本申请是申请日为2001年3月5日，申请号为01806315.2，发 明名称为“基于环丙基稠合的吡咯烷二肽基肽酶IV抑制剂、它们的 制备方法及用途”的发明专利申请的分案申请。
本发明涉及基于环丙基-稠合的吡咯烷二肽基肽酶IV(DP-4)抑制 剂，和涉及单独使用这样的环丙基-稠合的吡咯烷，或与另一类型的 抗糖尿病药和/或其它类型的治疗药物组合，用于治疗糖尿病、尤其 是II型糖尿病，以及高血糖、X综合征、糖尿病并发症、高胰岛素 血症、肥胖症、动脉粥样硬化和相关疾病，以及各种免疫调节疾病 和慢性炎性肠道疾病的方法。
二肽基肽酶IV(DP-4)为一种膜结合非典型丝氨酸氨基二肽酶， 该酶位于多种组织(肠、肝、肺、肾)中以及循环的T-淋巴细胞(在那 里所述酶被称作CD-26)中。它担负体内某些内源肽(GLP-1(7-36)，胰 高血糖素)的代谢裂解并且体外已证实对多种其它的肽(GHRH、 NPY、GLP-2、VIP)具有蛋白水解活性。
GLP-1(7-36)为一种经小肠中的前胰高血糖素(proglucagon)的翻译 后加工衍生的29个氨基酸的肽。GLP-1(7-36)在体内具有包括刺激胰 岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、促进饱满感和减慢胃排空在内的 多种作用。根据它的生理学分布模式(profile)，预期GLP-1(7-36)在预 防和治疗II型糖尿病和潜在的肥胖症方面是有益的。为支持这个权 利要求，在糖尿病患者中外源给予GLP-1(7-36)(连续灌注)已证实在 这个患者人群中的有效性。遗憾地是，GLP-1(7-36)在体内迅速降解 且显示具有短的体内半衰期(t1/2≈1.5min)。根据遗传学繁殖的DP- 4KO小鼠的研究和使用选择性DP-4抑制剂的体内/体外研究，已显 示DP-4是体内GLP-1(7-36)的主要降解酶。通过DP-4对GLP-1(9-36) 的有效，可降解GLP-1(7-36)，据推测它可作为对GLP-1(7-36)的生理 学拮抗剂起作用。因此，体内抑制DP-4将增强GLP-1(7-36)的内源 性水平且减少它的拮抗剂GLP-1(9-36)的形成，由此可用来改善糖尿 病症状。
按照本发明，提供抑制DP-4并具有以下结构的基于环丙基-稠合 的吡咯烷化合物，并且包括它们的药学上可接受的盐，和它们的前 药酯和它们的所有立体异构体，
其中x为0或1且y为0或1(条件是
当y＝0时x＝1，和
当y＝1时x＝0)；
n为0或1；
X为H或CN(即氰基)；
R1、R2、R3和R4为相同或不同的并且独立选自H、烷基、链烯 基、炔基、环烷基、环烷基烷基、二环烷基、三环烷基、烷基环烷 基、羟基烷基、羟基烷基环烷基、羟基环烷基、羟基二环烷基、羟 基三环烷基、二环烷基烷基、烷硫基烷基、芳基烷硫基烷基、环烯 基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基烷基、环杂烷基和环杂烷基烷 基，所有这些基团通过可以利用的碳原子由1、2、3、4或5个选自 以下的基团任选取代，包括：氢、卤代基、烷基、多卤代烷基、烷 氧基、卤代烷氧基、多卤代烷氧基、烷氧基羰基、链烯基、炔基、 环烷基、环烷基烷基、多环烷基、杂芳基氨基、芳基氨基、环杂烷 基、环杂烷基烷基、羟基、羟基烷基、硝基、氰基、氨基、取代的 氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫羟基、烷硫基、烷基羰基、酰基、 烷氧基羰基、氨基羰基、炔基氨基羰基、烷基氨基羰基、链烯基氨 基羰基、烷基羰基氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、烷基磺酰 氨基、烷基氨基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、烷基磺酰基、氨基磺 酰基、烷基亚硫酰基、亚磺酰氨基或磺酰基；和
R1和R3可任选连接在一起以形成-(CR5R6)m-，其中m为2-6，且 R5和R6为相同或不同的并且独立选自羟基、烷氧基、氰基、H、烷 基、链烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、环烯基、芳基、芳基烷 基、杂芳基、杂芳基烷基、环杂烷基、卤代基、氨基、取代的氨基、 环杂烷基烷基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、 芳氧基羰基氨基、烷氧基羰基、芳氧基羰基或烷基氨基羰基氨基， 或R1和R4可任选连接在一起以形成-(CR7R8)p-，其中p为2-6，且R7和R8为相同或不同的并且独立选自羟基、烷氧基、氰基、H、烷基、 链烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、环烯基、芳基、芳基烷基、 杂芳基、杂芳基烷基、环杂烷基、卤代基、氨基、取代的氨基、环 杂烷基烷基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、芳 氧基羰基氨基、烷氧基羰基、芳氧基羰基或烷基氨基羰基氨基，或 者R1和R3任选与
连接在一起形成包含总数2-4个选自N、O、S、SO或SO2的杂原子 的5-7元环；
或者R1和R3任选与
连接在一起以形成4-8元环杂烷基环，其中环杂烷基环具有稠合于其 上的任选的芳基环或稠合于其上的任选的3-7元环烷基环。
因此，本发明的式I化合物包括以下结构
另外，按照本发明，提供用于治疗糖尿病、尤其是II型糖尿病， 以及受损的葡萄糖内环境稳定、受损的葡萄糖耐受性、不育症、多 囊卵巢综合征、生长障碍、虚弱、关节炎、移植术中的同种异体移 植排斥、自身免疫疾病(例如硬皮病和多发性硬化症)、各种免疫调节 疾病(例如红斑狼疮或牛皮癣)、AIDS、肠道疾病(例如引起坏死的肠 炎、微绒毛包涵体病或乳糜泻)、炎性肠道综合征、化学疗法诱发的 肠粘膜萎缩或损伤、神经性厌食症、骨质疏松症、X综合征、代谢 障碍综合征、糖尿病并发症、高胰岛素血症、肥胖症、动脉粥样硬 化和相关疾病、以及炎性肠道疾病(例如克郎氏病和溃疡性结肠炎)的 方法，其中给予需要治疗的病人治疗有效量的结构I的化合物(该化 合物抑制DP 4)。
在Johannsson J.Clin.Endocrinol.Metab.，82，727-734(1997)中详 细描述了集合称作为“X综合征”或代谢综合征的症状、疾病和病 症。
另外，按照本发明，提供用于治疗糖尿病和如在上文及在下文 中定义的相关疾病以及以上提及的任何其它的疾病的方法，其中治 疗有效量的结构I的化合物与一、二、三种或更多种其它类型的抗糖 尿病药(可用于治疗糖尿病和相关疾病)和/或一、二或三种或更多种其 它类型的治疗药物的组合被给予需要治疗的病人。
术语“糖尿病和相关疾病”指II型糖尿病、I型糖尿病、受损的 葡萄糖耐受性、肥胖症、高血糖、X综合征、代谢障碍综合征、糖 尿病并发症、代谢障碍综合征和高胰岛素血症。
集合称作为“糖尿病并发症”的症状、疾病和病症包括视网膜 病、神经病和肾病变以及其它已知的糖尿病并发症。
在此使用的术语“其它类型的治疗药物”指一种或多种抗糖尿 病药(除式I的DP4抑制剂以外)、一种或多种抗肥胖症药，和/或一 种或多种调节血脂药(包括抗动脉粥样硬化药)，和/或一种或多种用于 治疗不育症的药物，一种或多种用于治疗多囊卵巢综合征的药物， 一种或多种治疗生长障碍的药物，一种或多种用于治疗虚弱的药物、 一种或多种用于治疗关节炎的药物，一种或多种用于预防移植术中 的同种异体移植排斥的药物，一种或多种用于治疗自身免疫疾病的 药物，一种或多种抗AISD药物，一种或多种抗骨质疏松症药物，一 种或多种用于治疗免疫调节疾病的药物，一种或多种用于治疗慢性 炎性肠道疾病或综合征的药物和/或一种或多种用于治疗神经性厌食 症的药物。
在此使用的术语“调节血脂药”指的是降低LDL和/或升高HDL 和/或降低甘油三酯和/或降低总胆固醇和/或其它用于疗效性地治疗脂 质紊乱的已知机理的药物。
在本发明的以上方法中，结构I的化合物将以相对抗糖尿病药或 其它的类型的治疗药物(依它们的作用模式而定)的约0.01∶1-约 500∶1，优选约0.1∶1-约100∶1，更优选0.2∶1-约10∶1范围内的重量比 使用。
优选式I化合物，其中R3为H或烷基，R1为H，烷基、环烷基、 二环烷基、三环烷基、烷基环烷基、羟基烷基、羟基三环烷基、羟 基环烷基、羟基二环烷基、或羟基烷基环烷基，R2为H或烷基，n 为0，X为CN，x为0或1且y为0或1。
如上所述的优选的式I化合物为最优选的，其中X为
或
和/或其中稠合的环丙基定义为
因此，本发明的优选的式I化合物包括部分：
或
以下化合物为特别优选的：
其中R1为烷基、环烷基、二环烷基、三环烷基、烷基环烷基、羟基 烷基、羟基环烷基、羟基烷基环烷基、羟基二环烷基或羟基三环烷 基；
其中R1为烷基、环烷基、二环烷基、三环烷基、羟基二环烷基、羟 基三环烷基、烷基环烷基、羟基烷基、羟基环烷基或羟基烷基环烷 基以及以下基团：
和
通过以下反应流程中所示的方法及其描述，可生成结构I的化合 物。
按照反应流程1，通过在此或在文献(例如参见Sagnard等，Tet- Lett.，1995，36，第3148-3152页，Tverezovsky等，Tetrahedron，1997， 53，第14773-14792页，Hanessian等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1998，8， 第2123-2128页)中描述的方法，可生成化合物1，其中，如下所述， PG1为常见的胺保护基团例如Boc、Cbz或FMOC且X1为H或CO2R9。 通过常规方法(例如(1)当PG1为Boc时，用TFA或HCl，或者(2)当PG1为Cbz时，用H2/Pd/C、TMSI，或者(3)当PG1为(FMOC)时，用Et2NH)) 除去PG1基团，得到游离的胺2。使用标准肽偶合条件(例如 EDAC/HOAT、i-BuCOCOCl/TEA、PyBop/NMM)，胺2可与各种保 护氨基酸例如3(其中PG2可以是PG1保护基团中的任何一种)偶合， 得到相应的二肽4。除去胺保护基团PG2，得到其中X＝H的本发明 化合物Ia。
在其中X1＝CO2R9(其中R9为烷基或芳烷基例如甲基、乙基、叔 丁基或苄基)的情况下，在各种条件下，例如用在适宜的溶剂例如甲 醇、THF或二噁烷中的NaOH水溶液，可将酯水解以得到酸5。通 过活化酸基团(例如使用i-BuOCOCl/TEA或EDAC)，随后用在溶剂 例如二噁烷、乙醚或甲醇中的等量的NH3或氨水处理，可进行酸基 团向一级(primary)甲酰胺的转变，得到6。通过各种标准条件(例如 POCl3/吡啶/咪唑或氰尿酰氯/DMF或三氟乙酸酐、THF、吡啶)，可 将酰胺官能度转变为腈基而得到7。最后，与上述类似除去PG2保护 基团，得到本发明Ib化合物。
在不同的序列(流程2)中，可将其中X1为CO2R9的化合物1皂化 为酸，随后如以上描述的那样酰胺化，得到酰胺8。除去PG1基团随 后通过使肽偶合于3，得到Ib合成中的中间体化合物6。
或者，如上所述，可将在8中的甲酰胺基团转变为腈，得到化 合物9。使PG1脱除保护得到10，它可经历标准肽偶合条件，得到Ib 合成中的中间体7。通过氧化胺2(例如NCS)随后通过水解，接着经 氰化物处理，也可生成化合物10。可得到作为立体异构体的混合物 或单一异构体/非对映体的化合物10，它可经差向异构化(使用常规方 法)得到立体异构体的混合物。
流程1
a.PG1＝Boc，TFA或HCl；PG1＝Cbz，H2/Pd/C或TMSI；PG1＝FMOC， Et2NH b.EDAC，HOBT，DMF或i-BuOCOCl/TEA或PyBop，NMM c.PG2＝PG1，(参见a的条件)d.LiOH或NaOH MeOH或THF/H2O或二噁烷 e.i-BuOCOCl/NMM或i-BuOCOCl/TEA或EDAC，然后 在二噁烷中的NH3或Et2O f.POCl3，吡啶，咪唑或氰尿酰氯，DMF 或TFAA，THF，吡啶。
流程2
a.在MeOH中或在THF/H2O中的或在二噁烷的LiOH或NaOH b.i-BuOCOCl/NMM或i-BuOCOCl/TEA或EDAC，然后在二噁烷或Et2O中的NH3 c.PG1＝Boc，TFA或HCl；PG1＝Cbz，H2/Pd/C或TMSI；PG1＝FMOC，Et2NH d.EDAC，HOBT，DMF或i-BuOCOCl/TEA或PyBop， NMM e.POCl3，吡啶，咪唑或氰尿酰氯，DMF。
在同样的方法中，β-氨基酸例如
可与2、8的游离胺或10偶合，得到相应的酰胺，按照相同的化学 这些酰胺可转变为化合物Ia或Ib的β-氨基酸衍生物。
除非另外指明，在此使用的术语“低级烷基”、“烷基”或“alk” 单独或作为另一个基团的部分包括在正常的链上包含1-20个碳，优 选1-10个碳，更优选1-8个碳的直链和支链的烃，例如甲基、乙基、 丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚 基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基-戊基、壬基、癸基、十一 烷基、十二烷基，它们的各种支链异构体等，以及包括1-4个取代基 的此类基团，所述取代基为例如卤代基，例如F、Br、Cl或I或CF3、 烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳基(芳基)或二芳基、芳基烷基、芳 基烷氧基、链烯基、环烷基、环烷基烷基、环烷基烷氧基、氨基、 羟基、羟基烷基、酰基、杂芳基、杂芳氧基、杂芳基烷基、杂芳基 烷氧基、芳氧基烷基、烷硫基、芳基烷硫基、芳氧基芳基、烷基酰 氨基、链烷酰基氨基、芳基羰基氨基、硝基、氰基、硫羟基、卤代 烷基、三卤代烷基和/或烷硫基。
除非另外指明，在此使用的术语“环烷基”单独或作为另一个 基团的部分包括含有1-3个环的饱和的或部分不饱和的(包含1或2 个双键)环状烃基，包括单环烷基、二环烷基(或双环烷基)和三环烷 基(三环烷基)，所述环烷基含有形成环的总数3-20个碳，优选形成 环的3-10个碳，它们可稠合于1或2个如对芳基描述的芳族环，它 们包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸 基和环十二烷基、环己烯基、金刚烷基、
这些基团中的任何一个可由1-4个以下的取代基任选取代，包括：例 如卤素、烷基、烷氧基、羟基、芳基、芳氧基、芳基烷基、环烷基、 羟基烷基、烷基酰氨基、链烷酰基氨基、氧代、酰基、芳基羰基氨 基、氨基、硝基、氰基、硫羟基和/或烷硫基和/或对烷基的取代基中 的任何一个。
在此使用的术语“环烯基”单独或作为另一个基团的部分指的 是包含3-12个碳，优选5-10个碳和1或2个双键的环状烃类。例证 性说明的环烯基包括环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基、 环己二烯基和环庚二烯基，它们可如对环烷基定义的那样任选被取 代。
在此使用的术语“亚环烷基”指包括自由键的“环烷基”，因 此为连接基团，例如
等，并且可如以上对“环烷基”定义的那样任选被取代。
在此使用的术语“链烷酰基”单独或作为另一个基团的部分指 连接于羰基的烷基。
除非另外指明，在此使用的术语“低级链烯基”或“链烯基” 其本身或作为另一个基团的部分指的是在正常的链上具有2-20个 碳，优选2-12个碳，且更优选为1-8个碳的直链或支链基因，它们 在正常的链上包括1-6个双键，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、 2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-庚烯基、3- 庚烯基、4-庚烯基、3-辛烯基、3-壬烯基、4-癸烯基、3-十一烯基、4- 十二烯基、4，8，12-十四碳三烯基等，它们可由1-4个取代基任选取代， 即卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、链烯基、炔基、芳基、芳基烷 基、环烷基、氨基、羟基、杂芳基、环杂烷基、链烷酰基氨基、烷 基酰氨基、芳基羰基-氨基、硝基、氰基、硫羟基、烷硫基和/或在此 所述的烷基取代基中的任何一个。
除非另外指明，在此使用的术语“低级炔基”或“炔基”其本 身或作为另一个基团的部分指的是在正常的链上具有2-20个碳，优 选2-12个碳，且更优选为2-8个碳的直链或支链的基团，它们在正 常的链上包括1个叁键，例如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、4-戊 炔基、3-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚 炔基、3-辛炔基、3-壬炔基、4-癸炔基、3-十一炔基、4-十二炔基等， 并且它们可由1-4个取代基任选取代，即卤素、卤代烷基、烷基、烷 氧基、链烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、氨基、杂芳基、 环杂烷基、羟基、链烷酰基氨基、烷基酰氨基、芳基羰基氨基、硝 基、氰基、硫羟基和/或烷硫基，和/或在此所述的烷基取代基中的任 何一个。
术语“芳基链烯基”和“芳基炔基”作为单独使用或作为另一 个基团的部分指具有芳基取代基的如以上描述的链烯基和炔基。
