技术领域
本发公开了一种治疗小儿外感风寒的药物组合，确切地说，是一种中药组合；同时还公 开了该药物组合的制备方法。
背景技术
感冒是小儿时期最常见的外感疾病，约占儿科门诊量的80％以上。外感风寒是小儿感冒 的重要成因。外感风寒中90％是由病毒感染所致，而西药对病毒感染有直接作用者尚不多见 ，采用中医药有效治疗方法，以解除患儿的痛苦，是目前研究的方向。近年来，国内不少学 者在此方面进行了有益的探索，研制出不少有效的治疗药物。但从目前投放市场的中成药品 种看，多数属于辛凉解表、清热解毒类，而对小儿外感发热临床表现寒热夹杂者，尚无对应 中成药可选。因此，深入开展小儿风寒感冒治疗学研究，开发适合小儿外感寒热夹杂证型之 中成药，对丰富中医辨证施治内容，发挥中医药对小儿外感的治疗学优势，无疑具有十分重 要的现实意义。
发明内容
本发明提供了一种更为有效的治疗小儿外感风寒的药物组合，具有发汗解表，清里退热 的功效。在现有文献中，未发现有关于本发明的报道。同时，本发明还公开了这种治疗小儿 风寒感冒的药物组合的制备方法。具体内容：
本发明药物组合是由如下原料药组成的：
柴胡23～28重量份、葛根23～28重量份、黄芩10～14重量份、桂枝7～10重量份、浮萍 7～10重量份、白芍7～10重量份、蝉蜕7～10重量份
经验证，该药物组合的最佳配比为：
柴胡26重量份、葛根26重量份、黄芩12重量份、桂枝9重量份、浮萍9重量份、白芍9重 量份、蝉蜕9重量份。
药物组合针对小儿外感风寒，表寒里热的病机，以发汗解表，清里退热原则而立方。因 表寒里热并存，单以辛温发汗，则汗出而热不解，单以辛凉清解，又汗出而邪不透，故本发 明药物组合辛温辛凉并用，解表清里并举，将表寒里热分而治之，使表寒祛，里热清，以收 表里双解之功。
该药物组合的制备方法为：
1)取桂枝、柴胡，加10～14倍量水，加热至70～90℃，温浸1～2小时，再蒸馏3～5小 时，馏出液冷藏12～24小时，分取上层油液，备用；蒸馏后的水液滤过，药渣再加4～8倍量 水煎煮0.5～1小时，滤过，滤液与蒸馏后水液合并，备用。
2)取葛根，照2000年版《中国药典》一部附录IO项下的渗漉法，用40～60％乙醇作溶剂 ，浸渍24～48小时，渗漉，收集6～10倍量渗漉液，60～70℃下减压回收乙醇，并继续浓缩至 相对密度约1.20～1.30(60℃)。
3)取黄芩，布袋包煎，加水煎煮2～3次，每次加6～10倍量水，煎煮0.5～1.5小时，合 并煎液、滤过，滤液在80～85℃加盐酸调pH1.5～2.0，保温1～2小时，静置24～48小时，滤 过，沉淀物加6～10倍量水搅溶，用氢氧化钠溶液调至中性，加等量乙醇，滤过，滤液用盐 酸调pH至1.0～2.0，50～70℃保温0.5～1小时，静置24～48小时，滤过、沉淀用水洗至中性 ，得黄芩粗提物。
4)白芍、浮萍、蝉蜕加水煎煮2～3次，每次加8～18倍量水，提取0.5～1.5小时，合并 煎液，滤过，滤液与桂枝、柴胡水提液合并，浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)，加乙醇 使含醇量达50～65％，冷藏24～48小时，滤过，60-70℃下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对 密度约1.20～1.30(60℃)。
5)将步骤2)和步骤4)所得的浓缩液合并，加入步骤1)中挥发油、步骤3)中黄芩提 取物，及所需辅料，制成所需剂型。
应用此工艺，该药物组合可以制成供临床使用的多种剂型，如口服液、颗粒剂、片剂、 胶囊剂等。此工艺在应用当中，尤其在制备口服固体制剂过程中，为防止有效成分的挥发损 失，也可将步骤1)中的挥发油制成倍他环糊精包合物并应用于步骤5)，此处理方式属对挥 发油的应用方式之一，因而亦包含于本发明的保护范围之内。
