-11.11(m， 2H)7.37-8.02(m， 8H)7.18-7.36(m， 2H)5.60(br.s.， 2H)5.17-5.40(m， 2H)3.17-4.73(m， 14H)2.79-3.19(m， 1H)2.45-2.81(m， 1H)2.29-2.45(m， + 1H)1.49-2.29(m， 8H)1.22-1.47(m， 3H)0.73-1.16(m， 6H).HRMS ： (M+H) 计 算 值 ： 783.3830 ； 实测值 ： 783.3832。中间体 19 ： 制备 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂 螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
中间体 19 可如以下反应方案中所说明来制备。
中 间 体 21 ： (3S)-3-({[2-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸苯基甲酯
向 (3S)-2-{[( 苯 基 甲 基 ) 氧 基 ] 羰 基 }-6， 10- 二 氧 杂 -2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸 ( 中间体 20)(878mg， 2.73mmol) 在 DMF(10mL) 中的搅拌溶液中加入 TEA(829mg， 8.20mmol) 和 HATU(1039mg， 2.73mmol)。在搅拌约 3 分钟之后， 加入 [(1S)-1-({(2S)-2[4-(4 ′ -{2-[(3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联 苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 1) (1575mg， 2.73mmol)。将所得混合物在室温下额外搅拌 2 小时， 之后用 NaHCO3( 饱和溶液 ) 猝灭并用 EtOAc(3×) 萃取。将合并的有机层经 MgSO4 干燥， 过滤并蒸发。粗产物通过柱 色谱 ( 硅胶， 在 DCM 中的 0-6％ MeOH(2M 氨 )) 纯化以得到作为固体的 (3S)-3-({[2-(4′ {2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -2- 甲酸苯基甲酯 ( 中间体 21)(1.76g， 产率 ： 80％ )。ES LC-MS m/z ＝ 807.5(M+H)+。
中 间 体 22 ： (3S)-3-(4-{4 ′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮 杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸苯基甲酯
向在密封管中的 (3S)-3-({[2-(4′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰 基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸苯基甲酯 ( 中间体 21)(1.76g， 2.18mmol)
在二烷 (5mL) 中的搅拌溶液中加入乙酸铵 (1.68g， 21.8mmol)。将反应混合物加热到110℃过夜。 冷却到室温， 过滤出过量的乙酸铵。 将滤液蒸发且残余物通过管柱 ( 硅胶， 在乙 酸乙酯中的 0-15％甲醇 ) 纯化以得到作为泡沫的 (3S)-3-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2- 吡 咯 烷 基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联 苯 基 }-1H- 咪 唑 -2- 基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸苯基甲酯 ( 中间体 22)(1.44g， 产 + 率： 84％ )。ES LC-MSm/z ＝ 788.5(M+H) 。
中 间 体 19 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S)-6， 10- 二 氧 杂 -2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
使 (3S)-3-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷 基 )-1H- 咪唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -2- 甲酸苯基甲酯 ( 中间体 22)(1.44g， 1.83mmol) 在乙醇 (100mL) 中在气囊下在 Pd/C 的催化下氢化 20 小时以得到 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮 杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 19)。ES LC-MS m/z ＝ 654.4(M+H)+。
中间体 20 ： (3S)-2-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸
中间体 20 可如以下反应方案中所说明来制备。
中间体 23 ： (2S)-4- 氧代 -1， 2- 吡咯烷二甲酸 2- 甲酯 1-( 苯基甲基 ) 酯在 -78℃下， 向乙二酰氯 (5.97g， 47mmol) 在 DCM(200mL) 中的搅拌溶液中缓慢加 入 DMSO(4.8g， 61.5mmol)。在 10 分钟搅拌之后， 将 (2S， 4R)-4- 羟基 -1， 2- 吡咯烷二甲酸 2- 甲酯 1-( 苯基甲基 ) 酯在 DCM(30mL) 中的溶液引入反应烧瓶中。继续搅拌 62 分钟， 之 后加入三乙胺 (10.98g， 108mmol)。随后除去冷却浴且让反应混合物缓慢升温至 0℃并用 饱和 NH4Cl 溶液猝灭。将各层分离且将水层用 DCM(2×) 萃取。将合并的有机层经 MgSO4 干燥， 过滤并蒸发。粗产物通过柱色谱 ( 硅胶， 在己烷中的 0-50％乙酸乙酯 ) 纯化以得到 (2S)-4- 氧代 -1， 2- 吡咯烷二甲酸 2- 甲酯 1-( 苯基甲基 ) 酯 ( 中间体 23)(6.3g， 产率 ： 1 63 ％ )。 H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 7.29-7.56(m， 5H)5.08-5.37(m， 2H)4.80-5.02(m， 1H)3.89-4.08(m， 2H)3.53-3.88(m， 3H)2.95(dd， J ＝ 18.82， 10.79Hz， 1H)2.63(dd， 1H)。
中间体 24 ： (3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 甲酯 2-( 苯 基甲基 ) 酯
遵循中间体 14 的制备中概述的类似程序， (3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -2， 3- 二甲酸 3- 甲酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 ( 中间体 24)(1.02g， 产率 ： 84％ ) 由 (2S)-4- 氧 代 -1， 2- 吡 咯 烷 二 甲 酸 2- 甲 酯 1-( 苯 基 甲 基 ) 酯 (1.0g， 3.61mmol) 和 1， 3- 丙 二 醇 1 (0.55g， 7.21mmol) 制备。 H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 7.05-7.61(m， 5H)4.91-5.25(m， 2H)4.29-4.68(m， 1H)3.75-4.07(m， 5H)3.38-3.75(m， 4H)2.25-2.67(m， 2H)1.51-2.00(m， + 1H).ES LC-MS m/z ＝ 336.6(M+H) 。
中间体 20 ： (3S)-2-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5]
癸烷 -3- 甲酸
遵循中间体 2 的制备中概述的类似程序， (3S)-2-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 ( 中间体 20)(878mg， 产率 ： 90％ ) 由 (3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 甲酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 ( 中间体 24) (1.02g， 3.04mmol) 和 LiOH(80mg， 3.35mmol) 得到。ES LC-MS m/z ＝ 322.2(M+H)+。
中间体 26、 27、 28、 29、 31、 33 和 34 使用与在中间体 20 的制备中所述类似的程序来 制备 ：
中间体 25 ： (3S)-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 甲酯 2-( 苯 基甲基 ) 酯 -d2
H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 7.27-7.46(m， 5H)4.97-5.27(m， 2H)4.29-4.64(m， 1H)3.72-4.02(m， 6H)3.49-3.72(m， 3H)2.19-2.67(m， 2H).ES LC-MS m/z ＝ 338.2(M+H)+。
中间体 26 ： (3S)-2-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 -d2
1ES LC-MS m/z ＝ 324.2(M+H)+。
中间体 27 ： (3S)-8， 8- 二甲基 -2-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮 杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸
中间体 28 ： (3S)-2-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 -d6
中间体 29 ： (8S)-7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸 -d4
中间体 30 ： (2R， 3R， 8S)-2， 3- 二甲基 -1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二 甲酸 8- 甲酯 7-( 苯基甲基 ) 酯H NMR(400MHz ，DMSO-d6) δ .ppm 1.12-1.24(m ， 6H) ， 2.00-2.18(m ， 1H) ， 2.35-2.46(m， 1H)， 3.32(s， 1H)， 3.35-3.44(m， 1H)， 3.56(s， 2H)， 3.64(s， 3H)， 4.28-4.37(m， 1H)， 4.38-4.45(m， 0H)， 5.09(s， 2H)， 7.24-7.41(m， 5H) +
LC-MS(ESI) ： m/z ＝ 350.1(M+H) ；
中间体 31 ： (2R， 3R， 8S)-2， 3- 二甲基 -7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二氧 杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸
1LC-MS(ESI) ： m/z ＝ 336.2(M+H)+ ；
中间体 32 ： (2S， 3S， 8S)-2， 3- 二甲基 -1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二 甲酸 8- 甲酯 7-( 苯基甲基 ) 酯
HNMR(400MHz， 氯 仿 -d)δppm 1.18-1.31(m， 6H)， 2.23(dd， J ＝ 13.1， 5.9Hz， 1H)， 2.39(dt， J ＝ 13.1， 8.0Hz， 1H)， 3.49-3.66(m， 6H)， 3.76(s， 1H)， 4.39-4.56(m， 1H)， 4.98-5.26(m， 2H)， 7.36(s， 5H)
LC-MS(ESI) ： m/z ＝ 350.1(M+H)+ ；
中间体 33 ： (2S， 3S， 8S)-2， 3- 二甲基 -7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二氧 杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸
1LC-MS(ESI) ： m/z ＝ 336.2(M+H)+ ；
中间体 34 ： (5′ S)-1′ -{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 } 四氢螺 [ 呋喃并 [3， 4-d] [1， 3] 二氧杂环戊烯 -2， 3′ - 吡咯烷 ]-5′ - 甲酸
LC-MS(ESI) ： m/z ＝ 350.2(M+H)+ ；
实 施 例 6： [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S)-2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
遵循在实施例 5 中概述的类似程序， [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(3 S)-2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 (47mg， 产率 ： 53 ％ ) 由 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S)-6， 10- 二氧 杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 19)(68mg， 0.104mmol)、 N-[( 甲氧 1 基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酸 (18.2mg， 0.104) 和 HATU(40mg， 0.104mmol) 制备。 HNMR(400MHz， 氯
仿 -d)δppm 10.20-11.06(m， 2H)7.35-8.02(m， 8H)7.22(d， J ＝ 7.78Hz， 2H)4.97-5.89(m， 4H)3.22-4.58(m， 15H)2.83-3.20(m， 1H)2.58-2.83(m， 1H)2.29-2.58(m， 1H)1.57-2.31(m， + 8H)0.64-1.22(m， 12H).HRMS ： (M+H) 计算值 ： 811.4143 ； 实测值 ： 811.4142。
实施例 7-11 使用对于实施例 5 的合成所述的类似合成顺序来制备。
实施例 7 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S)-8， 8- 二 甲 基 -2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸 甲酯
H NMR(400MHz ，DMSO-d 6 ) δ (ppm)11.84(br.s. ， 1H) ， 11.80(br.s ， 1H) ， 7.90-7.60(br.m， 9H)， 7.52(s， 1H)， 7.36-7.25(br.m， 2H)， 5.09(br.m， 1H)， 4.98(m， 1H)， 4.49(br.m， 1H)， 4.14-4.02(br.m， 2H)， 3.81(br， 2H)， 3.73-3.40(br.m， 11H)， 2.65(m， 1H)， 2.43-2.09(br.m， 3H)， 2.07-1.81(br.m， 4H)， 1.05-0.75(br.m， 18H) +
ES LC-MS m/z ＝ 839(M+H) 。纯度 (LC/MS)96％。
实 施 例 8： [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(3S)-2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6， 10- 二氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 -d6
1H NMR(400MHz， CD3OD)δppm 7.62(m， 8H)， 7.29(m， 2H)， 5.17(m， 2H)， 4.20(m， 2H)， 4.00(m， 2H)， 3.88(m， 2H)， 3.65(s， 6H)， 2.65-2.03(m， 8H)， 0.90(m， 12H). +
LC-MS C43H48N8O8D6(M+H) 计算值 ： 817， 实测值 ： 817。 +
HRMS C43H48N8O8D6(M+H) 计算值 ： 817.4519， 实测值 ： 817.4517。
纯度 (LC/MS)95％。
实 施 例 9： [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-7-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 -d4
1H NMR(400MHz， CD3OD)δppm 7.60(m， 8H)， 7.28(m， 2H)， 5.17(m， 2H)， 4.23(m， 1H)， 4.15(m， 1H)， 4.06(m， 1H)， 3.97(m， 1H)， 3.88(m， 2H)， 3.64(s， 6H)， 2.50-2.00(m， 8H)， 0.90(m， 12H)。