当以上定义的烷基具有在两个不同的碳原子上连接其它基团的 单键时，它们称作“亚烷基”且可如以上对“烷基”定义的那样任 选被取代。
当如上定义的链烯基和如上定义的炔基分别具有在两个不同的 碳原子上连接的单键时，它们分别称作“亚链烯基”和“亚炔基”， 且可如以上对“链烯基”和“炔基”定义的那样任选被取代。
在此使用的术语“卤素”或“卤代基”单独或作为另一个基团 的部分指氯、溴、氟和碘以及CF3，其中氯或氟为优选。
术语“金属离子”指的是碱金属离子例如钠、钾或锂和碱土金 属离子例如镁和钙以及锌和铝。
除非另外指明，在此使用的术语“芳基”单独或作为另一个基 团的部分指的是在环部分(例如苯基或包括1-萘基和2-萘基在内的萘 基)包含6-10个碳的单环和双环芳族基团，并且可任选包括1-3个稠 合于碳环的环或杂环的环(例如芳基、环烷基、杂芳基或环杂烷基环， 例如
另外的环并且可通过可利用的碳原子由1、2或3个选自以下的基团 任选取代，包括：氢、卤代基、卤代烷基、烷基、卤代烷基、烷氧 基、卤代烷氧基、链烯基、三氟甲基、三氟甲氧基、炔基、环烷基 烷基、环杂烷基、环杂烷基烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳氧 基、芳氧基烷基、芳基烷氧基、芳硫基、芳基偶氮基、杂芳基烷基、 杂芳基链烯基、杂芳基杂芳基、杂芳氧基、羟基、硝基、氰基、氨 基，其中氨基包括1或2个取代基(它们为烷基、芳基或在定义中提 及的其它的芳基化合物中的任何一个)的取代的氨基、硫羟基、烷硫 基、芳硫基、杂芳硫基、芳硫基烷基、烷氧基芳硫基、烷基羰基、 芳基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、 烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳基亚 硫酰基、芳基亚硫酰基烷基、芳基磺酰氨基或芳基磺酰(arylsulfon)- 氨基羰基和/或在此所述的烷基取代基中的任何一个。
除非另外指明，在此使用的术语“低级烷氧基”、“烷氧基”、 “芳氧基”或“芳烷氧基”单独或作为另一个基团的部分包括连接 于氧原子的以上的烷基、芳烷基或芳基中的任何一个。
除非另外指明，在此使用的术语“取代的氨基”单独或作为另 一个基团的部分指的是由一或两个取代基取代的氨基，所述取代基 可为相同的或不同的，例如烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基 烷基、环杂烷基、环杂烷基烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、 羟基烷基、烷氧基烷基或硫代烷基。如以上所述的那样，这些取代 基可另外被R1基团或对R1的取代基中的任何一个取代。另外，氨基 取代基可与它们连接的氮原子一起形成1-吡咯烷基、1-哌啶基、1-氮 杂基、4-吗啉基、4-硫代吗啉基、1-哌嗪基、4-烷基-1-哌嗪基、4- 芳基烷基-1-哌嗪基、4-二芳基烷基-1-哌嗪基、1-吡咯烷基、1-哌啶基 或1-氮杂基，它们由烷基、烷氧基、烷硫基、卤代基、三氟甲基 或羟基任选取代。
除非另外指明，在此使用的术语“低级烷硫基”、“烷硫基”、 “芳硫基”或“芳烷硫基”单独或作为另一个基团的部分包括连接 于硫原子的以上的烷基、芳烷基或芳基中的任何一个。
除非另外指明，在此使用的术语“低级烷基氨基”、“烷基氨 基”“芳基氨基”或“芳基烷基氨基”单独或作为另一个基团的部 分包括连接于氮原子的以上的烷基、芳基或芳基烷基中的任何一个。
除非另外指明，在此使用的术语“酰基”其本身或作为另一个 基团的部分指的是连接于羰基
的有机基团；酰基的实例包括连接于羰基的R1基团中的任何一个， 例如链烷酰基、链烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、杂芳酰基、环烷酰 基、环杂烷酰基等。
除非另外指明，在此使用的术语“环杂烷基”单独或作为另一 个基团的部分指的是5-、6-或7-元饱和的或部分不饱和的环，它包 括1-2个杂原子例如氮、氧和/或硫，通过碳原子或杂原子，可能时， 任选通过连键(linker)(CH2)r(其中r为1、2或3)连接，例如：
等。以上基团可包括1-4个取代基，例如烷基、卤代基、氧代和/或 在此所述的烷基取代基中的任何一个。另外，环杂烷基环中的任何 一个能够稠合于环烷基、芳基、杂芳基或环杂烷基环。
除非另外指明，在此使用的术语“杂芳基”单独或作为另一个 基团的部分指的是5-或6-元芳族环，它包含1、2、3或4个杂原子 例如氮、氧或硫且这样的环稠合于芳基、环烷基、杂芳基或环杂烷 基环(例如苯并噻吩基、吲哚基)且包括可能的N-氧化物。杂芳基可 任选包括1-4个取代基，例如以上对烷基所述的取代基中的任何一 个。杂芳基的实例包括如下：
等。
在此使用的术语“环杂烷基烷基”单独或作为另一个基团的部 分指的是通过C子或杂原子连接于(CH2)r链的如上定义的环杂烷 基。
在此使用的术语“杂芳基烷基”或“杂芳基链烯基”单独或作 为另一个基团的部分指的是通过C原子或杂原子连接于如上定义的 -(CH2)r-链、亚烷基或亚链烯基的如上定义的杂芳基。
在此使用的术语“多卤代烷基”指的是包含2-9个，优选2-5个 卤取代基，例如F或Cl，优选为F，例如CF3CH2、CF3或CF3CF2CH2的如上定义的“烷基”。
在此使用的术语“多卤代烷氧基”指的是包含2-9个，优选2-5 个卤取代基，例如F或Cl，优选F，如CF3CH2O、CF3O或CF3CF2CH2O的如上定义的“烷氧基”或“烷基氧基”。
本发明的化合物的所有立体异构体意图以混合物的形式或以纯 的或基本上纯的形式存在。本发明化合物可在任何碳原子(包括任何 一个或多个R取代基)上具有不对称中心。结果，式I化合物可以以 对映体或非对映体的形式或以它们的混合物存在。制备方法可使用 外消旋体、对映体或非对映体作为起始原料。当制备非对映体或对 映体产物时，它们可通过常规方法，例如层析法或分级结晶分离。
当需要时，结构I的化合物可以与一种或多种其它类型的抗糖尿 病药(用于治疗糖尿病和相关疾病)和/或一种或多种其它类型的治疗药 物联合使用，它们可以相同的剂型或以分开的口服剂型口服给药或 经注射给药。
可以任选与式I的DP4抑制剂联合使用的其它类型的抗糖尿病 药可以是1、2、3种或更多种抗糖尿病药或抗高血糖药，包括胰岛 素促分泌素或胰岛素增敏剂，或其它的优选具有不同于DP4抑制作 用的作用机理的抗糖尿病药，且可包括双胍类、磺酰脲类、葡萄糖 苷酶抑制剂、PPAR γ激动剂，例如噻唑烷二酮类、SGLT2抑制剂、 PPAR α/γ双重激动剂、aP2抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、高级 糖基化末端(AGE)产物抑制剂，和/或氯茴苯酸类(meglitinides)，以及 胰岛素，和/或胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或其模拟物。
相信结构I的化合物与1、2、3种或更多种其它的抗糖尿病药的 联合使用产生的抗高血糖结果大于这些药物中的每一种药物单独使 用可能产生的结果并且大于这些药物产生的联合加和的抗高血糖效 果。
其它的抗糖尿病药可为口服抗高血糖药，优选为双胍例如二甲 双胍或苯乙双胍或它们的盐，优选为二甲双胍HCl。
当其它的抗糖尿病药为一种双胍时，结构I的化合物将以对双胍 的约0.01∶1-约100∶1，优选约0.1∶1-约5∶1范围内的重量比使用。
其它的抗糖尿病药也可优选为磺酰脲例如格列本脲(也称作优降 糖)、格列美脲(在U.S.专利号4,379,785中公开)、格列吡嗪、格列齐 特或氯磺丙脲、其它已知的磺酰脲或其它的作用于β-细胞的ATP依 赖的通道的抗高血糖药，其中格列本脲和格列吡嗪为优选，它们可 以相同或以分开的口服剂型给药。
结构I的化合物将以对磺酰脲的约0.01∶1-约100∶1，优选约0.05∶1- 约5∶1范围内的重量比使用。
口服抗糖尿病药也可为葡萄糖苷酶抑制剂，例如阿卡波糖(公开 于U.S.专利号4,904,769中)或米格列醇(公开于U.S.专利号4,639,436 中)，它们可以以相同或分开的口服剂型给药。
结构I的化合物将以对葡萄糖苷酶抑制剂的约0.01∶1-约100∶1， 优选约0.2∶1-约50∶1范围内的重量比使用。
结构I的化合物可以与PPAR γ激动剂，例如噻唑烷二酮口服 抗糖尿病药或其它的胰岛素增敏剂(它们在NIDDM患者体内具有胰 岛素敏感性作用)如曲格列酮(Warner-Lambert的Rezulin，在U.S.专 利号4,572,912中公开)、罗格列酮(SKB)、吡格列酮(Takeda)、Mitsubishi 的MCC-555(在U.S.专利号5,594,016中公开)、Gxao-Wellcome的 GL-262570、恩格列酮(CP-68722，Pfizer)或达格列酮(CP-86325， Pfizer)、isaglitazone(MIT/J&J)、JTT-501(JPNT/P&U)、L-895645 (Merck)、R-119702(Sankyo/WL)、NN-2344(Dr.Reddy/NN)或YM-440 (Yamanouchi)，优选为罗格列酮和吡格列酮联合使用。
结构I的化合物将以对噻唑烷二酮的约0.01∶1-约100∶1，优选约 0.1∶1-约10∶1范围内的量的重量比使用。
磺酰脲和噻唑烷二酮可以以少于约150mg的量的口服抗糖尿病 药与结构I的化合物掺合在单一片剂中。
结构I的化合物也可与抗高血糖药，例如胰岛素或与胰高血糖素 样肽-1(GLP-1)例如GLP-1(1-36)酰胺、GLP-1(7-36)酰胺、GLP-1(7- 37)(如Habener在U.S.专利号5,614,492中公开的，其公开通过引用 结合到本文中)、或GLP-1模拟物例如AC2993或Exendin-4(Amylin)， 以及LY-315902或LY-307167(Lilly)和NN2211(Novo-Nordisk)联合 使用，它们可通过注射、鼻内或经皮或口腔装置给药。
当存在时，可以以如上描述的制剂和以如在医师诊疗手册 (Physician’s Desk Reference，PDR)中指明的量和剂量使用二甲双胍、 磺酰脲例如格列本脲、格列美脲、glipyride、格列吡嗪、氯磺丙脲和 格列齐特和葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖或米格列醇或胰岛素(注射、 肺、颊或口服)。
当存在时，二甲双胍或它的盐可以以每天约500-约2000mg范 围内的量使用，它可以单次剂量或以每天1-4次的分剂量给药。
当存在时，噻唑烷二酮抗糖尿病药可以以约0.01-约2000mg/天 范围内的量使用，它可以以单次剂量或以每天1-4次的分剂量给药。
当存在时，胰岛素可以如在医师诊疗手册(Physician’s Desk Reference)中指明的制剂、量和剂量使用。
当存在时，如在U.S.专利号5,346,701(TheraTech)、5,614,492和 5,631,224中描述的那样，GLP-1肽可以口腔颊含制剂、经鼻给药(例 如吸入喷雾)或非肠道给药，该文献通过引用结合到本文中。
其它的抗糖尿病药也可为PPAR α/γ双重激动剂，例如AR- HO39242(Astra/Zeneca)、GW-409544(G-axo-Wellcome)、KRP297 (Kyorin Merck)以及那些由Murakami等“一种新的胰岛素增敏剂作 为过氧化物酶体增殖激活受体α(PPAR α)和PPAR γ的复合配体 (Coligand)起作用。在PPAR α激活的Zucker脂肪大鼠的肝中异常脂 质代谢的作用(A Novel Insulin Sensitizer Acts As a Coligand for Peroxisome Proliferation-Activated Receptor Alpha(PPAR α)and PPAR γ.Effect on PPAR α Activation on Abnormal Lipid Metabolism in Liver of Zucker Fatty Rats)”，Diabetes 47，1841-1847(1998)，和在 2000年9月18日(代理人档案LA29NP)递交的U.S.申请系列号 09/664,598中公开的，该文献的公开内容通过引用结合到本文中，使 用如在此所述的剂量，指定为优选的化合物优选用于本文中。
其它的抗糖尿病药可为例如在2000年10月4日(代理人档案 LA49NP)递交的U.S.申请系列号09/679,027中公开的SGLT2抑制剂， 该文献通过引用结合到本文中，使用如在此所述的剂量。在以上申 请书中指定为优选的化合物为优选的。
可以任选与式I的DP4抑制剂联合使用的其它的抗糖尿病药可 为例如在1999年9月7日递交的U.S.申请系列号09/391,053和在2000 年3月6日(代理人档案LA27NP)递交的U.S.申请系列号09/519,079 中公开的aP2抑制剂，该文献通过引用结合到本文中，使用如在此 所述的剂量。在以上申请书中指定为优选的化合物为优选的。
可以任选与式I的DP4抑制剂联合使用的其它的抗糖尿病药可 为例如在WO 96/39384、WO 96/39385、EP 978279、WO 2000/47206、 WO 99/43663和U.S.专利号5,952,322和5,998/463、WO 99/26659和 EP 1041068中公开的。
可以任选与本发明的式I化合物联合使用的氯茴苯酸类可为瑞格 列奈、那格列奈(Novartis)或KAD1229(PF/Kissei)，其中瑞格列奈为 优选。
式I的DP4抑制剂将以对氯茴苯酸类、PPAR γ激动剂、PPAR α /γ双重激动剂、SGLT2抑制剂、aP2抑制剂或糖原磷酸化酶抑制剂 的约0.01∶1-约100∶1，优选约0.1∶1-约10∶1范围内的重量比使用。
可以任选与本发明的式I化合物联合使用的降血脂药或调节血脂 药可包括1、2、3种或更多种MTP抑制剂、HMG CoA还原酶抑制 剂、角鲨烯合成酶抑制剂、苯氧乙酸(fibric acid)衍生物、ACAT抑制 剂、脂氧合酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂、回肠Na+/胆汁酸协同转 运蛋白抑制剂、LDL受体活性正调节剂、ATP柠檬酸裂合酶抑制剂、 胆固醇酯转移蛋白抑制剂、胆汁酸螯合剂和/或烟酸和它们的衍生物。
在此使用的MTP抑制剂包括在U.S.专利号5,595,872、U.S.专利 号5,739,135、U.S.专利号5,712,279、U.S.专利号5,760,246、U.S.专 利号5,827,875、U.S.专利号5,885,983和1998年10月20日呈交的 U.S.申请系列号09/175,180，现在为U.S.专利号5,962,440中公开的 MTP抑制剂。在以上的专利和申请中的每一个公开的优选MTP抑制 剂中的每一种为优选的。
以上所有的U.S.专利和申请通过引用结合到本文中。
根据本发明使用的最优选MTP抑制剂包括在U.S.专利号 5,739,135和5,712,279，和U.S.专利号5,760,246中叙述的优选MTP 抑制剂以及implitapide(Bayer)。
最优选MTP抑制剂为9-[4-[4-[[2-(2，2，2-三氟乙氧基)苯甲酰基]氨 基]-1-哌啶基]丁基]-N-(2，2，2-三氟乙基)-9H-芴-9-甲酰胺
降血脂药物可为HMG CoA还原酶抑制剂，它包括(但不限于)美 伐他汀和如在U.S.专利号3,983,140中公开的相关化合物、洛伐他汀 (美降脂)和如在U.S.专利号4,231,938中公开的相关化合物、普伐他 汀和如在U.S.专利号4,346,227中公开的相关化合物、辛伐他汀和如 在U.S.专利号4,448,784和4,450,171中公开的相关化合物。可在此 使用的其它的HMG CoA还原酶抑制剂包括(但不限于)在U.S.专利号 5,354,772中公开的氟伐他汀、在U.S.专利号5,006,530和5,177,080 中公开的西立伐他汀、在U.S.专利号4,681,893、5,273,995、5,385,929 和5,686,104中公开的阿托伐他汀、在U.S.专利号5,011,930中公开 的atavastatin(Nissan/Sankyo’s的尼伐他汀(NK-104))、在U.S.专利号 5,260,440中公开的Shionogi-Astra/Zeneca的visastatin(ZD-4522)。
在此所用的角鲨烯合成酶抑制剂包括(但不限于)在U.S.专利号 5,172,396中公开的α-膦酰基-磺酸酯、那些由Biller等，J.Med.Chem.， 1988，第31卷，第10期，第1869-1871页公开的，包括类异戊二烯(氧 膦基-甲基)膦酸酯以及例如在U.S.专利号4,871,721和4,924,024和在 Biller，S.A.Neuenschwander，K.，Ponpipom，M.M.和Poulter，C.D.， Current Pharmaceutical Design，2，1-40(1996)中公开的其它已知的角鲨 烯合成酶抑制剂，。