优选工艺为：
1)取桂枝、柴胡，加12倍量水，加热至80℃，温浸1小时，再蒸馏4小时，馏出液冷藏 12小时，分取上层油液，制成倍他环糊精包合物，备用；蒸馏后的水液滤过，药渣再加6倍 量水煎煮0.5小时，滤过，滤液与蒸馏后水液合并，备用。
2)取葛根，照2000年版《中国药典》一部附录IO项下的渗漉法，用50％乙醇作溶剂，浸 渍24小时后进行渗漉，收集8倍量渗漉液，减压回收乙醇(60-70℃-0.08Mpa)，并继续浓 缩至相对密度约1.25(60℃)。
3)取黄芩，布袋包煎，加水煎煮三次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，第二、三次各 加6倍量水，煎煮0.5小时，合并煎液、滤过，滤液在80～85℃加10％盐酸调pH1.5～2.0，保 温1小时，静置24小时，滤过，沉淀物加6倍量水搅溶，用40％氢氧化钠调pH7.0～7.5，加等 量乙醇，滤过，滤液用10％盐酸调pH至2.0，60℃保温30分钟，静置24小时，滤过、沉淀用水 洗至中性，得黄芩粗提物。
4)白芍、浮萍、蝉蜕加水煎煮二次，第一次加18倍量水，提取1小时，第二次加8倍量 水提取0.5小时，合并煎液，滤过，滤液与桂枝、柴胡水提液合并，浓缩至相对密度为1.07 左右(50℃)，加乙醇使含醇量达60％，冷藏24小时，滤过，减压回收乙醇(60-70℃ -0.08Mpa)，并继续浓缩至相对密度约1.25(60℃)。
5)将步骤2)和步骤4)所得的浓缩液合并，加入步骤1)中倍他环糊精包合物、步骤3 )中黄芩提取物及蔗糖、糊精适量，制成颗粒剂。
具体实施方式：
本发明的药物组合具有发汗解表，清里退热，祛邪定痉之功效，用于小儿外感风寒引起的 发热恶寒，身痛无汗，烦燥口渴，鼻塞，流涕，头痛咽干，二便不调等病症。以下通过具体的动物 药效学实验进一步说明本发明的功效，所用“小儿柴桂退热口服液”是按本发明优选处方组 成制备而得。
试验材料：
受试药物：小儿柴桂退热口服液：批号960207，含生药量为2g/ml。同时用蒸馏水配成 所需浓度的混悬液。小儿热速清：具有清热解毒、泻火利咽的功效，主治小儿外感高热、头 痛、咽喉肿痛、鼻塞、流涕、咳嗽等症。(90)卫药准字Z？2号。中化四平制药厂生产批号： 951042。地塞米松：0.75mg/单位，购自江苏宝应县制药厂，批号：940804。病毒灵： 100mg/单位，购自山东医科大学附属医院药剂科。
药物剂量折算：小儿按平均20kg体重计，日服用剂量为的60ml，折合生药量30g/d，按 下公式折换成成人日用量为：60kg/人剂量＝儿童剂量×(1.7×成人体表面积)/儿童体 表面积＝30g/d×(1.7×1.65)/0.8＝1.50g/kg/d，60kg成人用量为1.75g/kg/d。 20kg儿童用量为1.50g/kg/d。
家兔给药高、中、低剂量，按体表面积比值折算，分别为24.55g/kg/d，9.82g/kg/ d，4.91g/kg/d给药剂量按含生药量计算，相当于临床60kg人每天每公斤服用量的14.0倍 ，5.6倍，2.8倍，(相当于20kg儿童每天每公斤服用量的16.4倍，6.6倍，3.3倍)按10ml/ kg免重的体积溜胃给药。
大白鼠给药高、中、低剂量按体面积折算，分别为47.34g/kg/d，18.94g/kg/d， 9.47g/kg/d，给药剂量按含生药量计算，相当于临床60kg人每公斤日服用量的27倍、 10.8倍，5.4倍，(相当于20kg儿童每天每公斤用药量的31.6倍，12.6倍，6.3倍)按1ml/ 100g鼠重的体积灌胃给药。