LC-MS ： C42H48N8O8D4(M+H)+ 计算值 ： 801， 实测值 ： 801。 +
HRMS ： C42H48N8O8D4(M+H) 计算值 ： 801.4237， 实测值 ： 801.4238。
纯度 (LC/MS)91％。
实 施 例 10 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(2R， 3R， 8S)-2， 3- 二 甲 基 -7-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -5- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲
1基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
1H NMR(400MHz ， DMSSO-d6) δ ppm 0.85(d ， J ＝ 6.4Hz ， 12H) ， 1.24(dd ， J ＝11.9， 5.8Hz， 6H)， 1.87-2.06(m， 4H)， 2.08-2.21(m， 2H)， 2.34-2.43(m， 1H)， 3.54(s， 6H)， 3.59-3.68(m， 2H)， 3.69-3.75(m， 2H)， 3.81(br.s.， 2H)， 3.97-4.14(m， 3H)， 5.00-5.17(m， 2H)， 7.25-7.33(m， 2H)， 7.49-7.54(m， 2H)， 7.62-7.71(m， 4H)， 7.78(d， J ＝ 7.7Hz， 4H)， + + 11.79(br.s.， 2H) ； LC-MS(ESI) ： m/z ＝ 825.5(M+H) ； HRMS ： (M+H) 计算值 ： 825.4299 ； 实测 值： 825.4302。纯度 ： 92％。
实 施 例 11 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(2S， 3S， 8S)-2， 3- 二 甲 基 -7-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二氧杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -5- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲 基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
H NMR(400MHz ，DMSO-d6) δ .ppm 0.70-0.96(m ， 7H) ， 1.12-1.35(m ， 4H) ， 1.85-2.04(m， 3H)， 2.04-2.25(m， 2H)， 2.31-2.47(m， 1H)， 3.33(s， 7H)， 3.45-3.61(m， 8H)， 3.63-3.89(m， 7H)， 3.94-4.15(m， 4H)， 4.91-5.17(m， 2H)， 7.20-7.40(m， 2H)， 7.49-7.59(m， 1H) ， 7.60-7.70(m ， 2H) ， 7.70-7.81(m ， 2H) ， 7.81-7.93(m ， 2H) ， 7.96-8.08(m ， 0H) ， + + 11.59-12.00(m， 2H) ； LC-MS(ESI) ： m/z 825.5(M+H) ； HRMS ： (M+H) 计算值 ： 825.4299 ； 实测 值： 825.4302。
中间体 36 ： (8S)-7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸 ：
1
中间体 35 ： (8S)-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二甲酸 8- 甲酯 7-( 苯 基甲基 ) 酯
向 (2S)-4- 氧代 -1， 2- 吡咯烷二甲酸 2- 甲酯 1-( 苯基甲基 ) 酯 ( 中间体 23)(680mg， 2.452mmol) 在 无 水 DCM(50mL) 中 的 搅 拌 溶 液 中 加 入 1， 2- 乙 二 硫 醇 (462mg， 4.9mmol) 且接着加入 BF3 乙醚络合物 (139mg， 0.4mmol)。 在室温下搅拌所得混合物过夜， 之 后用 NaHCO3( 饱和溶液 ) 猝灭。将各层分离且将有机层干燥， 过滤并蒸发。残余物通过柱 色谱 ( 硅胶， 在己烷中的 0-50％乙酸乙酯 ) 纯化以得到作为油的 (8S)-1， 4- 二硫杂 -7- 氮 杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二甲酸 8- 甲酯 7-( 苯基甲基 ) 酯 ( 中间体 35)。1H NMR(400MHz， 氯 仿 -d) δ ppm 7.28-7.48(m ， 5H)4.95-5.35(m ， 2H)4.34-4.63(m ， 1H)3.90-4.11(m ， 1H)3.82-3.90(m， 1H)3.78(s， 2H)3.50-3.69(m， 1H)3.15-3.45(m， 4H)2.74(ddd， J ＝ 13.30， 7.78， 1.25Hz， 1H)2.40-2.64(m， 1H).ES LC-MSm/z ＝ 354.2(M+H)。
中间体 36 ： (8S)-7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸
遵循在中间体 2 的制备中概述的程序， (8S)-7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸 ( 中间体 36) 酸 (36)(640mg， 产率 ： 84 ％ ) 由 (8S)-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二甲酸 8- 甲酯 7-( 苯基甲基 ) 酯 (798mg， 2.25mmol) 和 LiOH(60mg， 2.5mmol) 得到。ES LC-MSm/z ＝ 340.1(M+H)。
中 间 体 39 ： 制 备 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-1， 4- 二 硫 杂 -7- 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
中 间 体 37 ： (8S)-8-({[2-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨基 ) 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸苯基甲酯
遵循在中间体 21 的制备中概述的类似程序， (8S)-8-({[2-(4′ -{2-[(2S)-1-((2 S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联 苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸苯基甲酯 ( 中间体 37)(584mg， 产率 ： 68％ ) 由 {(1S)-l-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯 基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 ( 中间 体 1)(603mg， 1.046mmol)、 (8S)-7-{[( 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酸 ( 中间体 36)(355mg， 1.046mmol) 和 HATU(498mg， 1.046mmol) 得到。1H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 7.88-8.03(m， 2H)7.45-7.85(m， 6H)7.05-7.45(m， 6H)5.61(br. s. ， 1H)4.98-5.41(m ， 2H)4.42-4.92(m ， 2H)4.35(t ，J ＝ 7.78Hz ， 1H)3.93-4.06(m ， 1H)3.86(d， J ＝ 8.78Hz， 3H)3.62-3.80(m， 4H)3.35(d， J ＝ 5.02Hz， 4H)3.21(d， J ＝ 7.28Hz， 1H)2.61-2.96(m， 2H)2.24(br.s.， 2H)1.93-2.16(m， 2H)0.98-1.17(m， 3H)0.91(t， J ＝ 7.15Hz， 6H).ES LC-MS m/z ＝ 825.2(M+H)。
中 间 体 38 ： (8S)-8-(4-{4 ′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮 杂螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸苯基甲酯
遵 循 在 中 间 体 (22) 的 制 备 中 概 述 的 类 似 程 序， (8S)-8-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸 苯 基 甲 酯 ( 中 间 体 38)(497mg， 87 ％ ) 由 (8S)-8-({[2-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸苯基甲酯 ( 中 间体 37)(584mg， 0.71mmol) 和乙酸铵 (546mg， 7.1mmol) 得到。 ES LC-MSm/z ＝ 806.4(M+H)。
中间体 39 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(8S)-14- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲 基丙基 ] 氨基甲酸甲酯
在 室 温 下， 向 (8S)-8-(4-{4 ′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂 螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸苯基甲酯 ( 中间体 38)(497mg， 0.617mmol) 在 TFA(6mL) 中的搅拌溶 液中加入三氟甲磺酸 (278mg， 1.85mmol)。将所得混合物在室温下搅拌 3 小时。蒸发溶剂， 用 NaHCO3( 饱和溶液 ) 中和且将水相用 DCM(15％ IPA)(3×) 萃取。将合并的有机相干燥， 过滤并蒸发以得到 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(8S)-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲 基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 39)(400mg， 产率 ： 97％ )。ESLC-MS m/z ＝ 672.2(M+H)。
实 施 例 12 ： [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-7-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
遵循在实施例 5 中概述的类似程序， [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2[(8S)-7-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-1， 4- 二 硫 杂 -7- 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 ) 丙 基 ] 氨 基 甲 酸 甲 酯 (88mg， 产率 ： 27 ％ ) 由 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[( 8S)-1， 4- 二 硫 杂 -7- 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 )-2- 甲 基 丙 基 ] 氨 基 甲 酸 甲 酯 ( 中 间 体 39)(250mg， 0.372mmol)、 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酸 (65mg， 0.372mmol) 和 HATU(141mg， 0.372mmol) 1 氯 仿 -d)δppm 10.07-11.08(m， 2H)7.82(br.s.， 3H)7.58(d， J＝ 得 到。 H NMR(400MHz， 6.02Hz， 5H)7.10-7.30(m， 2H)5.54(d， J ＝ 9.29Hz， 2H)5.17-5.42(m， 3H)4.01-4.48(m， 2H)3.23-4.03(m， 10H)2.70-3.19(m， 2H)2.30-2.49(m， 1H)1.91-2.29(m， 4H)1.19-1.56(m， 4H)1.07(dd， J ＝ 10.54， 7.03Hz， 2H)0.58-0.97(m， 10H).HRMS ： (M+H)+ 计算值 ： 829.3530 ； 实 测值 ： 829.3534。
实施例 13 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(8S)-7-((2S)-2-{[( 甲氧 基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联 苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
遵循在实施例 5 中概述的类似程序， [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2 -[(8S)-7-((2S)-2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基 甲酸甲酯 (35mg， 产率 ： 27％ ) 由 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(8S)-1， 4- 二硫杂 -7- 氮 杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 39)(100mg， 0.149mmol)、 (2S)-2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酸 (24mg， 0.15mmol) 和 HATU(56.5mg， 0.149mmol) 得到。1H NMR(400MHz， 氯 仿 -d) δ ppm 9.99-11.64(m ， 2H)7.53(br.s. ， 8H)7.12-7.34(m ， 2H)5.26(br.s. ， 2H)3.18-4.64(m， 17H)2.79(br.s.， 2H)1.43-2.62(m， 8H)0.70-1.19(m， 9H).HRMS ： (M+H)+ 计 算值 ： 815.3373 ； 实测值 ： 815.3373。
实施例 14 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-7-({[( 甲氧基 ) 羰 基 ] 氨基 } 乙酰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
遵循在实施例 5 中概述的类似程序， [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[(8 S)-7-({[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 乙酰基 )-1， 4- 二硫杂 -7- 氮杂螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 ) 丙 基 ] 氨 基 甲 酸 甲 酯 (14mg， 产率 ： 24 ％ ) 由 [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-1， 4- 二 硫 杂 -7- 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -8- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 39)(50mg， 0.074mmol)、 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ] 1 甘 氨 酸 (10mg， 0.074mmol) 和 HATU(28.3mg， 0.074mmol) 得 到。 H NMR(400MHz， 氯 仿 -d) δppm 9.86-11.31(m， 2H)7.50(br.s.， 8H)6.91-7.27(m， 2H)5.41-6.31(m， 2H)5.24(br.s.， 2H)3.12-4.45(m， 18H)2.77(br.s.， 2H)1.77-2.50(m， 4H)0.58-1.15(m， 6H).HRMS ： (M+H)+ 计 算值 ： 787.3055 ； 实测值 ： 787.3056。
实施例 15 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联 苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