另外，适于在此使用的其它的角鲨烯合成酶抑制剂包括由P.Ortiz de Montellano等，J.Med.Chem.，1977， 20，243-249公开的类萜焦膦酸 酯、由Corey和Volante，J.Am.Chem.Soc.，1976，98，1291-1293公开 的法呢基二磷酸酯类似物A和前角鲨烯(presqualene)焦磷酸酯(PSQ- PP)类似物、由McClard，R.W.等，J.A.C.S.，1987， 109，5544报道的氧 膦基膦酸酯和由Capson，T.L.，PhD dissertation，1987年7月，Dept.Med. Chem.U of Utah，Abstract，Table of Contents，第16，17，40-43，48-51 页，概述报道的环丙烷。
适于在此使用的其它的降血脂药物包括(但不限于)苯氧乙酸类衍 生物，例如非诺贝特、吉非贝齐、氯贝丁酯、苯扎贝特、环丙贝特、 克利贝特等、丙丁酚，及如在U.S.专利号3,674,836中公开的相关化 合物，丙丁酚和吉非贝齐为优选，胆酸螯合剂例如考来烯胺、考来 替泊和DEAE-Sephadex(Secholex，Policexide)以及lipostabil(Rhone- Poulenc)、Eisai E-5050(N-取代的乙醇胺衍生物)、伊马昔尔(HOE- 402)、奥利司他(tetrahydrolipstatin)(THL)、istigmastanyl磷酸胆碱 (istigmastanylphosphorylcholine)(SPC，Roche)、氨基环糊精 (aminocyclodextrin)(Tanabe，Seiyoku)、Ajinomoto AJ-814(甘菊环衍生 物)、亚甲油酰胺(melinamide)(Sumitomo)、Sandoz 58-035、American Cyanamid CL-277,082和CL-283,546(二取代的脲衍生物)、烟酸、阿 西莫司、阿西呋喃、新霉素、对氨基水杨酸、阿司匹林、例如在U.S. 专利号4,759,923中公开的聚(二烯丙基甲基胺)衍生物、季铵聚(氯化 二烯丙基二甲基铵)和例如在U.S.专利号4,027,009中公开的紫罗烯， 和其它的已知的降血浆胆固醇药。
其它的降血脂药物可为例如在Drugs of the Future 24，9-15(1999) 中公开的ACAT抑制剂(Avasimibe)；“ACAT抑制剂Cl-1011在预 防和减少仓鼠主动脉脂肪纹面积中是有效的(The ACAT inhibitor，Cl- 1011 is effective in the prevention and regression of aortic fatty streak area in hamsters)”，Nicolosi等，Atherosclerosis(Shannon，Irel).(1998)， 137(1)，77-85；“FCE 27677的药理学分布：一种具有通过选择性抑 制含肝分泌的ApoB100的脂蛋白介导的有效降血脂活性的新的 ACAT抑制剂(The Pharmacological profile of FCE 27677：a novel ACAT inhibitor with potent hypolipidemic activity mediated by selective suppression of the hepatic secretion of ApoB 100-containing lipoprotein)”，Ghiselli，Giancarlo，Cardiovasc.Drug Rev.(1998)，16(1)， 16-30；“RP 73163：一种生物可利用的烷基亚硫酰基-二苯基咪唑 ACAT抑制剂(RP 73163：a bioavailable alkylsulfinyl-diphenylimidazole ACAT inhibitor)”，Smith，C.，等，Bioorg.Med.Chem.Lett.(1996)，6(1)， 47-50；“ACAT抑制剂：在实验动物中降血脂和抗动脉粥样硬化活 性的生理学机制(ACAT inhibitors：physiologic mechanism for hypolipidemic and anti-atherosclerotic activities in experimental animals)”，Krause等编辑：Ruffolo，Robert R.，Jr.；Hollinger，Mannfred A.， 炎症：介质途径(Inflammation：Mediators Pathways)(1995)，173-98， Publisher：CRC，Boca Raton，Fla.；“ACAT抑制剂：有效的抗动脉粥 样硬化药”，Sliskovic等，Curr.Med.Chem.(1994)，1(3)，204-25；“酰 基-CoA抑制剂：作为降胆固醇药的胆固醇O-酰基转移酶(ACAT)”。 6.具有调节脂质活性的第一种水溶性ACAT抑制剂。酰基-CoA抑 制剂：胆固醇酰基转移酶(ACAT)。7.“具有增强的降胆固醇活性的 一系列取代的N-苯基-N’-[(1-苯基环戊基)甲基]脲的开发”，Stout等， Chemtracts：Org.Chem.(1995)，8(6)，359-62，或TS-962(Taisho Pharmaceutical Co.Ltd)。
降血脂药物可为LD2受体活性的正调节剂，例如MD-700(Taisho Pharmaceutical Co.Ltd)和LY29 5427(Eli Lilly)。
降血脂药物可为胆固醇吸收抑制剂，优选为Schering-Plough的 SCH48461以及在Atherosclerosis 115，45-63(1995)和J.Med.Chem.41， 973(1998)中公开的那些胆固醇吸收抑制剂。
降血脂药物可为例如在Drugs of the Future，24，425-430(1999)中 公开的回肠Na+/胆汁酸协同转运蛋白抑制剂。
调节血脂药可为胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂，例如Pfizer 的CP 529,414(WO/0038722和EP 818448)和Pharmacia的SC-744和 SC-795。
可以与本发明组合使用的ATP柠檬酸裂合酶抑制剂可包括例如 在U.S.专利号5,447,954中公开的那些ATP柠檬酸裂合酶抑制剂。
优选的降血脂药物为普伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐 他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、atavastatin和ZD-4522。
以上提及的U.S.专利通过引用结合到本文中。所使用的量和剂 量应在医师诊疗手册(Physician’s Desk Reference)和/或在上述的专利 中指明。
本发明的式I化合物应以对降血脂药物(已存在)的约500∶1-约 1∶500，优选约100∶1-约1∶100范围内的重量比使用。
所给予的剂量必须根据患者的年龄、体重和病情、以及给药途 径、剂型和治疗方案以及所需的结果仔细调整。
降血脂药物的剂量和制剂应在以上讨论的多种专利和申请书中 公开。
当适用时，所使用的其它降血脂药物的剂量和制剂应在最新版 的医师诊疗手册(Physician’s Desk Reference)中阐述。
对于口服给药，以介于约0.01mg/kg-约500mg，优选约0.1mg- 约100mg范围内的量使用MTP抑制剂，每天1-4次，可得到满意的 结果。
优选的口服剂型，例如片剂或胶囊剂，应包含约1-约500mg， 优选约2-约400mg且更优选约5-约250mg的量的MTP抑制剂，每 天1-4次。
对于口服给药，如在医师诊疗手册(Physician’s Desk Reference)中 指明的那样，例如在介于约1-约2000mg且优选约4-约200mg范围 内的量的剂量下，使用HMG CoA还原酶抑制剂，例如普伐他汀、 洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀或西立伐他汀，可得 到满意的结果。
可以以介于约10mg-约2000mg且优选约25mg-约200mg范围 内的量的剂量下使用角鲨烯合成酶抑制剂。
优选的口服剂型，例如片剂或胶囊剂，应包含约0.1-约100mg， 优选约5-约80mg且更优选约10-约40mg的量的HMG CoA还原酶 抑制剂。
优选的口服剂型，例如片剂或胶囊剂，应包含约10-约500mg， 优选约25-约200mg的量的角鲨烯合成酶抑制剂。
其它的降血脂药物也可为脂氧合酶抑制剂，包括15-脂氧合酶 (15-LO)抑制剂例如在WO 97/12615中公开的苯并咪唑衍生物、如在 WO 97/12613中公开的15-LO抑制剂、如在WO 96/38144中公开的 异噻唑酮、以及由Sendobry等“用缺乏明显抗氧化剂性质的高选择 性15-脂氧合酶抑制剂对兔体内饮食诱导的动脉粥样硬化的弱化作用 (Attenuation of diet-induced atherosclerosis in rabbits with a highly selective 15-lipoxygenase inhibitor lacking significant antioxidant properties)”，Brit.J.Pharmacology(1997)120，1199-1206和Cornicelli 等，“15-脂氧合酶和它的抑制作用：一种用于血管疾病新的靶向治 疗(15-lipoxygenase and its Inhibition：A Novel Therapeutic Target for Vascular Disease”，Current Pharmaceutical Design，1999，5，11-20公开 的15-LO抑制剂。
在相同的时间下，可以以相同的口服剂型一起或以分开的口服 剂型使用式I化合物和降血脂药物。
以上描述的组合物可以以如上所述的剂型以单次剂量或每天1-4 次的分剂量给药。开始时，给予患者低的剂量组合，随后逐渐加大 到高剂量组合可能是明智的。
优选的降血脂药物为普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀、阿托伐 他汀、氟伐他汀或西立伐他汀。
可以任选与式I的DP4抑制剂一起使用的其它类型的治疗药物 可为1、2、3种或更多种抗肥胖症药物，包括β3肾上腺素能激动剂、 脂酶抑制剂、5-羟色胺(和多巴胺)重摄取抑制剂、甲状腺受体β药物、 食欲抑制剂和/或脂肪酸氧化作用正调节剂。
可以任选与式I化合物联合使用的β3肾上腺素能激动剂可为 AJ9677(Takeda/Dainippon)、L750355(Merck)或CP331648(Pfizer)或 如在U.S.专利号5,541,204、5,770,615、5,491,134、5,776,983和5,488,064 中公开的其它已知的β3激动剂,其中AJ9677、L750355和CP331648 为优选。
可以任选与式I化合物联合使用的脂酶抑制剂可为奥利司他或 ATL-962(Alizyme)，优选奥利司他。
可以任选与式I化合物联合使用的5-羟色胺(和多巴胺)重摄取抑 制剂可为西布曲明、托吡酯(Johnson & Johnson)或阿索开(Axokine) (Regeneron)，其中西布曲明或托吡酯为优选。
可以任选与式I化合物联合使用的甲状腺β受体化合物可为如在 WO 97/21993(U.Cal SF)、WO 99/00353(KaroBio)和GB 98/284425 (KaroBio)中公开的甲状腺受体配体，其中KaroBio申请的化合物为 优选。
可以任选与式I化合物联合使用的食欲抑制剂可为右苯丙胺、芬 特明、苯丙醇胺或马吲哚，其中右苯丙胺为优选。
可以任选与式I化合物联合使用的脂肪酸氧化作用正调节剂可以 为famoxin(Genset)。
上述各种抗肥胖症药物可以以本领域通常已知的或在PDR中的 剂量和治疗方案与式I化合物以相同的剂型使用或以不同的剂型使 用。
可以任选与本发明的DP4抑制剂联合使用的不育症药物可为1、 2种或更多种柠檬酸氯米芬(Clomid，Aventis)、甲磺酸溴隐亭 (Parlodel，Novartis)、LHRH类似物、亮丙瑞林(TAP Pharm.)、达那 唑、Danocrine(Sanofi)、孕激素或糖皮质激素，它们可以以在PDR 中指定的量使用。
可以任选与本发明的DP4抑制剂联合使用的用于多囊卵巢综合 征的药物可为1、2或更多种释放促性腺激素的激素(GnRH)、亮丙瑞 林(Lupron)、Clomid、Parlodel、口服避孕药或胰岛素增敏剂例 如PPAR激动剂、或用于这样用途的其它的常规药物，它们可以以 在PDR中指定的量使用。
可以任选与本发明的DP4抑制剂联合使用的治疗生长障碍和/或 虚弱的药物可为1、2或更多种生长激素或生长激素促分泌剂例如 MK-677(Merck)、CP-424391(Pfizer)和在2000年2月18日提交的U.S. 系列号09/506749中公开的化合物(代理人档案LA26)以及选择性雄 激素受体调节剂(SARMs)，它通过引用结合到本文中，当适用时，它 们可以以在PDR中指定的量使用。
可以任选与本发明的DP4抑制剂联合使用的治疗关节炎的药物 可为1、2或更多种阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸钠、萘 普生、萘普酮(Relafen，SmithKline Beecham)、托美汀钠(Tolectin， Ortho-McNeil)、吡罗昔康(Feldene，Pfizer)、酮咯酸三甲胺(Toradol， Roche)、塞来昔布(Celebrex，Searle)、罗非昔布(Vioxx，Merck)等， 它们可以以在PDR中指定的量使用。
用于预防移植术中的同种异体移植排斥的常规药物例如环孢菌 素、山地明(Novartis)、硫唑嘌呤、Immuran(Faro)或甲氨蝶呤可以与 本发明的DP4抑制剂任选联合使用，它们可以以在PDR中指定的量 使用。
用于治疗自身免疫疾病例如多发性硬化症和免疫调节疾病例如 红斑狼疮、牛皮癣的常规药物，例如硫唑嘌呤、Immuran、环磷酰胺、 NSAIDS例如布洛芬、COX 2抑制剂例如Vioxx和Celebrex、糖皮质 激素和羟氯喹，可以与本发明的DP4抑制剂任选联合使用，它们可 以以在PDR中指定的量使用。
可以与本发明的DP4抑制剂任选联合使用的AIDS药物可为非 核苷逆转录酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和/或AIDS 辅助抗感染药，并且可为1、2或更多种屈大麻酚(Marinol，Roxane Labs)、去羟肌苷(Videx，Bristol-Myers Squibb)、乙酸甲地孕酮 (Megace，Bristol-Myers Squibb)、司他夫定(Zerit，Bristol-Myers Squibb)、甲磺酸地拉韦定(Rescriptor，Pharmacia)、拉米夫定/齐多夫 定(CombivirTM，Glaxo)、拉米夫定(EpivirTM，Glaxo)、扎西他滨(Hivid， Roche)、齐多夫定(Retrovir，Glaxo)、英地那韦硫酸盐(Crixivan， Merck)、沙喹那韦(FortovaseTM，Roche)、甲磺酸沙喹那韦(Invirase， Roche)、利托那韦(Norvir，Abbott)、奈非那韦(Viracept，Agouron)。
以上抗AIDS药可以以在PDR中指定的量使用。
可以与本发明的DP4抑制剂任选联合使用的治疗炎性肠道疾病 或综合征的药物可为1、2种或更多种柳氮磺吡啶、水杨酸盐、美沙 拉秦(Asacol，P&G)或Zelmac(Bristol-Myers Squibb)，它们可以以 在PDR中或本领域中已知的指定的量使用。
可以与本发明的DP4抑制剂任选联合使用的治疗骨质疏松症的 药物可为1、2或更多种阿仑膦酸钠(Fosamax，Merck，替鲁膦酸 (Skelid，Sanofi)，依替膦酸二钠(Didronel，P&G)，雷洛昔芬HCl (Evista，Lilly)，它们可以以在PDR中指定的量使用。
在进行本发明的方法中，将使用与药用媒介物或稀释剂一起的 包含结构I的化合物、含有或不含有另一种抗糖尿病药和/或其它类 型的治疗药物的药用组合物。使用常规固体或液体媒介物或稀释剂 和适于所需给药模式的类型的药用添加剂，可配制药用组合物。通 过口服途径，例如以片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂的形式，可将化 合物给予包括人、猴、犬等在内的哺乳动物类，或者可通过非肠道 途径，以注射制剂的形式给予所述化合物。成人剂量优选介于每天 10-1,000mg之间，它能够以单次剂量或以每天1-4次的分剂量形式 给药。
口服给予的普通胶囊剂包含结构I的化合物(250mg)、乳糖(75mg) 和硬脂酸镁(15mg)。使混合物通过60目筛并且包装在1号明胶胶囊 中。
通过将250mg的结构I的化合物无菌放入到小瓶中，无菌冷冻 干燥并密封，可生产注射制剂。为使用，使小瓶的内容物与2mL生 理盐水混合，以制备注射制剂。
通过使用测量DP4抑制作用的有效性的体外试验系统，可测定 本发明化合物的DP4抑制剂活性。通过下述方法，可测定本发明的 DP4抑制剂的抑制常数(Ki值)。
猪二肽基肽酶IV的纯化
