【技术领域】
本发明涉及的是一种药物制剂技术领域的组合物及其制备方法，尤其是一 种苄丝肼缓释微球组合物及其制备方法。
【背景技术】
制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中相 当一部分药物需要长期频繁的给药才能治愈；还有一部分需要局部给药由于系 统给药的毒性大。要达到这些目的，原料药必须要制备成相应的剂型。例如需 要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释或控释剂型；对于一些 肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病照，例如靶向于肿瘤血管的栓塞微米球制 剂等；对帕金森病，症状性帕金森综合症由于现有的口服制剂，每日需要服用 三次，但是对于这类病人来说，是十分不便的，因为他们本来行动和记忆有问 题，如果能用一次药可以达到一个星期甚至一个月的效果，这对于他们来说是 非常好的一件事情；我们基于这个药物存在的这类问题开发了具有长期疗效的 左旋多巴缓释制剂，但是由于苄丝肼在体内非常容易被酶代谢，需要酶抑制剂 的帮助，才能达到理想的治疗效果。
经对现有技术文献的检索发现，目前没有相关文献报道制备苄丝肼的微球 的方法。
【发明内容】
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种苄丝肼缓释微球组合 物。
本发明的再一的目的是，提供一种苄丝肼缓释微球组合物制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种苄丝肼缓释微球组合物， 按重量百分比该组合物由以下组分组成：
可降解的疏水聚合物 40％-99％
苄丝肼 1％-60％。
所述的可降解的疏水聚合物选自聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、聚己内酯一 种或其混合物。
所述的苄丝肼缓释微球组合物粒径为0.4-500μm。
所述的苄丝肼缓释微球组合物粒径为50-160μm。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
制备权利要求1所述的苄丝肼缓释微球组合物的方法，该方法包括以下步 骤：
a，将苄丝肼颗粒加入到可降解的疏水聚合物有机溶液后，形成混悬液；
b，将步骤a得到的混悬液加入到重量百分比浓度为0％-10％的氯化钠溶 液和重量百分比浓度为1％-5％聚乙烯醇表面活性剂中乳化；
c，将步骤b得到的复乳加入到重量百分比浓度为1％-10％的氯化钠溶液固 化；
d，将步骤c得到的微球进行离心收集，除去表面活性剂和氯化钠，得到苄 丝肼缓释微球组合物。
步骤a中所述的可降解的疏水聚合物选自聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚 己内酯一种或其混合物，可降解的疏水聚合物有机溶液中的有机溶剂为：二氯 甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮。
所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸或聚己内酯的分子量的大小分别为： 6000-500,000、6000-1,000,000或10,000-5,000,000。
所述的聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、聚己内酯或它们的任意混合物的有机 溶液重量百分浓度为3％-30％。
所述的苄丝肼颗粒的粒径大小为0.1-10μm。
步骤b中所述的乳化时间1-5min，步骤c中所述的固化时间1-4小时。
本发明优点在于：
本发明克服苄丝肼在贮存的过程的不稳定性、提高病人用药的治疗效果； 用这种方法制备成微球组合物，可以避免用常规的W/O和W/O/W的包封率不高， 及S/O/O的严重突释，造成的环境污染的缺点；采用该方法制备微米球组合物， 其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制，不污染环境；可以避免对苄丝肼 的治疗的作用影响。微粒的表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需 要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻、疏松，不会塌陷、 不粘连，再分散性良好。
【附图说明】
图1苄丝肼PLA缓释微球组合物扫描电镜图。
图2苄丝肼PLA缓释微球组合物体外释放曲线图。
【具体实施方式】
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
①将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用 粉碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取37.5mg的聚乳酸(PLA，分子量为90,000-140,000)配制成重 量百分比浓度为15％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒12.5mg 混和并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳 液；将制备成苄丝肼的理论百分含量为25％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 66-120μm如图1所述)。
制备的微球组合物：其实际PLA的重量百分比为75％和苄丝肼为25％、在 37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分比 为10.63％、7天后的累积释放98.34％，释放曲线如图2所述。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制 备微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 28-48％。
实施例2
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取495mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％ Mole和glycolide 48-54％Mole；分子量为5000-6000)配制成重量百分 比浓度为30％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒5mg混和并搅 拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制 备成苄丝肼的理论百分含量为1％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为1％氯化钠和2％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为15％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 70-100μm)。
制备的微球组合物：其实际PLGA的重量百分比为99％和苄丝肼为1％、在 37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分比 为10.63％、4天后的累积释放95.23％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5％-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-1％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 27-46％。
实施例3
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取37.5mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％ Mole和glycolide 48-54％Mole；分子量为5000-6000)配制成重量百分 比浓度为15％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒12.5mg混和并 搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将 制备成苄丝肼的理论百分含量为25％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-120μm)。
制备的微球组合物：其实际PLGA的重量百分比为75％和苄丝肼为25％、在 37℃和pH为2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百 分比为32.88％、4天后的累积释放95.25％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.9％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 27-49％。
实施例4