小白鼠给药高、中、低剂量控体表面积折算分别为68.38g/kg/d，27.35g/kg/d， 13.68g/kg/d，给药剂量按含生药量计算，相当于临床60kg人每天每公斤用量的39.0倍， 15.6倍，7.8倍，(相当于20kg儿童每天每公斤用药量的45.6倍，18.2倍，9.1倍)按0.2ml/ 10g鼠重的体积灌胃给药。
受试动物：健康家兔，体重1.7？.5kg，雌雄不拘，购自齐河县家兔饲养专业产，大白 鼠Wistar种，雌雄兼用，体重150？80g；小白鼠昆明种体重12？4g，18？0g，25？0g雌雄兼用， 均购自山东省医学动物实验中心，合格证号：鲁动质：930101。
试验方法与结果
1.小儿柴桂退热口服液的解热作用
1.1对伤寒一副伤寒甲、乙三联菌苗致热家兔的解热作用
取上述家免70只，实验前一天下午和当天上午，分别用日本产电子测温计，预测肛温( 超过37℃或一日内体温波动＞0.5℃者剔除)取其平均值做为基础体温，逐只称重，经耳缘静 脉，注入伤寒一副伤寒甲、乙三联菌苗0.75ml/kg，1小时后测其升温程度，以＞0.8℃视为 合格，分成药物高、中、低剂量组和小儿热速清组，给药剂量分别为24.55g/kg/d， 9.82g/kg/d，4.91g/kg/d和9.82ml/kg/d按10ml/kg兔重的体积灌胃，空白组给等体 积的水灌胃，观察药后0.5h，1.0h，1.5h，2.0h，3.0h，4.0h，5.0h，6.0h复测肛温，与基 础体温比较，计算温差，并将结果进行组间统计学处理(见表1.1)。
表1.1，小儿柴桂退热口服液对三联菌苗致家兔发热的影响(n＝10，X±SD) 组别 基础体温 1小时升温 (℃) 给药后不同时间内温差 0.5h 1h 1.5h 空白组 37.93±0.16 1.55±0.48 1.97±0.49 2.26±0.48 2.75±0.55 高剂量组 (24.55g/kg/d) 37.96±0.36 1.59±0.40 1.52±0.38* 1.54±0.36*** 1.70±0.47*** 中剂量组 (9.82g/kg/d) 37.92±0.32 1.56±0.42 1.45±0.41 1.56±0.39*** 2.02±0.46** 低剂量组 (4.91g/kg/d) 38.02±0.20 1.51±0.20 1.53±0.25* 1.66±0.24*** 1.98±0.27*** 小儿热速清组 (9.82ml/kg/d) 38.02±0.15 1.57±0.40 1.56±0.23* 1.73±0.25** 2.07±0.30***
表1.1(续) 2h 3h 4h 5h 6h 2.55±0.46 1.84±0.41 1.52±0.34 1.25±0.30 1.22±0.21 2.07±0.46* 1.89±0.30 1.44±0.34 1.10±0.45 0.94±0.39 2.25±0.26 1.86±0.23 1.39±0.20 1.22±0.31 0.99±0.29 2.27±0.25 1.89±0.20 1.43±0.21 1.12±0.23 0.92±0.23** 2.23±0.18 1.85±0.18 1.38±0.28 1.11±0.20 0.93±0.18***
表1.1结果表明药物高、中、低剂量均于药后30分钟发挥解热作用，极显著地降低药后 1.5小时体温的升高，并明显拮抗发热高峰，以高剂量效果最佳，药后2小时与对照组比较有 显著性差异(p＜0.05)提示本药对三联菌苗致家兔发热有较好的治疗作用。
2.小儿柴挂退热口服液抗炎作用
2.1.对小鼠毛细血管通透性的影响