如先前(1)描述的那样，稍作几处修改，以纯化猪酶。由15-20 只动物得到肾，切开皮质并于-80℃下冷冻。在Waring粘合机上于12 L的0.25M蔗糖中，将冷冻的组织(2000-2500g)匀浆化。然后使匀 浆于37℃下放置18小时，以便利于从细胞膜裂解DP-4。裂解步骤 后，于4℃通过以7000Xg离心20min使匀浆澄清，收集上清液。 将固体硫酸铵加至60％饱和度，通过在10,000Xg下离心收集沉淀并 且丢弃。向上清液加入另外的硫酸铵至80％饱和度，收集80％的沉 淀并使之在20mM Na2HPO4(pH7.4)中溶解。
在对20mM Na2HPO4(pH7.4)透析后，通过在10,000Xg下离心 使制剂澄清。然后将澄清的制剂上样到在相同的缓冲液中平衡的300 mL的ConA琼脂糖凝胶上。用缓冲液洗涤至常数A280后，用5％(w/v) 的甲基α-D-吡喃甘露糖苷洗脱柱。合并活性部分，浓缩，对5mM 乙酸钠(pH5.0)透析。然后使透析的物料流过在相同的缓冲液中平衡 后的100mL的Pharmacia Resource S柱。收集流过的物料，其中包 含大多数酶活性。再次浓缩活性物料并透析到20mM Na2HPO4(pH7.4) 中。最后，在Pharmacia S-200凝胶过滤柱上将浓缩的酶层析以除去 低分子量的污染物。通过减少SDS-PAGE，分析柱流分的纯度，合 并最纯的流分，浓缩。于-80℃将纯化的酶保存在20％的甘油中。
猪二肽基肽酶IV的试验
在稳态条件下，如先前描述的那样(2)用gly-pro-对-硝基N-酰基 苯胺作为底物，并作以下修改，对酶进行测定。在最终体积100μl 中，反应液包含100mM Aces、52mM TRIS、52mM乙醇胺、500μ M gly-pro-对-硝基N-酰基苯胺、0.2％ DMSO和于25℃的4.5nM酶(pH 7.4)。为单次试验，将10μM的受试化合物、缓冲液、化合物和酶 加入到96孔微滴定板上的孔中，并于室温下孵育5分钟。通过加入 底物开始反应。在405nM下，使用Molecular Devices Tmax板读数 器，每9秒读取一次，测量对-硝基苯胺的连续产生15min。在每一 个进度曲线(progress curve)的线性部分得到对-硝基苯胺产生的线性速 率。在每一个实验开始时，得到对-硝基苯胺吸收度的标准曲线，从 标准曲线对酶催化的对-硝基苯胺产生进行定量。选择给出大于50％ 抑制作用的化合物用于进一步的分析。
为分析阳性化合物，将稳态动力学抑制常数作为底物和抑制剂 浓度两者的函数来测定。在60μM-3600μM的gly-pro-对-硝基N- 酰基苯胺的浓度下得到底物饱和曲线。在抑制剂存在下，还得到另 外的饱和曲线。重复三次测定的包含11种底物和7种抑制剂浓度的 竞争抑制实验通过板进行。对于具有Kis小于20nM的紧密结合的抑 制剂，酶浓度减至0.5nM而反应时间增至120min。将由三块板合并 的数据集拟合到合适的竞争性、非竞争性或无竞争性抑制作用的方 程式中。
(1)Rahfeld，J.Schutkowski，M.，Faust，J.，Neubert.，Barth，A.和 Heins，J.(1991)Biol.Chem.Hoppe-Seyler，372，313-318。
(2)Nagatsu，T.，Hino，M.，Fuyamada，H.，Hayakawa，T.，Sakakibara， S.，Nakagawa，Y.和Takemoto，T.(1976)Anal.Biochem.，74，466-476。
在实施例和在本文其它地方使用以下缩写：
Ph＝苯基
Bn＝苄基
i-Bu＝异丁基
Me＝甲基
Et＝乙基
Pr＝丙基
Bu＝丁基
TMS＝三甲基甲硅烷基
FMOC＝芴基甲氧基羰基
Boc或BOC＝叔丁氧基羰基
Cbz＝羰基苄基氧基或羰苄氧基或苄氧基羰基
HOAc或AcOH＝乙酸
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
EtOAc＝乙酸乙酯
THF＝四氢呋喃
TFA＝三氟乙酸
Et2NH＝二乙胺
NMM＝N-甲基吗啉
n-BuLi＝正丁基锂
Pd/C＝披钯炭
PtO2＝氧化铂
TEA＝三乙胺
EDAC＝3-乙基-3’-(二甲基氨基)丙基-碳二亚胺盐酸盐(或1-[(3-(二甲 基)氨基)丙基])-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)
HOBT或HOBT·H2O＝1-羟基苯并三唑水合物
HOAT＝1-羟基-7-氮杂苯并三唑
PyBOP试剂＝苯并三唑-1-基氧基-三吡咯烷基膦鎓六氟磷酸盐
min＝分钟
h或hr＝小时
L＝升
mL＝毫升
μL＝微升
g＝克
mg＝毫克
mol＝摩尔
mmol＝毫摩尔
meq＝毫当量
rt＝室温
sat或sat’d＝饱和的
aq.＝水溶液
TLC＝薄层层析
HPLC＝高效液相层析
LC/MS＝高效液相层析/质谱
MS或Mass Spec＝质谱
NMR＝核磁共振
mp＝熔点
以下实施例表示本发明的优选实施方案。
实施例1
步骤1
通过以下文献方法[Stephen Hanessian，Ulrich Reinhold，Michel Saulnier，和Stephen Claridge；Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 8(1998)2123-2128]或伴随以下改进合成步骤1标题化合物。将L-焦 谷氨酸乙酯经N-保护为氨基甲酸叔丁酯(Boc2O，DMAP或NaH)，然 后以一釜法(one pot)通过羰基还原(三乙基硼氢化物，甲苯，-78℃)脱 水为4，5-脱氢脯氨酸乙酯，随后脱水(TFAA，二甲基吡啶)。通过4，5- 脱氢脯氨酸乙酯的环丙烷化(Et2Zn，ClCH2I，1，2-二氯乙烷，-15℃)，得 到标题化合物。更详细的方法如下：
4，5-脱氢-L-脯氨酸乙酯的合成：将L-焦谷氨酸乙酯(200g，1.27 mol)溶于1.2升二氯甲烷中，在环境温度下用二碳酸二叔丁酯(297g， 1.36mol)和催化的DMAP(1.55g，0.013mol)顺序处理。6小时后，用 饱和盐水猝灭混合物，干燥(Na2SO4)有机相，通过短的硅胶柱过滤， 得到323g(100％)的N-Boc-L-焦谷氨酸乙酯。将N-Boc-L-焦谷氨酸 乙酯(160g，0.62mol)溶于1升甲苯中，冷却至-78℃并用三乙基硼氢 化锂(666mL的1.0M溶液在THF中)处理且在90分钟内滴加。3小 时后，滴加2，6-二甲基吡啶(423mL，3.73mol)，随后滴加入DMAP(0.2 g，0.0016mol)。向该混合物中加入TFAA(157g，0.74mol)，于2小 时内使反应物回复到环境温度。用EtOAc和水稀释混合物，用3N HCl、水、碳酸氢盐水溶液和盐水洗涤有机物，干燥(Na2SO4)，通过 硅胶塞过滤，得到165g的粗品4，5-脱氢脯氨酸乙酯，经快速硅胶柱 层析纯化，用1∶5乙酸乙酯∶己烷洗脱，得到120g，75％的烯烃。
4，5-脱氢-L-脯氨酸乙酯的环丙烷化：在-15℃下，将4，5-脱氢-L- 脯氨酸乙酯(35.0g，0.145mol)加入到纯净的Et2Zn(35.8g，0.209mol) 在1升1，2-二氯乙烷中的溶液中。用1小时，向该混合物中滴加ClCH2I(102g，0.58mol)，在-15℃下把混合物搅拌18小时。用饱和碳酸氢盐 水溶液猝灭反应物，蒸发溶剂，用EtOAc吸收反应物，用盐水洗涤， 经硅胶层析纯化，使用20％ EtOAc/己烷/50％ EtOAc/己烷的阶式梯度 液洗脱，得到17.5g(50％)非对映体纯的步骤1的标题化合物。
步骤2
在室温下，向步骤1的化合物(411mg，1.61mmol)在CH2Cl2(1.5 mL)中的搅拌溶液中加入TFA(1.5mL)。在室温下，把反应混合物搅 拌2小时并蒸发。用CH2Cl2稀释残余物，然后蒸发，并且再蒸发三 次，得到为无色油的标题化合物，433mg，100％收率。
步骤3
于室温下、氮气下，向搅拌着的(S)-N-叔丁氧基羰基异亮氨酸 (372.6mg，1.61mmol)和苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸 盐(1.25g，2.42mmol)在CH2Cl2(6mL)中的溶液中加入4-甲基吗啉 (NMM(0.36mL，3.2mmol)。5分钟后，加入步骤2化合物(433mg，1.61 mmol)和NMM(0.27mL，2.4mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液。加入 后，于室温、氮气下，把反应混合物搅拌过夜。用CH2Cl2(40mL)稀 释反应混合物，并用4％ KHSO4(10mL)、NaHCO3水溶液(10mL)和 盐水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。经快速层析(1∶4 EtOAc/己烷) 纯化，得到为无色油的标题化合物，530mg，89％收率。
步骤4
在室温下，向搅拌着的步骤3的化合物(530mg，1.44mmol)在 MeOH(4mL)和H2O(4mL)中的溶液中加入LiOH-H2O(91mg，2.16 mmol)。在室温下，把反应混合物搅拌过夜，蒸发。向残余物中加入 水(10mL)并用Et2O(2×10mL)提取。通过滴加4％ KHSO4把水层酸 化至～pH4。用EtOAc(15mL×3)提取乳状溶液。用盐水洗涤合并的 EtOAc层，经Na2SO4干燥，蒸发，得到为白色固体的标题化合物， 440mg，90％收率。
步骤5
在-15℃、氮气下，用2分钟向搅拌着的步骤4的化合物(300mg， 0.88mmol)在THF(6mL)中的溶液中先后加入4-甲基吗啉(0.12mL， 1.06mmol)和氯代甲酸异丁酯(0.13mL，0.97mmol)。形成白色沉淀。 在-15℃、氮气下，把反应混合物搅拌25分钟，并加入NH3在二噁 烷中的溶液(8.8mL，4.4mmol)。在-15℃下，将反应混合物搅拌30分 钟，温热至室温并在室温下搅拌过夜。通过4％ KHSO4猝灭反应混 合物至～pH4，用EtOAc(20mL×3)提取。合并提取液，用盐水(10mL) 洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。经快速柱层析(1∶1 EtOAc/己烷)纯化，得 到为白色泡沫的标题化合物，268mg，90％收率。
步骤6
在-35℃、氮气下，向搅拌着的步骤5的化合物(248mg，1.38mmol) 和咪唑(94mg，1.38mmol)在干燥吡啶(12mL)中的溶液中滴加POCl3(0.26mL，2.76mmol)。在-35℃至-20℃之间把反应混合物搅拌1小时， 蒸发。加入CH2Cl2(10mL)，形成白色沉淀。过滤后，浓缩滤液，经 快速层析(2∶5 EtOAc/己烷)纯化，得到为无色油的标题化合物，196 mg，88％收率。
步骤7
在室温下，向搅拌着的步骤6的化合物(130mg，0.4mmol)在 CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入TFA(2mL)。在室温下，把反应混合 物搅拌2小时。将反应混合物缓慢加入到NaHCO3(3.8g)在H2O(3mL) 中的预先冷却的浆状物中。用CH2Cl2(6mL×5)提取混合物，蒸发合 并的CH2Cl2层，经制备型HPLC纯化，得到为白色粉末的标题化合 物，77mg。57％收率，mp＝141-143℃。LC/MS给出所需化合物的正 确的分子离子[(M+H)+＝222]。
实施例2
步骤1
通过以下文献方法合成步骤1的标题化合物。[Stephen Hanessian， Ulrich Reinhold，Michel Saulnier，和Stephen Claridge；Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 8(1998)2123-2128]。
步骤2
采用与对实施例1步骤2-6描述的相同方法，从步骤1化合物 制备标题化合物。LC/MS给出所需化合物的正确的分子离子[(M+H)+＝ 222]。
实施例3
步骤1
通过以下文献方法[Willy D.Kollmeyer，U.S.专利4,183,857.]制 备步骤1的标题化合物。
步骤2
于室温、氮气下，向搅拌着的(S)-N-叔丁氧基羰基异亮氨酸(231 mg，1mmol)和苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(780mg， 1.5mmol)在CH2Cl2(6mL)中的溶液中加入4-甲基吗啉(0.33mL，3 mmol)。5分钟后，一次性加入步骤1化合物(120mg，1mmol)。于室 温、氮气下，把反应混合物搅拌过夜，然后用CH2Cl2(30mL)稀释， 用4.1％ KHSO4(10mL)、NaHCO3水溶液(10mL)、盐水(10mL)洗涤， 干燥(Na2SO4)，蒸发。经硅胶快速层析(2.4×20cm柱，1∶3 EtOAc/己 烷)纯化，得到为无色油的标题化合物，290mg，90％收率。LC/MS 给出所需化合物的正确的分子离子[(M+H)+＝297]。
步骤3
在室温下，将步骤2的化合物(220mg，0.74mmol)和4M HCl在 二噁烷(1.5mL，6mmol)中的反应混合物搅拌2小时，减压蒸发。向 残余物中加入Et2O，形成沉淀。倾出Et2O且重复三次。真空干燥沉 淀，得到为白色粉末的标题化合物，130mg(76％收率)，mp 205-206 ℃。LC/MS给出所需化合物的正确的分子离子[(M+H)+＝197]。
实施例4-4A
(实施例4) (实施例4A)
步骤1
通过以下文献方法制备为1∶1比率的对映体的步骤1的标题化合 物。[Willy D.Kollmeyer，U.S.专利4,183,857.]。
步骤2
于室温、氮气下，将(S)-N-叔丁氧基羰基-异亮氨酸(92.5mg，0.4 mmol)、1-[(3-(二甲基)氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(77mg，0.4mmol) 和HOAT(54.4mg，0.4mmol)在ClCH2CH2Cl(0.3mL)中的浆状物搅拌 1小时，然后加入步骤1的化合物(22mg，0.2mmol)，随后加入Et3N(0.015mL，0.1mmol)。于室温、氮气下，把反应混合物搅拌过夜，然 后用CH2Cl2(3mL)稀释，用H2O(1mL)、NaHCO3水溶液(1mL)和盐 水(1mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。经硅胶快速层析(2.4×12cm柱， 2∶7 EtOAc/己烷)纯化，得到为无色油的标题化合物，33mg，51％收 率。LC/MS给出所需化合物的正确的分子离子[(M+H)+＝322]。
步骤3
(实施例4) (实施例4A)
在室温下，向搅拌着的步骤2化合物(30mg，0.4mmol)在CH2Cl2(0.5mL)中的溶液中加入TFA(0.5mL)。在室温下，把反应混合物搅 拌2小时。把反应混合物缓慢加入到预先冷却的NaHCO3(0.8g)在H2O(1mL)中的浆状物中。用CH2Cl2(2mL×5)提取混合物，蒸发合并的 CH2Cl2层，经制备型HPLC纯化，得到为1∶1比率的非对映体的标题 化合物，22mg，73％收率。LC/MS给出所需化合物的正确的分子离 子[(M+H)+＝222]。
实施例5-5A
和
(实施例5) (实施例5A)
步骤1
向实施例4，步骤1的化合物(150mg，1.39mmol)在2-丙醇(0.8mL) 中的溶液中加入NaCN(40mg，1.0mmol)。把反应混合物加热至回流 3小时。冷却至室温后，蒸发反应混合物，然后在Et2O(5mL)中浆状 化。过滤后，蒸发滤液，得到实施例4步骤1的化合物和实施例5 步骤1的化合物(140mg，93％)，为2∶1的非对映体混合物，每一个为 外消旋混合物。
步骤2
于室温、氮气下，将(S)-N-叔丁氧基羰基-异亮氨酸(595mg，2.57 mmol)、1-[(3-(二甲基)氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(493mg，2.57mmol) 和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(350mg，2.57mmol)在ClCH2CH2Cl(2mL) 中的浆状物搅拌1小时，然后加入步骤1化合物的混合物(139mg，1.28 mmol)。于室温、氮气下，把反应混合物搅拌过夜，然后用CH2Cl2(30 mL)稀释，用H2O(10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(10mL) 洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发。经硅胶快速层析(2.4×20cm柱，1∶3 EtOAc/ 己烷)纯化，得到实施例4步骤2的化合物(260mg)和为1∶1比率的非 对映体的标题化合物(105mg)。LC/MS给出所需化合物的正确的分子 离子[(M+H)+＝322]。
步骤3
(实施例5) (实施例5A)
在室温下，向搅拌着的步骤2化合物(104mg，0.32mmol)在 CH2Cl2(1mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室温下，把反应混合 物搅拌2小时。将反应混合物缓慢加入到NaHCO3(2g)在H2O(2mL) 中的预先冷却的浆状物中。用CH2Cl2(4mL×4)提取混合物，蒸发合 并的CH2Cl2层，经制备型HPLC纯化，得到标题化合物实施例5(36mg) 和实施例5A(36mg)。LC/MS给出所需化合物的正确的分子离子 [(M+H)+＝222]。