①将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用 粉碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取25mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％ Mole和glycolide 48-54％Mole；分子量为6000)配制成重量百分比浓度 为10％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和并搅拌、漩涡 或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制备成苄丝 肼的理论百分含量为50％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为1％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为110,000-124,000，醇解度为醇解度98-99％)水溶液 10mL并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 50-120μm)。
制备的微球组合物：其实际PLGA的重量百分比为50％和苄丝肼为50％、在 37℃和pH为2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百 分比为45.78％、4天后的累积释放95.83％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 28-48％。
实施例5
①将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用 粉碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取25mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％ Mole和glycolide 48-54％Mole；分子量为59,000-80,000)配制成重量 百分比浓度为10％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和 并搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液； 将制备成苄丝肼的理论百分含量为39％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-120μm)。
制备的微球组合物：其实际PLGA的重量百分比为61％和苄丝肼为39％、在 37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分比 为18.88％、5天后的累积释放为99.21％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 27-47％。
实施例6
①将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用 粉碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取25mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％ Mole和glycolide 48-54％Mole；分子量为59,000-80,000)配制成重量 百分比浓度为5％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和并 搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将 制备成苄丝肼的理论百分含量为20％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和2.0％的 聚乙二醇(PVA的分子量为13,000-23,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-120μm)。
制备的微球组合物：其实际PLGA的重量百分比为80％和苄丝肼为20％、在 37℃和pH7.4的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分 比为20.48％、4天后的累积释放99.23％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 28-48％。
实施例7
①将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用 粉碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取495mg的聚乳酸(PLA，分子量为5000-6000)配制成重量百分 比浓度为30％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒5mg混和并搅 拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制 备成苄丝肼的理论百分含量为1％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-140μm)。
制备的微球组合物：其实际PLA的重量百分比为99％和苄丝肼为1％、在 37℃和pH7.4的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分 比为31.88％、4天后的累积释放91.23％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 26-45％。
实施例8
①将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用 粉碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取25mg的聚乳酸(PLA，分子量为90,000-140,000)配制成重量 百分比浓度为5％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和并 搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将 制备成苄丝肼的理论百分含量为45％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 50-125μm)。
制备的微球组合物：其实际PLA的重量百分比为55％和苄丝肼为45％、在 37℃和pH7.4的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分 比为32.48％、7天后的累积释放99.78％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 27-45％。
实施例9
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取595mg的聚己内酯(PCL分子量为10,000)配制成重量百分比 浓度为30％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒5mg混和并搅拌、 漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制备成 苄丝肼的理论百分含量为1％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为1％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-140μm)。
制备的微球组合物：其实际PCL的重量百分比为99％和苄丝肼为1％、在 37℃和pH7.4的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分 比为30.18％、7天后的累积释放94.23％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 29-48％。
实施例10
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取37.5mg的聚己内酯(PCL分子量为250,000)配制成重量百分 比浓度为15％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒12.5mg混和并 搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将 制备成苄丝肼的理论百分含量为25％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 66-120μm)。
制备的微球组合物：其实际PCL的重量百分比为75％和苄丝肼为25％、在 37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄丝肼的百分比 为25.47％、10天后的累积释放99.93％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 26-48％。
实施例11
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取25mg的聚己内酯(PCL分子量为500,000)配制成重量百分比 浓度为5％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和并搅拌、 漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制备成 苄丝肼的理论百分含量为50％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 50-125μm)。
制备的微球组合物：其实际PCL的重量百分比为50％和苄丝肼为50％、在 37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1天的释放量占总的苄丝肼的百分比为 8.92％、60天后的累积释放99.83％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 24-45％。