使 ((1S)-2- 甲基 -1-{[(2S)-2-(4-{4 ′ -[({[2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ] 羰基 } 氨基 ) 乙酰基 ]-4- 联 苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 } 丙基 ) 氨基甲酸甲酯 ( 中间体 104)(131mg， 0.16mmol) 和乙酸铵 (122mg， 1.6mmol) 在二 烷 (2mL) 中的溶液脱气并在密封管中将其加热到 110℃历时 18 小时。将反应物冷却到室温， 用乙酸乙酯稀释， 过滤并真空浓缩。残余物 产率 通过 C18RP 色谱以 10-90％水 / 乙腈 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供灰白色固体 (44mg， 1 34％ )。H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm7.55-7.87(m， 8H)7.32(br.s.， 4H)5.02-5.23(m， 3H)4.13-4.34(m， 4H)3.93-4.04(m， 1H)3.88(br.s.， 2H)3.49-3.84(m， 8H)1.86-2.54(m， + 10H)1.45-1.84(m， 4H)0.69-1.12(m， 12H).HRMS C44H57N8O7(M+H) 计算值 ： 809.4350， 实测值 ： 809.4346。纯度 (LC-MS) ： 96％。
制备中间体 104
中间体 101 ： 8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯遵循在 WO 98/08850， 第 50 页中概述的程序， 中间体 101 由四氢 -2H- 吡喃 -4- 甲 醛 (1.0g， 8.8mmol) 以定量产率作为外消旋物得到。
中间体 102 ： 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸乙酯
向 8- 氧 杂 -2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲 酸 乙 酯 (101)(200mg， 0.94mmol)、 HATU(392mg， 1.03mmol) 和 N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酸 (181mg， 1.03mmol) 在 无 水 CH2Cl2(6mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (Hunig’ s base)(0.33mL， 1.88mmol) 且在室温下在 氮气下搅拌所述溶液。2 小时之后， 将反应物真空浓缩， 通过 C18RP 色谱用 10-90％ ACN/ 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化， 以提供作为黄色油的产物 (313mg， 产率 90％ )。
中间体 103 ： 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸
向 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲 酸乙酯 (102)(310mg， 0.84mmol) 在 THF/ 水 / 甲醇 (6mL) 的 2 ∶ 1 ∶ 1 混合物中的溶液中加 入氢氧化锂单水合物 (70mg， 1.67mmol) 且将反应物在室温下搅拌 2 小时。 用 1N HCl(1.6mL) 处理， 在 EtOAc 和水 ( 各 30mL) 之间分配， 将有机层用 EtOAc(30mL) 萃取， 干燥 (MgSO4) 且 浓缩以得到白色泡沫 (211mg， 产率 74 ％ )。该物质在不经额外纯化的情况下用于随后步 1 骤 中。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.43(br.s.， 1H)7.19-7.41(m， 1H)4.05-4.28(m， 1H)3.91-4.05(m， 2H)3.40-3.71(m， 6H)3.20-3.28(m， 1H)1.81-1.98(m， 2H)1.70-1.80(m， 1H)1.46-1.69(m， 2H)1.32-1.46(m， 1H)0.65-1.03(m， 10H)。
中 间 体 104 ： ((1S)-2- 甲 基 -1-{[(2S)-2-(4-{4 ′ -[({[2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ] 羰基 } 氨 基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 } 丙基 ) 氨基甲酸甲酯
向 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲 酸 (103)(100mg， 0.29mmol)、 HATU(111mg， 0.29mmol) 和 如 在 实 施 例 1 中 所 述 制 备 的 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 )
羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 (1)(168mg， 0.29mmol) 在无水 CH2Cl2(2mL) 中 的溶液中加入许尼希碱 (0.2mL， 1.17mmol) 且将溶液在室温下在氮气下搅拌。1 小时之后， 将反应物真空浓缩， 通过 C18RP 色谱用 10-90％ ACN/ 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化， 以提供作 为黄色固体的产物 (133mg， 产率 55％ )。
实施例 16 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8， 8- 二氧代 -8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
将 ((1S)-2- 甲基 -1-{[(2S)-2-(4-{4 ′ -[({[2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8， 8- 二氧代 -8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ] 羰基 } 氨基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 } 丙基 ) 氨基甲酸甲酯 (108) 烷 (1.5mL) 中的溶液用氮气脱气并在(107mg， 0.12mmol) 和乙酸铵 (94mg， 1.2mmol) 在二密封管中将其加热到 110℃历时 18 小时。将反应物冷却到室温， 用乙酸乙酯稀释， 过滤并 1 真空浓缩。通过 SFC 纯化以提供作为褐色固体的产物 (39mg， 产率 37％ )。 H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.64(br.s.， 10H)7.32(br.s.， 2H)5.05-5.24(m， 1H)4.04-4.29(m， 1H)3.99(br.s. ， 1H)3.81(br.s. ， 1H)3.55-3.73(m ， 6H)3.03-3.25(m ， 4H)1.80-2.47(m ， + 14H)0.68-1.06(m， 16H).HRMS C44H57N8O8S(M+H) 计算值 ： 857.4020， 实测值 ： 857.4020。 纯度 (LC-MS) ： 97％。
制备中间体 108
中间体 105 ： 8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯 8， 8- 二氧化物该化合物以与实施例 15 类似的方式由四氢 -2H- 噻喃 -4- 甲醛 1， 1- 二氧化物 (1.05g， 6.47mmol) 以 90％的产率制备。
中间体 106 ： 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸乙酯 8， 8- 二氧化物
中间体 106 以与实施例 15 类似的方式由 8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 乙酯 8， 8- 二氧化物 (105)(200mg， 0.77mmol) 以 60％的产率制备。
中间体 107 ： 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸 8， 8- 二氧化物
中间体 107 以与实施例 15 类似的方式由 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰 基 }-8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯 8， 8- 二氧化物 (106)(187mg， 0.45mmol) 以 1 定量产率制备。在不经额外纯化的情况下用于随后的步骤。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.48(br.s. ， 1H)7.13-7.44(m ， 1H)4.10-4.31(m ， 1H)3.46-3.61(m ， 3H)2.93-3.24(m ， 3H)2.32(dd ， J ＝ 3.7 ， 1.76Hz ， 1H)1.93-2.13(m ， 3H)1.73-1.94(m ， 2H)1.55-1.71(m ， 1H)0.66-1.04(m， 10H)。
中 间 体 108 ： ((1S)-2- 甲 基 -1-{[(2S)-2-(4-{4 ′ -[({[2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8， 8- 二氧代 -8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ] 羰基 } 氨基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 } 丙基 ) 氨基甲 酸甲酯
以 与 实 施 例 15 中 所 述 的 类 似 方 式 由 2-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-8- 硫杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 8， 8- 二氧化物 (107)(100mg， 0.26mmol) 和 {(1S)-1-[((25)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 (1)(148mg， 0.26mmol) 以 49％的产率制备。
实 施 例 17 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[8， 8- 二 氟 -2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 味 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸 甲酯
将乙酸铵 (540mg， 6.9mmol) 和 (3S)-8， 8- 二氟 -2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 2-{4 ′ -[({[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ] 羰基 } 氧基 ) 乙酰基 ]-4- 联
苯基 }-2- 氧代乙酯 ( 中间体 117)(307mg， 0.35mmol) 在无水二烷 (3.5mL) 中的溶液用氮气脱气并在密封管中加热到 110 ℃历时 3 小时。将反应物冷却到室温且在 EtOAc 和 饱和 NaHCO3( 各 35mL) 分 配， 将有机层用盐水 洗涤， 干 燥 (MgSO4) 并真空浓 缩。残余物 通过 C18 逆相色谱以 10-100 ％乙腈 / 水 /0.2 ％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为黄色固体 的 标 题 化 合 物 (235mg， 产 率 80 ％ )。1H NMR(400MHz， METHANOL-d4).ppm 7.69-7.82(m， 3H)7.63(br.s. ， 5H)7.17-7.37(m ， 2H)5.03-5.19(m ， 1H)4.20(br.s. ， 1H)4.06-4.16(m ， 1H)3.96(br.s.， 1H)3.85(br.s.， 1H)3.62(d， J ＝ 3.1Hz， 6H)2.24-2.38(m， 3H)2.15(br. 3H)0.96(br.s.， 4H)0.87(d， J ＝ s.， 3H)1.85-2.09(m， 8H)1.77-1.85(m， 2H)1.53-1.76(m， + 6.3Hz， 12H).HRMS C45H57N8O6F2(M+H) 计算值 ： 843.4369， 实测值 ： 843.4371.Purity(LC-MS) ： 97％。
制备中间体 70
中间体 60 ：
将 (2S)-2-{[((2S)-2-{[(1， 1- 二甲基乙基 ) 氧基 ] 羰基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ] 氨基 }-3- 甲基丁酸 (24.57g， 143mmol) 和 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酸 (25.1g， 143mmol) 溶解于 DCM(50mL) 中。 加入 DIPEA(75mL， 430mmol) 和 HOBT(21.97g， 143mmol)。 5 分钟之后， 加入 EDC(27.5g， 143mmol)。将反应物在室温下搅拌 3 小时。用水 (50mL) 稀释且加入 1N HCl(1mL)。 将沉淀物滤出且将有机层 / 水层经疏水玻璃料过滤并浓缩以干燥以提供 42.92g 无色油。
中间体 61 ：
将 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -L- 脯氨酸 1， 1- 二甲基乙酯 (61g， 186mmol) 溶解于 HCl(50mL， 1646mmol) 中 (150mL 的 4M 溶液 ) 并搅拌 5 小时。浓缩至干燥以提供 47.9g 作为浅黄色粘稠泡沫的产物。
中间体 70
将 1， 1′ -(4， 4′ - 联苯二基 ) 双 (2- 溴乙酮 )(37.8g， 95mmol) 溶解于 DMF(800mL) 中并脱气 15 分钟 (N2)。 将中间体 61(21.99g， 81mmol) 溶解于 DMF(100mL) 中， 接着在氮气下 经 15 分钟谨慎地加入 NaH(2.94g， 73.4mmol， 60％在油中 )。在氮气下将溶液搅拌 15 分钟， 随后经 15 分钟逐滴缓慢加到 1， 1′ -(4， 4′ - 联苯二基 ) 双 (2- 溴乙酮 ) 的溶液中， 接着在 室温下搅拌 1 小时。随后使溶剂体积减少至约 100mL 并冷却到 20℃。缓慢加入 100mL 水且 将所得微灰黄色固体过滤并用水 (200mL)、 己烷 (200mL) 洗涤并在真空下干燥 (12 小时 )。 将粗化合物在 500g 硅胶上用己烷 / 乙酸乙酯 ( 梯度从 50％增加到 100％ EA) 上纯化， 产 1 生 14.5g(37.3％ ) 中间体 70。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 8.11(dd， J ＝ 12.0， 8.5Hz， 4H)7.96(d， J ＝ 8.4Hz， 4H)7.41(d， J ＝ 8.4Hz， 1H)5.43-5.75(m， 2H)4.99(s， 2H)4.53(dd， J ＝ 8.6， 4.7Hz， 1H)4.03(t， J ＝ 8.6Hz， 1H)3.76-3.90(m， 1H)3.60-3.73(m， 1H)3.53(s， 3H)2.22-2.37(m， 1H)2.12-2.21(m， 1H)1.85-2.06(m， 3H)0.90(dd， J ＝ 10.7， 6.6Hz， 6H)。
制备中间体 117
中间体 110 ： 8-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯该化合物以与实施例 15 类似的方式由 4-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷 基 ] 氧基 } 环己烷甲醛 ( 顺式异构体 / 反式异构体的混合物 )(7.35g， 30.3mmol) 作为外消 旋物以 98％的产率得到。
中间体 111 ： 8-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯
向 8-{[(1， 1- 二 甲 基 乙 基 )( 二 甲 基 ) 甲 硅 烷 基 ] 氧 基 }-2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸乙酯 (110)(10.61g， 31.3mmol) 溶解于干燥 DCM 的溶液中加入三乙胺 (10.8mL， 78mmol)， 将其冷却到 0℃， 接着加入 Cbz-Cl(6.2mL， 43.5mmol)， 且将反应物在 0℃下搅拌 5
分钟， 在室温下搅拌 1 小时。将反应物用 DCM(700mL) 稀释， 用 0.1N HCl(700mL) 洗涤， 干燥 (MgSO4) 且真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 10-60％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提供作为 黄色油的标题化合物 (5.73g， 产率 39％ )。
中间体 112 ： 8- 羟基 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯
向 8-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 (111)(5.73g， 12.05mmol) 在 THF(60mL) 中的溶液中加 入冰乙酸 (1.38mL， 24.0mmol)， 接着加入作为在 THF 中的 1M 溶液的 TBAF(24mL)。将反应物 在室温下搅拌 72 小时。将反应物在 EtOAc 和水 ( 各 250mL) 之间分配， 将有机层分离， 用饱 和 NaHCO3(100mL) 洗涤， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩。通过 TLC 发现反应不完全。将残余物溶
解于干燥 THF(60mL) 中， 冷却到 0℃并用 HF- 吡啶 (1.6mL， 18.0mmol) 处理， 升温至室温并 在氮气下搅拌 2 小时。将反应物注入饱和 NaHCO3(100mL) 中， 加入固体碳酸钾， 直至气体逸 出停止。用 EtOAc(2×150mL) 萃取， 将有机层合并， 用 0.1N HCl(100mL) 洗涤， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩从而以定量产率提供作为黄色油的标题化合物， 其不经额外纯化而用于随后反 应。
中间体 113 ： 8- 氧代 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯I
向 8- 羟基 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 (112) (4.36g， 120.05mmol) 在干燥 DCM(60mL) 中的溶液中加入戴斯 - 马丁高价碘化物 (10.22g， 24.1mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 18 小时。将反应物注入 10％硫代硫酸钠水 溶液 (150mL) 和饱和 NaHCO3 水溶液 (150mL) 中并搅拌 10 分钟。用 DCM(2×150mL) 萃取， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 25-80％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提供 作为浅黄色油的标题化合物 (2.89g， 产率 67％ )。
中间体 114 ： (3S)-8， 8- 二氟 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯
基甲基 ) 酯
向 8- 氧 代 -2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 烷 -2， 3- 二 甲 酸 3- 乙 酯 2-( 苯 基 甲 基 ) 酯 (113)(2.89g， 7.13mmol) 在 无 水 CH2Cl2(50mL) 中 的 溶 液 中 加 入 Deoxo-Fluor(2.2mL， 12.1mmol)， 接着加入催化量的乙醇且将反应物在室温下在氮气下搅拌。在 2.5 小时之后， 将反应物注入饱和 NaHCO3(150mL) 中， 搅拌 10 分钟。用 DCM(2×150mL) 萃取， 将有机层用 0.1NHCl(100mL) 洗涤， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩以提供作为黄色油的所需化合物 (3.01g)， 发现其被 (3S)-8- 氟 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 -7- 烯 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 以 1 ∶ 1 比率污染。将残余物溶解于干燥 DCM(35mL) 中， 用 mCPBA(77％， 1.66g， 7.45mmol) 处理并在氮气下搅拌 18 小时。将反应物注入包含饱和 NaHCO3(40mL) 和 10％硫代硫酸钠水 溶液 (40mL) 中并搅拌 10 分钟。用 DCM(100mL) 萃取， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩。残余物通 过硅胶色谱以 5-50％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化。外消旋物随后通过手性 HPLC 在 10μm OD 管柱上以在己烷中的 25％异丙醇洗脱来分离以提供作为澄清油的标题化合物 (632mg， 产 率 23％ )。绝对构型通过振动圆二色光谱 (VCD) 测定。 1
H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δppm 7.28-7.41(m， 5H)4.98-5.23(m， 2H)4.37(ddd， J＝ 19.3， 8.1， 8.0Hz， 1H)4.22(q， J ＝ 7.2Hz， 1H)3.93-4.12(m， 1H)3.45-3.70(m， 1H)3.36(dd， J ＝ 10.8， 2.0Hz ， 1H)2.22(dd， J ＝ 12.8 ， 8.5Hz ， 1H)1.79-2.03(m ， 4H)1.59-1.78(m ， 4H)1.56(br.s.， 1H)1.28(t， J ＝ 7.1Hz， 1H)1.22(d， J ＝ 6.1Hz， 1H)1.13(t， J ＝ 7.1Hz， 1H). + LC-MS ESI(M+H) ＝ 381.68。
中间体 115 ： (3S)-8， 8- 二氟 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯
向 (3S)-8， 8- 二氟 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 (114)(630mg， 1.65mmol) 在绝对乙醇 (12mL) 中的溶液中加入在碳 (65mg) 上的 20％ Pd(OH)2 且反应物在 Fisher-Porter 设备上在 60psi 下氢化 18 小时。反应物经硅藻土过滤并真空 浓缩以提供作为澄清油的标题化合物 (380mg， 产率 93％ )。
中间体 116 ： (3S)-8， 8- 二氟 -2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸
向 (3S)-8， 8- 二氟 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯 (115)(380mg， 1.54mmol) 在无水 CH2Cl2(10mL) 中的溶液中加入 HATU(614mg， 1.6mmol)、 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬 氨酸 (283mg， 1.6mmol)、 接着加入三乙胺 (0.43mL， 3.1mmol) 且将反应物在室温下在氮气 下搅拌 1 小时。将反应物真空浓缩且残余物通过硅胶色谱以 15-80％己烷 /EtOAc 洗脱来 纯化。将适当级分合并并真空浓缩。将残余物溶解于 THF/ 水 / 甲醇 (5mL/2.5mL/2.5mL) 中， 加入氢氧化锂单水合物 (119mg， 2.8mmol) 且将溶液在室温下搅拌 30 分钟。将反应物 用 1N HCl(3.5mL) 处理并在 EtOAc 和水 ( 各 50mL) 之间分配。将水层用乙酸乙酯 (50mL) 萃取， 将有机层合并并干燥 (MgSO4) 且真空浓缩。将残余物在乙醚中湿磨且真空浓缩以 提供作为白色固体的标题化合物 (542mg， 产率 93 ％ )。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.47(br.s.， 1H)7.41(d， J ＝ 8.0Hz， 1H)4.24(t， J ＝ 8.6Hz， 1H)3.95-4.14(m， 2H)3.52(s， 3H)3.25-3.33(m ， 1H)2.22(dd ， J ＝ 12.3 ， 8.4Hz ， 1H)1.79-2.11(m ， 5H)1.58-1.77(m ， + 3H)1.41-1.59(m， 2H)0.93(dd， J ＝ 12.7， 6.6Hz， 6H).LC-MS ESI(M+H) ＝ 377.23。
中间体 117 ： (3S)-8， 8- 二氟 -2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁 酰基 )-2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 2-{4′ -[({[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ] 羰基 } 氧基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-2- 氧代乙酯
向 (3S)-8， 8- 二 氟 -2-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2- 氮 杂 螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 (116)(168mg， 0.45mmol) 和 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -L- 脯氨酸 2-[4′ -( 溴乙酰基 )-4- 联苯基 ]-2- 氧代乙酯 (70)(250mg， 0.43mmol) 在无水乙腈 (2mL) 中的溶液中加入三乙胺 (0.09mL， 0.64mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 1 小时。将 反应物在 EtOAc 和 0.1N HCl( 各 30mL) 之间分配， 将有机层用盐水洗涤， 干燥 (MgSO4) 并真 空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 65-100％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提供作为灰白色固体 的标题化合物 (309mg， 产率 82％ )。
实施例 18 ： (4， 4′ - 联苯二基双 {1H- 咪唑 -4， 2- 二基 (3S)-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3， 2- 二基 [(2S)-3- 甲基 -1- 氧代 -1， 2- 丁二基 ]}) 双氨基甲酸二甲酯
向冷却到 0℃的 (3S， 3′ S)-3， 3′ -[4， 4′ - 联苯二基双 (1H- 咪唑 -4， 2- 二基 )] 双 (8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸苯基甲酯 )(119)(210mg， 0.25mmol) 在三氟乙 酸 (2mL) 中的溶液中加入三氟甲烷磺酸 (0.13mL) 且将反应物升温至室温且搅拌 30 分钟。 将反应物真空浓缩并旋转蒸发。 使残余物从甲苯中旋转蒸发出来且将残余物悬浮在二氯甲 烷 (3mL) 中并用 4N 在二 烷中的 HCl(0.65mL) 处理。将反应物真空浓缩并在乙醚中湿磨且过滤以得到棕色固体。
向该固体在无水 DMF(2.5mL) 中的溶液中加入 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酸 (88mg， 0.5mmol)、 HATU(183mg， 0.48mmol) 和 三 乙 胺 (0.4mL， 2.88mmol) 且 将 反 应 物 在 室 温下搅拌 1 小时。粗反应混合物通过 HPLC 以 10-90％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化 METHANOL-d4) 以提供作为浅黄色固体的标题化合物 (79mg， 产率 37％ )。1H NMR(400MHz， δppm 7.60-7.79(m， 10H)7.33(s， 2H)5.11(dd， J ＝ 9.9， 7.9Hz， 2H)4.30(d， J ＝ 10.2Hz， 2H)4.17(d， J ＝ 8.2Hz， 2H)3.70-3.87(m， 6H)3.56-3.71(m， 10H)2.40(dd， J ＝ 12.9， 7.8Hz， 2H)2.13(dd， J ＝ 12.6， 10.3Hz， 2H)1.88-2.00(m， 2H)1.70-1.84(m， 4H)1.46-1.69(m， + 6H)0.83-0.97(m， 12H).HRMS C48H63N8O8(M+H) 计算值 ： 879.4769， 实测值 ： 879.4769。纯度 (LC-MS) ： 98％。
制备中间体 119
中间体 118 ： 3， 3′ -[4， 4′ - 联苯二基双 (2- 氧代 -2， 1- 乙二基 )]2， 2′ - 双 ( 苯 基甲基 )(3S， 3′ S) 双 (-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸酯 )
向 1， 1′ -(4， 4′ - 联苯二基 ) 双 (2- 溴乙酮 )(155mg， 0.39mmol) 和 (3S)-2-{[( 苯 基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 (121)(275mg， 0.86mmol) 在无水乙腈 (4mL) 中的溶液中加入三乙胺 (0.19mL， 1.4mmol) 且将溶液在室温下在氮气下 搅拌 3.5 小时。将反应物在 EtOAc 和 0.1N HCl( 各 40mL) 之间分配， 将有机层用盐水洗涤， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 20-100％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提 供作为白色固体的标题化合物 (225mg， 产率 66％ )。
中间体 119 ： (3S， 3′ S)-3， 3′ -[4， 4′ - 联苯二基双 (1H- 咪唑 -4， 2- 二基 )] 双 (8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸苯基甲酯 )
向 3， 3′ -[4， 4′ - 联苯二基双 (2- 氧代 -2， 1- 乙二基 )]2， 2′ - 双 ( 苯基甲基 ) (3S， 3′ S) 双 (-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸酯 )(118)(225mg， 0.26mmol)
在二烷 (3.5mL) 中的溶液中加入乙酸铵 (318mg， 4.1mmol)。将反应物用氮气脱气且在密封管中加热到 110℃历时 18 小时。将反应物在 EtOAc 和饱和 NaHCO3( 各 35mL) 之间分配， 将有机层用盐水洗涤， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩从而以定量产率提供标题化合物。
制备中间体 121
中间体 120 ： (3S)-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯
将 8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸乙酯 (3.54g， 16.6mmol) 溶解于干燥二 氯甲烷 (80mL) 中， 加入三乙胺 (5.8mL， 41.5mmol)， 接着加入氯甲酸苄酯 (3.5mL， 24.9mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 2 小时。将反应物用二氯甲烷稀释， 用 0.2N HCl 洗涤， 经 MgSO4 干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 20-100％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提 供黄色油。 外消旋物随后通过手性 HPLC 在 10μm OD 管柱上以在己烷中的 25％异丙醇洗脱 来分离以提供作为澄清油的标题化合物 (1.66g， 产率 29％ )。
中间体 121 ： (3S)-2-{[ 苯基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -3- 甲酸
向 (3S)-8- 氧杂 -2- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2， 3- 二甲酸 3- 乙酯 2-( 苯基甲基 ) 酯 (120)(300mg， 0.86mmol) 在 THF/ 水 / 甲醇 (3mL/1.5mL/1.5mL) 中的溶液中加入氢氧化锂 单水合物 (72mg， 1.7mmol) 且将反应物在室温下搅拌 30 分钟。将反应物用 1N HCl(mL) 处理且使其在 EtOAc 和水之间分配。将水层用 EtOAc 萃取且有机层经 MgSO4 干燥并真空
浓缩从而以定量产率提供标题化合物。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm12.54-12.93(m， 1H)7.21-7.47(m ， 5H)4.90-5.20(m ， 2H)4.11-4.41(m ， 1H)3.44-3.70(m ， 5H)3.24(dd ， J ＝ 15.0， 11.7Hz， 1H)2.32(td， J ＝ 13.6， 8.5Hz， 1H)1.73(ddd， J ＝ 16.8， 12.9， 7.2Hz， 1H)1.38-1.64(m， 4H).LC-MS ESI(M-H) ＝ 318.19。