实施例6
通用方法A：用于由可市售获得的氨基酸制备抑制剂的平行排列合 成方法。如在流程3中显示，用在THF/H2O中的LiOH把在实施例 1步骤1中描述的酯11皂化为酸，并通过先用氯代甲酸异丁酯/NMM 处理，接着通过在二噁烷中的氨处理使之转化为酰胺12。在酸性条 件下，使用在二氯甲烷中的TFA除去Boc保护基团，得到13。使用 EDAC/HOBT/DMF或EDAC/DMAP/CH2Cl2，使TFA盐与Boc-叔丁 基甘氨酸偶合，得到14。在-20℃下，使用在吡啶中的POCl3，将酰 胺脱水为腈15，最终在环境温度下，用在CH2Cl2中的TFA脱除保 护，得到目标物16。
流程3，通用方法A(实施例6-27)
a.LiOH在THF/H2O中 b.i-BuOCOCl/NMM或i-BuOCOCl/TEA在-30 ℃或EDAC中，然后NH3在二噁烷中或Et2O在室温下 c.TFA， CH2Cl2，室温 d.Boc-叔丁基甘氨酸和PyBop/NMM或EDAC，DMAP， CH2Cl2 e.POCl3，吡啶，咪唑，-20℃ f.TFA，CH2Cl2，室温
步骤1
在室温下，向搅拌着的实施例1步骤1的化合物(1.40g，5.49mmol) 在40mL的1∶1甲醇∶水溶液中的溶液中加入氢氧化锂(0.20g，8.30 mmol)。在室温下，把反应混合物搅拌18小时，然后加热至50℃2 小时。用等体积的乙醚和水(50mL)稀释混合物，然后用KHSO4酸化 至pH3。用乙醚(3×20mL)提取乳状溶液。经Na2SO4干燥合并的醚 层，蒸发。将残余物从甲苯(2×10mL)中气提，减压干燥，得到为稠 的浆状的标题化合物，1.20g，96％。
步骤2
在-15℃、氮气下，用5分钟向搅拌着的步骤1化合物(1.20g，5.28 mmol)在THF(20mL)中的溶液中先后加入4-甲基吗啉(0.71mL，6.50 mmol)和氯代甲酸异丁酯(0.78mL，6.00mmol)。在-15℃下，把反应物 搅拌30分钟，冷却至-30℃并用NH3在二噁烷中的溶液(50mL，25 mmol)处理。在-30℃下，将反应混合物搅拌30分钟，温热至室温并 搅拌过夜。用柠檬酸溶液猝灭反应混合物(pH4)，用乙醚(3×50mL) 提取。用盐水洗涤合并的有机部分，经Na2SO4干燥，浓缩。经硅胶 快速柱层析纯化，用EtOAc洗脱，得到步骤2化合物，1.00g，84％。
步骤3
在0℃下，向搅拌着的步骤2化合物(0.90g，4.00mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入TFA(3mL)。在0℃下，把反应混合物搅拌18 小时。减压浓缩反应混合物，得到为稠的油形式的标题化合物，0.98 g，100％。长时间放置后该油可逐渐固化。
步骤4
将步骤3化合物(56mg，0.22mmol)、N-叔丁氧基羰基-(L)-叔亮 氨酸(53mg，0.23mmol)、二甲基氨基吡啶(0.11g，0.88mmol)和CH2Cl2(4mL)填充到烘箱干燥的15-mL实验试管中。在氮气氛下将试管密 封并用1-[(3-(二甲基)氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(84mg，0.44mmol) 处理，将混合物置于振动器上并涡流过夜。使用United Technology SCX柱(2g吸附剂在6mL柱中)，通过把物料上样到SCX离子交换 柱上，经固相提取纯化产物并用CH2Cl2(5mL)、在CH2Cl2(5mL)中 的30％甲醇、在CH2Cl2(5mL)中的50％甲醇，和甲醇(10mL)连续洗 涤。减压浓缩含有产物的流分，得到所需的酰胺。经在YMC S5 ODS 20×250mm柱上的反相制备型柱层析进一步纯化，得到标题化合物， 50mg(68％收率)。纯化条件：在15分钟内，从30％甲醇/水/0.1 TFA- 90％甲醇/水/0.1 TFA梯度洗脱。在90％甲醇/水/0.1 TFA下维持5分 钟。流速：20mL/分钟。检测波长：220。保留时间：14分钟。
步骤5
将步骤4化合物(50mg，0.15mmol)、咪唑(31mg，0.46mmol)和 吡啶(1mL)填充到烘箱干燥的15-mL实验试管中。在氮气氛下将试 管密封并冷却至-30℃。混合后，缓慢加入POCl3(141mg，88uL，0.92 mmol)，得到稠的浆状物。在-30℃下，将试管混合3小时，蒸发挥 发物。使用United Technology硅胶提取柱(2g吸附剂在6mL柱中)， 通过把物料载荷到硅胶柱上，经固相提取纯化产物并用CH2Cl2(5 mL)、5％在CH2Cl2(5mL)中的甲醇、7％在CH2Cl2(5mL)中的甲醇、 以及12％在CH2Cl2(10mL)中的甲醇连续洗涤。合并含有产物的流 分，减压浓缩，得到标题化合物，46mg，96％收率。
步骤6
将步骤5化合物(0.45mg，0.14mmol)、CH2Cl2(1mL)和TFA(1mL) 填充到烘箱干燥的15-mL实验试管中。在室温下，将反应混合物涡 流40分钟，用甲苯(4mL)稀释，减压浓缩为稠的油。经在YMC S5 ODS 20×250mm柱上的反相制备型柱层析纯化产物，得到实施例6化合 物，14mg，35％。纯化条件：在18分钟内，从10％甲醇/水/0.1 TFA-90％ 甲醇/水/0.1 TFA梯度洗脱；在90％甲醇/水/0.1 TFA下维持5分钟。 流速：20mL/分钟。检测波长：220。保留时间：10分钟。
按照实施例6的方法，由市售来源获得的氨基酸制备实施例7- 27。
表1
实施例27
步骤1
使用在4mL CH2Cl2中的PyBop(172mg，0.33mmol)和N-甲基吗 啉(67mg，0.66mmol)，使(2S，4S，5S)-4，5-亚甲基-L-脯氨酸甲酰胺TFA 盐(53mg，0.22mmol)与N-Boc-L-酪氨酸-苄基醚(82mg，0.22mmol)偶 合。把反应物搅拌16小时，用EtOAc吸收，用H2O、1N HCl水溶 液、盐水洗涤，然后蒸发，经硅胶快速层析纯化，得到偶合产物(FAB MH+480)。
步骤2
采用通用方法C(它在实施例29之后)，将步骤1酰胺脱水为腈 (FAB MH+462)。
步骤3
在室温下，于MeOH中，通过使用10％披钯炭且在1大气压氢 气下催化氢解，将步骤2的苄基醚裂解1.5小时。经硅藻土过滤反应 物并浓缩为油，其无须进一步纯化处理而使用(FAB MH+372)。
步骤4
将步骤3的N-[N-Boc-L-酪氨酸-]-(2S，4S，5S)-2-氰基-4，5-亚甲基- L-脯氨酰胺溶于CH2Cl2中并在室温下加入TFA盐。把反应物搅拌1 小时，蒸发，如在通用方法B中所述(在以下实施例29中阐述)经制 备型HPLC纯化，得到标题化合物(FAB MH+272)。
实施例28
通过使实施例6步骤3中描述的(2S，4S，5S)-4，5-亚甲基-L-脯氨酸 甲酰胺TFA盐与N-(叔丁氧基羰基羟基缬氨酸偶合，制备标题化合 物。用三乙基甲硅烷基氯保护羟基，并用在吡啶中的POCl3/咪唑将 酰胺脱水，采用通过方法C，用TFA使(N-末端氢和缬氨酸羟基)脱 除保护，得到标题化合物(FAB MH+224)。
实施例29
步骤1
在N2下，将用在THF(17mL)中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.67 g，11.04mmol)和咪唑(938mg，13.8mmol)处理的N-Boc-L-高丝氨酸 (1.20g，5.47mmol)搅拌为稠的浆状物48小时。蒸发溶剂，并使粗品 物料溶于MeOH(10mL)中。在室温下，搅拌生成的溶液2小时。蒸 发溶剂，用CH2Cl2(50mL)稀释粗品物料，并用0.1N HCl(2×10mL) 处理。用盐水洗涤CH2Cl2层，经MgSO4干燥。除去挥发物，得到为 油的标题化合物(1.8g)，它无须进一步纯化即可使用(LC/Mass，+离子)： 334(M+H)。
步骤2
向搅拌着的步骤1化合物(333mg，1.0mmol)在6mL CH2Cl2中的 溶液中加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(256mg， 1.32mmol)。然后在室温下搅拌溶液30分钟，随后加入实施例6步 骤3的胺TFA盐(160mg，0.66mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(244mg， 2.0mmol)。然后在室温下搅拌溶液过夜。用CH2Cl2(5mL)稀释混合 物并用H2O、10％柠檬酸、盐水连续洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸 发，得到标题化合物(350mg)，它无须进一步纯化即可使用(LC/Mass，+ 离子)：442(M+H)。
步骤3
将步骤2的化合物(350mg，0.79mmol)、咪唑(108mg，1.58mmol)、 吡啶(3ml)装入一烘箱-干燥的10-ml圆底烧瓶中。在氩气下将该烧瓶 冷却至-30℃。混和后缓慢加入POCl3(0.30ml，3.16mmol)，得到一稠 的浆状物。于-30℃混和该浆状物3小时，蒸发挥发物。然后加入二 氯甲烷(5ml)，通过过滤除去不溶性固体。用水、10％柠檬酸、盐水 洗涤有机层，经硫酸钠干燥。除去溶剂得到所需的粗品腈(330mg) (LC/Mass，+离子)：424(M+H)。
步骤4
将三氟乙酸(3.3mL)mg，入到搅拌着的步骤3化合物(330mg， 0.58mmol)在3.3mL CH2Cl2中的溶液中。然后在室温下搅拌溶液30 分钟，加入几滴水并把混合物搅拌0.5小时。用CH2Cl2(5mL)稀释 混合物，减压浓缩为稠的油。经YMC S5 ODS 20×100mm柱的反相 制备型柱层析纯化产物，得到标题化合物，59mg，17％。纯化条件：在 15分钟内，从10％甲醇/水/0.1 TFA-90％甲醇/水/0.1 TFA梯度洗脱； 在90％甲醇/水/0.1 TFA下维持5分钟。流速：20mL/分钟。检测波长： 220。保留时间：10分钟。(LC/Mass，+离子)：210(M+H)。
通用方法B：Boc-保护的氨基酸的Claisen重排顺序。
通用方法B提供四价的Boc-保护的氨基酸。通过使流程4的氨 基酸偶合，实施例30-47含有乙烯基侧链，化合物20为代表性的。 在Horner-Emmons条件下，将环戊酮烯化，得到17，在-78℃至室温 下，使用在甲苯中的DIBAL-H，将17还原为烯丙醇18。使用在CH2Cl2中的DCC/DMAP，用N-Boc甘氨酸将烯丙醇18酯化，得到19。通 过用无水氯化锌配位并在-78℃下用二异丙基氨化锂脱质子化，随后 温热至环境温度，使甘氨酸酯19经历Lewis酸介导的Claisen重排， 得到20。
流程4，通用方法B，实施例30-47
a.膦酰基乙酸三乙酯，NaH，THF 0C-室温 b.DIBAL-H，甲苯，-78C 至室温 c.N-Boc甘氨酸，DCC，DMAP，CH2Cl2，室温 d.ZnCl2，THF， LDA，-78C至室温
步骤1
亚环戊基乙酸乙酯
在0℃下，于氩气下，通过加料漏斗向含有在120mL无水THF 中的NaH(5.10g的60％在矿物油中的分散液，128mmol，1.10当量) 的火焰干燥的500-mL圆底烧瓶中滴加膦酰基乙酸三乙酯(25.6mL， 128mmol，1.10当量)。使混合物温热至室温，搅拌另外1小时。于20 分钟内，通过加料漏斗滴加环戊酮(10.3mL，116mmol)在10mL无水 THF中的溶液，并在室温下搅拌混合物2.5小时。然后加入乙醚(200 mL)和水(100mL)，分离各层。用水(100mL)和盐水(100mL)连续洗 涤有机相，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到17.5g(98％)为无色油的 所需酯。
步骤2
2-亚环戊基乙醇
在-78℃下，于氩气下，通过加料漏斗，于30分钟期间内，向含 有在100mL无水甲苯中的亚环戊基乙酸乙酯(17.5g，113mmol)的火 焰干燥的500-mL圆底烧瓶中滴加DIBAL-H(189mL的1.5M在甲苯 中的溶液，284mmol，2.50当量)，然后使混合物温热至室温，搅拌18 小时。然后将反应混合物再次冷却至-78℃，并通过小心加入30mL 无水MeOH猝灭。温热至室温后，加入1N Rochelle’s盐(100mL)， 并搅拌混合物90分钟。然后在分液漏斗中用Et2O(200mL)稀释两相 反应混合物，分离各层。然后用盐水(100mL)洗涤有机层，干燥 (Na2SO4)，减压浓缩，经快速柱层析(硅胶，CH2Cl2/EtOAc，10∶1)纯 化，得到11.6g(92％)为无色油的所需烯丙醇。
步骤3
(2-亚环戊基乙基)-N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸酯
在室温下，向含有在100mL CH2Cl2中的N-(叔丁氧基羰基)甘氨 酸(13.45g，76.75mmol)的火焰干燥的500-mL圆底烧瓶中加入在20 mL CH2Cl2中的步骤2化合物(8.61g，76.75mmol，1.00当量)，随后加 入在80mL CH2Cl2中的二环己基碳二亚胺(16.63g，mmol，1.05当量)。 然后向该反应混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(0.94mg，mmol，0.10 当量)，并使混合物搅拌过夜。然后通过介质烧结玻璃漏斗过滤反应 混合物，用100mL CH2Cl2漂洗，减压浓缩。然后经快速层析(硅胶， 己烷/EtOAc，20∶1-1∶1梯度液)纯化粗产物，得到19.43g(94％)为无 色油的所需甘氨酸酯(glycinyl ester)。
步骤4
N-(叔丁氧基羰基)(1’乙烯基环戊基)-甘氨酸
于氩气下，向火焰干燥的500-mL圆底烧瓶中填充ZnCl2(11.8g， mmol，1.20当量)和20mL甲苯。伴随剧烈搅拌下真空加热混合物， 以随着甲苯蒸馏共沸带出任何痕量的湿气，重复该过程(2x)。然后在 氩气下将烧瓶冷却至室温，通过套管，加入作为在180mL THF中的 溶液的(2-亚环戊基乙基)N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸酯(19.36g，71.88 mmol)，然后将混合物冷却至-78℃。在-78℃下，在另一个含有在90mL THF中的二异丙胺(26.3mL，mmol，2.60当量)的火焰干燥的200-mL 圆底烧瓶中加入正丁基锂(71.89mL的2.5M在己烷中的溶液，mmol， 2.5当量)，并使混合物温热至0℃ 30分钟，之后再次冷却至-78℃。 然后于40分钟内，在稳定的速率下，通过套管将如此生成的二异丙 基氨化锂滴加入到ZnCl2酯混合物中，并使生成的反应混合物缓慢温 热至室温且搅拌过夜。然后把黄色反应混合物倾入到分液漏斗中， 用300mL Et2O稀释，并用300mL的1N HCl和300mL盐水连续 洗涤生成的有机溶液，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。经快速层析(硅胶，3％ MeOH在含有0.5％ HOAC的CH2Cl2中)纯化，得到17.8g(92％)为白 色固体的所需氨基酸产物。(FAB MH+270)。
实施例30
通用方法C：4，5-亚甲基-脯氨酰胺的的肽偶合，酰胺脱水并最终脱 除保护。
在室温下，使用在DMF中的HOBT/EDC，将酰胺13的TFA盐 与各种外消旋四价保护的氨基酸偶合，得到N-末端氨基酸上的非对 映体的D/L混合物。所需的L非对映体经层析分离为酰胺21或为腈 22。在-20℃下，通过用在吡啶中的POCl3/咪唑处理酰胺，得到腈22。 在酸性条件下，通过使用在CH2Cl2中的TFA脱除保护，得到最终目 标物23。
流程5，通用方法C
a.EDAC，HOBT，DMF b.POCl3，吡啶，咪唑，-20C c.TFA，CH2Cl2， 室温
步骤1
将实施例6步骤3的化合物(877mg，3.65mmol)和在通用方法B 的步骤4中描述的N-Boc环戊基乙烯基氨基酸(1.13g，4.20mmol)溶 于20mL无水DMF中，冷却至0℃，向该混合物中加入EDAC(1.62g， 8.4mmol)、HOBT水合物(2.54g，12.6mmol)和TEA(1.27g，12.6 mmol)，使反应物温热至室温且搅拌24小时。用EtOAc(100mL)吸 收反应混合物，用H2O(3×20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，经硅胶快速 柱层析(100％ EtOAc)纯化，得到1.38g(86％)步骤1的化合物(MH+， 378)。
步骤2
在氮气下，通过甲苯共沸(5mL×2)干燥步骤1的化合物(1.38g， 3.65mmol)和咪唑(497mg，7.30mmol)，使其溶于10mL无水吡啶中， 冷却至-30℃并通过注射器加入POCl3(2.23g，14.60mmol)。1小时后， 反应完成，蒸发至干并把剩余物经两个连续的硅胶快速柱层析纯化。 第一个柱(100％ EtOAc)用于分离非对映体的混合物(1.15g，88％)与反 应副产物。第二个柱(25％ EtOAc/己烷-50％ EtOAc/己烷的梯度液)用 于拆分非对映体的混合物，得到504mg所需的步骤2腈(MH+，360)。