实施例12
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取15mg的聚乳酸(PLA，分子量为90,000-140,000)和10mg的 聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％Mole和glycolide 48 -54％Mole；分子量为59,000-80,000)配制成重量百分比浓度为15％的二氯 甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和并搅拌、漩涡或超声1-5 分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制备成苄丝肼的理论百 分含量为50％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-125μm)。
制备的微球组合物：其实际PLA的重量百分比为30和PLGA为20％和苄丝 肼为50％、在37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄 丝肼的百分比为12.68％、12天后的累积释放98.93％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 20-43％。
实施例13
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取70mg的聚乳酸(PLA，分子量为90,000-140,000)和30mg的 聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％Mole和glycolide 48 -54％Mole；分子量为59,000-80,000)配制成重量百分比浓度为12.5％的二 氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒10mg混和并搅拌、漩涡或超声1 -5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制备成苄丝肼的理论 百分含量为6％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-125μm)。
制备的微球组合物：其实际PLA的重量百分比为65％和PLGA为29％和苄丝 肼为6％、在37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄 丝肼的百分比为14.48％、14天后的累积释放99.83％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 20-45％。
实施例14
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取60mg的聚乳酸(PLA，分子量为90,000-140,000)和40mg的 聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％Mole和glycolide 48 -54％Mole；分子量为59,000-80,000)配制成重量百分比浓度为12.5％的二 氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒10mg混和并搅拌、漩涡或超声1 -5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制备成苄丝肼的理论 百分含量为8％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和1％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 60-125μm)
制备的微球组合物：其实际PLA的重量百分比为55％和PLGA为37％和苄丝 肼为8％、在37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的苄 丝肼的百分比为11.58％、14天后的累积释放99.83％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 20-40％。
实施例15
①苄丝肼微粒制备
将100mg苄丝肼，先用电子显微镜观察是否在0.05-0.1μm，如果不在可 以用粉碎机粉碎成再过筛选出0.05-0.1μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取37.5mg的聚羟基乙酸-聚乳酸(PLGA，d，l-lactide：46-52％ Mole和glycolide 48-54％Mole；分子量为5000-6000)配制成重量百分 比浓度为3％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒12.5mg混和并搅 拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制 备成苄丝肼的理论百分含量为25％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和2％的聚 乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL并搅 拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为10％的1000mL氯化钠溶液固化1-4 小时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 0.4-40μm)。
制备的微球组合物：其实际PLGA的重量百分比为82.18％和苄丝肼为 17.82％、在37℃和pH为2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1小时的释放量占总的 苄丝肼的百分比为38.88％、4天后的累积释放98.25％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-11％，而微球几乎 不变约0-0.9％。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 22-39％。
实施例16
将100mg苄丝肼，先用显微镜观察是否在0.4-10μm，如果不在可以用粉 碎机粉碎成0.4-5μm；
②苄丝肼缓释微球组合物制备
(a)将称取25mg的聚己内酯(PCL分子量为5,000,000)配制成重量百分 比浓度为30％的二氯甲烷的有机溶液和称取①得的苄丝肼微粒25mg混和并搅 拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(S/O)乳液；将制 备成苄丝肼的理论百分含量为50％缓释微球。
(b)把步骤(a)得乳液分别加到重量百分比浓度为5％氯化钠和0.5％的 聚乙二醇(PVA的分子量为146,000-186,000，醇解度98-99％)水溶液10mL 并搅拌、漩涡或超声0.1-5分钟形成复乳；
(c)把步骤(b)的复乳加到浓度为5％的1000mL氯化钠溶液固化1-4小 时；
(d)把步骤(c)得到的微球进行离心收集，并用水洗涤3-5次，冻干后 得到微球组合物(上述制备的微球的表面光滑、粒径分布均匀，粒径为约 200-500μm)。
制备的微球组合物：其实际PCL的重量百分比为50.83％和苄丝肼为 49.17％、在37℃和pH2的磷酸缓冲溶液中摇体外第1天的释放量占总的苄丝肼 的百分比为7.96％、60天后的累积释放99.83％。
本发明的方法制备的微球组合物的包封率比分别比用W/O和W/O/W法制备 微球高5-30％；第一天的突释比W/O和W/O/W法及S/O/O法少5％-20％。
稳定性试验考察：把苄丝肼和本发明制备的苄丝肼微球同时放在可见光照 射，然后回收检测其含量，发现苄丝肼在一年后活性下降5-10％，而微球几乎 不变约0-0.8％。
本发明解决了现有的、传统的给药方式(目前只有口服剂型的状态)及现 有的技术长期制备微球不足：初期突释、及不完全释放等难题，利用水包油一 油包固体(S/O/W)制备微球方法把上述苄丝肼进一步微囊包在具有缓释的高 分子材料中。使其制备的微球表面光滑圆整，均匀度好，颗粒规整无粘连；包 封率高，突释小，载药量高。这种微球不仅可以用来皮下注射给药、肌肉，而 且可以口服等给药的方式。
体内血药浓度考察：用于同剂量的苄丝肼口服制剂和苄丝肼微球比较，发 现微球剂型明显好于口服制剂，其体内血药浓度的总面积高于口服的约 20-38％。
实施例17：平行实验
为了科学评价以下各组药物的性能，我们用平行试验的方法，同时检测 下列各组的稳定性、体内血药浓度和包封率。
各组药物分组情况如下：
A组：苄丝肼缓释微球采用本发明的(S/O/W)方法制备得到，其中苄丝 肼含量为5％，高分子辅料含量为95％。
B组：司来吉兰缓释微球采用中国专利申请号200910201414.X专利文献 报道的O1/O2乳化液中干燥方法制备得到司来吉兰缓释微球，其中司来吉兰缓 释微球中的卡巴拉汀含量为5％，高分子辅料含量为95％。
C组：卡巴拉汀缓释微球采用中国专利申请号200910201416.9专利文献 报道的O1/O2乳化液中干燥方法制备得到卡巴拉汀缓释微球，其中卡巴拉汀缓 释微球中的卡巴拉汀含量为5％，高分子辅料含量为95％。
D组：左旋多巴纳米制剂采用中国专利申请号200410030559.5专利文献 报道的方法制备得到左旋多巴纳米制剂。
各组药物实验结果如下：
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通 技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些 改进和补充也应视为本发明的保护范围。