实 施 例 19 ： 2-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-3-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲酸 1， 1- 二甲 基乙酯
将 2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-3-({[2-(4 ′ -{2[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲
酸 1， 1- 二甲基乙酯 (134)(126mg， 0.14mmol) 和乙酸铵 (105mg， 1.4mmol) 在无水二烷(1.5mL) 中的溶液用氮气脱气并在密封管中加热到 110℃历时 18 小时。将反应物真空浓缩 且通过 HPLC 以 10-90％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为褐色固体的标题化 合物 (84mg， 产率 68％ )。1H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.56-7.87(m， 10H)7.31(br. s. ， 2H)5.04-5.23(m ， 1H)4.11-4.32(m ， 2H)3.93-4.04(m ， 1H)3.80-3.92(m ， 1H)3.63(s ， 6H)3.33-3.61(m ， 6H)1.86-2.49(m ， 9H)1.68(br.s. ， 1H)1.56(br.s. ， 2H)1.37-1.49(m ， + 908.5034， 实测值 ： 908.5031。纯度 9H)0.81-1.08(m， 15H).HRMS C49H65N9O8(M+H) 计算值 ： (LC-MS) ： 93％。
制备中间体 134
中间体 131 ： 2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3， 8- 二甲酸 8-(1， 1- 二甲基乙基 ) 酯3- 乙酯
该化合物遵循在 WO 98/08850 第 50 页中概述的程序由 14- 甲酰基 -1- 哌啶甲酸 1- 二甲基乙酯作为外消旋物得到。
中间体 132 ： 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3，
8- 二甲酸 8-(1， 1- 二甲基乙基 ) 酯 3- 乙酯
向 2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3， 8- 二甲酸酯 8-(1， 1- 二甲基乙基 ) 酯 3- 乙酯 (131)(150mg， 0.48mmol)、 HATU(183mg， 0.48mmol) 和 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酸 (93mg， 0.53mmol) 在无水 CH2Cl2(4mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (0.17mL， 0.96mmol) 且将反应物 在室温下在氮气下搅拌 2 小时。将反应物真空浓缩并通过硅胶色谱以 15-80％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提供作为浅黄色油的标题化合物 (125mg， 产率 55％ )。
中间体 133 ： 8-{[(1， 1- 二甲基乙基 ) 氧基 ] 羰基 }-2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬 氨酰基 }-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸
向 2-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2， 8- 二 氮 杂 螺 [4.5] 癸 烷 -3， 8- 二 甲 酸 8-(1， 1- 二 甲 基 乙 基 ) 酯 3- 乙 酯 (132)(125mg， 0.27mmol) 在 THF/ 水 / 甲 醇 (1.2mL/0.6mL/0.6mL) 中 的 溶 液 中 加 入 氢 氧 化 锂 单 水 合 物 (22mg， 0.53mmol) 且 将 反 应物在室温下搅拌 1.5 小时。将反应物用 1N HCl(0.5mL) 处理且使其在 EtOAc 和 0.1N HCl( 各 10mL) 之 间 分 配 并 将 水 层 用 EtOAc(10mL) 萃 取。 将 有 机 层 合 并， 干 燥 (MgSO4) 1 并真空浓缩以提供作为白色固体的标题化合物 (107mg， 产率 91 ％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.29-12.54(m， 1H)7.08-7.44(m， 1H)4.47(t， J ＝ 5.4Hz， 1H)4.13-4.30(m， 1H)3.86-4.13(m， 3H)3.45-3.58(m， 3H)3.16-3.27(m， 2H)2.64(br.s.， 1H)2.15-2.31(m， 1H)1.81-1.95(m ， 1H)1.43-1.67(m ， 3H)1.29-1.43(m ， 11H)0.69-1.03(m ， 6H).LC-MS ESI(M-H) ＝ 440.59。
中间体 134 ： 2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-3-({[2-(4′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲酸 1， 1- 二甲基乙酯
向 8-{[(1， 1- 二甲基乙基 ) 氧基 ] 羰基 }-2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰 基 }-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -3- 甲酸 (133)(106mg， 0.24mmol)、 HATU(91mg， 0.24mmol) 和 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 (1)(138mg， 0.24mmol) 在无水 CH2Cl2(4mL) 中 的溶液中加入许尼希碱 (0.17mL， 0.96mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 1 小时。将 反应物真空浓缩且通过 HPLC 以 10-90％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为灰 白色固体的标题化合物 (129mg， 产率 58％ )。
实施例 20 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[2-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
向 2-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-3-(4-{4 ′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧 基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲酸 1， 1- 二甲基乙酯 (68mg， 0.08mmol) 在无水 CH2Cl2(1mL) 中的溶液中加入三氟乙酸 (0.3mL) 且将反应物在室温下搅拌 2 小时。将反应物真空浓缩 且通过 HPLC 以 10-90％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为褐色固体的标题化 合物 (49mg， 产率 81％ )。1H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δ.ppm7.56-7.83(m， 10H)7.31(br. s.， 2H)5.00-5.22(m， 2H)4.12-4.30(m， 3H)4.01(br.s.， 1H)3.80-3.91(m， 1H)3.57-3.70(m， 6H)2.76-3.07(m， 4H)1.89-2.48(m， 10H)1.69-1.81(m， 1H)1.61(br.s.， 2H)0.82-1.09(m， + 15H).HRMS C44H58N9O6(M+H) 计算值 ： 808.4510， 实测值 ： 808.4509。纯度 (LC-MS) ： 94％。
实 施 例 21 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[8- 乙 酰 基 -2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2， 8- 二 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸 甲酯
向 [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 20)(19mg， 0.02mmol) 在无水 CH2Cl2(0.5mL) 中的溶液中加入三乙胺 (0.016mL， 0.12mmol)， 接着加入 乙酰氯 (0.01mL， 0.14mmol) 且将反应物在室温下搅拌 1 小时。将反应物真空浓缩并溶解 于甲醇 (0.7mL) 中， 向其中加入碳酸钾 (30mg， 0.22mmol) 且将反应物在室温下搅拌 2 小 时。将反应物真空浓缩且使其在 CH2Cl2 和水 ( 各 3mL) 之间分配， 且将水层用 CH2Cl2(3mL) 萃 取 且 将 有 机 层 合 并， 干 燥 (MgSO4) 并 真 空 浓 缩 以 提 供 作 为 黄 色 固 体 的 标 题 化 合 物 1 产率 90％ )。 H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.54-7.88(m， 10H)7.32(br.s.， (18mg， 2H)5.05-5.23(m， 2H)4.03-4.34(m， 2H)3.71-4.03(m， 3H)3.56-3.71(m， 8H)3.34-3.56(m， 2H)2.14-2.46(m， 4H)1.89-2.14(m， 6H)1.46-1.83(m， 4H)1.19-1.32(m， 2H)0.78-1.07(m， + 14H).HRMS C46H60N9O7(M+H) 计算值 ： 850.4616， 实测值 ： 850.4617。纯度 (LC-MS) ： 94％。
实 施 例 22 ： 2-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-3-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲酸甲酯
向 [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[2-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2， 8- 二氮杂螺 [4.5] 癸 -3- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 20)(19mg， 0.02mmol) 在无水 CH2Cl2(0.5mL) 中的溶液中加入三乙胺 (0.016mL， 0.12mmol)， 接着加入 乙酰氯 (0.011mL， 0.14mmol) 且将反应物在室温下搅拌 1 小时。将反应物真空浓缩并溶解 于甲醇 (0.7mL) 中， 向其中加入碳酸钾 (30mg， 0.22mmol) 且将反应物在室温下搅拌 2 小 时。将反应物真空浓缩且使其在 CH2Cl2 和水 ( 各 3mL) 之间分配， 且将水层用 CH2Cl2(3mL) 萃 取 且 将 有 机 层 合 并， 干 燥 (MgSO4) 并 真 空 浓 缩 以 提 供 作 为 黄 色 固 体 的 标 题 化 合 物 1 (15mg， 产率 74％ )。 H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.51-7.92(m， 10H)7.32(br.s.， 2H)5.02-5.25(m， 1H)4.03-4.31(m， 2H)3.75-4.05(m， 2H)3.61-3.72(m， 7H)3.34-3.60(m，
4H)1.82-2.50(m ， 7H)1.70(br.s. ， 2H)1.44-1.63(m ， 4H)1.27(br.s. ， 4H)0.77-1.10(m ， + 14H).HRMS C46H60N9O8(M+H) 计算值 ： 866.4565， 实测值 ： 850.4564。纯度 (LC-MS) ： 96％。
实 施 例 23 ： 6-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-7-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸 1， 1- 二甲 基乙酯
将 6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-7-({[2-(4 ′ -{2[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸
1， 1- 二甲基乙酯 (148)(400mg， 0.45mmol) 和乙酸铵 (343mg， 4.5mmol) 在无水二烷 (5mL)中的溶液用氮气脱气且在密封管中加热到 110℃历时 18 小时。将反应物用 EtOAc 稀释， 过 滤并真空浓缩。残余物通过 C18 逆相色谱以 10-100％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以 提供作为浅黄色固体的标题化合物 (315mg， 产率 80％ )。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 11.63-12.35(m ， 1H)7.47-7.92(m ， 9H)7.19-7.42(m ， 1H)5.08(br.s. ， 2H)3.94-4.23(m ， 4H)3.62-3.93(m ， 7H)3.56(s ， 6H)2.24-2.45(m ， 2H)2.14(br.s. ， 2H)1.77-2.07(m ， + 6H)1.37(d， J ＝ 5.5Hz， 9H)0.76-1.02(m， 12H).HRMS C 47H62N9O8(M+H) 计算值 ： 880.4721， 实 测值 ： 880.4725。纯度 (LC-MS) ： 95％。
制备中间体 148
中间体 145 ： 2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2， 7- 二甲酸 2-(1， 1- 二甲基乙基 ) 酯7- 乙酯
该化合物以在实施例 19 中对于中间体 131 类似的方式由 3- 甲酰基 -1- 吖丁啶甲 酸 1， 1- 二甲基乙酯 (650mg， 3.5mmol) 以 93％的产率制备。
中间体 146 ： 6-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2， 7- 二甲酸 2-(1， 1- 二甲基乙基 ) 酯 7- 乙酯
向 2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2， 7- 二甲酸 2-(1， 1- 二甲基乙基 ) 酯 7- 乙酯 (145) (500mg， 1.76mmol)、 HATU(735mg， 1.93mmol) 和 N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酸 (339mg， 3.87mmol) 且将反应物 1.93mmol) 在无水 CH2Cl2(10mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (0.68mL， 在室温下在氮气下搅拌 2 小时。将反应物真空浓缩且通过 C18 反相色谱以 10-90％ ACN/ 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为灰白色固体的标题化合物 (398mg， 产率 51％ )。
中间体 147 ： 2-{[(1， 1- 二甲基乙基 ) 氧基 ] 羰基 }-6-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬 氨酰基 }-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸
向 6-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-2， 6- 二 氮 杂 螺 [3.4] 辛 烷 -2， 7- 二 甲 酸 2-(1， 1- 二 甲 基 乙 基 ) 酯 7- 乙 酯 (146)(344mg， 0.78mmol) 在 THF/ 水 / 甲 醇 (3mL/1.5mL/1.5mL) 中的溶液中加入氢氧化锂单水合物 (65mg， 1.56mmol) 且将反应物在室 温下搅拌 1.5 小时， 由此将其用 1NHCl(1.5mL) 处理。使反应物在 EtOAc 和水 ( 各 30mL) 之 间分配， 将水层用 EtOAc(30mL) 萃取， 将有机层合并， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩以提供作为 1 白色固体的标题化合物 (245mg， 产率 76％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.46(br.s.， 1H)7.06-7.66(m， 1H)4.13-4.32(m， 1H)3.88-4.12(m， 2H)3.56-3.89(m， 5H)3.39-3.57(m， 3H)2.24-2.45(m， 1H)1.99-2.19(m， 1H)1.80-1.95(m， 1H)1.26-1.44(m， 9H)0.56-1.00(m， 6H).LC-MS ESI(M-H) ＝ 412.41。