取25～30g小鼠65只，♀/♂不拘，随机分为药物高、中、低剂量组，分别给68.38g/ kg/d，27.35g/kg/d，13.68g/kg/d/小儿热速清组27.35ml/kg/d，按0.2ml/10g鼠 重灌胃给药，空白对照组给等体积水灌胃，连续三天，末次药后1小时，称重，尾v.iv0.5 ％伊文氏兰生理盐水液0.1ml/10g鼠重，5分钟后腹腔注射0.6％冰醋酸0.1ml/10g鼠重，20 分钟后处死，剖腹用5ml蒸馏水反复冲洗腹腔，冲洗液加0.1mol/L氨氯化钠0.1ml静置30分 钟，离心按陈氏法于590nm波长处，测定其吸收度，结果进行组间统计学处理(见表2.1)
表2.1，小儿柴桂退热口服液对小鼠毛细血管通透性的影响(n＝13) 组别 吸收度(A)值 (X±SD) 空白对照组 0.45±0.08 高剂量组68.38g/kg/d 0.19±0.03 中剂量组27.35g/kg/d 0.26±0.06 低剂量组13.68g/kg/d 0.28±0.09 热速清组27.35ml/kg/d 0.26±0.03
表2.1结果表明药物高、中、低剂量组皆可极显著地降低其吸收度与空白组比较有极显 著性差异(P＜0.001)，提示本药能降低毛细血管通透性，从而抑制急性炎症的早期渗出。
3.小儿柴桂退热口服液对小鼠的发汗作用
取18～20g小鼠，♀/♂不拘，共50只，随机分为五组，分组，给药剂量和时间均同2.1 ，按方法，小鼠周身涂抹2％碘酊，干后，再灌胃相对应的药物，并同时涂抹淀粉蓖麻油液 ，40分钟后按发汗评级办法，计数各小鼠发汗级别，结果进行组间统计学处理(见表3)。
表3，小儿柴桂退热口服液对小鼠的发汗作用(n＝10) 组别 吸收度(A)值 (X±SD) 空白对照组 1.40±1.17 高剂量组68.38g/kg/d 2.70±0.75 中剂量组27.35g/kg/d 2.30±0.82 低剂量组13.68g/kg/d 1.80±1.23 眠安宁组27.35ml/kg/d 2.40±1.07
表3.结果表明药物高剂量可明显促进小鼠的发汗作用，与空白对照组比较有显著性差 异(P＜0.05)。
4.小儿柴桂退热口服液的抗菌、抗病毒作用
4.1体外抑菌作用
取山东省卫生防疫站保存菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923，乙型链球菌ATCC 02410， 肺炎双球菌ATCC 01402，流感杆菌ATCC59601-3，分别接种各自适宜生长的平板上，37℃培 养24小时，接种血清内汤于37℃培养18小时，将培养液做原菌液将2g/ml的小儿柴桂退热口 服液做对倍稀释，试验药液1ml，然后向药液中分别滴加0.1ml菌液，37℃培养24小时，初步 观察试验结果，然后将试验液取出一菌环点种各种菌株适宜的平板，37℃培养18～24小时按 方法观察结果。评判结果表示：(+)表示有菌生长，(-)表示无菌生长(详见表4.1)
表4.1，小儿柴桂退热口服液的体外抑菌作用的观察 试验菌株 药物剂量(生药量g/ml) 阴性 对照 2g/ml 1g/ml 0.5g/ml 0.25g/ml 0.125g/ml 0.0625g/ml 金黄色葡萄球菌 - - - + + + + 乙型链球菌 - - - + + + + 肺炎双球菌 - - - - - + + 流感杆菌 - - - + + + +
4.2.体外对流感病霉的抑制试验
选用鸡胚半体内法，分别将甲型流感病毒A3/京防/32/92和乙型流感B/沪防/3/91 ，的病毒液与等量实验药液(2g/ml)和按对倍稀释后的药液混匀，接种于九日龄鸡胚羊膜腔 内，不蜡封孔，孵育72h后，收获液体，用血凝试验，测其血球凝集度，结果判定：凝血(+ )表示不能抑制病毒生长，凝血(-)表示能抑制病毒生长。(详见表4.2)