步骤3
将步骤2化合物(32mg，0.09mmol)溶于1mL的CH2Cl2中并加 入1mL的TFA，在室温下把反应物搅拌30分钟，蒸发至干。经YMC S5 ODS 20×250mm柱的反相制备型柱层析纯化产物，得到12mg TFA盐(从水中冷冻干燥或蒸发洗脱剂并用乙醚研磨后分离)的标题化 合物。纯化条件：在18分钟内，从10％甲醇/水/0.1 TFA-90％甲醇/水 /0.1 TFA梯度洗脱；在90％甲醇/水/0.1三氟乙酸下维持5分钟。流 速：20mL/分钟。检测波长：220。
通过在通用方法B和通用方法C中概述的方法，分别从环戊酮、 环丁酮、环己酮、环庚酮、环辛酮、顺式-3，4-二甲基环戊酮，和4- 吡喃酮、环丙酮缩一乙醇(cyclopropaneethylhemiacetal)、丙酮，和3- 戊酮起始，制备实施例30-39。
表2
*通过在Tetrahedron Letters 1986，1281-1284中描述的方法，制备步骤 3的化合物。
实施例40
步骤1
采用通用方法B，用环戊酮和2-氟-三乙基膦酰基乙酸酯替代膦 酰基乙酸三乙酯作为原料，制备步骤1的化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过步骤1的酸的肽偶合，随后脱水 并最终脱除保护，制备标题化合物[MS(M+H)278]。
实施例41
步骤1
采用通用方法B，用环丁酮和2-氟-三乙基膦酰基乙酸酯替代膦 酰基乙酸三乙酯作为原料，制备步骤1的化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过步骤1的酸的肽偶合，随后脱水 并最终脱除保护，制备标题化合物MS(M+H)264。
实施例42
步骤1
采用通用方法B，用环戊酮和膦酰基丙酸三乙酯替代膦酰基乙 酸三乙酯作为原料，制备步骤1的化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过步骤1的酸的肽偶合，随后脱水 并最终脱除保护，制备标题化合物。MS(M+H)274。
实施例43
步骤1
采用通用方法B，用环丁酮和膦酰基丙酸三乙酯替代膦酰基乙 酸三乙酯作为原料，制备步骤1化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过步骤1的酸的肽偶合，随后脱水 并最终脱除保护，制备标题化合物。MS(M+H)260。
实施例44
通用方法D：通过臭氧分解氧化裂解乙烯基取代基。用臭氧处理保 护的环戊基乙烯基腈226-8分钟并用硼氢化钠还原性猝灭，直接得到 羟基甲基类似物24。在0℃及酸性条件下，用在CH2Cl2中的TFA将 该化合物脱除保护，得到目标化合物25。
流程6，通用方法D，实施例44、46、48
a.O3，MeOH∶CH2Cl2，10∶4，-78C；然后NaBH4，-78C-0C，79％
b.TFA∶CH2Cl2，1∶2，0℃。
步骤1
将在通用方法C的步骤2中制备的环戊基乙烯基化合物(1.28g， 3.60mmol)溶于56mL CH2Cl2∶甲醇的2∶5混合物中，冷却至-78℃并 用臭氧流处理，直到反应混合物呈现蓝色，此时，加入NaBH4(566mg， 15.0mmol，4.2当量)并使反应物温热至0℃。30分钟后，用2mL饱 和NaHCO3水溶液猝灭反应物，然后温热至室温。将反应混合物蒸 发至干，并用EtOAc吸收。加入小量水以溶解无机物，分离各层。 干燥(Na2SO4)EtOAc层，过滤，蒸发为油，经硅胶快速柱层析纯化， 用EtOAc洗脱，得到922mg(71％)步骤1的化合物。MS(M+H)364。
步骤2
将步骤1的化合物(900mg，2.48mmol)溶于60mL的CH2Cl2中， 冷却至0℃，并用20mL新鲜蒸馏的TFA处理。在80分钟内反应完 成，蒸发混合物至干，经制备型HPLC(YMC S5 ODS 30×100mm， 18分钟梯度80％溶剂A：溶剂B-100％溶剂B，溶剂A＝10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA，溶剂B＝90％ MeOH-10％ H2O-.1％ TFA，从5.1-6.5 分钟收集产物)纯化，从水中冻干后，得到660mg(71％)为白色冻干 物的标题化合物的TFA盐。(MH+264)。
实施例45
通用方法E：通过四氧化锇-高碘酸钠氧化裂解乙烯基取代基，随后 经硼氢化钠还原为醇。用在THF∶水，1∶1中的四氧化锇和高碘酸钠处 理环丁基烯烃26，并把中间体醛分离为粗品，迅速用硼氢化钠还原， 以56％收率得到27。使用TFA的标准脱除保护条件，得到目标化合 物28。
流程7，通用方法E，实施例45、47
a.OsO4，THF∶H2O，1∶1，NaIO4；处理，然后NaBH4，MeOH，室 温，56％
b.TFA∶CH2Cl2，1∶2，0℃至室温。
步骤1
将N-Boc保护的环丁基乙烯基化合物(实施例31，通过通用方法 C制备)(0.16g，0.46mmol)溶于10mL的THF∶水的1∶1混合物中并用 OsO4(12mg，催化剂)和NaIO4(0.59g，2.76mmol，6当量)处理。2小 时后，用50mL乙醚和10mL水稀释反应混合物。平衡这些层，用 NaHCO3溶液把有机部分洗涤一次，经MgSO4干燥，浓缩，得到深 色油。用10mL甲醇稀释油，用NaBH4(0.08g，2.0mmol)处理。混 合物变得非常深，30分钟后用乙醚稀释，用NaHCO3水溶液猝灭反 应物。平衡混合物，分离各层。用NaHCO3溶液和0.1M HCl洗涤有 机部分。干燥(MgSO4)有机物，浓缩，得到90mg(56％)为深色油的 步骤1的化合物。
步骤2
将步骤1的化合物(90mg，0.26mmol)溶于3mL CH2Cl2中，冷却 至0℃并用3mL新鲜蒸馏的TFA处理。在80分钟内反应完成，蒸 发至干，经制备型HPLC(YMC S5 ODS 30×100mm，10分钟梯度 100％ A-100％ B，溶剂A＝10％ MeOH-90％ H2O-0.1％ TFA，溶剂B＝ 90％ MeOH-10％ H2O-0.1％ TFA)纯化，除去水后，得到50mg(60％) 的标题化合物。(MH+250)。
表3
实施例49
步骤1
部分A.向50-mL烧瓶中填充二氢-4，4-二甲基-2，3-呋喃二酮(5.0g， 39.0mmol)、乙酸(10mL)、乙酸钠(3.82g，39.0mmol)和羟胺盐酸盐 (2.71g，39.0mmol)。在室温下，把反应混合物搅拌2小时，减压浓 缩以除去大部分乙酸。把剩余物倾入到水(100mL)中，用EtOAc(3×40 mL)提取水相。经Na2SO4干燥有机物，并浓缩为无色的油，可放置 固化。
部分B.向200-mL圆底烧瓶中填充部分A固体(@39mmol)， 用80mL乙醇和39mL的2N HCl(78mmol)稀释。用1.0g的5％ Pd/ 碳处理混合物并使混合物脱气。将烧瓶置于H2气氛下8小时。经硅 藻土过滤混合物，浓缩滤液为灰白色固体。
部分C.向250-mL圆底烧瓶中填充部分B固体，用THF(50mL) 和水(15mL)稀释。用二碳酸二叔丁酯(12.7g，117mmol)和碳酸氢钠 (10.0g，117mmol)处理混合物。搅拌4小时后，用50mL乙醚和50mL 水稀释混合物。分离各层，经MgSO4干燥有机部分，浓缩。经硅胶 快速柱层析纯化残余物，用在己烷中的30％ EtOAc洗脱，得到2.00g (22％总收率)为白色固体的步骤1化合物。
步骤2
于室温、氮气下，向搅拌着的步骤1化合物(1.00g，3.80mmol) 在THF(20mL)中的溶液中先后加入LiOH水合物(0.16g，3.80mmol) 和水(5mL)。在40℃下，把反应物搅拌0.5小时，然后冷却至室温。 浓缩混合物至干，把剩余物从THF(2x)、甲苯(2x)和THF(1x)中汽 提。用5mL的THF稀释剩余的玻璃，先后用咪唑(0.63g，9.19mmol) 和叔丁基-二甲基甲硅烷基氯(1.26g，8.36mmol)处理。搅拌反应物过 夜并用10mL甲醇猝灭。搅拌1小时后，浓缩混合物。加入另外部 分的甲醇，浓缩混合物。用乙醚和0.1N HCl(pH2)稀释油。平衡这 些层，弃去水层。经MgSO4干燥有机部分，浓缩，得到1.25g(83％) 为无色玻璃的步骤2化合物。
步骤3
如在通用方法C中概述的那样，通过步骤2的羧酸与实施例6 步骤3的胺的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备标题化合物。MS (M+H)238。
通用方法F：催化氢化乙烯基取代基。如在流程8中所示，在大气压 下，使用10％ Pd/C和氢，通过催化氢化，将保护的乙烯基取代的氨 基酸20转化为相应的饱和类似物29。
流程8，通用方法F，实施例50-56
a.10％ Pd/C，1大气压H2，MeOH，12小时，100％
步骤1.
将N-(叔丁氧基羰基)(1’乙烯基环戊基)甘氨酸(2.23g，8.30mmol) 溶于50mL MeOH中并放入用氩气吹洗的氢化容器中。向该混合物 中加入10％ Pd-C(224mg，10％ w/w)，并在室温下，于1个大气压H2下把反应物搅拌12小时。经硅藻土过滤反应物，浓缩，经硅胶快速 柱层析纯化，用1∶9甲醇∶CH2Cl2洗脱，得到为玻璃的步骤1化合物。 (FAB MH+272)。
如在通用方法C中所述，通过氨基酸的的肽偶合(其中乙烯基取 代基已按照通用方法F氢化)，随后脱水并脱除保护，制备实施例50-56 的化合物。
表4
实施例 R1，R2 MS [M+H] 50 环戊基 262 51 环丁基 248 52 环庚基 290 53 4-吡喃基 278 54 甲基，甲基 236 55 乙基，乙基 264 56 甲基，乙基 250
实施例57
如在通用方法C中所述，通过异丙基环丁烷氨基酸的肽偶合(其 中烯烃取代基已按照通用方法F氢化)，随后脱水并脱除保护，制备 实施例57的标题化合物。
实施例58
如在通用方法C中所述，通过异丙基环戊烷氨基酸的肽偶合(其 中烯烃取代基已按照通用方法F氢化)，随后脱水并脱除保护，制备 实施例58的标题化合物。MS(M+H)276。
通用方法G：通过不对称Strecker反应合成L-氨基酸。在回流下， 于含有HCl的MeOH中或使用在Et2O/甲醇中的三甲基甲硅烷基重氮 甲烷，将可市售获得的金刚烷基羧酸酯化，得到30。用在THF中的 LAH将酯还原为醇31，然后受到Swern氧化，得到醛32。在不对称 Strecker条件下，用KCN、NaHSO3和R-(-)-2-苯基甘氨醇，将醛32 转化为33。在强酸性条件下，使用在HOAc中的12M HCl，将33 的腈水解，得到34。通过在50磅/平方英寸氢气下，使用在酸性甲 醇中的Pearlman氏催化剂催化还原，除去手性辅剂，得到35，并把 生成的氨基保护为氨基甲酸叔丁基酯，得到36。
流程9，通用方法G，实施例59-64
a.LAH，THF，0C-室温，96％ b.ClCOCOCl，DMSO，CH2Cl2，-78C， 98％ c.R-(-)-2-苯基甘氨醇，NaHSO3，KCN d.12 M HCl，HOAc，80C， 16小时，78％ e.20％ Pd(OH)2，50磅/平方英寸H2，MeOH∶HOAc，5∶1 f.(Boc)2O，K2CO3，DMF，92％，2步骤
步骤1
将金刚烷-1-羧酸(10.0g，55mmol，1当量)溶于Et2O(160mL)和 MeOH(40mL)的混合物中，并用三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2.0M在 己烷中，30mL，60mmol，1.1当量)处理且在室温下搅拌3小时。然后 经旋转蒸发除去挥发物，经硅胶快速柱层析(5×15cm)纯化产物，用 40％ CH2Cl2/己烷洗脱，得到为白色结晶固体的产物(10.7g，100％)。
步骤2
在氩气下，将步骤1化合物(10.7g，0.055mmol，1当量)溶于无水 THF(150mL)中，并用LiAlH4溶液(1M在THF中，69mL，69mmol， 1.25当量)处理。在室温下搅拌1.5小时后，把反应物冷却至0℃，并 连续用H2O(5.1mL)、15％ NaOH水溶液(5.1mL)和H2O(10.2mL)猝 灭。在室温下搅拌15分钟后，真空过滤浆状物，并用EtOAc(2×100 mL)洗涤固体。经旋转蒸发浓缩滤液，经硅胶快速柱层析(5×15cm) 纯化生成的固体，用10％ EtOAc/CH2Cl2洗脱。得到为白色固体的步 骤2产物(8.74g，96％)。
步骤3
在氩气氛下，向配备有125-mL加料漏斗的烘箱干燥的3-颈烧瓶 中填充无水CH2Cl2(150mL)和无水DMSO(10.3mL，0.145mol，2.5当 量)并冷却至-78℃。缓慢滴加草酰氯(6.7mL，0.0768mol，1.32当量)， 随后搅拌15分钟，得到活化的DMSO加成物。用步骤2化合物(9.67 g，58.2mmol，1当量)在干燥CH2Cl2(75mL)中的溶液将其处理并搅拌 反应物1小时。然后滴加三乙胺(40.5mL，0.291mol，5当量)处理生成 的白色混合物。30分钟后，除去冷却浴，连续用冷的20％ KH2PO4水溶液(25mL)和冷水(150mL)猝灭反应物。在室温下搅拌15分钟后， 用Et2O(400mL)稀释混合物，分离各层。用冷的10％ KH2PO4水溶 液(3×150mL)和饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤有机物。干燥(Na2SO4) 有机物，过滤，浓缩。经硅胶快速柱层析(5×10cm)纯化残余物，用 CH2Cl2洗脱，得到为白色固体的步骤3化合物(9.40g，98％)。
步骤4
将步骤3化合物(9.40g，57mmol，1当量)悬浮于H2O(145mL)中 并冷却至0℃。用NaHSO3(5.95g，57mmol，1当量)、KCN(4.0g，59 mmol，1.04当量)和(R)-(-)-苯基甘氨醇(8.01g，57mmol，1当量)在 MeOH(55mL)中的溶液处理混合物。在室温下，把生成的混合物搅 拌2小时，然后回流16小时。把混合物冷却至室温，并加入200mL EtOAc。混合15分钟后，分离各层。用EtOAc提取水溶液部分。用 盐水(50mL)洗涤合并的EtOAc提取物，经无水Na2SO4干燥，过滤， 浓缩滤液。经硅胶快速柱层析(6.4×20cm)纯化产物，用20％ EtOAc/ 己烷洗脱，得到为白色固体的所需的(R，S)产物(11.6g，37.4mmol， 65％)：MS m/e 311(M+H)+。
步骤5
在80℃下，将步骤4的腈(5.65g，18mmol)在浓HCl(120mL)和 HOAc(30mL)中加热18小时，此时，在冰浴中冷却反应物。真空过 滤生成的沉淀，得到为白色固体的所需产物(5.21g，14mmol，78％)。 MS m/e 330(M+H)+。
步骤6
将步骤6化合物(5.21g，14mmol)溶于MeOH(50mL)和HOAc(10 mL)中，并用H2(50磅/平方英寸)和Pearlman氏催化剂(20％ Pd(OH)2， 1.04g，20％ w/w)氢化18小时。通过PTFE滤膜过滤反应物，并用MeOH(3×25mL)洗涤催化剂。经旋转蒸发浓缩滤液，得到白色固体。产物 无须进一步纯化即可用于步骤7中。
步骤7
在氩气下，将粗品步骤6化合物(@14mmol)溶于无水DMF(50 mL)中，并在室温、氩气下，用K2CO3(5.90g，42mmol，3当量)和二 碳酸二叔丁酯(3.14g，14mmol，1当量)处理。19小时后，经旋转蒸发 (泵)除去DMF，并在减压下把残余物进一步干燥。将残余物与H2O(100 mL)和Et2O(100mL)混合，分离各层，并用Et2O(2×100mL)碱性水 溶液以除去来自氢解步骤的副产物。将水溶液冷却至0℃，用EtOAc(200mL)稀释，剧烈搅拌，同时用1N HCl水溶液把水溶液小心酸化 至pH3。分离各层，用EtOAc(100mL)提取水溶液。用盐水(50mL) 洗涤合并的EtOAc提取液，干燥(Na2SO4)，过滤，经旋转蒸发浓缩 滤液。经SiO2快速柱(5×12cm)纯化残余物，用5％ MeOH/CH2Cl2+ 0.5％ HOAc洗脱。用己烷处理(chase)产物，得到为白色泡沫的产物 (4.07g，13mmol，92％)：MS m/e 310(M+H)+。
实施例59
如在通用方法C中所述，通过通用方法G中的步骤7化合物的 肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备实施例59的标题化合物。MS m/e 300(M+H)+。
实施例60
步骤1
将KMnO4(337mg，2.13mmol，1.1当量)在2％ KOH水溶液(6mL) 中的溶液加热至60℃，分批加入通用方法G中的步骤7化合物(600mg， 1.94mmol，1当量)，且升高温度加热至90℃。1.5小时后，把反应物 冷却至0℃，加入EtOAc(50mL)，用1N HCl把混合物小心酸化至 pH3。分离各层，用EtOAc(50mL)提取水溶液。用盐水洗涤合并的 有机提取物，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经硅胶快速柱层析(3.8×15 cm)纯化残余物，用2％(200mL)、3％(200mL)、4％(200mL)和5％(500 mL)的MeOH/CH2Cl2+0.5％ HOAc洗脱。分离产物后，用己烷处理 物料，得到白色固体(324mg，51％)：MS m/e 326(M+H)+。