中间体 148 ： 6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-7-({[2-(4′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-2- 氧代乙基 ] 氨基 } 羰基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸 1， 1- 二甲基乙酯向 2-{[(1， 1- 二甲基乙基 ) 氧基 ] 羰基 }-6-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰 基 }-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸 (147)(245mg， 0.59mmol)、 HATU(225mg， 0.59mmol) 和 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷 基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 (1)(342mg， 0.59mmol) 在无水 CH2Cl2(6mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (0.41mL， 2.37mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 1 小时。 将反应物真空浓缩且通过 C18 逆相色谱以 10-100％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提 供作为灰白色固体的标题化合物 (400mg， 产率 75％ )。
实施例 24 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
该 化 合 物 以 与 实 施 例 20 类 似 的 方 式 由 6-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-7-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸 1， 1- 二甲 基乙酯 (298mg， 0.34mmol) 制备以提供作为黄色固体的标题化合物 (203mg， 产率 77 ％ )。 1 H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.43-7.86(m， 8H)7.04-7.42(m， 2H)5.20-5.41(m， 1H)5.01-5.19(m， 2H)4.30-4.43(m， 1H)4.12-4.27(m， 3H)3.78-4.03(m， 5H)3.65-3.78(m， 4H)3.61-3.64(m， 6H)3.39-3.52(m， 1H)2.54-2.77(m， 1H)2.38-2.54(m， 1H)2.09-2.39(m，
2H)1.89-2.13(m， 4H)0.81-1.13(m， 12H).HRMS C42H54N9O6(M+H)+ 计算值 ： 780.4197， 实测值 ： 780.4200。纯度 (LC-MS) ： 96％。
实 施 例 25 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[2- 乙 酰 基 -6-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2， 6- 二 氮 杂 螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 味唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸 甲酯
该 化 合 物 以 与 实 施 例 21 类 似 的 方 式 由 [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[6-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2， 6- 二 氮 杂 螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基 甲酸甲酯 ( 实施例 24)(40mg， 0.05mmol) 制备以提供作为黄色固体的标题化合物 (35mg， 产 1 率 83％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 11.67-12.33(m， 1H)7.19-7.99(m， 12H)5.07(br. s.， 1H)3.92-4.25(m， 4H)3.67-3.94(m， 4H)3.45-3.66(m， 8H)2.20-2.46(m， 3H)2.17(br.s.， 2H)1.80-2.06(m， 5H)1.60-1.82(m， 3H)0.78-1.02(m， 12H).HRMS C44H56N9O7(M+H)+ 计 算 值 ： 822.4303， 实测值 ： 822.4300。纯度 (LC-MS) ： 91％。
实 施 例 26 ： 6-{N-[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ]-L- 缬 氨 酰 基 }-7-(4-{4′ -[2-((2S)-1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-2- 吡咯烷基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸甲酯
该 化 合 物 以 与 实 施 例 22 类 似 的 方 式 由 [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[6-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2， 6- 二 氮 杂 螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡 咯 烷 基 } 羰 基 ) 丙 基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 24)(40mg， 0.05mmol) 制备以提供作为黄色固体的标题化合 1 物 (37mg， 产率 87％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 11.38-12.37(m， 1H)7.58-7.93(m， 8H)7.19-7.59(m， 3H)4.93-5.17(m， 1H)3.63-4.22(m， 7H)3.45-3.64(m， 6H)2.24-2.48(m， 4H)2.08(br.s. ， 4H)1.79-2.07(m ， 6H)0.99-1.18(m ， 1H)0.75-0.97(m ， 14H).HRMS + C44H56N9O8(M+H) 计算值 ： 838.4252， 实测值 ： 838.4252。纯度 (LC-MS) ： 87％。
实 施 例 27 ： [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[2-[( 甲 基 氨 基 ) 羰 基 ]-6-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2， 6- 二 氮 杂 螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
向 [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰 基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 24)(45mg， 0.06mmol) 在无 水 CH2Cl2(0.6mL) 中的溶液中加入异氰酸甲酯 (0.01mL， 0.17mmol)， 且将反应物在室温下搅 拌 2 小时。真空除去溶剂， 将残余物溶解于甲醇 (1mL) 中， 加入碳酸钾 (40mg， 0.29mmol) 且 将反应物在室温下搅拌 18 小时。使反应物在 CH2Cl2(10mL) 和水 (5mL) 之间分配， 将水层用 CH2Cl2(5mL) 萃取， 将有机层合并， 干燥 (MgSO4) 并真空浓缩以提供作为黄色固体的标题化 1 合物 (34mg， 产率 70％ )。 H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.64(br.s.， 10H)7.33(br. s.， 2H)5.06-5.22(m， 1H)4.03-4.46(m， 3H)3.73-4.04(m， 8H)3.54-3.73(m， 6H)3.46(q， J ＝ 7.0Hz， 2H)2.52-2.76(m， 5H)2.10-2.53(m， 4H)2.02(br.s.， 3H)0.70-1.09(m， 12H).HRMS + C 44H57N10O7(M+H) 计算值 ： 837.4412， 实测值 ： 838.4416。纯度 (LC-MS) ： 91％。
实施例 28 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2-( 甲基磺酰基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
向 [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰 基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2， 6- 二氮杂螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪 唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯 ( 实施例 24)(60mg， 0.08mmol) 在无 水 CH2Cl2(1mL) 中的溶液中加入三乙胺 (0.054mL， 0.39mmol)， 且将反应物冷却到 0 ℃。加 入甲磺酰氯 (0.018mL， 0.23mmol) 且将反应物在 0℃下搅拌 15 分钟。真空除去溶剂， 将残 余物溶解于甲醇 (1mL) 中， 加入碳酸钾 (80mg， 0.58mmol) 且将反应物在室温下搅拌 1.5 小 时。使反应物在 CH2Cl2(10mL) 和水 (10mL) 之间分配， 将有机层干燥 (MgSO4) 并真空浓缩 1 以提供作为褐色固体的标题化合物 (57mg， 产率 86％ ) H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.50-7.86(m ， 10H)7.33(br.s. ， 2H)5.06-5.21(m ， 1H)4.04-4.26(m ， 2H)3.75-4.05(m ， 6H)3.56-3.72(m， 6H)3.38-3.55(m， 2H)2.84-3.04(m， 3H)2.70-2.86(m， 1H)2.40-2.64(m， 1H)2.10-2.40(m， 3H)1.83-2.09(m， 2H)1.20-1.37(m， 2H)1.07-1.20(m， 2H)0.81-1.07(m， + 12H).HRMS C43H56N9O8S(M+H) 计算值 ： 858.3973， 实测值 ： 858.3975。纯度 (LC-MS) ： 86％。
实 施 例 29 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(7S)-2， 2- 二 氟 -6-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-6- 氮 杂 螺 [3.4] 辛 -7- 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ] 氨基甲酸 甲酯
向 (7S)-2， 2- 二氟 -6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-6- 氮 杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸 2-{4 ′ -[({[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨 基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ] 羰基 } 氧基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-2- 氧代乙酯 (157)(102mg，
0.12mmol) 在无水二烷 (1.2mL) 中的溶液中加入乙酸铵 (184mg， 2.4mmol) 且将反应物加热到 110℃历时 4 小时。使反应物在 EtOAc 和饱和 NaHCO3 之间分配， 将有机层用盐水洗涤， 经 MgSO4 干燥并真空浓缩。残余物通过 C18 逆相色谱以 10-100％乙腈 / 水 /0.2％ NH4OH 洗 脱来纯化以提供作为黄色固体的标题化合物 (68mg， 产率 69％ )。1H NMR(400MHz， DMSO-d6) δppm 11.42-12.37(m， 2H)7.56-7.90(m， 8H)7.51(s， 2H)7.19-7.46(m， 2H)4.73-5.39(m， 2H)3.91-4.23(m ， 3H)3.82(br.s. ， 2H)3.54(s ， 6H)2.55-2.86(m ， 4H)2.20-2.45(m ， 2H)2.14(br.s.， 2H)1.73-2.09(m， 5H)0.57-0.99(m， 12H).HRMS C43H53N8O6F2(M+H)+ 计 算 值 ： 815.4056， 实测值 ： 815.4059。纯度 (LC-MS) ： 97％。
制备中间体 157
中间体 150 ： 2-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸乙酯该化合物以与 110( 实施例 17) 类似的方式由 3-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 } 环丁基甲醛 (2.23g， 10.4mmol) 制备以提供作为黄色油的标题化合物 (2.97g， 产率 92％ )。
中间体 151 ： 2-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 ) 酯
该化合物以与 111( 实施例 17) 类似的方式由 2-{[(1， 1- 二甲基乙基 )( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸乙酯 (150)(2.97g， 9.5mmol) 制备以得到 作为黄色油的标题化合物 (1.87g， 产率 44％ )。
中间体 152 ： 2- 羟基 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 ) 酯
向 2-{[(1， 1- 二 甲 基 乙 基 )( 二 甲 基 ) 甲 硅 烷 基 ] 氧 基 }-6- 氮 杂 螺 [3.4] 辛 烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 ) 酯 (151)(1.87g， 4.2mmol) 在 THF(20mL) 中的溶 液中加入冰乙酸 (0.48mL)， 接着加入 TBAF(8.5mL， 在 THF 中的 1M 溶液 ) 且将反应物加热 到 45 ℃历时 18 小时。将反应物真空浓缩并使其在 EtOAc 和水之间分配。将有机层用饱 和 NaHCO3 洗涤， 接着用盐水洗涤， 随后经 MgSO4 干燥并真空浓缩从而以定量产率提供作 1 为澄清油的标题化合物。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm7.17-7.48(m， 5H)4.83-5.15(m， 3H)3.88-4.34(m， 4H)3.35-3.47(m， 2H)2.02-2.39(m， 3H)1.65-1.96(m， 3H)1.00-1.22(m， + 3H).LC-MS ESI(M+H) ＝ 334.17。
中间体 153 ： 2- 氧代 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 )酯
该化合物以与 113( 实施例 17) 类似的方式由 2- 羟基 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 ) 酯 (152)(1.39g， 4.2mmol) 制备以得到作为澄清油的标题 化合物 (1.25g， 产率 90％ )。
中间体 154 ： (7S)-2， 2- 二氟 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯 基甲基 ) 酯
向 2- 氧代 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 ) 酯 (153) (1.25g， 3.8mmol) 在无水二氯甲烷 (20mL) 中的溶液中加入 Deoxo-Fluor(1.2mL， 6.4mmol)， 接着加入乙醇 (0.04mL， 0.75mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 18 小时。 将反应物注 入饱和 NaHCO3 中并搅拌 10 分钟。将混合物用二氯甲烷 (2×) 萃取， 将有机层用 0.1N HCl 洗涤， 经 MgSO4 干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 5-50％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化。 外消旋物随后通过手性 HPLC 在 10μmOD 管柱上以在己烷中的 25％异丙醇洗脱来分离以提 供作为澄清油的标题化合物 (356mg， 产率 30％ )。