表4.2，小儿柴桂退热口服液的体外抗病毒作用 试验菌株 药物剂量(生药量g/ml) 病毒 阴性对照 病毒唑 0.05g/ml 2g/ml 1g/ml 0.5g/ml 0.25g/ml 金黄色葡萄球菌 - - - + + - 乙型链球菌 - - - + + -
试验结果发现：(1)2g/ml的小儿柴桂退热口服液对鸡胚毒性实验：48小时观察，鸡 胚生长良好，无明显鸡胚毒性作用。(2)小儿荣桂退热口服液含生药量为0.5g/ml，对甲型 流感病毒A3有抑制作用，含生药量为1g/ml的药物对乙型流感病毒B有抑制作用。
4.3对流感病毒甲、乙型感染小鼠肺重量的影响
取12～14g小鼠♂/♀不拘，共10只，每10只为一组，分成药物高、中、低剂量组，病 毒灵组和空白组，于感染前一天开始灌胃给药，小鼠乙醚浅麻，滴鼻感染流感病毒A3和B浓 度为15LD50的病毒液50ul，滴鼻后1小时，连续3天给药，感染后72小时，处死小鼠，剖取全 肺，精称肺重，计算肺指数值与对照组比较进行组间t检验(见表4.3)
表4.3，小儿柴桂退热口服液对流感病毒感染鼠肺重量的影响(n＝10，X±SD) 组别 剂量 (g/kg/d) 甲型流感病毒 A3性肺病变 乙型流感病毒 B性肺病变 肺指数值 抑制率(％) 肺指数值 抑制率(％) 病毒阴性对照组 1.30±0.18 1.43±0.19 高剂量组 68.38 0.89±0.18*** 39.23 0.98±0.14*** 31.47 中剂量组 27.35 0.94±0.21*** 35.38 1.12±0.16** 21.68 低剂量组 13.68 1.07±0.27 17.69 1.12±0.19* 13.99 ABOB组 0.039 0.85±0.21*** 34.62 0.89±0.23*** 37.76 正常对照组 0.75±0.10
表4.3结果表明：本药高剂量对甲、乙型流感病毒所致肺病变，有极显著的抑制作用， 与病毒阴性造模组相比有极显著差异(P＜0.001)，中剂量对甲型流感病毒所致肺病变有极显 著的抑制作用P＜0.001)，对乙型流感病毒有非常显著的抑制作用(P＜0.01)，低剂量对甲型 流感病毒所致肺病变抑制作用不明显，但对乙型、流感病毒所致肺病变有显著性差异 (P＜0.05)，提示本药有较好的体内抗病毒作用。
实施例：以下通过实施例将进一步说明本发明处方组成及制备工艺的可行性：
实施例1，口服液的制备：
处方组成：柴胡23kg、葛根23kg、黄芩10kg、桂枝7kg、浮萍7kg、白芍7kg、蝉蜕7kg
制备方法：
1)取桂枝、柴胡，加10倍量水，加热至70℃，温浸1小时，再蒸馏3小时，馏出液冷藏 12小时，分取上层油液，备用；蒸馏后的水液滤过，药渣再加4倍量水煎煮0.5小时，滤过， 滤液与蒸馏后水液合并，备用。
2)取葛根，照2000年版《中国药典》一部附录IO项下的渗漉法，用40％乙醇作溶剂，浸 渍24小时，渗漉，收集6倍量渗漉液，60℃下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度约1.28～ 1.30(60℃)。
3)取黄芩，布袋包煎，加水煎煮2次，每次加6倍量水，煎煮0.5小时，合并煎液、滤过 ，滤液在80～85℃加盐酸调pH1.5～2.0，保温1小时，静置24小时，滤过，沉淀物加6倍量水 搅溶，用40％氢氧化钠溶液调至中性，加等量乙醇，滤过，滤液用稀盐酸调pH至1.0，50℃ 保温0.5小时，静置24小时，滤过、沉淀用水洗至中性，得黄芩粗提物。
4)白芍、浮萍、蝉蜕加水煎煮2次，每次加8倍量水，提取0.5小时，合并煎液，滤过， 滤液与桂枝、柴胡水提液合并，浓缩至相对密度为1.05～1.07(50℃)，加乙醇使含醇量达 50％，冷藏24小时，滤过，60℃下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度约1.28～1.30(60 ℃)。