步骤2
在氩气下，将步骤1化合物(404mg，1.24mmol，1当量)溶于无水 DMF(10mL)中并冷却至0℃。以下按顺序加入：实施例6步骤3的 盐(328mg，1.37mmol，1.1当量)、HOBT(520mg，3.85mmol，3.1当 量)、EDAC(510mg，2.61mmol，2.1当量)，和TEA(0.54mL，3.85mmol， 3.1当量)。使反应混合物温热至室温过夜，经旋转蒸发(泵)除去DMF。 把剩余物进一步真空干燥。将残余物溶于EtOAc(100mL)中，用饱 和NaHCO3水溶液(50mL)和饱和NaCl水溶液(25mL)洗涤，经无水 Na2SO4干燥，过滤，经旋转蒸发浓缩。经硅胶快速柱层析(3.8×15cm) 纯化产物，用6％(200mL)、7％(200mL)和8％(500mL)的 MeOH/CH2Cl2梯度液洗脱，得到为白色固体的产物(460mg，1.06mmol， 85％)：MS m/e 434(M+H)+。
步骤3
在氩气下，将步骤2化合物(95mg，0.22mmol，1当量)溶于无水 CH2Cl2(2.5mL)中并冷却至-78℃。用二异丙基乙胺(65μL，0.37mmol， 1.7当量)，和三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸盐(75μL，0.33mmol，1.5 当量)处理混合物，并在0℃下搅拌1.5小时。将反应物与MeOH(0.5 mL)、硅胶(200mg)和H2O(2滴)混合，在室温下搅拌18小时。经旋 转蒸发除去溶剂，经硅胶快速柱层析(2.5×10cm)纯化残余物，用4％ MeOH/CH2Cl2洗脱，得到产物(92mg，0.17mmol，77％)：MS m/e 548 (M+H)+。
步骤4
在氩气下，将步骤3化合物(90mg，0.16mmol，1当量)溶于无水 吡啶(2mL)中并冷却至-30℃。用咪唑(24mg，0.35mmol，2.1当量)和 磷酰氯(66μL，0.67mmol，4.1当量)处理，并在-30℃下继续搅拌45 分钟，得到稠的浆状物。将挥发物旋转蒸发，并进一步减压干燥滤 饼(cake)。经硅胶快速柱层析(2.5×10cm)纯化产物，用7％ EtOAc/CH2Cl2洗脱，得到为白色泡沫的产物(76mg，87％)：MS m/e 530 (M+H)+。
步骤5
将步骤4化合物(76mg，0.14mmol)溶于无水CH2Cl2(1mL)中并 冷却至0℃，用TFA(1mL)和H2O(2滴)处理并在0℃下搅拌1.5小 时。经旋转蒸发除去溶剂，用甲苯(5mL)处理(chase)残余物，减压干 燥。用Et2O研磨，得到为白色固体的标题化合物(54mg，88％)：MS m/e 316(M+H)+。
实施例61
步骤1
向用氩气吹洗的烘箱干燥的烧瓶中填充无水CH2Cl2(3mL)并冷 却至-78℃。先后用二乙基氨基硫三氟化物(DAST，60μL，0.45mmol， 1.5当量)和实施例60步骤2的化合物(131mg，0.30mmol，1当量)在 干燥CH2Cl2(3mL)中的溶液处理。15分钟后，把反应物倾入到含有 饱和NaHCO3水溶液(25mL)的分液漏斗中并分离各层。用CH2Cl2(25 mL)提取水溶液部分，然后用盐水(10mL)洗涤合并的有机提取物， 干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。经硅胶快速柱层析(2.5×10cm)纯化产 物，用5％ MeOH/CH2Cl2洗脱，得到步骤1化合物(124mg，0.29mmol， 94％)：MS m/e 436(M+H)+。
步骤2
在氩气下，将来自步骤1的氟化酰胺(161mg，0.37mmol，1当量) 溶于无水吡啶(4mL)中并冷却至-30℃。用咪唑(54mg，0.77mmol，2.1 当量)和磷酰氯(143μL，1.52mmol，4.1当量)处理混合物并在-30℃下 搅拌40分钟。经旋转蒸发除去溶剂，并进一步减压干燥。经硅胶快 速柱层析(2.5×10cm)纯化产物，用5％ EtOAc/CH2Cl2洗脱，得到为 白色泡沫的步骤2化合物(126mg，82％)：MS m/e 418(M+H)+。
步骤3
将步骤2化合物(125mg，0.30mmol)溶于TFA/CH2Cl2(1∶1 v/v，2 mL)中，在室温下搅拌。30分钟后，经旋转蒸发除去溶剂，用甲苯(2× 5mL)处理(chase)剩余物，减压干燥固体。用Et2O研磨，得到为白色 固体的标题化合物(93mg，0.21mmol，72％)：MS m/e 318(M+H)+。
实施例62
步骤1
按照通用方法G，通过不对称Strecker合成，用2-adamantanal 起始并加工为纯手性的Boc-氨基酸，制备步骤1的化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过在步骤1中描述的2-金刚烷基氨 基酸的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备实施例62中的标题化合 物。MS(M+H)300。
实施例63
步骤1
向配备有冷凝器和干燥管的烘箱干燥的烧瓶中填充降冰片烷-2- 羧酸(4.92g，35mmol，1当量)，并用溴(2.1mL，41mmol，1.15当量)和 三氯化磷(0.153mL，1.8mmol，0.05当量)处理。在85℃并避光保护下， 把混合物加热7小时。加入另外的溴(0.4mL，7.8mmol，0.22当量)， 伴随继续加热1小时。把混合物冷却至室温，加入Et2O(100mL)。 用10％ NaHSO3水溶液(50mL)、H2O(2×50mL)和盐水(25mL)洗涤 混合物。干燥(Na2SO4)乙醚部分，过滤，经旋转蒸发浓缩。经硅胶快 速柱层析(5×15cm)纯化产物，用2％-4％ MeOH/CH2Cl2+0.5％ HOAc洗脱。用己烷检测产物以除去残余的HOAc。所分离的物料由两种不 可分离的物质(4.7g)组成，该物质无须进一步纯化即可用于下一步 骤。
将在Et2O(80mL)和MeOH(20mL)中的来自上面的粗产物，外- 2-溴代降冰片烷-1-羧酸(4.7g，不纯)与三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2.0 M在己烷中，11.8mL，23.6mol)混合，并在室温下搅拌1小时。经旋 转蒸发除去溶剂，且经硅胶快速柱层析(5×18cm)纯化，用CH2Cl2/ 己烷(20％和30％各600mL)的梯度液，随后用CH2Cl2洗脱，得到为 白色固体的产物(3.97g，0.017mol，两步79％)：MS m/e 233/235 (M+H)+。
在配备有冷凝器的烘箱干燥的3-颈烧瓶中，将外-2-溴代降冰片 烷-1-羧酸甲酯(2.0g，8.58mmol，1当量)溶于无水THF(50mL)中，并 用氩气吹洗。用AIBN(288mg，1.71mmol，0.2当量)和氢化三丁基锡 (3.6mL，12.87mmol，1.5当量)处理混合物，然后加热至回流2小时。 把烧瓶冷却至室温，经旋转蒸发除去THF，得到粗产物。经硅胶快 速柱层析(5×10cm)纯化产物，用5％ EtOAc/己烷洗脱。生成的物质 无须进一步纯化即可用于下一步。
步骤2
按照通用方法G，通过不对称Strecker合成，用1-norbonyl甲基 羧酸酯作为原料并加工为纯手性的Boc氨基酸，制备步骤1化合物。
步骤3
如在通用方法C中所述，通过在步骤2中描述的1-norbonyl氨 基酸的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备实施例63中的标题化合 物。MS(M+H)260。
实施例64
步骤1
按照通用方法G，通过不对称Strecker合成，用4-甲酰基吡喃作 为原料并加工为纯手性的Boc氨基酸，制备步骤1化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过在步骤2中描述的4-吡喃基氨基 酸的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备实施例64中的标题化合物。 MS(M+H)250。
通用方法H：外消旋氨基酸的Strecker合成。
流程10，通用方法H，实施例65-66
a.硅藻土，PCC，CH2Cl2，室温，91％ b.NH4Cl，NaCN，MeOH；12 M HCl，HOAc；(Boc)2O，TEA，DMF。
步骤1
在0℃下，向搅拌着的1-苯基环-1-戊烷-羧酸(5.00g，26.3mmol) 在25mL THF中的溶液中加入在THF中的LAH(52mL，52mmol，1 M)。把反应混合物缓慢温热至室温，然后回流18小时。按照Fieser 方法猝灭反应物：小心加入2mL水；6mL在水中的15％ NaOH； 和2mL水。用100mL乙醚稀释两相混合物，滤除粒状白色固体。 经Na2SO4干燥乙醚部分，蒸发，得到4.30g(93％)步骤1的化合物。
步骤2
在室温下，向步骤1化合物(0.80g，4.50mmol)在15mL的CH2Cl2中的搅拌溶液中先后加入硅藻土(5g)和PCC(1.95g，5.00mmol)。搅 拌3小时后，用40mL CH2Cl2稀释反应混合物，经硅藻土过滤。再 一次通过硅胶过滤滤液，得到无色滤液。蒸发CH2Cl2部分，得到0.72 g(91％)为无色油的醛。
步骤3
在室温下，向含有在8mL水中的步骤2化合物(0.72g，4.20mmol) 的50-mL圆底烧瓶中先后加入NaCN(0.20g，4.20mmol)和NH4Cl(0.20g，5.00mmol)。然后向该反应混合物中加入甲醇(8mL)，搅拌混 合物过夜。然后用乙醚(2×15mL)提取反应混合物，干燥(MgSO4)， 减压浓缩，得到粗品Strecker产物。
向含有粗品Strecker产物的100-mL圆底烧瓶中加入10mL的 HOAc和10mL的浓HCl。把混合物回流过夜。减压浓缩混合物，得 到黄色固体。用5mL的乙醚和己烷的1∶1混合物研磨固体。用在50mL DMF中的三乙胺(1.4mL，9.99mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.00g，4.60 mmol)处理白色固体。4小时后，用饱和Na2CO3溶液将混合物的pH 调节至9。搅拌另外3小时后，用1∶1乙醚和己烷提取混合物，用5％ KHSO4溶液把水溶液部分酸化至pH2。用乙醚(2×40mL)洗涤水相， 干燥(MgSO4)有机物，蒸发为油，经硅胶快速层析纯化油，，用8∶92 甲醇∶CH2Cl2洗脱，得到0.3g(23％)为淡色油的Boc-保护的氨基酸 (M-H，318)。
实施例65
步骤1
步骤1化合物的合成被描述在对外消旋氨基酸的Strecker合成的 通用方法H中。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过在步骤1和通用方法H中描述的 环戊基苯基氨基酸的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备实施例65 中的标题化合物。MS(M+H)310。
实施例66
步骤1
按照通用方法H，从2，2-二甲基-苯基乙酸起始，使用外消旋 Strecker合成，制备步骤1化合物。
步骤2
如在通用方法C中所述，通过在步骤1中描述的二甲基苯基氨 基酸的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备实施例66中的标题化合 物。MS(M+H)284。
实施例67
步骤1
将N-(苄氧基羰基)琥珀酰亚胺(5.6g，22.4mmol)溶于CH2Cl2(25 mL)中，并把溶液加入到搅拌着的氨基丙二酸二乙酯盐酸盐(5.0g，23.6 mmol)和三乙胺(13.4mL，95mmol)在CH2Cl2(125mL)中的冷却的(0℃) 溶液中。在0℃下，将生成的溶液搅拌10分钟，然后在室温下搅拌 1小时。用10％柠檬酸(2×50mL)、10％碳酸氢钠(2×50mL)和水(50 mL)洗涤溶液，然后干燥(Na2SO4)，蒸发，得到为无色油的N-苄氧基 羰基氨基丙二酸二乙酯，在0℃下放置结晶(6.3g)(LC/Mass+离子)： 310(M+H)。
步骤2
将步骤1化合物(6.18g，20mmol)溶于干燥乙醇(30mL)中并加入 到乙醇钠溶液(2.85g，8.8mmol；21％ w/w溶液在乙醇中)(6mL)中。 加入3-甲基-2-丁烯醛(1.68g，20mmol)在乙醇(12mL)中的溶液，在25 ℃下把溶液搅拌24小时。然后加入乙酸(0.56mL)，在50磅/平方英 寸下，使用10％ Pd/C(2.0g)作为催化剂，将溶液氢化24小时。过滤 溶液，蒸发，在硅胶上层析残余物，用CH2Cl2/EtOAc(9∶1)洗脱，得 到2，2-二乙酯基-3，3-二甲基-吡咯烷(1.6g)(LC/Mass，+离子)：244 (M+H)。
将二酯(850mg)在5M盐酸(10ml)/TFA(1ml)中回流8小时，蒸发 后，得到粉末状白色固体。从甲醇/乙醚中重结晶得到3，3-二甲基-dl- 脯氨酸盐酸盐(190mg)，为白色结晶，mp 110-112℃。
步骤3
将步骤2化合物(173mg，0.97mmol)溶于DMF(3mL)/水(3mL) 中。向该澄清的溶液中加入三乙胺(0.46mL，3.18mmol)和二碳酸二叔 丁酯(0.23g，1.06mmol)，在室温下搅拌反应混合物5小时。蒸发溶 液，在硅胶柱上层析化残余物，用CH2Cl2/甲醇(9∶1)作为洗脱剂，得 到为油的叔丁氧基羰基-3，3-二甲基-dl-脯氨酸(200mg)(1LC/Mass，+ 离子)：244(M+H)。
步骤4
如在通用方法C中所述，通过在步骤3中描述的叔丁氧基羰基- 3，3-二甲基-dl-脯氨酸氨基酸的肽偶合，随后脱水并脱除保护，制备 实施例67中的标题化合物。MS(M+H)220。
实施例68
步骤1
在室温、氩气下，将在乙醇(2mL)中的乙醇钠(940mg的21wt％ 溶液在乙醇中，2.9mmol)加入到乙酰氨基丙二酸二乙酯(4.31g，19.8 mmol)的EtOH(23mL)的搅拌溶液中。将反应混合物冷却至0℃；并 滴加反式-2-戊烯醛(1.51g，18.0mmol)，维持反应物温度在＜5℃。加 入后，使反应物温热至室温，搅拌4小时，然后用乙酸(460μl)猝灭。 真空浓缩溶液，把残余物溶于EtOAc(25mL)中，用10％ NaHCO3溶 液(2×5mL)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)。过滤溶液，浓缩至10mL 体积，然后加热至回流，用己烷(20mL)稀释。冷却至室温，沉淀标 题化合物，收集得到3.0g(50％)的步骤1化合物(mp 106-109℃； LC/Mass：+离子，324M+Na)。
步骤2
于氩气下，向步骤1化合物(2.87g，9.5mmol)和三乙基硅烷(2.28 mL，14.3mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中边搅拌边滴加TFA(7.35 mL，95.3mmol)，同时借助冰浴维持内部温度在25℃。在室温下搅拌 4小时后，浓缩溶液。用CH2Cl2(100mL)稀释残余物，然后在剧烈搅 拌下用H2O(50mL)和固体Na2CO3处理，直到混合物为碱性。分离 有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩，得到为黄色油的步骤2化 合物，它无须进一步纯化即可使用(LC/Mass：+离子，308M+Na)。
步骤3
将步骤2的化合物(3.73g，9.5mmol)悬浮于6N HCl(20mL)和 HOAc(5mL)中并在回流下加热20小时。然后冷却反应混合物，用 EtOAc(20mL)洗涤，然后浓缩，得到油，用乙醚研磨结晶，得到标 题化合物(1.2g，70.6％)(LC/Mass，+离子)：144(M+H)。
步骤4
将步骤3化合物(692mg，3.76mmol)溶于丙酮(12mL)/水(12mL) 中。向该澄清的溶液中加入三乙胺(1.9mL，12.8mmol)和二碳酸二叔 丁酯(928mg，4.24mmol)。在室温下，搅拌反应混合物18小时。蒸 发溶剂，在硅胶上层析残余物，用1∶9甲醇∶CH2Cl2洗脱，得到为油 的步骤4化合物(LC/Mass：+离子，266M+Na)。
步骤5
如在通用方法C中所述，通过步骤4的氨基酸的肽偶合，随后 脱水并脱除保护，制备实施例68的化合物。(MS(M+H)234)。
实施例69
步骤1
在室温、氩气下，将在乙醇(2mL)中的乙醇钠(940mg，2.9mmol； 21％ w/w溶液在乙醇中)加入到乙酰氨基丙二酸二乙酯(4.31g，19.8 mmol)的EtOH(23mL)的搅拌溶液中。将反应混合物冷却至0℃；并 滴加4-甲基-2-戊烯醛(1.77g，18.0mmol)，维持反应物温度在＜5℃。 加入后，使反应物温热至室温，搅拌4小时，然后用乙酸(460μl)猝 灭。浓缩溶液，并使残余物溶于EtOAc(25mL)中。用10％ NaHCO3溶液(2×5mL)、盐水洗涤有机物，干燥(MgSO4)。过滤溶液，并浓缩 至10mL体积，然后加热至回流，用己烷(20mL)处理。冷却，沉淀 步骤1的化合物并收集(3.3g)(LC/Mass，+离子)：338(M+Na)。