中间体 155 ： (7S)-2， 2- 二氟 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸乙酯
该化合物以与 115( 实施例 17) 类似的方式由 (7S)-2， 2- 二氟 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -6， 7- 二甲酸 7- 乙酯 6-( 苯基甲基 ) 酯 (14)(356mg， 1.0mmol) 制备以提供出作为澄 清油的标题化合物 (209mg， 产率 95％ )。
中间体 156 ： (7S)-2， 2- 二氟 -6-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸
该化合物以与 116( 实施例 17) 类似的方式由 (7S)-2， 2- 二氟 -6- 氮杂螺 [3.4] 辛 烷 -7- 甲 酸 乙 酯 (155)(207mg， 0.94mmol) 制 备 以 提 供 作 为 白 色 固 体 的 标 题 化 合 物 1 (263mg， 产率 81％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 12.53(br.s.， 1H)7.46(d， J ＝ 8.0Hz， 1H)4.24(t， J ＝ 7.8Hz， 1H)4.02(d， J ＝ 10.4Hz， 1H)3.92(t， J ＝ 8.5Hz， 1H)3.62(d， J＝ 10.4Hz， 1H)3.51(s， 3H)2.54-2.78(m， 4H)2.28-2.44(m， 1H)1.81-2.05(m， 2H)0.91(dd， J ＝ + 11.2， 6.7Hz， 6H).LC-MS ESI(M+H) ＝ 349.13。
中间体 157 ： (7S)-2， 2- 二氟 -6-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁 酰基 )-6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸 2-{4′ -[({[(2S)-1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-2- 吡咯烷基 ] 羰基 } 氧基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-2- 氧代乙酯
该化合物以与 117( 实施例 17) 类似的方式由 (7S)-2， 2- 二氟 -6-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-6- 氮杂螺 [3.4] 辛烷 -7- 甲酸 (156)(59mg， 0.17mmol) 和 N-[( 甲氧 基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 -L- 脯氨酸 2-[4′ -( 溴乙酰基 )-4- 联苯基 ]-2- 氧代乙酯 (70) (95mg， 0.16mmol) 制备以提供作为白色固体的标题化合物 (104mg， 产率 75％ )。
实施例 30 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联 苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
向 ((1S)-2- 甲基 -1-{[(2S)-2-(4-{4′ -[({[1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰 基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 ] 羰基 } 氨基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯 基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 } 丙基 ) 氨基甲酸甲酯 (169)(71mg， 0.09mmol)在无水二烷 (1mL) 中的溶液中加入乙酸铵 (66mg， 0.86mmol) 且将反应物用氮气脱气并在密封管中加热到 110℃历时 48 小时。反应物通过 HPLC 以 10-90％水 / 乙腈 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为灰白色固体的标题化合物 (10mg， 产率 14 ％ )。1H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.56-7.86(m， 9H)7.16-7.44(m， 2H)6.88-7.09(m， 1H)5.72(br.s.， 1H)5.09-5.21(m， 1H)4.03-4.28(m， 1H)3.80-4.04(m， 6H)3.42-3.71(m， 9H)2.11-2.56(m， + 8H)1.88-2.11(m， 6H)0.80-1.06(m， 12H).HRMS C44H57N8O7(M+H) 计算值 ： 809.4350， 实测值 ： 809.4347。纯度 (LC-MS) ： 93％。
制备中间体 169
中间体 162 ： 2-[( 二苯基亚甲基 ) 氨基 ]-4-( 四氢 -4H- 吡喃 -4- 亚基 ) 丁酸乙酯向 N-( 二 苯 基 亚 甲 基 ) 氨 基 乙 酸 乙 酯 (5.29g， 19.8mmol)、 苄基三乙基氯化铵 (0.41g， 1.8mmol) 和氢氧化铯单水合物 (4.54g， 27.0mmol) 在无水二氯甲烷 (50mL) 中的溶 液中加入作为在无水二氯甲烷 (40mL) 中的溶液的 4-(2- 溴乙亚基 ) 四氢 -2H- 吡喃 (3.44g， 18.0mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 72 小时。使反应物在二氯甲烷和水之间分 配且将水层用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 5-40％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化从而以定量产率提供作为澄清油的标题化合物。
中间体 163 ： 2- 氨基 -4-( 四氢 -4H- 吡喃 -4- 亚基 ) 丁酸乙酯
向 2-[( 二苯基亚甲基 ) 氨基 ]-4-( 四氢 -4H- 吡喃 -4- 亚基 ) 丁酸乙酯 (162) (6.8g， 18.0mmol) 在 THF(30mL) 中的溶液中加入水 (30mL) 和冰乙酸 (20mL) 且将反应物在 室温下搅拌 2.5 小时。将反应物真空浓缩且将残余物溶解于 0.1N HCl 中。将其用乙酸乙 酯萃取两次且弃去有机层。向水层中加入固体碳酸钾， 直至溶液使 pH 试纸显蓝色。将水层 用 15％异丙醇 / 二氯甲烷萃取 3 次， 将有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩以提供作为澄清油 的标题化合物 (3.05g， 产率 79％ )。
中间体 164 ： 2-{[(4- 硝基苯基 ) 磺酰基 ] 氨基 }-4-( 四氢 -4H- 吡喃 -4- 亚基 ) 丁酸乙酯
向 2- 氨基 -4-( 四氢 -4H- 吡喃 -4- 亚基 ) 丁酸乙酯 (163)(1.0g， 4.7mmol) 在无 水二氯甲烷 (30mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (1.6mL， 9.4mmol)， 接着加入 4- 硝基苯磺酰氯 (1.14g， 5.2mmol)， 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 2 小时。将反应物用二氯甲烷稀释并 用 0.1N HCl 洗涤， 将有机层经 MgSO4 干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 10-70％己 烷 /EtOAc 洗脱来纯化从而以定量产率提供作为灰白色固体的标题化合物。
中间体 165 ： 1-[(4- 硝基苯基 ) 磺酰基 ]-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸 乙酯
向 2-{[(4- 硝基苯基 ) 磺酰基 ] 氨基 }-4-( 四氢 -4H- 吡喃 -4- 亚基 ) 丁酸乙 酯 (164)(1.87g， 4.7mmol) 在 无 水 氯 仿 (47mL) 中 的 溶 液 中 加 入 三 氟 甲 烷 磺 酸 (0.2mL， 2.3mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 4 小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用饱和 NaHCO3 洗涤， 且有机层经 MgSO4 干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 10-70 ％己烷 / EtOAc 洗脱纯化以提供作为白色固体的标题化合物 (1.47g， 产率 79％ )。1H NMR(400MHz， 氯 仿 -d)δppm 8.19-8.36(m， 2H)8.08(d， J ＝ 8.8Hz， 2H)4.52(dd， J ＝ 8.5， 2.1Hz， 1H)3.99-4.14(m， 2H)3.87-3.99(m， 2H)3.21-3.49(m， 2H)2.58-2.78(m， 2H)2.10-2.30(m， 2H)1.89-2.06(m， 2H)1.77(dd， J ＝ 13.0， 2.1Hz， 1H)1.35(dd， J ＝ 12.9， 1.6Hz， 1H)1.22(t，
J ＝ 7.1Hz， 3H).LC-MS ESI(M+H)+ ＝ 399.47。
中间体 166 ： 8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸乙酯
向 1-[(4- 硝 基 苯 基 ) 磺 酰 基 ]-8- 氧 杂 -1- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 烷 -2- 甲 酸 乙 酯 (165)(1.47g， 3.7mmol) 在 无 水 乙 腈 (25mL) 中 的 溶 液 中 加 入 碳 酸 钾 (0.76g， 5.5mmol)、 18- 冠 -6(0.2g， 0.7mmol) 和硫苯酚 (0.6mL， 5.5mmol) 且将反应物在室温下搅拌 18 小时。 将反应物真空浓缩且将残余物溶解于 0.1N HCl 中。将水层用 EtOAc 萃取两次且弃去有机 层。将水层用固体碳酸钾处理， 直至溶液使 pH 试纸显蓝色。将其用 15％异丙醇 / 二氯甲烷 萃取 3 次， 将有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩以提供作为澄清油的标题化合物 (0.71g， 产 率 90％ )。
中间体 167 ： 1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -2- 甲酸乙酯
向 8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸乙酯 (166)(125mg， 0.59mmol) 在无水 二氯甲烷 (2mL) 中的溶液中加入氰化银 (98mg， 0.73mmol)， 接着加入作为溶液的在无水二 氯甲烷 (3.5mL) 中的 N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰氯 (142mg， 0.73mmol) 且将溶液在室 温下在氮气下搅拌 18 小时。将反应物过滤并用甲醇处理且搅拌 5 分钟。将反应物真空浓 缩且残余物通过硅胶色谱以 30-100％己烷 /EtOAc 洗脱来纯化以提供作为白色固体的标题 化合物 (43mg， 产率 20％ )。
中间体 168 ： 1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 烷 -2- 甲酸
向 1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲 酸 乙 酯 (167)(80mg， 0.2mmol) 在 THF/ 水 / 甲 醇 (1.0mL/0.5mL/0.5mL) 中 的 溶 液 中 加 入 氢氧化锂单水合物 (13mg， 0.3mmol) 且将反应物在室温下搅拌 72 小时。将反应物用 1N HCl(0.5mL) 处理且使反应物在 EtOAc 和 0.1N HCl 之间分配。 将有机层分隔， 经 MgSO4 干燥并 1 真空浓缩以提供作为白色固体的标题化合物 (53mg， 产率 72％ )。 H NMR(400MHz， DMSO-d6)
δppm 12.88(br.s.， 1H)7.45-7.61(m， 1H)4.89-5.03(m， 1H)3.70-3.87(m， 2H)3.65(t， J ＝ 9.2Hz， 1H)3.53(s， 3H)3.02(td， J ＝ 12.9， 4.9Hz， 1H)2.71-2.90(m， 1H)2.22-2.38(m， 1H)1.87-2.19(m， 3H)1.53-1.73(m， 1H)1.32-1.42(m， 1H)1.06-1.15(m， 1H)0.61-0.98(m， + 8H).LC-MS ESI(M+H) ＝ 342.95。
中 间 体 169 ： ((1S)-2- 甲 基 -1-{[(2S)-2-(4-{4 ′ -[({[1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 ] 羰基 } 氨 基 ) 乙酰基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 } 丙基 ) 氨基甲酸甲酯
向 1-{N-[( 甲氧基 ) 羰基 ]-L- 缬氨酰基 }-8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲 酸 (168)(52mg， 1.5mmol)、 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4′ -( 氨基乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪 唑 -2- 基 }-1- 吡 咯 烷 基 ) 羰 基 ]-2- 甲 基 丙 基 } 氨 基 甲 酸 甲 酯 二 盐 酸 盐 (1)(88mg， 0.15mmol) 和 HATU(58mg， 0.15mmol) 在无水二氯甲烷 (1.2mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (0.12mL， 0.68mmol) 且将反应物在室温下搅拌 1 小时。将反应物真空浓缩且通过 HPLC 以 10-90％水 / 乙腈 /0.2％ NH4OH 洗脱来纯化以提供作为灰白色固体的标题化合物 (73mg， 产 率 58％ )。
实施例 31 ： ((1S)-1-{[(2S)-2-(4-{4′ -[2-(1- 乙酰基 -8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 )-1H- 咪唑 -4- 基 ]-4- 联苯基 }-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 ] 羰基 }-2- 甲 基丙基 ) 氨基甲酸甲酯
该化合物以与实施例 30 类似的方式由 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4 ′ -({[(1- 乙 酰基 -8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 ) 羰基 ] 氨基 } 乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪 唑 -2- 基 }-1- 吡 咯 烷 基 ) 羰 基 ]-2- 甲 基 丙 基 } 氨 基 甲 酸 甲 酯 (172)(116mg， 0.16mmol) 制备以提供作为褐色固体的标题化合物 (19mg， 产率 17 ％ )。1H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δppm 7.51-7.90(m， 8H)7.17-7.52(m， 2H)5.08-5.26(m， 2H)3.81-4.03(m， 4H)3.64(s ， 3H)3.41-3.61(m ， 3H)2.21-2.51(m ， 5H)2.01-2.21(m ， 4H)1.97(d ，J ＝ 19.9Hz， 5H)1.77-1.91(m， 1H)1.64-1.75(m， 1H)1.31-1.42(m， 1H)0.79-1.04(m， 8H).HRMS + C39H48N7O5(M+H) 计算值 ： 694.3717， 实测值 ： 694.3718。纯度 (LC-MS) ： 79％。
制备中间体 172