5)将步骤2)和步骤4)所得的浓缩液合并，加入步骤1)中挥发油和水液、步骤3)中 黄芩提取物，及甜菊素0.4％，调PH值6.5，灌装成口服液。
实施例2，颗粒剂的制备
处方组成：柴胡26kg、葛根26kg、黄芩12kg、桂枝9kg、浮萍9kg、白芍9kg、蝉蜕9kg
制备方法：
1)取桂枝、柴胡，加12倍量水，加热至80℃，温浸1小时，再蒸馏4小时，馏出液冷藏 12小时，分取上层油液，制成倍他环糊精包合物，备用；蒸馏后的水液滤过，药渣再加6倍 量水煎煮0.5小时，滤过，滤液与蒸馏后水液合并，备用。
2)取葛根，照2000年版《中国药典》一部附录IO项下的渗漉法，用50％乙醇作溶剂，浸 渍24小时后进行渗漉，收集8倍量渗漉液，减压回收乙醇(60-70℃-0.08Mpa)，并继续浓 缩至相对密度约1.25(60℃)。
3)取黄芩，布袋包煎，加水煎煮三次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，第二、三次各 加6倍量水，煎煮0.5小时，合并煎液、滤过，滤液在80～85℃加10％盐酸调pH1.5～2.0，保 温1小时，静置24小时，滤过，沉淀物加6倍量水搅溶，用40％氢氧化钠调pH7.0～7.5，加等 量乙醇，滤过，滤液用10％盐酸调pH至2.0，60℃保温30分钟，静置24小时，滤过、沉淀用水 洗至中性，得黄芩粗提物。
4)白芍、浮萍、蝉蜕加水煎煮二次，第一次加18倍量水，提取1小时，第二次加8倍量 水提取0.5小时，合并煎液，滤过，滤液与桂枝、柴胡水提液合并，浓缩至相对密度为1.07 左右(50℃)，加乙醇使含醇量达60％，冷藏24小时，滤过，减压回收乙醇(60-70℃ -0.08Mpa)，并继续浓缩至相对密度约1.25(60℃)。
5)将步骤2)和步骤4)所得的浓缩液合并，加入步骤1)中倍他环糊精包合物、步骤3 )中黄芩提取物及蔗糖、糊精适量，制成颗粒剂。
实施例3，片剂的制备：
处方组成：柴胡28kg、葛根28kg、黄芩14kg、桂枝10kg、浮萍10kg、白芍10kg、蝉蜕 10kg
制备方法：
1)取桂枝、柴胡，加14倍量水，加热至90℃，温浸2小时，再蒸馏5小时，馏出液冷藏 24小时，分取上层油液，制成倍他环糊精包合物，备用；蒸馏后的水液滤过，药渣再加8倍 量水煎煮1小时，滤过，滤液与蒸馏后水液合并，备用。
2)取葛根，照2000年版《中国药典》一部附录IO项下的渗漉法，用60％乙醇作溶剂，浸 渍～48小时，渗漉，收集10倍量渗漉液，70℃下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度约 1.20～1.23(60℃)。
3)取黄芩，布袋包煎，加水煎煮3次，每次加10倍量水，煎煮1.5小时，合并煎液、滤 过，滤液在80～85℃加盐酸调pH1.5～2.0，保温2小时，静置48小时，滤过，沉淀物加10倍 量水搅溶，用40％氢氧化钠溶液调至中性，加等量乙醇，滤过，滤液用10％盐酸调pH至1.0 ～2.0，70℃保温1小时，静置48小时，滤过、沉淀用水洗至中性，得黄芩粗提物。
4)白芍、浮萍、蝉蜕加水煎煮3次，每次加18倍量水，提取1.5小时，合并煎液，滤过 ，滤液与桂枝、柴胡水提液合并，浓缩至相对密度为1.07～1.10(50℃)，加乙醇使含醇量达 65％，冷藏48小时，滤过，70℃下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度约1.20～1.22(60 ℃)。
5)将步骤2)和步骤4)所得的浓缩液合并，加入步骤1)中倍他环糊精包合物、步骤3 )中黄芩提取物，及糊精适量，压制成片。