步骤2
于氩气下，向步骤1化合物(3.0g，9.5mmol)和三乙基硅烷(2.28 mL，14.3mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中边搅拌边滴加TFA(7.35 mL，95.3mmol)，同时借助冰浴维持内部温度在25℃。在室温下搅拌 4小时后，浓缩溶液，用CH2Cl2(100mL)稀释残余物，然后在剧烈搅 拌下用H2O(50mL)和固体Na2CO3处理，直到混合物为碱性。分离 有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，然后浓缩，得到为油的标题化合物， 它无须进一步纯化即可使用(LC/Mass：+离子，300M+H)。
步骤3
将步骤2化合物(3.8g，9.5mmol)悬浮于6N HCl(20mL)和HOAc(5mL)中并在回流下加热20小时。冷却反应混合物，用EtOAc(20mL) 洗涤，然后浓缩，得到一种油，将其用乙醚研磨结晶，得到步骤3 的化合物(1.4g，76.0％)。LC/Mass：+离子，158(M+H)。
步骤4
将步骤3化合物(728mg，3.76mmol)溶于1∶1丙酮/水溶液(24mL) 中。向该澄清的溶液中加入三乙胺(1.9mL，12.8mmol)和二碳酸二叔 丁酯(928mg，4.24mmol)。在室温下，搅拌反应混合物18小时。蒸 发溶液，并在硅胶柱上层析残余物，使用CH2Cl2/甲醇(9∶1)作为洗脱 剂，得到为油的标题化合物(LC/Mass，+离子)：258(M+H)。
步骤5
如在通用方法C中所述，通过步骤4的氨基酸的肽偶合，随后 脱水并脱除保护，制备实施例69化合物。(MS(M+H)248)。
实施例70
步骤1
通过在通用方法C中描述的方法，从N-Boc-s-叔丁基半胱氨酸 起始，制备步骤1化合物。
步骤2
向配备有磁力搅拌棒和N2入口的25-mL圆底烧瓶中填充步骤1 化合物(78mg，0.21mmol)和氯仿(3mL)。把混合物冷却至0℃并用在 CHCl3(2mL)中的间氯过氧苯甲酸(85mg，0.44mmol)处理。3小时后， 用CHCl3(7mL)稀释溶液，用5％ NaHCO3(2×5mL)、H2O洗涤，经 Na2SO4干燥。除去溶剂，得到粗品亚砜(100mg)，它无须进一步纯化 即可使用(LC/Mass，+离子)：384(M+H)。
步骤3
将三氟乙酸(1.5mL)加入到步骤2化合物(100mg，0.26mmol)在5 mL CH2Cl2中的冷却的(0℃)溶液中。然后在0℃下搅拌溶液1.5小时， 用CH2Cl2(5mL)稀释并减压浓缩为稠的油。经在YMC S5 ODS 20× 100mm柱上的反相制备型柱层析纯化产物，得到实施例70的标题 化合物，17mg，16％。纯化条件：在15分钟内，从10％甲醇/水/0.1 TFA-90％甲醇/水/0.1 TFA的梯度洗脱，在90％甲醇/水/0.1 TFA下维 持5分钟。流速：20mL/分钟。检测波长：220。保留时间：10分钟 (LC/Mass，+离子)：284(M+H)。
实施例71
步骤1
向配备有磁力搅拌棒和N2入口的25-mL圆底烧瓶中填充在氯仿 (3mL)中的得自实施例70，步骤1的化合物(78mg，0.21mmol)。把 混合物冷却至0℃并用在CHCl3(2mL)中的间氯过苯甲酸(144mg， 0.84mmol)处理。在室温下30分钟后，用CHCl3(7mL)稀释溶液， 用5％ NaHCO3(2×10mL)、H2O洗涤，经Na2SO4干燥。除去溶剂， 得到粗品砜(100mg)，它无须进一步纯化即可使用(LC/Mass，+离子)： 344(M+H-Bu)。
步骤2
将三氟乙酸(1.5mL)加入到步骤1化合物(100mg，0.26mmol)在 5mL CH2Cl2中的冷却的(0℃)搅拌溶液中。在0℃下搅拌溶液30分钟， 用CH2Cl2(5mL)稀释，减压浓缩为稠的油。经在YMC S5 ODS 20×100 mm柱上的反相制备型柱层析纯化产物，得到标题化合物，14mg， 17％。纯化条件：在15分钟内，从10％甲醇/水/0.1 TFA-90％甲醇/水/0.1 TFA的梯度洗脱。在90％甲醇/水/0.1 TFA下维持5分钟。流速：20mL/ 分钟。检测波长220。保留时间：10分钟。(LC/Mass，+离子)：300 (M+H)。
实施例72
按照用于合成(2S，3R，4S)-N-Boc-3，4-亚甲基-L-脯氨酸羧酸酯的公 开的方法(Sasaki等，Tetrahedron Lett.1995，36，3149，Sasaki等， Tetrahedron 1994，50，7093)，制备标题化合物。通过通用方法A制备 相应的酰胺并用TFA脱除保护，得到也如在通用方法A中描述的TFA 盐。
实施例73
采用通用方法C，通过在实施例72中描述的(2S，3R，4S)-3，4-亚甲 基-L-脯氨酸羧酰胺-N-三氟乙酸酯与L-环己基甘氨酸的偶合，然后用 POCl3/咪唑脱水为酰胺并用TFA脱除保护(N-末端氮)，制备标题化合 物(FAB MH+248)。
实施例74
采用通用方法C，通过在实施例72中描述的(2S，3R，4S)-3，4-亚甲 基-L-脯氨酸羧酰胺-N-三氟乙酸酯与L-叔丁基甘氨酸的偶合，然后用 POCl3/咪唑脱水为酰胺且用TFA脱除保护(N-末端氮)，制备标题化合 物(FAB MH+222)。
实施例75
采用通用方法C，通过在实施例72中描述的(2S，3R，4S)-3，4-亚甲 基-L-脯氨酸羧酰胺-N-三氟乙酸酯与L-缬氨酸的偶合，然后用POCl3/ 咪唑脱水为酰胺，用TFA脱除保护(N-末端氮)，制备标题化合物(FAB MH+207)。
实施例76
采用通用方法C，通过在实施例72中描述的(2S，3R，4S)-3，4-亚甲 基-L-脯氨酸羧酰胺-N-三氟乙酸酯与在通用方法B中描述的N-(叔丁 氧基羰基)-(1’乙基环戊基)甘氨酸偶合，然后用POCl3/咪唑脱水为酰 胺且用TFA脱除保护(N-末端氮)，制备标题化合物(FAB MH+262)。
实施例77
采用通用方法C，通过在实施例72中描述的(2S，3R，4S)-3，4-亚甲 基-L-脯氨酸羧酰胺-N-三氟乙酸酯与在通用方法B中描述的N-(叔丁 氧基羰基)-(1’乙烯基环戊基)甘氨酸偶合，然后用POCl3/咪唑脱水为 酰胺且用TFA脱除保护(N-末端氮)，制备标题化合物(FAB MH+ 260)。
实施例78
将在通用方法C，步骤2中描述的N-[((S)-环戊基乙烯基)-N-叔 丁氧基羰基甘氨酸基]-(2S，4S，5S)-2-氰基-4，5-亚甲基-L-脯氨酰胺(70 mg，0.19mmol)溶于2mL t-BuOH/3mL THF的混合物中并加入N-甲 基吗啉-N-氧化物(33mg，0.28mmol)，随后加入四氧化锇(0.1mmol，50 mol％)。用1mL的10％ Na2SO3水溶液猝灭反应物，用EtOAc吸收 且用5mL H2O洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发，经硅胶快速层析(5％ MeOH/CH2Cl2)纯化，得到41mg(55％)为油的保护的二醇。按照通用 方法C，通过用TFA将胺官能度脱除保护，得到标题化合物(FAB MH+ 294)。
实施例79
通用方法I：借助迈克尔加成为丙二酸酯，随后通过选择性水解及库 尔提斯重排，合成四价氨基酸。实施例79-84。
环己酮和丙二酸二乙酯经历由在THF和CCl4中的四氯化钛介导 的诺文葛尔缩合，得到40。铜(I)介导溴化甲基镁的格利雅加成，得 到41，它被选择性皂化为42。通过苄醇捕集(trapping)库尔提斯重排， 得到43，通过标准脱除保护-保护方法，将其转化为44。使酯44皂 化，得到四价氨基酸45。
流程11，通用方法I
a.THF，CCl4，TiCl4，丙二酸二乙酯，0C；吡啶，THF，0-室温72 小时b.MeMgBr，CuI，Et2O，0C c.1N NaOH，EtOH，室温6天d. Ph2PON3，TEA，室温-回流-室温，BnOH e.10％Pd(OH)2/C，EtOAc； (Boc)2O，K2CO3，THF f.1N NaOH，二噁烷
步骤1
按照文献方法(Tetrahedron 1973，29，435)，将干燥四氢呋喃(400 mL)和干燥四氯化碳(50mL)的混合物冷却至0℃(冰-盐水浴)并用四 氯化钛(22.0mL，0.2mole)处理。在0℃下，把生成的黄色悬浮液搅拌 5分钟，连续用环己酮(10.3mL，0.1mole)和蒸馏的丙二酸二乙酯(15.2 mL，0.1mole)处理，然后在0℃下搅拌30分钟。然后用干燥吡啶(32mL， 0.40mole)在干燥THF(60mL)中的溶液处理反应混合物，在0℃下搅 拌1.0小时，然后在室温下搅拌72小时。用水(100mL)猝灭反应混 合物，搅拌5分钟，然后用乙醚(2×200mL)提取。用饱和氯化钠(100 mL)、饱和碳酸氢钠(100mL)和盐水(100mL)洗涤合并的有机提取物， 经无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。快速层析，使用在己烷中的5％ EtOAc洗脱，得到为淡黄色油的步骤1的化合物。5.25g(22％)。MS(M+Na) 263。
步骤2
按照文献(Org.Syn.VI，442，1988；Liebigs Ann.Chem.1981， 748)，在0℃(冰-盐水浴)下，搅拌3.0M碘化甲基镁(3.1mL，9.36mmol) 和氯化亚铜(9.0mg)的混合物，于5分钟内，用步骤1化合物(1.5g，6.24 mmol)在干燥乙醚(1.8mL)中的溶液处理并在0℃下搅拌1小时，然 后在室温下搅拌40分钟。把混合物缓慢加入到冰和水的浆状物(15mL) 中，滴加10％ HCl(3.7mL)处理，然后用EtOAc(3×25mL)提取。用 1％硫代硫酸钠(2.0mL)和饱和氯化钠(2.0mL)洗涤合并的有机提取 物，经无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩。在硅胶柱上快速层析，使用 在己烷中的5％乙醚(1.0L)洗脱，得到为澄清的浆状物的步骤2化合 物。得量：1.09g，(68％)。MS(M+H)257。
步骤3
用1N氢氧化钠(4.84mL，4.84mmol或1.2当量)处理步骤2化 合物(1.09g，4.03mmol)在甲醇(5.4mL)和水(2.7mL)的混合物中的溶 液并在室温下搅拌6天。反应混合物仍然显示存在起始原料，所以 加入THF(4.0mL)，并把全部混合物搅拌另外2天。蒸发溶液至干， 将生成的浆在水(8.0mL)和乙醚(15mL)之间分配。用1N盐酸(4.8mL) 酸化水相至pH2-3并用EtOAc(3×25mL)提取。用盐水(10.0mL)洗 涤合并的有机提取物，经无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到为稠 的浆的步骤3化合物。得量：875mg，(95.1％)。MS(M+H)229。
或者作为选择：二酯在乙醇、THF、二噁烷和水的混合物中的溶 液或它们的混合物可用氢氧化钠水解。
步骤4
按照文献(J.Org.Chem 1994，59，8215)，将步骤3化合物(0.875g， 3.83mmol)在干燥苯(4.0mL)中的溶液用三乙胺(0.52mL，3.83mmol) 和二苯基磷酰基叠氮化物(0.85mL，3.83mmol)处理，在氮气下回流1 小时并冷却至室温。用苄基醇(0.60mL，5.75mmol或1.5当量)处理溶 液，回流17小时，冷却然后用乙醚(40mL)稀释。用10％柠檬酸水溶 液(2×3mL)洗涤溶液，用乙醚(40mL)反萃取柠檬酸洗液。用5％碳 酸氢钠(2×3mL)洗涤合并的有机提取物，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。 将粗品产物在硅胶上快速层析，用在己烷中的10％ EtOAc(1.0L)洗 脱，得到为澄清的稠的浆状物的步骤4化合物。得量：1.15g(90％)。 MS(M+H)334。
步骤5
用载于碳上的氢氧化钯(298mg)处理步骤4化合物(1.15g，3.46 mmol)在EtOAc(60mL)中的溶液并在室温下氢化20小时。通过硅藻 土垫过滤混合物，然后用EtOAc(3×25mL)充分洗涤垫，然后浓缩 滤液，得到游离胺。将胺在四氢呋喃(12mL)和水(12mL)中的溶液用 二碳酸二叔丁酯(1.0g，4.58mmol或1.48当量)和碳酸钾(854mg，6.18 mmol或2.0当量)处理，然后在室温下搅拌20小时。将反应混合物 在水(8mL)和乙醚(3×40mL)之间分配并用盐水(8mL)洗涤合并的有 机提取物，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。粗品产物经快速层析，用在 己烷中的10％ EtOAc(1L)洗脱，得到为澄清的稠的浆状物的步骤5 化合物。得量：1.18g(100％)。MS：(M+H)300。
也可使用其它方法，例如：按照Tetrahedron Lett.1988，29，2983， 其中氨基甲酸苄基酯在乙醇中的溶液可以用三乙基硅烷(2当量)、二 碳酸二叔丁酯(1.1当量)、催化的乙酸钯和三乙胺(0.3当量)处理，以 “一釜法”的方式得到BOC-保护的胺。
或者作为选择：在二碳酸二叔丁酯存在下，氨基甲酸苄基酯在 甲醇中的溶液可经历氢解，以“一釜法”的方式得到BOC-保护的胺。
步骤6
用1N氢氧化钠(9.1mL，9.1mmol或3.0当量)处理步骤5化合物 (1.18g，3.09mmol)在二噁烷(8.0mL)中的溶液并在60℃(油浴)下搅 拌28小时。浓缩反应混合物为浆状物，将其溶于水(15mL)中并用乙 醚(25mL)提取。用1N盐酸(9.2mL)将水相酸化至pH2-3，然后用 EtOAc(3×50mL)提取。用饱和氯化钠(10mL)洗涤合并的有机提取 物，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到为灰白色固体的步骤6化合物。 得量：808mg(96％)。MS(M+H)272。
步骤7
按照通用方法C的方法，从步骤6化合物制备标题化合物，其 中氨基酸被偶合，酰胺被脱水，并且保护基团被除去，得到标题化 合物。MS(M+H)262。
通过通用方法I和通用方法C，从环己酮、环戊酮和环丁酮起始， 并使用甲基-、乙基-、烯丙基-和丙基镁卤化物作为格利雅试剂，制 备实施例90-100的化合物。
表5
实施例号 环烷 R MS数据 M+H 79 环己烷 甲基 262 80 环己烷 乙基 276 81 环戊烷 甲基 248 82 环戊烷 烯丙基 274 83 环戊烷 丙基 276 84 环丁烷 甲基 234
实施例85
步骤1
按照实施例79：将干燥四氯化碳(50mL)的混合物冷却至0℃(冰 -盐水浴)并用四氯化钛(11.0mL，0.1mol)处理。在0℃下，将生成的 黄色悬浮液搅拌5分钟，连续用环戊酮(4.42mL，0.05mol)和蒸馏的 丙二酸二乙酯(7.6mL，0.05mol)处理，然后在0℃下搅拌30分钟。然 后用干燥吡啶(16mL，0.20mol)在干燥THF(30mL)中的溶液处理反 应混合物，在0℃下搅拌1.0小时，然后在室温下搅拌20小时。用 水(50mL)猝灭反应混合物，搅拌5分钟，然后用乙醚(2×100mL)提 取。用饱和氯化钠(50mL)、饱和碳酸氢钠(50mL)和盐水(50mL)洗涤 合并的有机提取物，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。快速层析，使用在 己烷中的5％ EtOAc洗脱，得到为淡黄色油的步骤1化合物。收率：7.67 g(68％)。MS(M+H)226。
步骤2
用10％ Pd/C(0.20g，10mol％)处理步骤1化合物(1.00g，4.42 mmol)在甲醇(50mL)中的溶液并在室温下氢化(气球压力)20小时。用 甲醇稀释混合物并通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，经硅胶快速柱层 析纯化，用在己烷中的7％ EtOAc洗脱，得到0.84g(91％)的步骤2 化合物。MS(M+H)229。
步骤3
通过在通用方法H中概述的方法，制备步骤3化合物，其中所 述酯经历水解、库尔提斯重排、保护基团互换，和最后再次进行酯 水解。
步骤4
按照通用方法C的方法，从步骤3化合物制备标题化合物，其 中氨基酸被偶合，酰胺被脱水，并且保护基团被除去，得到标题化 合物。MS(M+H)234。
通过用于实施例85的方法，分别从环己酮和环丁酮起始，制备 实施例86和87。
实施例号 环烷 质谱 M+H 85 环戊基 234 86 环己基 248 87 环丁基 220
实施例89
步骤1
以实施例6步骤1制备步骤1化合物。
步骤2
按照通用方法C，从步骤1化合物制备标题化合物，其中羧酸 经历肽偶合，酰胺脱水和除去保护基团。MS(M+H)218。
实施例90-99
其中X＝H的化合物的实例包括可使用如上文描述的方法制备 的以下化合物。
实施例100-109
其中n＝1的化合物的实例包括可使用如上文描述的方法制备的 以下化合物。