中间体 170 ： 1- 乙酰基 -8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸乙酯向 8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸乙酯 (166)(135mg， 0.63mmol) 在无水 二氯甲烷 (2mL) 中的溶液中加入许尼希碱 (0.22mL， 1.3mmol)， 接着加入乙酰氯 (0.05mL， 0.76mmol) 且将反应物在室温下在氮气下搅拌 1.5 小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用 0.1N HCl 洗涤， 有机层经 MgSO4 干燥并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱以 60-100％己烷 / EtOAc 洗脱来纯化以提供作为黄色油的标题化合物 (94mg， 产率 58％ )。
中间体 171 ： 1- 乙酰基 -8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸
向 1- 乙酰基 -8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲酸乙酯 (170)(93mg， 0.34mmol) 在 THF/ 水 / 甲 醇 (1.1mL/0.6mL/0.6mL) 中 的 溶 液 中 加 入 氢 氧 化 锂 单 水 合 物 (29mg， 0.69mmol) 且将反应物在室温下搅拌 3 小时。将反应物用 1N HCl(0.7mL) 处理且使反应物 在 EtOAc 和 0.1N HCl 之间分配， 将水层用 EtOAc 萃取两次， 将合并的有机层经 MgSO4 干燥 并真空浓缩以提供作为白色固体的标题化合物 (79mg， 产率 95％ )。
中 间 体 172 ： {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4 ′ -({[(1- 乙 酰 基 -8- 氧 杂 -1- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -2- 基 ) 羰基 ] 氨基 } 乙酰基 )-4- 联苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰 基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯
该化合物以与 169 类似的方式由 1- 乙酰基 -8- 氧杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸烷 -2- 甲 酸 (171)(56mg， 0.25mmol) 和 {(1S)-1-[((2S)-2-{4-[4 ′ -( 氨 基 乙 酰 基 )-4- 联 苯基 ]-1H- 咪唑 -2- 基 }-1- 吡咯烷基 ) 羰基 ]-2- 甲基丙基 } 氨基甲酸甲酯二盐酸盐 (1) (142mg， 0.25mmol) 制备以提供作为灰白色固体的标题化合物 (118mg， 产率 67％ )。
实施例 32-37 使用与实施例 30 和 31 类似的合成顺序来制备。
实 施 例 32 ： [(1S)-1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[8， 8- 二 氟 -1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-1- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -2- 基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 )-1- 吡咯烷基 } 羰基 )-2- 甲基丙基 ) 氨基甲酸 甲酯
H NMR(400MHz， METHANOL-d4)δ7.92-7.51(m， 8H)， 7.29(br.s.， 2H)， 5.71(br. s.， 1H)， 5.32(br.s.， 1H)， 4.21(d， J ＝ 7.4Hz， 1H)， 4.15-3.80(m， 4H)， 3.77-3.41(m， 8H)， 3.18(br.s.， 1H)， 3.12-2.82(m， 1H)， 2.63-1.40(m， 16H)， 1.05-0.84(m， 10H)， 0.78-0.64(m， + 843.4369， 实测值 ： 843.4368。 1H)， 0.44-0.28(m， 1H).HRMS C45H57F2N8O6(M+H) 计算值 ：
实 施 例 33 ： [(1S)-1-({8， 8- 二 氟 -2-[4-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -1- 基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
1
H NMR(400MHz， 氯 仿 -d)δ7.84(d， J ＝ 7.8Hz， 3H)， 7.72-7.41(m， 6H)， 7.31-7.09(m， 3H)， 5.73-5.17(m， 4H)， 5.12(br.s.， 1H)， 4.41-4.06(m， 3H)， 3.97-3.56(m， 11H)， 3.37-2.76(m， 4H)， 2.60-1.55(m， 9H)， 1.46-1.20(m， 2H)， 1.06(d， J ＝ 6.0Hz， 2H)， + 1.00-0.79(m， 5H)， 0.56(d， J ＝ 7.3Hz， 1H).HRMS C44H55F2N8O6(M+H) 计算值 ： 829.4213， 实测1值： 829.4211。
实 施 例 34 ： ((1S)-2-{8， 8- 二 氟 -2-[4-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -1- 基 }-1- 甲基 -2- 氧代乙基 ) 氨基甲酸甲酯
H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δ10.97-10.14(m， 2H)， 7.91-7.40(m， 8H)， 7.34-7.16(m， 2H)， 5.68-5.15(m， 3H)， 5.08(d， J ＝ 6.0Hz， 1H)， 4.34(d， J ＝ 8.0Hz， 2H)， 3.95-3.54(m， 8H)， 3.37-2.69(m， 4H)， 2.60-1.57(m， 13H)， 1.56-1.18(m， 3H)， 1.06(d， J ＝ 6.8Hz， 1H)， 0.89(d， + J ＝ 6.5Hz， 6H).HRMS C43H53F2N8O6(M+H) 计算值 ： 815.4056， 实测值 ： 815.4061。
实 施 例 35 ： [(1S)-1-({8， 8- 二 氟 -2-[4-(4 ′ -{2-[(2S)-1-((2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-2- 吡 咯 烷 基 ]-1H- 咪 唑 -4- 基 }-4- 联 苯 基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -1- 基 } 羰基 )-3- 甲基丁基 ] 氨基甲酸甲酯
1H NMR(400MHz， 氯仿 -d)δ11.07-9.94(m， 2H)， 8.17-7.42(m， 10H)， 7.33-7.08(m， 2H) ， 5.72-5.19(m ， 3H) ， 5.14-4.99(m ， 1H) ， 4.86(br.s. ， 1H) ， 4.50-4.09(m ， 2H) ， 4.02-3.50(m， 8H)， 3.45(s， 1H)， 3.33-2.71(m， 4H)， 2.59-1.47(m， 11H)， 1.40(br.s.， 3H)， + 1.19-0.67(m， 11H)， 0.63-0.40(m， 1H).).HRMS C46H59F2N8O6(M+H) 计 算 值 ： 857.4526， 实测 值： 857.4531。
实 施 例 36 ： ((1S)-1-{[2S)-2-(4-{4 ′ -[2-(1- 乙 酰 基 -8， 8- 二 氟 -1- 氮 杂 螺 [4.5] 癸 -2- 基 )-1H- 咪 唑 -4- 基 ]-4- 联 苯 基 }-1H- 咪 唑 -2- 基 )-1- 吡 咯 烷 基 ] 羰 基 }-2- 甲基丙基 ) 氨基甲酸甲酯
1H NMR(400MHz ， 氯 仿 -d) δ 11.17-10.07(m ， 2H) ， 8.16-7.40(m ， 10H) ， 7.35-7.03(m， 2H)， 5.85-4.98(m， 2H)， 4.59-4.12(m， 1H)， 3.72(s， 5H)， 3.46(br.s.， 1H)， + 3.33-2.72(m， 2H)， 2.76-1.39(m， 17H)， 1.27-0.74(m， 5H).HRMS C40H48F2N7O4(M+H) 计 算 值 ： 728.3736， 实测值 ： 728.3736。
实施例 37 ： [(1S)-2- 甲基 -1-({(2S)-2-[4-(4′ -{2-[1-((2S)-3- 甲基 -2-{[( 甲 氧基 ) 羰基 ] 氨基 } 丁酰基 )-8， 8- 二氧代 -8- 硫杂 -1- 氮杂螺 [4.5] 癸 -2- 基 ]-1H- 咪
67唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯
H NMR(400MHz， 氯 仿 -d)δ7.92-7.52(m， 9H)， 5.39(br.s.， 4H)， 4.36(br.s.， 1H)， 3.98-3.82(m， 1H)， 3.82-3.60(m， 10H)， 3.19(br.s.， 4H)， 2.88-2.70(m， 1H)， 2.33(br. s.， 4H)， 2.02(s， 4H)， 1.81(br.s.， 5H)， 1.06(s， 1H)， 0.89(d， J ＝ 7.0Hz， 6H)， 0.74(d， + J ＝ 6.5Hz， 3H)， 0.44-0.34(m， 3H).HRMS C44H57N8O8S(M+H) 计 算 值 ： 857.4020，实 测 值 ： 857.4018。
在 HCV 复制子测定中对化合物进行试验和数据分析的方案
使用基因型 1a 和 1b 亚基因复制子模型体系测定化合物对抗 HCV 的活性。使用 携带基因型 1a 和 1b 复制子的稳定细胞系来筛选化合物。两种复制子均为双顺反子型 且含有荧火虫荧光素酶基因。将 ET 细胞系用包埋 I389LUC-UBI-NEO/NS3-3 ′ /ET 复制子
1的 RNA 转录体稳定转染， 该复制子含有荧火虫荧光素酶 - 泛素 - 新霉素磷酸转移酶融合 蛋白和含有细胞培养适应性突变 (E1202G、 T1280I、 K1846T) 的 EMCV-IRES 驱动 NS3-5B 多 聚蛋白质的 (Krieger 等， 2001 和未发表的文献 )。基因型 1a 复制子为 Apath LLC 许可 的稳定细胞系， 其经修饰以包含荧火虫荧光素酶基因。所述细胞在补充有 10％胎牛血清、 2mM 谷氨酰胺、 青霉素 (100IU/mL)/ 链霉素 (100μg/mL)、 1x 非必需氨基酸和 250-500μg/ mLG418(“Geneticin” ) 的 DMEM 中生长。它们全可由 Life Technologies(Bethesda， Md.) 3 得到。将细胞在装有化合物的 384 孔板上以 5×10 个细胞 / 孔涂板。化合物的最后浓度 为 0.03pM-50μm 且 DMSO 的最后浓度为 0.5-1％。
荧光素酶活性通过加入 Steady glo 试剂 (Promega， Madison， Wis.) 于 48 小时后 测量。相对于没有化合物对照物的情况绘出复制数据的抑制百分数。在相同条件下使用细 胞滴度 glo(Promega， Madison， Wis) 测定化合物的细胞毒性。对于各化合物使用 3-4 倍系 列稀释由 11 点剂量响应曲线测定 EC50， 其横跨大于 1000 倍的浓度范围。各化合物的抑制 水平用活性基质 (Activity Base) 或 BioAssay 加 Excel XC50 组件测定。抑制百分数用以 下方程确定， 其中串扰校正值为得自试验孔的值， 化合物正对照平均值为不存在化合物的 孔的平均值， 且 DMSO 负控制平均值为具有 DMSO 但不存在细胞的孔的平均值。
这些标准化值输出为 EC50， 其中它们使用标准 4 参数逻辑方程相对于化合物摩尔 浓度绘制 ：其中 ：
A ＝ y 最小值 D ＝斜率因子
B ＝ y 最大值 x ＝ log10 化合物浓度 [M]
C ＝ log10EC50 pEC50 ＝ -C
如下所示， 发现， 除了实施例 20 以外， 所有试验化合物都抑制复制子的活性， 其中 pEC50 ＞ 5。
制 备 实 施 例 2 的 化 合 物 [(1S)-2- 甲 基 -1-({(2S)-2-[4-(4 ′ -{2-[(8S)-7-( (2S)-3- 甲 基 -2-{[( 甲 氧 基 ) 羰 基 ] 氨 基 } 丁 酰 基 )-1， 4- 二 氧 杂 -7- 氮 杂 螺 [4.4]
壬 -8- 基 ]-1H- 咪唑 -4- 基 }-4- 联苯基 )-1H- 咪唑 -2- 基 ]-1- 吡咯烷基 } 羰基 ) 丙基 ] 氨基甲酸甲酯的结晶盐。
实施例 2 的化合物的结晶二盐酸盐 ：
WO 2009/020828 公开了据称可用于治疗 HCV 感染的化合物的结晶二盐酸盐。WO 2009/020828 的标题化合物如该专利中所述来制备。
将实施例 2 的化合物分离并纯化为非晶游离碱。在室温下在搅拌下将该非晶 游离碱溶解于丙酮 (3.6mL， 30 体积 ) 中。加入盐酸 (316μL， 1.0M， 在二 烷中 ； 2.1 当 量 ) 且产生非晶沉淀物。等分地加入甲醇 (480μL， 4 体积 )， 直至固体刚好溶解。加入 WO 2009/020828 二盐酸盐化合物的晶种， 且将混合物搅拌过周末。 将产物过滤， 不进行洗涤， 实 施例 2 的化合物的结晶二盐酸盐产率为 62.6％ (84.0mg， 0.0946mmol)。
实施例 2 的化合物的结晶二盐酸盐 ：
将实施例 2 的化合物分离并纯化为非晶游离碱。 在 50℃下在搅拌下将该非晶游离 碱 (555mg， 0.696mmol) 溶解于丙酮 (8.3mL， 15 体积 ) 和甲醇 (2.2mL， 4 体积 ) 中。缓慢加 入盐酸 (1.46mL， 1.0M， 在二 烷中 ； 2.1 当量 )， 接着加入实施例 2 的化合物的二盐酸盐的 晶种。使浆料保持在 50℃下历时 1 小时， 冷却至室温并搅拌过周末。将产物快速过滤， 不进 行洗涤并在 50℃下在放出氮气的真空烘箱中干燥。 实施例 2 的化合物的结晶二盐酸盐的产 率为 54.0％ (327mg， 0.376mmol)。 实施例 2 的化合物的结晶硫酸盐 ：
实施例 2 的化合物的非晶硫酸盐通过向游离碱的溶液中加入 1.0 当量的硫酸并浓 缩至干燥来制备。使非晶硫酸盐 ( 约 50mg， 0.056mmol) 溶解于丙酮 (750μl， 15 体积 ) 中， 且将混合物加热到 50℃。加入甲醇 (210μL， 4.2 体积 )， 每次 10μL， 直至固体几乎全部溶 解， 产生浑浊溶液。将该浑浊溶液在 50℃下混合 16 小时， 随后冷却到 23℃。将产物过滤， 分析并确定与实施例 2 的化合物的结晶硫酸盐一致。
实施例 2 的化合物的结晶硫酸盐 ：
将实施例 2 的化合物的非晶游离碱 (250mg， 0.314mmol) 与甲醇 (1.25mL， 5 体积 ) 混合且在搅拌下加热到 50 ℃以加速溶解。缓慢加入硫酸 (0.105mL， 3.0M， 在水中 ； 1.0 当 量 )， 接着加入实施例 2 的化合物的硫酸盐的晶种。使浆料保持在 50 ℃历时 3 小时以形 成中等稠度的黄色浆料。使温度降低到 50 ℃以增加产率。将产物过滤， 不进行洗涤且在 50 ℃下放出氮气的真空烘箱中干燥。GSK2336805 的结晶硫酸盐产率为 73.6 ％ (211mg， 0.231mmol)。
结晶盐分析 ：
实施例 2 的化合物的结晶二盐酸盐和硫酸盐通过离子色谱、 粉末 X 射线衍射 (PXRD)、 拉曼光谱、 DSC 和 TGA 分析。所有分析都与结晶一致。粉末 X 射线衍射用具有 Johansson Kα1 单色仪的 PANalytical X′ Pert-Pro MPD 使用 X′ Celerator 检测器进 行。关键操作参数为 ： 辐射 ： Cu(Kα1)， 1.54060 埃 ( 单色 ) ； 检测器 ： X′ Celerator ； 电压 ：
45kV ； 电流 ： 40mA ； 起始角度 ：终止角度 ：步长 ： 0.02° ； 时间 / 步骤 ： 40.0秒； 扫描速度 ： 0.05° / 秒 ； 入射光束 ： 2°固定防散射狭缝， 和可程序控制的发散狭缝 ； 衍 射光束 ： 0.02rad 梭拉狭缝和可程序控制的防散射狭缝。样品在硅零背景样品夹持器上制 备。实施例 2 的化合物的二盐酸盐在粉末 X 射线衍射图中在 2θ 值 ( 以度计 ) 和在括 号中的 d 间距 ( 以埃计 ) 处具有显著峰 ： 5.3(16.55)， 9.9(8.94)， 10.4(8.54)， 13.3(6.65)， 18.9(4.70)， 20.3(4.37)， 21.2(4.18)， 22.5(3.95)， 23.2(3.84)， 23.7(3.75)， 24.4(3.65)， 26.3(3.39)， 27.6(3.23)。实施例 2 的化合物的二盐酸盐的 TGA 曲线与非晶形式一致。实 施例 2 的化合物的二盐酸盐的 DSC 曲线显示在约 262℃开始熔融和 / 或分解。
实施例 2 的化合物的硫酸盐在粉末 X 射线衍射图中在 2θ 值 ( 以度计 ) 和在括号 中的 d 间距 ( 以埃计 ) 处具有显著峰 ： 5.6(15.87)， 7.1(12.39)， 8.0(11.10)， 10.5(8.41)， 11.9(7.41)， 12.6(7.02)， 13.4(6.61)， 14.3(6.18)， 16.6(5.33)， 17.5(5.07)， 18.4(4.81)， 20.0(4.43)， 21.2(4.19)， 23.8(3.73)。实施例 2 的化合物的硫酸盐的 TGA 曲线与变体水合 形式一致。实施例 2 的化合物的硫酸盐的 DSC 曲线显示在约 241℃开始熔融和 / 或分解。72